盛玲潔 徐 佳 戴靜靜 王海芳 曹傲能

（上海大學(xué)環(huán)境與化學(xué)工程學(xué)院，納米化學(xué)與生物學(xué)研究所，上海 200444）

以納米粒子（NPs）來模擬天然蛋白質(zhì)既是一個(gè)重要的科學(xué)問題，也具有廣闊的生物醫(yī)學(xué)應(yīng)用前景［1］。目前賦予NPs與蛋白質(zhì)特異性作用的生物功能的常用方法是在NPs表面直接連接具有該功能的分子基團(tuán)［2-3］。比如，很多研究都在NPs 表面直接修飾完整的蛋白質(zhì)，但由于NPs對(duì)蛋白質(zhì)構(gòu)象的影響以及難以控制NPs上蛋白質(zhì)的取向，作用效果常常低于預(yù)期，而且蛋白質(zhì)較大的分子體積也常常影響作用效果和應(yīng)用范圍［4］。在NPs表面直接連接具有活性的蛋白質(zhì)片段也是一種常用的手段［5］，但絕大多數(shù)蛋白質(zhì)片段離開了原來的蛋白質(zhì)骨架后就沒有了穩(wěn)定的構(gòu)象和功能，因此這種方法的應(yīng)用范圍也極為有限。

能不能在NPs 上重建蛋白質(zhì)片段的天然構(gòu)象，從而恢復(fù)其天然活性呢？針對(duì)這個(gè)問題，最近本課題組［6］提出“構(gòu)象工程”概念，旨在通過精確控制NPs 表面的柔性基團(tuán)（多肽片段）的構(gòu)象賦予NPs新的生物功能。和通常應(yīng)用一個(gè)化學(xué)鍵把多肽連接到NPs 上的方法不同，本課題組［6］巧妙地通過兩個(gè)Au-S 鍵將一段來自天然抗體、單獨(dú)存在時(shí)沒有穩(wěn)定構(gòu)象和功能的互補(bǔ)決定簇區(qū)（CDR）多肽連接到金納米粒子（AuNPs）表面，成功地重建了CDR 多肽的天然構(gòu)象，得到了像原天然抗體一樣能特異性識(shí)別原抗原的的納米人工抗體——金抗體（Goldbody）。進(jìn)一步的丙氨酸掃描突變等實(shí)驗(yàn)證明，金抗體中CDR 片段的結(jié)合構(gòu)象與其在原天然抗體中的完全一致［7］。這一構(gòu)象工程技術(shù)也得到了其他課題組的理論計(jì)算和實(shí)驗(yàn)的驗(yàn)證［8-9］。Liu等［10］和Wang等［11］后續(xù)利用構(gòu)象工程技術(shù)制備出了多種靶向不同抗原的金抗體，同時(shí)，許艷嬌等［12］研究表明，金抗體在實(shí)際應(yīng)用中有望代替天然抗體。這些金抗體不僅具有和原天然抗體一樣的特異性，而且穩(wěn)定性更好。Willson教授［13］專門為這一構(gòu)象工程技術(shù)創(chuàng)造了一個(gè)特殊的術(shù)語“金化”，將其與醫(yī)用抗體中的“人源化”技術(shù)相比。在金抗體工作取得成功的基礎(chǔ)上，Xu 等［14］研究發(fā)現(xiàn)，構(gòu)象工程技術(shù)并不僅僅局限于AuNPs，在銀納米粒子（AgNPs）上同樣可以重建CDR 片段的天然構(gòu)象，并制備出了能特異性結(jié)合原抗原的銀抗體。

