嚴(yán)艷琴 綜述,許永杰,張 華,△,莫 非,3 審校

1.貴州醫(yī)科大學(xué),貴州貴陽(yáng) 550004;2.貴州省人民醫(yī)院檢驗(yàn)科,貴州貴陽(yáng) 550002;3.貴州醫(yī)科大學(xué)附屬醫(yī)院醫(yī)務(wù)處,貴州貴陽(yáng) 550004

金納米顆粒(AuNPs)具有獨(dú)特的理化性質(zhì),在生物檢測(cè)和診斷方面具有巨大的應(yīng)用價(jià)值[1]。AuNPs的特性適于多樣化的傳感應(yīng)用,可通過調(diào)整其大小、形狀和表面修飾配體等,進(jìn)而調(diào)節(jié)AuNPs與生物靶標(biāo)的相互作用,檢測(cè)生物樣本中不同類型分析物[2]。本文主要對(duì)AuNPs的性質(zhì)、合成方法、表面功能化,以及AuNPs在生物傳感領(lǐng)域的研究進(jìn)展進(jìn)行綜述。

1 AuNPs的特性、合成及表面功能化

1.1AuNPs的特性

1.1.1局域表面等離子體共振(LSPR)特性 LSPR是指AuNPs表面自由電子的震蕩頻率與入射光的頻率一致時(shí)產(chǎn)生共振,從而引起光被吸收的現(xiàn)象,導(dǎo)致了AuNPs的不同顏色變化[3]。幾十納米大小的球形AuNPs,其典型的LSPR吸收峰為515～560 nm,而且LSPR可以在很寬的波長(zhǎng)范圍內(nèi)進(jìn)行調(diào)諧,從可見光到近紅外區(qū)域[4]。AuNPs尺寸、形狀和表面功能化、粒子間距離的變化很容易將LSPR吸收峰轉(zhuǎn)移到光譜的其他區(qū)域,引起顏色的明顯改變[5],使人們夠通過比色檢測(cè)分析物。

1.1.2表面增強(qiáng)拉曼散射(SERS)特性 SERS即利用特定波長(zhǎng)的光源照射局域表面等離激元所產(chǎn)生的局部增強(qiáng)的電磁場(chǎng),放大拉曼散射信號(hào)[6]。AuNPs在可見光和近紅外區(qū)域存在LSPR帶,被廣泛用作SERS基底。SERS強(qiáng)度呈現(xiàn)距離依賴性,離表面較遠(yuǎn)的電磁場(chǎng)呈指數(shù)衰減,使得信號(hào)增強(qiáng)限制在離基底表面較近的地方。因此,位于AuNPs表面熱點(diǎn)的分析物,其拉曼信號(hào)將受到明顯增強(qiáng)[7]。

1.1.3熒光淬滅和熒光增強(qiáng)特性 AuNPs在特定波長(zhǎng)入射光激發(fā)下產(chǎn)生LSPR現(xiàn)象。其LSPR吸收帶通常與熒光基團(tuán)發(fā)射光譜重疊,在近距離(<5 nm)時(shí),AuNPs通過熒光共振能量轉(zhuǎn)移作用淬滅靠近的熒光基團(tuán)[8]。隨著熒光基團(tuán)與AuNPs之間距離的增加,能量轉(zhuǎn)移呈指數(shù)衰減。金屬增強(qiáng)熒光是由于金屬納米結(jié)構(gòu)表面等離激元被入射光激發(fā)導(dǎo)致局部電磁場(chǎng)的增強(qiáng),進(jìn)而提高熒光基團(tuán)的激發(fā)速率和發(fā)射速率,使熒光增強(qiáng)[9]。在閾值距離(10～30 nm)內(nèi),熒光增強(qiáng)程度達(dá)到最大。當(dāng)距離大于此閾值時(shí),增強(qiáng)電場(chǎng)隨距離的增加呈指數(shù)衰減,熒光增強(qiáng)程度會(huì)下降,直到在非常遠(yuǎn)的距離達(dá)到其原始熒光強(qiáng)度[10]。

