姚曉雷,井亞萍,胡月麗

(商丘市第三人民醫(yī)院,河南 商丘 476000)

急性缺血性腦卒中(AIS)是一種以腦組織缺血缺氧損害和顱內(nèi)血栓形成為主要臨床特征的腦血管疾病,老年人高發(fā),對(duì)患者家庭和社會(huì)均造成沉重的經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)[1-2]。若能盡早診斷病情并及時(shí)給予對(duì)癥治療,可顯著改善此類患者的臨床預(yù)后。血清標(biāo)志物檢查具有檢測(cè)方便、結(jié)果及時(shí)等優(yōu)勢(shì),已廣泛應(yīng)用于臨床工作中。研究證實(shí)[3-4],血清同型半胱氨酸(Hcy)與腦梗死具有明確的因果關(guān)系。研究發(fā)現(xiàn)[5],AIS的發(fā)生與血腦屏障受損、動(dòng)脈粥樣硬化、炎癥反應(yīng)及長(zhǎng)鏈非編碼RNA等相關(guān)。有報(bào)道指出[6],在蛛網(wǎng)膜下腔出血患者中,血清LnRNA母系表達(dá)基因3(LncRNA MEG3)含量明顯增加,可通過(guò)促進(jìn)神經(jīng)元細(xì)胞損害起到加速疾病進(jìn)展的作用?，F(xiàn)已證實(shí)[7-8],動(dòng)脈粥樣硬化是導(dǎo)致腦卒中發(fā)生的主要病理機(jī)制,而抗髓過(guò)氧化物酶(MPO)抗體與動(dòng)脈粥樣硬化存在密切聯(lián)系。目前關(guān)于血清Hcy和LncRNA MEG3及抗-MPO抗體水平與AIS患者神經(jīng)功能缺損和腦梗死面積的相關(guān)性研究較少。本研究探討了急性缺血性腦卒中血清指標(biāo)與預(yù)后的關(guān)系,報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選擇2021年3月—2023年3月收治的AIS患者100 例為觀察組,選擇同期體檢健康者100 例作為對(duì)照組。兩組患者一般資料比較,差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05),具有可比性。根據(jù)腦梗死體積將觀察組分為小面積組(d<2 cm,n=42)、中面積組(d≥2～<5 cm,n=30)和大面積組(d≥5 cm,n=28)。根據(jù)美國(guó)國(guó)立衛(wèi)生研究院卒中量表(NIHSS)評(píng)分將其分為輕型組(NIHSS評(píng)分<5 分,n=40)、中型組(NIHSS評(píng)分≥5～≤20 分,n=28)和重型組(NIHSS評(píng)分>20 分,n=32)。本研究經(jīng)醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。

1.2 納入和排除標(biāo)準(zhǔn)

觀察組納入標(biāo)準(zhǔn):經(jīng)影像學(xué)檢查明確診斷為AIS,診斷標(biāo)準(zhǔn)參照《中國(guó)急性缺血性腦卒中診治指南2018》[9];均為首次發(fā)病,發(fā)病至就診時(shí)間不超過(guò)24 h;臨床資料完整,均自愿簽署知情同意書(shū)。

對(duì)照組納入標(biāo)準(zhǔn):無(wú)心腦血管疾病的健康人群,未發(fā)生急性缺血性腦卒中;臨床資料完整,且均自愿參與本研究;均為我院體檢的健康人群。

兩組排除標(biāo)準(zhǔn):無(wú)癥狀腦梗死;合并風(fēng)濕性心臟病、腦外傷、心力衰竭及瓣膜性心臟病者;伴有嚴(yán)重臟器功能障礙者;妊娠、哺乳期婦女;合并精神疾病和惡性腫瘤者;依從性不佳者。

1.3 方法

所有受試者均于收治入院時(shí)完成顱腦MRI檢測(cè)。觀察組患者入院次日和對(duì)照組健康體檢者體檢當(dāng)日清晨采集空腹肘靜脈血8 mL,經(jīng)離心處理后,保留上層血清于-80 ℃環(huán)境中保存,待統(tǒng)一檢測(cè)。

1.3.1 血清抗-MPO抗體及Hcy水平

使用貝克曼AU5800檢測(cè)儀器檢測(cè)血清Hcy和抗-MPO抗體水平,采用酶聯(lián)免疫法(ELISA),試劑盒購(gòu)自長(zhǎng)光華醫(yī)生物醫(yī)學(xué)工程有限公司,所有檢測(cè)操作均嚴(yán)格遵照說(shuō)明書(shū)標(biāo)準(zhǔn)執(zhí)行。