金抗體和銀抗體的成功表明了構(gòu)象工程技術(shù)可能是一種普適性的技術(shù)，只要NPs表面的原子具有流動(dòng)性以保證連接的多肽能夠進(jìn)行構(gòu)象調(diào)整，其他NPs，特別是與Au 和Ag 相似的貴金屬NPs 都可以作為構(gòu)象工程的骨架。在眾多貴金屬中，鉑的化合物和鉑納米粒子（PtNPs）在抗腫瘤治療中具有廣闊的應(yīng)用前景［15-16］。此外，PtNPs由于具有良好的熱穩(wěn)定性和較高的光熱轉(zhuǎn)換效率，還常被用作抗癌藥物的載體［17］。如果能夠應(yīng)用構(gòu)象工程技術(shù)開發(fā)基于PtNPs 的鉑抗體，即賦予PtNPs 像天然抗體一樣的、特異性識(shí)別靶蛋白的能力，那將為研發(fā)高度靶向性的PtNPs藥物載體提供一條全新的路徑。

本文以在金抗體和銀抗體中都取得成功的抗溶菌酶天然抗體（cAB-lys3）中CDR3 多肽片段為研究對(duì)象，通過兩個(gè)Pt-S 鍵將其連接到2.5 nm 的PtNPs 上，經(jīng)過PtNPs 表面多肽密度調(diào)控和聚乙二醇（PEG）修飾等優(yōu)化過程，成功地制備出了能夠特異性識(shí)別溶菌酶并抑制其活性的鉑抗體。

1 材料與方法

1.1 試劑與儀器

磷酸二氫鈉、磷酸氫二鈉、濃硝酸、濃鹽酸、二水合檸檬酸鈉、六水合氯鉑酸和硼氫化鈉購于國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司；鉑標(biāo)準(zhǔn)溶液（100 mg/L）購于鋼研納克檢測(cè)技術(shù)有限公司；溶菌酶和溶壁微球菌購于美國Sigma-Aldrich 公司；SH-PEG-SH（平均分子質(zhì)量為1 ku）購于上海芃碩生物科技有限公司。所用試劑均為分析純。多肽P1、多肽P1m 和多肽P1s 購于上?？齐纳锟萍加邢薰?，純度均大于95%。 實(shí)驗(yàn)中使用超純水（18.2 MΩ·cm，美國Millipore公司）。

U-3010 型紫外-可見分光光度計(jì)（日本HⅠTACHⅠ公司）；HT7700 型透射電子顯微鏡（日本日立公司）；ZS90 型納米粒度分析儀（英國Malvern 公司）；F-7000 型熒光光譜儀（日本HⅠTACHⅠ公司）；PinAAcle 900T 型原子吸收光譜儀（美國PerkinElmer公司）。

1.2 PtNPs的合成

參考和改進(jìn)了文獻(xiàn)［18-20］中的水熱合成方法，制備了PtNPs。具體來說，在25℃恒溫水浴中，向盛有38 ml超純水的圓底燒瓶中加入1 ml濃度為16 mmol/L 的氯鉑酸溶液和1 ml 濃度為40 mmol/L 的檸檬酸鈉溶液，攪拌30 min。之后用注射泵逐滴加入0.2 ml 新鮮配制的50 mmol/L 的硼氫化鈉，攪拌1 h。制備完成后樣品封口避光保存于4℃冰箱中待用。使用前用0.22 μm濾膜過濾。

1.3 PtNPs濃度及粒徑的測(cè)定

采用原子吸收光譜儀（AAS）對(duì)PtNPs樣品的濃度進(jìn)行定量。首先，將一定體積的樣品溶液加入超濾管（Amicon-Ultra-15，截留分子質(zhì)量為3 ku，Millipore公司）中，5 000g轉(zhuǎn)速下超濾20 min，去除未反應(yīng)的氯鉑酸；隨后，向濃縮好的樣品中加入新鮮配制的王水，使其充分溶解，再加熱趕酸并定容，最后在AAS 上測(cè)量。標(biāo)準(zhǔn)曲線由用氯鉑酸標(biāo)準(zhǔn)溶液配制的一系列不同濃度的標(biāo)樣繪制。樣品來自3 個(gè)不同批次合成的PtNPs，每個(gè)批次的樣品分析3 個(gè)平行樣，測(cè)量結(jié)果取平均值。PtNPs 的粒徑結(jié)合電鏡圖進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。最后，用PtNPs的顆粒半徑（r）、樣品中Pt 的濃度以及Pt 的密度（ρ，21.45 g/cm3），根據(jù)公式（1）計(jì)算出樣品中PtNPs的摩爾濃度。