1.1.4導(dǎo)電特性 AuNPs具有優(yōu)異的電子轉(zhuǎn)移能力。氧化還原反應(yīng)消耗或產(chǎn)生離子或電子,AuNPs被用于增強(qiáng)電極與氧化還原物質(zhì)之間的電子轉(zhuǎn)移速率,電子快速轉(zhuǎn)移到電極表面,使傳感器具有較快的響應(yīng)速度[11]。AuNPs具有較大的比表面積和良好的導(dǎo)電性能,能促進(jìn)反應(yīng)物的氧化還原反應(yīng),有效提高響應(yīng)信號(hào)的信噪比和檢測(cè)靈敏度,被廣泛應(yīng)用于電化學(xué)傳感技術(shù)[12]。

1.1.5生物相容性 金屬在生物體中的毒性主要是由于金屬陽(yáng)離子的形成而損傷細(xì)胞膜。金具有高還原電位而相對(duì)穩(wěn)定,與其他金屬相比,它電離的可能性較小[13]。生物相容性是促進(jìn)其在體內(nèi)成像、示蹤及治療應(yīng)用的前提。AuNPs的表面功能化為改善生物相容性和與細(xì)胞的反應(yīng)性提供了良好策略。

1.2AuNPs的合成 AuNPs合成最常用的方法是檸檬酸還原法。檸檬酸鹽還原法是TURKEVICH等[14]在1951年提出的,即通過檸檬酸三鈉還原氯金酸HAuCl4合成AuNPs,其中檸檬酸鹽的作用是將Au3+還原為Au,同時(shí)通過靜電排斥穩(wěn)定納米顆粒并防止團(tuán)聚。FRENS[15]在此基礎(chǔ)上進(jìn)一步優(yōu)化,通過改變檸檬酸鹽的濃度來控制納米顆粒的大小。為了合成更穩(wěn)定分散的AuNPs,其他合成方法逐漸發(fā)展起來。不同的方法具有各自的優(yōu)勢(shì)和局限性。比如Brust-Schiffrin法[16]利用硼氫化鈉還原金離子,可在兩相溶液中產(chǎn)生穩(wěn)定的AuNPs。電化學(xué)法[17]操作簡(jiǎn)單、易合成形狀大小可控的AuNPs。激光燒蝕[18]可以產(chǎn)生粒徑低于10 nm的AuNPs,而且AuNPs的尺寸可以通過激光強(qiáng)度來控制。離子濺射法[19]可以在不使用液相的情況下合成AuNPs,這減少了來自溶劑的有毒殘留物。通過化學(xué)方法合成AuNPs會(huì)產(chǎn)生危害生物和環(huán)境的有毒副產(chǎn)物。物理方法涉及使用高外力,條件要求比較高。綠色生物合成方法[20],即細(xì)菌、真菌、酵母菌等微生物通過生物還原金離子合成AuNPs,改變培養(yǎng)條件可以控制納米顆粒的大小和形狀,具有簡(jiǎn)單、無毒、環(huán)境友好、經(jīng)濟(jì)的優(yōu)點(diǎn)。

1.3表面功能化 在生物檢測(cè)平臺(tái)中,AuNPs需要將其表面功能化,從而為特定的生物靶標(biāo)提供識(shí)別元件。常見的表面功能化策略有共價(jià)和非共價(jià)方法。共價(jià)方法中,金硫鍵(Au-S)介導(dǎo)生物偶聯(lián)最常見。含巰基(-SH)配體,如谷胱甘肽、二硫化物,可與AuNPs共價(jià)形成金硫鍵(Au-S)[21]。含氨基或羧基生物分子,如賴氨酸和精氨酸,也能與AuNPs共價(jià)結(jié)合[22]。非共價(jià)方法,包括靜電相互作用和物理吸附。帶正電荷聚合物聚乙烯亞胺功能化AuNPs,通過帶電分子提供額外的靜電排斥,阻止納米顆粒聚集[23]。含有多個(gè)連續(xù)腺嘌呤的聚腺嘌呤(polyA)序列以高親和力吸附AuNPs,能有效地阻斷非特異性DNA-Au的結(jié)合,可以制備具有良好雜交能力的納米偶聯(lián)物[24]。其他分子也可用于提高穩(wěn)定性,如聚乙二醇、硫辛酸、牛血清清蛋白[25]。表面易功能化使得AuNPs成為與多種分子官能化的良好支架,這在實(shí)現(xiàn)生物醫(yī)學(xué)應(yīng)用方面起著重要的作用。