1.3.2 血清LncRNA MEG3水平

采用qRT-PCR法檢測(cè)LncRNA MEG3含量,具體如下:解凍凍存的血液樣本,采用Trizol法提取樣本中的總DNA,并逆轉(zhuǎn)錄為cDNA。根據(jù)擴(kuò)增反應(yīng)試劑盒說(shuō)明書(shū)配置反應(yīng)體系,并進(jìn)行擴(kuò)增和檢測(cè)。以GAPDH為內(nèi)參,LncRNA MEG3的上游引物序列為5＇-ATCATCCGTCCACCTCCTTGTCTTC-3＇,下游引物序列為5＇-GTATGAGGATAGCAAAGGTGAGGGC-3＇,引物由北京義翹神州科技有限公司合成,根據(jù)2-ΔΔCt法計(jì)算LncRNA MEG3相對(duì)表達(dá)量。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

2 結(jié) 果

2.1 兩組一般資料比較

兩組患者的體質(zhì)量指數(shù)(BMI)、性別、年齡和吸煙、糖尿病患者比例比較,差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。觀察組高血壓患者比例高于對(duì)照組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)(見(jiàn)表1)。

表1 兩組臨床資料對(duì)比

2.2 兩組血清指標(biāo)水平及抗-MPO抗體陽(yáng)性率比較

觀察組患者血清LncRNA MEG3,Hcy水平和抗-MPO抗體陽(yáng)性率高于對(duì)照組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)(見(jiàn)表2)。

表2 兩組患者血清指標(biāo)水平及抗-MPO抗體陽(yáng)性率比較

2.3 不同梗死面積患者抗-MPO抗體和血清水平比較

隨著患者梗死面積的增加,其血清Hcy和LncRNA MEG3水平呈升高趨勢(shì),且抗-MPO抗體陽(yáng)性率也明顯升高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)(見(jiàn)表3)。

表3 不同梗死面積患者血清指標(biāo)和抗-MPO抗體陽(yáng)性率比較

2.4 不同神經(jīng)功能缺損程度患者血清指標(biāo)和抗-MPO抗體陽(yáng)性率比較

重型組患者的血清Hcy,LncRNA MEG3水平和抗-MPO抗體陽(yáng)性率高于輕型組和中型組,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)(見(jiàn)表4)。

表4 不同神經(jīng)功能缺損程度患者血清指標(biāo)和抗-MPO抗體陽(yáng)性率比較

2.5 AIS患者血清指標(biāo)和抗-MPO抗體陽(yáng)性率與腦梗死體積和神經(jīng)功能缺損的相關(guān)性分析

AIS患者的血清LncRNA MEG3和Hcy水平及抗-MPO抗體陽(yáng)性率與腦梗死體積、NIHSS評(píng)分均呈正相關(guān)(P<0.05)(見(jiàn)表5)。

表5 AIS患者血清指標(biāo)和抗-MPO抗體陽(yáng)性率與腦梗死體積和NIHSS評(píng)分的相關(guān)性分析結(jié)果

3 討 論

臨床證據(jù)顯示[10-11],目前臨床針對(duì)腦卒中患者的臨床療效并不十分理想,且不少患者治療后伴有程度不一的神經(jīng)功能缺損,這對(duì)患者生活質(zhì)量造成了嚴(yán)重的負(fù)面影響,使社會(huì)醫(yī)療負(fù)擔(dān)加重,同時(shí)還會(huì)影響患者情緒,繼而對(duì)預(yù)后質(zhì)量產(chǎn)生負(fù)面影響。文獻(xiàn)指出[12],動(dòng)脈粥樣硬化是導(dǎo)致腦卒中發(fā)生的主要原因,其次是各種炎性介質(zhì)和細(xì)胞參與的慢性炎癥過(guò)程。髓過(guò)氧化物酶是一種具有促炎癥作用的特異性標(biāo)志物。中性粒細(xì)胞在被激活狀態(tài)下,可通過(guò)分泌抗-MPO抗體來(lái)介導(dǎo)血管炎性改變和免疫反應(yīng)[13]。本研究結(jié)果顯示,觀察組抗-MPO抗體陽(yáng)性率高于對(duì)照組,提示高水平的MPO與AIS的發(fā)生發(fā)展過(guò)程存在密切聯(lián)系,檢測(cè)MPO抗體的水平可在一定程度上輔助臨床早期診斷AIS。此外,本研究中,AIS患者的抗-MPO抗體陽(yáng)性率隨著腦梗死面積和NIHSS評(píng)分升高,提示抗-MPO抗體與腦卒中疾病的嚴(yán)重程度存在一定相關(guān)性。相關(guān)性分析結(jié)果顯示,AIS患者的血清抗-MPO抗體陽(yáng)性率與其腦梗死體積呈正相關(guān)。分析機(jī)制在于[14],在疾病早期,各種細(xì)胞因子或代謝產(chǎn)物均可刺激中性粒細(xì)胞,促使分泌抗-MPO抗體來(lái)參與AIS病理過(guò)程;此外,中性粒細(xì)胞的大量聚集還會(huì)觸發(fā)機(jī)體的免疫反應(yīng),引發(fā)神經(jīng)血管炎癥,進(jìn)而對(duì)患者神經(jīng)功能造成損傷。