其中NA是阿伏伽德羅常數(shù)。

1.4 鉑抗體的制備

取6 ml PtNPs 溶液加入10 ml 玻璃瓶中，玻璃瓶放置在磁力攪拌器上，轉(zhuǎn)速設(shè)置為650 r/min。隨后，向玻璃瓶中加入10 μl 0.2 mol/L 的檸檬酸鈉溶液，提高溶液的穩(wěn)定性，防止PtNPs 發(fā)生團(tuán)聚。接著，在攪拌的條件下將2 ml多肽溶液（或多肽與SH-PEG-SH的混合溶液）逐滴勻速地加入到PtNPs溶液中，室溫下反應(yīng)12 h。反應(yīng)結(jié)束后，將多肽修飾后的PtNPs樣品避光放置于4°C冰箱備用。

1.5 PtNPs接肽后的表征

將多肽修飾后的PtNPs 溶液加入超濾管（Amicon-Ultra-15， 截留分子質(zhì)量為30 ku，Millipore公司）中，1 500g轉(zhuǎn)速下超濾15 min，收集下清溶液。通過熒光光譜儀來測(cè)量反應(yīng)前和反應(yīng)后游離多肽的熒光強(qiáng)度，以定量多肽嫁接到PtNPs表面的效率。多肽的熒光強(qiáng)度測(cè)量的激發(fā)波長設(shè)置為280 nm，激發(fā)狹縫寬度為5 nm，發(fā)射狹縫寬度為5 nm，發(fā)射譜的波長收集范圍是300~400 nm。同時(shí)，采用納米粒度儀表征多肽修飾前后PtNPs水合粒徑的變化。

1.6 鉑抗體對(duì)溶菌酶活性抑制的檢測(cè)

利用紫外-可見分光光度計(jì)檢測(cè)在鉑抗體及對(duì)照樣品存在條件下，溶菌酶酶解溶壁微球菌導(dǎo)致細(xì)菌吸光度的變化來定量測(cè)定溶菌酶的酶活［21-22］。整個(gè)測(cè)試體系的溫度控制在25℃，溶液環(huán)境是pH=6.2 的0.1 mol/L 磷酸鹽緩沖溶液。為了保證對(duì)溶菌酶活性的抑制效果，鉑抗體與溶菌酶的摩爾濃度比控制在1∶1~1∶3之間，且溶菌酶濃度固定為30 nmol/L，溶壁微球菌的濃度固定為0.13 g/L。在實(shí)驗(yàn)開始前，先將溶菌酶和溶壁微球菌溶液分別置于25℃恒溫水浴中預(yù)孵育1 h。實(shí)驗(yàn)中，取1 ml樣品加入5 ml 離心管中，并在25℃恒溫水浴中孵育3 min，隨后加入0.5 ml 溶菌酶溶液，震蕩混合均勻，1 min 后向其中加入1 ml 溶壁微球菌溶液，快速震蕩混合均勻，30 s后，取1 ml三者混合液加入比色皿中，用紫外-可見分光光度計(jì)測(cè)量其90 s 內(nèi)450 nm 處的吸光度隨時(shí)間的變化，溶菌酶活性以吸光度隨時(shí)間變化曲線的斜率表示。在測(cè)定溶菌酶活性的抑制實(shí)驗(yàn)中，鉑抗體及對(duì)照樣品預(yù)先和溶菌酶溶液混合，再按上述方法測(cè)定溶菌酶活性，并根據(jù)公式（2）計(jì)算出抑制率。

