賈瀟霄,王 馳,向帆麗

廣漢市人民醫(yī)院,四川德陽 618300

急性腹瀉是指發(fā)作時(shí)間短、持續(xù)時(shí)間較短的胃腸道癥狀[1],表現(xiàn)為大便數(shù)量增多、質(zhì)地稀薄、黏液或血絲等不同程度的異常,伴有腹部疼痛、惡心、嘔吐、發(fā)熱等情況。急性腹瀉一般分為細(xì)菌性感染與病毒性感染,這兩種感染在兒童群體中的發(fā)病率較高[2],可嚴(yán)重危害兒童的身心健康。細(xì)菌性腹瀉和病毒性腹瀉的臨床表現(xiàn)相似,均可引起腹瀉、腹痛、發(fā)熱等癥狀,故鑒別診斷較為困難。目前,外周血中性粒細(xì)胞表面抗原CD64指數(shù)(CD64)、人中性粒細(xì)胞載脂蛋白(HNL)、糞便鈣衛(wèi)蛋白(FC)作為臨床檢查指標(biāo),已經(jīng)在鑒別細(xì)菌性腹瀉和病毒性腹瀉方面得到了廣泛應(yīng)用[3]。在外周血檢查方面,CD64和HNL是兩種常見的白細(xì)胞活化標(biāo)志物,其水平通常能夠反映機(jī)體對感染的免疫反應(yīng)狀態(tài)。另外,FC主要分布于腸道上皮細(xì)胞和單核細(xì)胞中,并且與腸道炎癥程度關(guān)系密切。但CD64、HNL、FC在細(xì)菌性與病毒性感染患兒中的水平有何差異目前鮮有報(bào)道?；诖?筆者將2021年1月至2022年12月本院收治的急性腹瀉患兒納入研究,旨在探究外周血外周血CD64、HNL及FC在細(xì)菌性腹瀉和病毒性腹瀉患兒鑒別診斷中的價(jià)值,以幫助醫(yī)生更準(zhǔn)確地判斷腹瀉的病因,指導(dǎo)臨床治療,現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料和方法

1.1一般資料 將2021年1月至2022年12月本院收治的90例急性腹瀉患兒納入研究。納入標(biāo)準(zhǔn):(1)符合《中國腹瀉病診斷治療方案》[4]中病毒性腹瀉、細(xì)菌性腹瀉的診斷標(biāo)準(zhǔn),而且患兒就診15 d內(nèi)存在2次稀便;(2)發(fā)病后于本院就診,未接受院外治療,檢查前2周內(nèi)未使用過抗菌藥物;(3)年齡6個(gè)月至6歲。排除標(biāo)準(zhǔn):(1)重要臟器功能嚴(yán)重不全者;(2)其他烈性、感染性腹瀉;(3)細(xì)菌與病毒雙重感染者;(4)臨床資料不完整者;(5)有消化道腫瘤;(6)長期使用非甾體類抗炎藥物。按病原體將患兒分為病毒性腹瀉組(33例)、細(xì)菌性腹瀉組(57例);將細(xì)菌性腹瀉組患兒根據(jù)病情嚴(yán)重程度分為輕型組(18例)、中型組(26例)及重型組(13例)。另選取同期于本院體檢的健康兒童45例作為對照組。各組一般資料比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05),見表1。納入研究的患兒或監(jiān)護(hù)人對本研究知情同意并簽署知情同意書。本研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。

表1 一般資料比較(n/n或

1.2方法

1.2.1CD64的檢測 將CD64-藻紅蛋白抗體加入至乙二胺四乙酸抗凝靜脈全血中,劑量為20μL,將其混勻,在室溫下避光,孵育時(shí)間為1 h。待孵育完成后,在其中加入磷酸鹽緩沖液,劑量為430 μL,采用Attune NxT型流式細(xì)胞儀(賽默飛世爾科技有限公司)進(jìn)行檢測。

1.2.2HNL的檢測 待患者血液凝固完全后,以3 000 r/min,離心15 min,將血清分離,采用酶聯(lián)免疫吸附法檢測患者HNL水平。每隔24 h檢測1次質(zhì)控品,每次試劑盒更換后需進(jìn)行質(zhì)控品的檢驗(yàn)。

1.2.3FC的檢測 將糞便標(biāo)本置于室溫解凍,按1∶50的比例進(jìn)行稀釋,之后進(jìn)行常溫孵育,采用雙抗體夾心法檢測患者的FC。使用同一濃度質(zhì)控品進(jìn)行多次檢測,觀察結(jié)果的離散程度。例如,將濃度為50 mg/L的質(zhì)控品每天隨機(jī)測量至少3次,持續(xù)至少30 d。計(jì)算其平均值、標(biāo)準(zhǔn)差和變異系數(shù),評估結(jié)果的離散程度。如果標(biāo)準(zhǔn)差小于10%,變異系數(shù)小于15%,則說明檢測的精密度良好。