2 AuNPs在生物傳感體系中的應(yīng)用

AuNPs在生物傳感領(lǐng)域有著廣泛的應(yīng)用。其特性可用于構(gòu)建多種類型的傳感器,檢測(cè)不同的靶標(biāo),如蛋白質(zhì)、核酸、小分子、金屬離子、細(xì)菌、外泌體等。

2.1基于AuNPs的比色傳感體系 AuNPs比色傳感是指基于調(diào)控AuNPs聚集引起膠體溶液的可見顏色變化。分散的球形AuNPs(直徑1～50 nm)在溶液中呈酒紅色,而聚集的AuNPs呈紫色。MOITRA等[26]利用反義寡核苷酸鏈修飾的AuNPs與靶標(biāo)直接進(jìn)行雜交引發(fā)AuNPs聚集,引起顏色改變,通過視覺檢出新型冠狀病毒(SARS-CoV-2)RNA陽(yáng)性病例,而不需要復(fù)雜的儀器。ZHU等[27]通過靶識(shí)別后的級(jí)聯(lián)反應(yīng)調(diào)控AuNPs聚散,靶標(biāo)ATP識(shí)別適體后引起脫氧核酶(DNAzyme)序列同步組裝,裂解底物DNA,使互補(bǔ)單鏈DNA(ssDNA)修飾的AuNPs無法交聯(lián)而分散?；谖?解吸過程誘導(dǎo)AuNPs聚集是另一類常見的策略。GAN等[28]提出了一種基于適配體鏈捕獲Cd2+誘導(dǎo)裸AuNPs聚集的比色分析方法,通過顏色快速識(shí)別Cd2+。SUN等[29]利用靶蛋白競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合DNA,導(dǎo)致AuNPs表面DNA的解吸,裸AuNPs不耐鹽聚集,使溶液呈現(xiàn)紅到藍(lán)的變化。通過不同的分子識(shí)別機(jī)制調(diào)控AuNPs組裝,可形成簡(jiǎn)單的視覺檢出策略。AuNPs在比色傳感的應(yīng)用也存在一些局限性,如非特異性吸附和靈敏度低的問題。為避免非特異性吸附,可考慮用配體封閉AuNPs的表面。針對(duì)低靈敏度,可在體系中偶聯(lián)等溫?cái)U(kuò)增或級(jí)聯(lián)放大技術(shù)[30]。

2.2基于AuNPs的側(cè)向流動(dòng)檢測(cè)(LFA) LFA是最常用的基于AuNPs的傳感類型,由于試紙條LFA對(duì)分析物的簡(jiǎn)單和快速檢測(cè),在床旁檢測(cè)(POCT)領(lǐng)域得到廣泛的應(yīng)用。傳統(tǒng)的LFA通常利用抗體作捕獲分子,抗體與靶抗原形成三明治結(jié)構(gòu),在檢測(cè)線上形成紅線。FREW等[31]用抗核衣殼蛋白抗體偶聯(lián)150 nm AuNPs建立試紙條測(cè)試,檢測(cè)SARS-CoV-2抗原,能在15 min內(nèi)檢出陽(yáng)性樣本。近年來,核酸探針代替抗體被用于設(shè)計(jì)LFA,用于靶核酸的定性和定量分析。XU等[32]將穩(wěn)定的DNA四面體捕獲探針放置在檢測(cè)線上,其與靶催化組裝的H1-H2雙鏈、鏈酶親和素修飾的AuNPs結(jié)合形成夾心復(fù)合物,檢測(cè)外泌體微小RNA(miRNA)。此外,核酸適配體技術(shù)的快速發(fā)展擴(kuò)展了LFA的檢測(cè)范圍,基于適體的LFA在小分子檢測(cè)方面也顯示了良好的應(yīng)用前景。MAO等[33]設(shè)計(jì)了一個(gè)與適體序列互補(bǔ)的cDNA偶聯(lián)的AuNPs探針,與目標(biāo)啶蟲脒競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合檢測(cè)線上適體,最小檢出濃度為0.33 ng/mL。GUO等[34]巧妙運(yùn)用了T-Hg2+-T堿基對(duì)共軛,提出了基于胸腺嘧啶錯(cuò)配捕獲AuNPs的LFA方法,用于檢測(cè)Hg2+。AuNPs LFA通過簡(jiǎn)單的比色信號(hào)或裸眼視覺檢出,具備快速簡(jiǎn)便的優(yōu)勢(shì),靈敏度低是其主要缺陷。通過引入信號(hào)放大技術(shù),改變AuNPs的大小或形狀,開發(fā)熒光-LFA、SERS-LFA等新型方法,有助于提高靈敏度[35]。