Hcy是甲硫氨酸和半胱氨酸代謝過(guò)程中的中間產(chǎn)物,其本質(zhì)是一種含硫氨基酸。在正常情況下,Hcy在人體血液中的含量較低,但在一些外界因素(原發(fā)性或繼發(fā)性)的影響下,其代謝會(huì)出現(xiàn)異常,致使血Hcy水平明顯升高,誘發(fā)腦血管疾病的發(fā)生[15]?，F(xiàn)已證實(shí)[16],高Hcy是導(dǎo)致腦血管病和動(dòng)脈粥樣硬化的獨(dú)立危險(xiǎn)因素,其表達(dá)水平與腦梗死呈劑量依賴關(guān)系。本研究中觀察組血清Hcy高于對(duì)照組,且隨著AIS患者腦梗死面積和神經(jīng)缺損嚴(yán)重程度的增加,其表達(dá)水平也呈現(xiàn)明顯上升趨勢(shì)。相關(guān)性分析結(jié)果提示,血清Hcy與AIS患者腦梗死面積和神經(jīng)功能缺損呈正相關(guān),表明血清Hcy可在一定程度上輔助臨床評(píng)估AIS患者病情的嚴(yán)重程度。分析其原因在于,高水平的Hcy可通過(guò)分泌超氧化物影響凝血因子的功能,血栓形成的風(fēng)險(xiǎn)明顯增加,進(jìn)而形成動(dòng)脈粥樣硬化,最終導(dǎo)致腦卒中的發(fā)生和病情惡化[17]。

LncRNA MEG3是一種與神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)育、突觸可塑性相關(guān)的LnRNA,可促進(jìn)細(xì)胞凋亡,并對(duì)細(xì)胞增殖起到抑制作用。其表達(dá)水平在腦缺血再灌注損傷發(fā)生時(shí)會(huì)出現(xiàn)異常改變,主要是通過(guò)影響神經(jīng)元凋亡、血腦屏障通透性及腦梗死體積來(lái)參與腦缺血再灌注損傷的病理發(fā)展過(guò)程。胡雪鐘和童同[18]研究發(fā)現(xiàn),下調(diào)LncRNA MEG3水平可起到防止缺血損傷、改善神經(jīng)功能的作用。腦梗死體積可體現(xiàn)卒中患者的病變體積和范圍[19],NIHSS評(píng)分則可反映患者的神經(jīng)缺損情況[20],兩者可從不同方面來(lái)輔助臨床判斷AIS患者的病情。本研究發(fā)現(xiàn),血清LncRNA MEG3水平可隨著AIS患者腦梗死體積和NIHSS評(píng)分的增加而呈現(xiàn)升高趨勢(shì),表明LncRNA MEG3與AIS的病理過(guò)程存在密切聯(lián)系,有望成為臨床評(píng)估AIS患者病情的有效參考指標(biāo)。分析其機(jī)制可能在于,LncRNA MEG3作為L(zhǎng)ncRNA家族成員之一,可通過(guò)影響血腦屏障通透性、神經(jīng)元增殖和凋亡等過(guò)程來(lái)起到影響AIS的作用[21-22]。

綜上所述,AIS患者的血清Hcy和LncRNA MEG3及抗-MPO抗體水平較高,且均與患者的神經(jīng)功能缺損程度和腦梗死面積呈正相關(guān),可用于早期診斷AIS和評(píng)估病情的嚴(yán)重程度。本研究納入患者數(shù)量較少,且均為本院區(qū)患者,結(jié)論的可推廣性不強(qiáng);此外,本研究中未能明確血清抗-MPO抗體、Hcy及LncRNA MEG33在腦卒中患者不同階段的變化情況和作用機(jī)制,仍需進(jìn)一步多中心的研究以提高結(jié)論的準(zhǔn)確性。