1.3觀察指標(biāo) (1)比較細(xì)菌性腹瀉組、病毒性腹瀉組與對照組外周血CD64、HNL、FC水平。(2)采用ROC曲線分析外周血CD64、HNL、FC單項(xiàng)及聯(lián)合檢測用于診斷細(xì)菌性腹瀉的效能。(3)采用Spearman秩相關(guān)分析外周血CD64、HNL、FC水平與細(xì)菌性腹瀉患兒嚴(yán)重程度的相關(guān)性。

2 結(jié) 果

2.13組間外周血CD64、HNL、FC比較 3組間外周血CD64、HNL、FC水平比較,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),細(xì)菌性腹瀉組外周血CD64、HNL、FC水平高于病毒性腹瀉組(P<0.05),病毒性腹瀉組這3項(xiàng)指標(biāo)均高于對照組(P<0.05)。見表2。

表2 3組間外周血CD64、HNL、FC水平比較

2.2外周血CD64、HNL、FC水平診斷細(xì)菌性腹瀉的效能分析 ROC曲線分析顯示,CD64、HNL、FC水平診斷細(xì)菌性腹瀉的曲線下面積(AUC)分別為0.820、0.870、0.854。將CD64、HNL、FC納入Logistic回歸模型,通過回歸系數(shù)β(分別為0.424、0.034、0.028)得出3項(xiàng)指標(biāo)聯(lián)合診斷的預(yù)測變量計(jì)算公式為:預(yù)測變量=CD64+(0.034/0.424)×HNL+(0.028/0.424)×FC,3項(xiàng)聯(lián)合診斷細(xì)菌性腹瀉的AUC為0.924。見表3、圖1。

圖1 外周血CD64、HNL、FC用于診斷細(xì)菌性腹瀉的ROC曲線

表3 外周血CD64、HNL、FC診斷細(xì)菌性腹瀉的效能

2.3不同嚴(yán)重程度的細(xì)菌性腹瀉患兒外周血CD64、HNL、FC水平比較 不同嚴(yán)重程度細(xì)菌性腹瀉患兒外周血CD64、HNL、FC水平比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。重型組外周血CD64、HNL、FC水平高于中型組,中型組這3項(xiàng)指標(biāo)均高于輕型組,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表4。

表4 不同嚴(yán)重程度的細(xì)菌性腹瀉患兒外周血CD64、HNL、FC水平比較

2.4外周血CD64、HNL、FC水平與細(xì)菌性腹瀉患兒嚴(yán)重程度的相關(guān)性分析 Spearman秩相關(guān)分析顯示,CD64、HNL、FC水平與細(xì)菌性腹瀉患兒嚴(yán)重程度均呈正相關(guān)(r=0.813、0.614、0.668,P<0.05)。

3 討 論

急性腹瀉是指胃腸道受到感染或刺激,導(dǎo)致胃腸道的炎癥反應(yīng)和黏膜受損,從而引起腹瀉、腹痛等癥狀。常見的病因包括細(xì)菌、病毒、寄生蟲和真菌感染等。急性腹瀉一般分為病毒性腹瀉與細(xì)菌性腹瀉,無論是哪種腹瀉,都會(huì)對患兒產(chǎn)生一定的危害。其中,細(xì)菌性腹瀉可能會(huì)導(dǎo)致嚴(yán)重的腸道感染,有時(shí)甚至?xí)?dǎo)致敗血癥和其他并發(fā)癥[5]。對于年齡較小的兒童、老年人和免疫系統(tǒng)受損的人來說,這種危害更為明顯。而病毒性腹瀉通常不會(huì)造成嚴(yán)重的并發(fā)癥,但在兒童、老年人和免疫系統(tǒng)受損的人中,可能導(dǎo)致脫水和電解質(zhì)紊亂等問題。