2 結(jié)果與討論

2.1 鉑抗體的設(shè)計(jì)

鉑抗體的設(shè)計(jì)思想如圖1 所示。P1 是從cABlys3的CDR3中截取的多肽片段，并在其兩端各添加一個(gè)半胱氨酸，以便通過Pt-S鍵將多肽片段的兩個(gè)末端連接在PtNPs 表面。自由狀態(tài)下的P1 沒有穩(wěn)定的構(gòu)象，因而也就沒有識(shí)別抗原的功能。只有通過構(gòu)象工程在PtNPs 表面重建P1 在原抗體中的天然構(gòu)象后，才可能像原天然抗體cAB-lys3一樣，通過CDR3深插到溶菌酶的活性位點(diǎn)裂縫與溶菌酶特異性結(jié)合，并抑制溶菌酶的活性［23-24］。為了減少鉑抗體對(duì)蛋白質(zhì)的非特異性吸附，根據(jù)前期研究成果［25］，還引入SH-PEG-SH來輔助多肽的構(gòu)象工程。另外，和金抗體及銀抗體工作一樣，為了對(duì)比顯示構(gòu)象工程的效果，本文將兩條對(duì)照多肽，P1m和P1s，也分別修飾到PtNPs 表面。其中，P1m 僅僅比P1 少了C 端的半胱氨酸，只能一端錨定在PtNPs 上，因而無法對(duì)其構(gòu)象進(jìn)行精確調(diào)控，P1s具有和P1 相同的氨基酸組成，在兩端都有半胱氨酸，但中間序列則被完全打亂，P1s被用來作為和溶菌酶非特異性相互作用的對(duì)照多肽。如果構(gòu)象工程可以在PtNPs 上實(shí)現(xiàn)，則PtNPs 和多肽的復(fù)合物（PtNP-Pep）對(duì)溶菌酶酶活的抑制率的順序應(yīng)該為：PtNP-P1>PtNP-P1m>PtNP-P1s。

Fig. 1 Scheme of the design of the anti-HEWL Platinumbody

2.2 PtNPs的形貌表征及濃度測(cè)定

采用透射電子顯微鏡（TEM）對(duì)PtNPs進(jìn)行了形貌表征。由圖2a可見，PtNPs保持著良好的分散性，粒徑也較為均一。對(duì)TEM 圖的PtNPs 粒徑進(jìn)行統(tǒng)計(jì)（圖2b），得到PtNPs 平均粒徑約為2.5 nm。

利用AAS 對(duì)合成的PtNPs 樣品的濃度進(jìn)行定量。如表1所示，樣品批次間的平行性良好，說明合成和純化方法重復(fù)性好。取不同批次的平均值23.77 mg/L作為樣品中PtNPs的含量。結(jié)合TEM測(cè)量的PtNPs粒徑約為2.5 nm，根據(jù)公式（1），計(jì)算得到合成出來的PtNPs濃度為225 nmol/L。

Table 1 Pt contents of the PtNP solutions determined by AAS

2.3 多肽修飾后PtNPs的理化性質(zhì)表征

經(jīng)不同多肽修飾后的PtNPs依然保持著良好的分散性，粒徑也較為均一（圖3）。同時(shí)，為了定性表征多肽成功修飾在PtNPs表面，采用納米粒度儀對(duì)多肽修飾前后PtNPs 水合粒徑的變化進(jìn)行測(cè)定。如圖4 所示，經(jīng)多肽修飾的PtNPs 相較于未被修飾的PtNPs粒徑發(fā)生了明顯地增大。水合粒徑的增大證明了多肽已成功地修飾在PtNPs表面。

Fig. 3 TEM images of PtNP-peptide conjugates

Fig. 4 Sizes of PtNPs and PtNP-peptide conjugates in water characterized by dynamic light scattering（DLS）