2.3基于AuNPs的熒光傳感體系 AuNPs可引起距離依賴性熒光淬滅或增強(qiáng)(近距離熒光淬滅,閾值距離外熒光增強(qiáng)),可通過靶識(shí)別精確組裝AuNPs與熒光基團(tuán)。CHOI等[36]將金半殼/聚苯乙烯納米球表面修飾捕獲ssDNA,其與靶DNA、熒光基團(tuán)偶聯(lián)的ssDNA形成夾心式雜交,通過等離子體激元增強(qiáng)熒光。隨后較小的AuNPs被引入,淬滅吸附在其表面的未雜交ssDNA的背景熒光,使靈敏度提高約103倍。然而,精確控制AuNPs與熒光基團(tuán)從淬滅到增強(qiáng)仍然是一個(gè)挑戰(zhàn)。常見的策略是熒光基團(tuán)置于AuNPs表面時(shí)被淬滅,遠(yuǎn)離AuNPs表面熒光即恢復(fù)。該策略結(jié)合DNA walker高效的信號(hào)放大功能,可顯著提高檢測(cè)靈敏度。TAN等[37]利用DNAzyme序列組成的walker,循環(huán)切割A(yù)uNPs表面探針產(chǎn)生熒光信號(hào),檢測(cè)尿嘧啶-DNA糖基化酶。ZHOU等[38]用walker鏈與AuNPs表面熒光探針雜交,觸發(fā)Nb.BbvCⅠ蛋白酶切割釋放熒光信號(hào)并驅(qū)動(dòng)walker位移,檢測(cè)外泌體。

相較于常見的熒光基團(tuán),碳量子點(diǎn)(CQD)等新興的納米材料,在光穩(wěn)定性、低細(xì)胞毒性和生物相容性方面具有明顯優(yōu)勢(shì)[39]?；贑QD和AuNPs的熒光共振能量轉(zhuǎn)移系統(tǒng)適合用于復(fù)雜樣品分析。SHI等[40]通過脫落酸ABA-適體識(shí)別結(jié)合觸發(fā)AuNPs的聚集,阻礙了AuNP與CQDs之間的能量轉(zhuǎn)移過程,導(dǎo)致熒光淬滅。

2.4基于AuNPs的電化學(xué)傳感體系 在電化學(xué)傳感器中,AuNPs可以通過促進(jìn)電子轉(zhuǎn)移、固定生物分子、標(biāo)記生物分子等方式發(fā)揮作用。常見的策略可分為兩類,一類是將AuNPs沉積在基底表面,另一類是通過靶分子結(jié)合事件將AuNPs固定在傳感器表面[41]。AuNPs沉積在電極表面,為核酸、抗體等識(shí)別元件固定提供了位點(diǎn),通過促進(jìn)電子轉(zhuǎn)移放大電化學(xué)信號(hào)。ALAFEEF等[42]將AuNPs沉積在石墨烯表面,修飾ssDNA的AuNPs與SARS-CoV-2 RNA特異性結(jié)合,可在5 min內(nèi)輸出電化學(xué)信號(hào)。ROBERTS等[43]將AuNPs滴注到氧化錫電極上用作信號(hào)放大器,并固定特異性抗體以檢測(cè)SARS-CoV-2 S1抗原。AuNPs通過靶標(biāo)結(jié)合事件固定到傳感器表面是另一種方式。AuNPs表面通常標(biāo)記電活性物質(zhì)和酶,標(biāo)記的酶可催化底物水解成可溶性電活性產(chǎn)物,實(shí)現(xiàn)電化學(xué)反應(yīng)信號(hào)檢測(cè)[44]。HU等[45]將黏蛋白適體和辣根過氧化物酶HRP固定在AuNPs上,靶分子與適體結(jié)合后,導(dǎo)致AuNPs被捕獲到傳感器表面。HRP酶催化底物轉(zhuǎn)化,檢測(cè)電活性產(chǎn)物的信號(hào)。AuNPs標(biāo)記電活性物質(zhì),是通過該物質(zhì)直接轉(zhuǎn)化為可測(cè)量的電化學(xué)信號(hào)。ZHANG等[46]針對(duì)外泌體設(shè)計(jì)3種特異性適體,外泌體結(jié)合電極表面適體,同時(shí)結(jié)合適體修飾的AuNPs,以AuNPs表面亞甲藍(lán)和二茂鐵為信號(hào)單元,檢測(cè)乳腺癌外泌體。研究AuNPs在電極表面發(fā)生反應(yīng)的機(jī)制以及如何增強(qiáng)其電催化性能,將有助于設(shè)計(jì)更有效的電化學(xué)傳感器。