CD64在炎癥反應(yīng)中起著重要作用[7]。HNL又稱天然殺傷細(xì)胞細(xì)胞活化指標(biāo)[8],屬于細(xì)胞毒素類胞外酶。FC具備組織或體細(xì)胞特異性,屬于促炎癥蛋白。它主要存在于中性粒細(xì)胞、單核細(xì)胞和巨噬細(xì)胞等白細(xì)胞中,當(dāng)腸道受到炎癥刺激時(shí),腸壁細(xì)胞損傷導(dǎo)致FC的水平升高[9]。本研究結(jié)果表明,細(xì)菌性腹瀉組外周血CD64、HNL、FC水平高于病毒性腹瀉組,后者又高于對照組。可見在急性腹瀉中,外周血CD64、HNL、FC水平均處于增高狀態(tài),而且細(xì)菌性腹瀉的外周血CD64、HNL、FC水平最高。分析原因:外周血CD64、HNL及FC都是炎癥指標(biāo)[10],其升高可反映機(jī)體免疫系統(tǒng)對感染的應(yīng)激反應(yīng)[11]。在細(xì)菌性腹瀉患者中,這些指標(biāo)的表達(dá)水平通常會(huì)更高,因?yàn)榧?xì)菌感染比病毒感染引起的局部炎癥反應(yīng)更強(qiáng)烈。同時(shí),CD64和HNL是中性粒細(xì)胞的活化指標(biāo),它們的升高可以反映中性粒細(xì)胞的活化程度,而中性粒細(xì)胞的活化也是細(xì)菌感染的重要特征之一[12]。FC是腸黏膜中的一種蛋白質(zhì),在腸道炎癥和損傷時(shí)會(huì)大量釋放進(jìn)入糞便。因此,它可以作為判斷腸道炎癥程度的指標(biāo)。

細(xì)菌性腹瀉患兒病情越嚴(yán)重,細(xì)菌的數(shù)量越多,影響范圍越大[13],機(jī)體對感染的免疫反應(yīng)也更加強(qiáng)烈。外周血CD64、HNL及FC都是機(jī)體炎癥反應(yīng)的指標(biāo)[14],其水平通常與病情的嚴(yán)重程度相關(guān)。本研究表明,重型組外周血CD64、HNL、FC水平高于中型組,后者又高于輕型組。相關(guān)性分析顯示,CD64、HNL、FC與細(xì)菌性腹瀉患兒嚴(yán)重程度呈正相關(guān),提示細(xì)菌性腹瀉患兒的病情越嚴(yán)重,機(jī)體對感染的應(yīng)激反應(yīng)越強(qiáng)烈,外周血CD64、HNL及FC的水平也就越高。具體原因?yàn)镃D64和HNL是中性粒細(xì)胞表面的蛋白質(zhì)[15],在機(jī)體免疫系統(tǒng)被激活時(shí),它們會(huì)被中性粒細(xì)胞釋放出來。中性粒細(xì)胞是免疫系統(tǒng)中最主要的細(xì)胞,它們會(huì)吞噬并摧毀入侵細(xì)菌。當(dāng)細(xì)菌數(shù)量增多時(shí),中性粒細(xì)胞需要被激活來對抗細(xì)菌,因此CD64和HNL水平會(huì)升高[16]。FC是一種由中性粒細(xì)胞和巨噬細(xì)胞分泌的蛋白質(zhì)。在腸道受到感染或炎癥刺激時(shí),腸黏膜上皮細(xì)胞就會(huì)分泌大量FC以抑制腸道中的細(xì)菌,這時(shí)候FC水平也會(huì)升高。FC反映了機(jī)體的炎癥反應(yīng)狀態(tài)。

外周血CD64、HNL及糞便CF的檢測方法簡單[17]、快速、非侵入性,而且準(zhǔn)確性較高,這些指標(biāo)的聯(lián)合檢測可以提高對細(xì)菌性腹瀉的診斷效能。本研究結(jié)果顯示,3項(xiàng)指標(biāo)聯(lián)合診斷細(xì)菌性腹瀉的AUC為0.924,提示聯(lián)合檢測外周血CD64、HNL及FC有助于提供更準(zhǔn)確的細(xì)菌性腹瀉診斷結(jié)果[18]。原因分析:CD6表達(dá)水平會(huì)在感染過程中會(huì)發(fā)生變化,在細(xì)菌感染中,其表達(dá)水平會(huì)明顯升高,因此可以作為診斷的一個(gè)指標(biāo)。HNL在病毒感染過程中高表達(dá)。檢測其水平可以幫助診斷病毒感染。FC在免疫反應(yīng)中發(fā)揮重要作用。檢測其水平有助于了解免疫系統(tǒng)的反應(yīng)。通過聯(lián)合檢測這3項(xiàng)指標(biāo),有助于判斷腹瀉的原因,從而提高診斷的準(zhǔn)確性。

綜上所述,細(xì)菌性腹瀉患兒外周血CD64、HNL、FC水平高于病毒性腹瀉患兒,外周血CD64、HNL、FC水平可作為鑒別細(xì)菌性腹瀉和病毒性腹瀉患兒的有效指標(biāo),聯(lián)合檢測的診斷效能更高。外周血CD64、HNL、FC水平與細(xì)菌性腹瀉嚴(yán)重程度關(guān)系密切。本研究樣本量較小,難以得到更有說服力的結(jié)論,期望在今后的臨床工作中繼續(xù)累積樣本進(jìn)行更為深入的研究。