為了定量多肽連接到PtNPs上的效率，本文通過超濾的方法，用熒光光譜儀測(cè)定了反應(yīng)前總的多肽和反應(yīng)后游離多肽的熒光強(qiáng)度。當(dāng)PtNPs濃度為225 nmol/L，多肽與PtNPs 的摩爾投料比為60∶1時(shí)，反應(yīng)后的游離多肽與投入多肽的熒光強(qiáng)度相比極弱（圖5）。這一結(jié)果表明，在此條件下溶液中幾乎不含游離的多肽，也就是說幾乎100%的多肽已修飾到PtNPs表面。

2.4 PtNPs表面多肽的構(gòu)象調(diào)控

金抗體和銀抗體的研究都表明，優(yōu)化NPs表面的多肽密度可以更好地調(diào)控多肽構(gòu)象。優(yōu)化多肽密度有兩方面的作用。一方面，合適的多肽密度可以對(duì)多肽在NPs表面的移動(dòng)加以必要的限制；另一方面，覆蓋NPs表面，以避免NPs普遍存在的對(duì)蛋白質(zhì)的非特異性吸附。參考前期金抗體和銀抗體的結(jié)果，首先在2.5 nm 的PtNPs 表面連接了60 條多肽（簡(jiǎn)寫為PtNP-60P1，其他依此類推），對(duì)它的抗溶菌酶活性進(jìn)行了測(cè)定。圖6所示的溶菌酶測(cè)活結(jié)果表明，30 nmol/L 的PtNP-60P1 可以顯著地抑制溶菌酶的活性，但30 nmol/L 的PtNP-60P1s 也具有較強(qiáng)抑制能力，表明PtNP-60P1s 存在明顯的非特異性相互作用。由于抑制劑對(duì)酶的抑制率隨濃度的增加存在飽和效應(yīng)，30 nmol/L 已經(jīng)超過PtNP-60P1和PtNP-60P1m 的最大抑制濃度，因此它們之間的差距被掩蓋。為了展示PtNP-60P1 和PtNP-60P1m抑制能力的差別，又檢測(cè)了15 nmol/L 時(shí)兩者對(duì)溶菌酶活力的抑制能力。結(jié)果顯示，當(dāng)濃度降低到15 nmol/L后，PtNP-60P1對(duì)溶菌酶的抑制能力要顯著強(qiáng)于PtNP-60P1m，初步顯示出了構(gòu)象工程的效果（圖6）。盡管PtNP-P1m不能控制多肽構(gòu)象，但P1m 本身具有微弱的活性，而且由于每個(gè)PtNPP1m 上有60 條多肽，多價(jià)效應(yīng)能夠顯著增強(qiáng)P1m的活性，使得PtNP-P1m 也表現(xiàn)出略高于PtNP-P1s的抑制能力，但差別沒有統(tǒng)計(jì)顯著性。

Fig. 5 Conjugation efficiency shown by the fluorescence spectra of the total peptides （dotted black lines） before conjugation onto PtNPs and the free peptides （red lines） after conjugation

Fig. 6 Inhibition of the enzymatic activity of lysozyme by the PtNP-peptide conjugates with different concentrations