2.5基于AuNPs的SERS傳感體系 AuNPs作為高靈敏度和更可控的SERS基底,被廣泛應(yīng)用于SERS傳感領(lǐng)域。SERS可分為非標(biāo)記分析和標(biāo)記分析。非標(biāo)記分析即SERS基底上不需要標(biāo)記分析物,檢測(cè)AuNPs表面天然分析物的SERS信息[47]。FRAIRE等[48]在外泌體囊泡表面官能化AuNPs,通過SERS信號(hào)鑒定單個(gè)外泌體類別,并在原位生長(zhǎng)銀層形成Au@AgNPs,消除AuNPs表面配體產(chǎn)生的干擾信號(hào),從而得到清晰的生物結(jié)構(gòu)的SERS光譜指紋。標(biāo)記分析是指AuNPs表面可標(biāo)記或吸附拉曼信號(hào)分子。CAMACHO等[49]設(shè)計(jì)了一種增強(qiáng)拉曼散射的殼核納米結(jié)構(gòu),該結(jié)構(gòu)由AuNPs和涂覆有尼羅藍(lán)(拉曼報(bào)告子)的二氧化硅殼組成,殼層有效減少了背景信號(hào)的干擾,通過在其表面修飾抗體,可檢測(cè)低至10 ng/mL的寨卡病毒NSl抗原。由于生物樣品的復(fù)雜性,強(qiáng)背景干擾成為SERS技術(shù)應(yīng)用于核酸檢測(cè)的主要限制。PAN等[50]依據(jù)Au@Ag核殼納米粒子與Fe(CN)64-的獨(dú)特拉曼峰檢測(cè)靶DNA,最終顯示為未受背景干擾的SERS信號(hào)。

SERS基底上的熱點(diǎn)分布極不均勻,局部增強(qiáng)的電磁場(chǎng)主要集中在納米間隙和尖端等區(qū)域。可通過合理設(shè)計(jì)納米間隙,在納米組件之間產(chǎn)生增強(qiáng)的熱點(diǎn),如利用DNAzyme裂解底物使AuNPs接近金薄膜產(chǎn)生熱點(diǎn)檢測(cè)Pb2+[51]。如何構(gòu)建高密度、分布均勻的熱點(diǎn),實(shí)現(xiàn)熱點(diǎn)中拉曼分子的有效富集,是SERS面臨的重要挑戰(zhàn)[52]。

2.6基于AuNPs的電化學(xué)發(fā)光傳感體系 電化學(xué)發(fā)光(ECL)是由電化學(xué)反應(yīng)引發(fā)化學(xué)發(fā)光的現(xiàn)象。ECL效應(yīng)取決于AuNPs與ECL發(fā)光載體之間的距離。近距離時(shí),發(fā)光載體的ECL與AuNPs發(fā)生共振能量轉(zhuǎn)移導(dǎo)致ECL淬滅效應(yīng);在遠(yuǎn)點(diǎn)的距離(<10 nm),AuNPs獨(dú)特的LSPR誘導(dǎo)的增強(qiáng)電磁場(chǎng)可以增強(qiáng)ECL載體的發(fā)射,從而增強(qiáng)信號(hào)[53]。BROWN等[54]在電極表面沉積AuNPs,AuNPs可明顯增加電活性面積,促進(jìn)目標(biāo)吉西他濱的電催化氧化,使ECL信號(hào)強(qiáng)度增加了60倍。VILLA等[55]利用鉑涂層的金核納米顆粒與[Ru(bpy)3]2+發(fā)生ECL共振能量轉(zhuǎn)移,檢測(cè)SARS-CoV-2病毒N蛋白,顯示出低檢測(cè)限和寬線性響應(yīng)范圍。為更好地實(shí)現(xiàn)ECL增強(qiáng)效應(yīng),需考慮如何精確控制AuNPs與發(fā)光載體的距離、改善識(shí)別元件在電極表面的分布等問題。