圖6 的抑制酶活結(jié)果符合預(yù)期的PtNP-P1>PtNP-P1m>PtNP-P1s順序，初步顯示了構(gòu)象工程的成功。但PtNP-P1s 顯示出比前期AuNP-P1s 和AgNP-P1s 更強(qiáng)的非特異性吸附能力［6，14］。而且，和AuNP-P1s 非特異性隨著P1s 密度的增加而下降的趨勢(shì)不同［6］，即使增加P1s 在PtNPs 上的密度并不能降低PtNP-P1s 對(duì)溶菌酶的非特異性吸附（圖7），這種區(qū)別可能是NPs 的粒徑不同造成的［26-27］。PtNP-Pep中的PtNPs粒徑只有2.5 nm，比先前金抗體中的AuNPs （3.6 nm） 和銀抗體中的AgNPs（5 nm）粒徑更小，更容易進(jìn)入溶菌酶的活性裂縫處。同時(shí)雖然P1s 序列已被打亂，但P1s 能與溶菌酶活性位點(diǎn)結(jié)合的3 個(gè)關(guān)鍵疏水殘基Tyr（對(duì)應(yīng)于原天然抗體中的Y99、Y100b、Y100c）依然存在，這樣同一PtNPs 上的多個(gè)P1s 多肽上的疏水殘基可能同時(shí)與溶菌酶相互作用而產(chǎn)生較強(qiáng)的“非特異性”結(jié)合。

Fig. 7 Inhibition of the enzymatic activity of lysozyme by the PtNP-xP1s conjugates with various peptide densities on the surface of PtNPs

研究顯示，在NPs 上嫁接雙頭巰基的PEG 可以輔助多肽在NPs表面的構(gòu)象工程，大大減少多肽的用量［25］；同時(shí)，PEG 是FDA 批準(zhǔn)的安全聚合物，且容易功能化在NPs表面，對(duì)NPs表面進(jìn)行空間屏蔽，能有效地減少NPs 對(duì)蛋白質(zhì)的吸附［28-29］。因此，本工作隨即在PtNPs表面修飾了一定數(shù)量的雙頭巰基PEG?？紤]到PEG 鏈的柔性，為避免過長的PEG 鏈覆蓋在多肽表面，從而降低P1 對(duì)溶菌酶的特異性吸附，本文選擇了分子質(zhì)量為1 ku的短鏈雙頭巰基PEG。從圖8a 可見，當(dāng)每個(gè)粒子上的P1s多肽數(shù)量降低并固定在20個(gè)時(shí)，隨著PEG個(gè)數(shù)的增加，PtNP-P1s對(duì)溶菌酶活性的抑制率下降，表明與溶菌酶的非特異性結(jié)合減少。當(dāng)PEG 個(gè)數(shù)為10 時(shí)，PtNP-P1s 對(duì)溶菌酶的非特異性吸附已顯著減弱，繼續(xù)增加PEG 數(shù)量雖然可以進(jìn)一步減少非特異性吸附，但減弱程度變小并逐漸趨于穩(wěn)定。因?yàn)楹罄m(xù)還需要在粒子上修飾多肽P1，所以選定PtNPs表面修飾PEG的個(gè)數(shù)為10。

為了進(jìn)一步優(yōu)化多肽密度，實(shí)驗(yàn)中固定PtNPs上PEG數(shù)為10，同時(shí)固定P1數(shù)量為20，然后通過添加不同數(shù)量的P1s，分析粒子對(duì)溶菌酶活性的影響。這樣設(shè)計(jì)主要是為了保持具有較強(qiáng)的特異性吸附的P1數(shù)量不變，用弱吸附的P1s來調(diào)控密度，以盡量減少多價(jià)效應(yīng)對(duì)結(jié)果判斷的影響。由圖8b 可見，在固定10PEG 和20P1 的條件下，在PtNPs 表面再嫁接10個(gè)P1s對(duì)溶菌酶活性的抑制明顯優(yōu)于其他數(shù)量的P1s?；谏鲜鰧?shí)驗(yàn)結(jié)果，最終選定PtNPs 表面的最佳功能基團(tuán)密度為每個(gè)PtNP（2.5 nm）上連接10 條PEG 和30 條多肽，而PtNP-10PEG-30P1 即為本工作優(yōu)化得到的抗溶菌酶鉑抗體。

Fig. 8 Reducing non-specific interaction by PEG and optimizing specific interaction by adjusting the density of P1 on PtNPs