2.7基于AuNPs的其他傳感體系

2.7.1光纖LSPR傳感 光纖LSPR傳感器是將AuNPs放置在光纖截面上,利用光纖產(chǎn)生的倏逝場(chǎng)激發(fā)AuNPs形成LSPR,AuNPs表面結(jié)合事件會(huì)導(dǎo)致周圍介質(zhì)折射率的增加,引起LSPR吸收峰強(qiáng)度變化[56]。KIM等[57]將抗體偶聯(lián)的球形AuNPs附著在光纖表面,靶抗原與抗體反應(yīng)引起光纖上AuNPs與游離AuNPs之間的耦合,導(dǎo)致LSPR信號(hào)改變。NING等[58]基于靶DNA催化的雜交鏈?zhǔn)椒磻?yīng)組裝大量AuNPs,與“Ω”形光纖表面的AuNPs探針雜交,LSPR信號(hào)明顯增強(qiáng)。光纖LSPR傳感僅依賴于紫外吸收光譜儀讀數(shù),具備無標(biāo)記、小型化、快速的優(yōu)點(diǎn)。

2.7.2光熱傳感 光熱傳感檢測(cè)是基于AuNPs產(chǎn)生的光熱效應(yīng)。LSPR現(xiàn)象使AuNPs產(chǎn)生較高的光吸收,聚集態(tài)AuNPs表現(xiàn)出較強(qiáng)的光熱轉(zhuǎn)換效應(yīng)[59],使生物標(biāo)記物的信息轉(zhuǎn)換為光熱信號(hào),結(jié)合溫度計(jì)即可進(jìn)行定量檢測(cè)。靶標(biāo)引入誘導(dǎo)AuNPs聚集是常見的策略,結(jié)合AuNPs表面不同的偶聯(lián)物,可以檢測(cè)不同靶標(biāo),如結(jié)核分枝桿菌DNA[60]、胰蛋白酶[61]。光熱傳感平臺(tái),選擇溫度作為信號(hào)讀數(shù),具有成本低、操作方便、背景低等優(yōu)點(diǎn),有應(yīng)用于POCT的潛力。

2.7.3光電化學(xué)(PEC)傳感 PEC傳感的原理是光敏材料在吸收光后被激發(fā)產(chǎn)生電子空穴對(duì),導(dǎo)致電荷分離和電荷轉(zhuǎn)移形成光電流[62]。在PEC過程中,AuNPs因LSPR效應(yīng)會(huì)明顯增加光吸收,增強(qiáng)電荷分離,從而提高PEC性能[63]。例如在金屬蛋白酶的檢測(cè)中,AuNPs被沉積到光敏電極表面,為識(shí)別元件提供固定位點(diǎn)的同時(shí)提高光電轉(zhuǎn)換效率[64]。因光激發(fā)源與電化學(xué)響應(yīng)信號(hào)分離,PEC傳感具有良好的信噪比和靈敏度。

3 展 望

快速、靈敏、準(zhǔn)確、低成本的檢測(cè)方法一直是人們關(guān)注的問題。新型傳感模式和納米材料(特別是AuNPs)為解決這些問題提供了策略。基于AuNPs在光、電及生物相容性方面的優(yōu)勢(shì),其應(yīng)用不僅限于生物傳感,可以為疾病的診斷和治療開辟更多新的途徑,包括藥物靶向輸送及腫瘤的成像與治療等。AuNPs可與其他材料結(jié)合制成雜化材料,如金屬氧化物、聚合物、脂質(zhì)、無機(jī)材料、金屬有機(jī)骨架等[65],該雜化物具有物理或化學(xué)的協(xié)同效應(yīng)或具有新的功能,因而應(yīng)用范圍更廣泛,已用于藥物遞送、體外診斷、生物成像等各種領(lǐng)域。盡管基于AuNPs的體外診斷應(yīng)用的研究已取得了很大的進(jìn)展,但仍有一些關(guān)鍵問題有待解決,例如如何保證AuNPs分析平臺(tái)的可重復(fù)性、可靠性、AuNPs的均一性等?？傊?AuNPs技術(shù)具有廣闊的應(yīng)用前景,通過不斷優(yōu)化應(yīng)用條件,可使其在生物醫(yī)學(xué)領(lǐng)域發(fā)揮更大的應(yīng)用價(jià)值。