圖9 顯示了30 nmol/L 的鉑抗體對(duì)30 nmol/L 溶菌酶活性抑制的結(jié)果，可見鉑抗體對(duì)溶菌酶的抑制能力顯著高于作為對(duì)照的PtNP-10PEG-30P1m 和PtNP-10PEG-30P1s。特別需要指出的是，相比圖6中的PtNP-60P1，鉑抗體中P1數(shù)量減少了一半，因而多價(jià)性效應(yīng)的作用已大大減少，同時(shí)PEG 的引入也降低了鉑抗體對(duì)溶菌酶的非特異性吸附。因此圖9顯示的鉑抗體對(duì)溶菌酶活性的顯著抑制能力很好地證明了在PtNPs上構(gòu)象工程的成功。但與金抗體和銀抗體相比，在PtNPs上進(jìn)行構(gòu)象工程難度較大，這也是預(yù)料之中的結(jié)果。以金抗體為代表的通過在AuNPs 上重構(gòu)天然蛋白質(zhì)片段的天然構(gòu)象來制備人工抗體之所以能夠成功，首先是因?yàn)檫@些片段有形成其天然構(gòu)象的傾向性，其背后的理論基礎(chǔ)是蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)的“限域下最低能量片段”理論［30-31］。其次還要求NPs表面的原子像金、銀、鉑一樣具有一定的流動(dòng)性，使得通過調(diào)整多肽兩端在NPs上的跨度調(diào)控多肽的構(gòu)象成為可能［6，13］。金屬的熔點(diǎn)大致反映了NPs位于晶格最外層的原子的活潑性。鉑的熔點(diǎn)高于金和銀，因而PtNPs表面的鉑原子要比AuNPs 表面的金原子和AgNPs 表面的銀原子更穩(wěn)定［32-33］，這意味著Pt-S 鍵的流動(dòng)性比Au-S 鍵和Ag-S 鍵弱，因此PtNPs 的表面構(gòu)象工程比AuNPs 及AgNPs 的難度更大。在金、銀、鉑3種NPs中，AgNPs穩(wěn)定性最差，雖然有利于多肽進(jìn)行構(gòu)象調(diào)控，但AgNPs 在含Cl-等溶液環(huán)境中可以溶解，這就對(duì)銀抗體的儲(chǔ)存和使用環(huán)境提出了一定要求，而PtNPs因?yàn)楦€(wěn)定，因而進(jìn)行構(gòu)象工程難度更大，但一旦在PtNPs構(gòu)象工程成功，制備的鉑抗體便具有極好的穩(wěn)定性。除了這3 種貴金屬外，許多金屬，包括非貴金屬都可以制備成NPs。在沒有進(jìn)行共價(jià)修飾之前，這些NPs表面的金屬原子處于高能態(tài)并都具有一定的流動(dòng)性，因而都可能作為進(jìn)行構(gòu)象工程的“骨架”。但另一方面，部分金屬NPs 表面常常容易被氧化，表面被氧化后的金屬NPs 可能失去了流動(dòng)性，也就不再適合進(jìn)行構(gòu)象工程。

3 結(jié)論

本文通過分子構(gòu)象工程技術(shù)，在PtNPs表面成功地實(shí)現(xiàn)了對(duì)柔性多肽構(gòu)象的控制，制備出了一種全新的抗溶菌酶人工抗體——鉑抗體。該鉑抗體可以特異性結(jié)合溶菌酶并顯著抑制其酶活。該工作拓展了分子構(gòu)象工程方法的適用范圍，證明了分子構(gòu)象工程方法的普適性，也為基于NPs的天然蛋白質(zhì)模擬和具有靶向功能的藥物載體的開發(fā)提供了一種全新思路。而蛋白質(zhì)片段在NPs上的重新折疊，以及僅依靠NPs和一小段蛋白質(zhì)片段就能重現(xiàn)天然蛋白質(zhì)的功能，也為闡明蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)-功能機(jī)制帶來新的啟示。