葛瑩，李慶海，王歡歡，魏瑩暉，王彥蘆，劉航，張雷，范京輝

(杭州市農(nóng)業(yè)科學(xué)研究院，浙江 杭州 310024)

茶源自植物茶樹(Camelliasinesis)的葉子，是世界范圍內(nèi)最受歡迎的飲料之一[1]。作為茶葉生產(chǎn)和消費(fèi)大國，我國2021年產(chǎn)茶量達(dá)300萬噸。據(jù)報道，茶葉不僅蛋白質(zhì)含量高、氨基酸和微量元素豐富，還含有茶多酚、生物堿等多種活性物質(zhì)，具有抗氧化、免疫調(diào)節(jié)、抗肥胖等作用，是一種具有開發(fā)前景的動物飼料資源[2-3]。但茶葉中的單寧能螯合飼料中的金屬元素和蛋白質(zhì)，并且抑制胰α-淀粉酶活性，是一種味澀、適口性差的抗?fàn)I養(yǎng)因子[4]。為了降解茶葉中的抗?fàn)I養(yǎng)因子，微生物固態(tài)發(fā)酵技術(shù)成為當(dāng)下研究的焦點(diǎn)。這些研究大多在茶渣的基礎(chǔ)上配伍其他輔料，以增添氮源、碳源，有助于微生物高效繁殖[5-6]。選用的微生物通常為乳酸菌類、芽胞桿菌類及真菌類3大類，且許多學(xué)者認(rèn)為多菌種聯(lián)合效果較好。胡桂萍等[7]利用乳桿菌、枯草芽胞桿菌、酵母菌和米曲霉菌進(jìn)行混合發(fā)酵，生產(chǎn)的茶飼料營養(yǎng)豐富且適口性高。Ding等[8]選用枯草芽胞桿菌、黑曲霉及釀酒酵母3種菌種發(fā)酵后，茶飼料營養(yǎng)成分均有所提高。

在蛋雞生產(chǎn)實(shí)踐中，長期產(chǎn)蛋積累的氧化應(yīng)激會造成母雞激素缺乏，產(chǎn)蛋率、蛋品質(zhì)加速下降，因此，有必要通過營養(yǎng)調(diào)控進(jìn)行改善[9-11]。有學(xué)者發(fā)現(xiàn)在飼料中添加適量綠茶粉或茶多酚能改善蛋雞生產(chǎn)性能和蛋品質(zhì)[12-13]。發(fā)酵茶飼料作為一種新型飼料原料，目前在育肥豬及肉羊研究中得到較多的報道[8，14]。在蛋雞上的研究仍相對較少，其營養(yǎng)數(shù)據(jù)和適宜添加量需補(bǔ)充和完善。本試驗(yàn)擬將發(fā)酵茶飼料以5%、10%兩種濃度添加到日糧中并連續(xù)飼喂8周，探究其對產(chǎn)蛋后期蛋雞的生產(chǎn)性能和蛋品質(zhì)的影響，以期為發(fā)酵茶飼料在蛋雞生產(chǎn)中的應(yīng)用提供參考依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

試驗(yàn)選用茶葉品種為西湖龍井，產(chǎn)自浙江杭州，由杭州市農(nóng)科院提供。黑曲霉(ZD8)、釀酒酵母(CICC1520)、枯草芽胞桿菌(BS12)由浙江大學(xué)飼料科學(xué)研究所提供。參考Ding等[8]方法，將15%茶葉、70%豆粕、15%玉米作為發(fā)酵底物，按照2∶1∶2比例加入活菌數(shù)均為1×107CFU/g的黑曲霉、釀酒酵母、枯草芽胞桿菌，將活化好的菌種均勻噴灑到原料中，邊噴灑邊攪拌混勻，裝入帶有呼吸閥的發(fā)酵袋內(nèi)，在溫度30 ℃、含水量55%的條件下厭氧發(fā)酵72 h，65 ℃烘干至恒重，制得發(fā)酵茶飼料。營養(yǎng)成分含量(以風(fēng)干樣計(jì))為水分11.75%，粗蛋白42.56%，粗脂肪2.55%，粗纖維10.95%，粗灰分7.36%，鈣0.62%，總磷0.47%。

1.2 試驗(yàn)設(shè)計(jì)

選用55周齡、健康狀況良好、產(chǎn)蛋率相近的新楊黑羽蛋雞432只，由杭州畬洪禽業(yè)股份有限公司提供。將雞群隨機(jī)分為3組，每組3個重復(fù)，每個重復(fù)48只，其中，對照組飼喂基礎(chǔ)日糧，試驗(yàn)組以5%、10%發(fā)酵茶飼料替代基礎(chǔ)日糧。參照GB/T 5916—2020《產(chǎn)蛋雞和肉雞配合飼料》推薦的蛋雞營養(yǎng)需要量配制粉狀配合飼料。各組日糧組成及營養(yǎng)成分見表1。預(yù)試期為1周，各組均飼喂基礎(chǔ)日糧且組間產(chǎn)蛋性能差異不顯著。正試期為8周。蛋雞自由采食和飲水，按照常規(guī)飼養(yǎng)流程進(jìn)行免疫和消毒。

表1 日糧組成及營養(yǎng)成分(風(fēng)干基礎(chǔ))

1.3 生產(chǎn)性能測定

試驗(yàn)期間，以重復(fù)為單位記錄每周的總產(chǎn)蛋數(shù)(含破損蛋)、總蛋重、采食量和死淘數(shù)，統(tǒng)計(jì)每周以及全程的產(chǎn)蛋率、平均蛋重、平均日采食量、料蛋比和死淘率。

1.4 雞蛋質(zhì)量參數(shù)測定

分別收集正試期第2、4、6、8 周的雞蛋，每個重復(fù)10枚。使用電子天平稱取蛋重，用游標(biāo)卡尺測量雞蛋橫徑、縱徑。分離蛋黃、蛋清、蛋殼(含蛋殼膜)。使用羅氏比色扇判斷蛋黃色澤。蛋清通過1 mm×1 mm標(biāo)準(zhǔn)檢驗(yàn)篩濾出稀蛋白，依次稱取蛋黃重、稀蛋白重、蛋殼重。濃蛋白重(g)=蛋重-蛋殼重-蛋黃重-稀蛋白重；蛋黃比=蛋黃重/蛋重×100%；稀蛋白比=稀蛋白重/蛋重×100%；濃蛋白比=濃蛋白重/蛋重×100%；蛋殼比=蛋殼重/蛋重×100%；蛋形指數(shù)=縱徑/橫徑。

1.5 蛋黃膽固醇含量及抗氧化指標(biāo)測定

試驗(yàn)結(jié)束時，每個重復(fù)隨機(jī)選取3枚雞蛋，分離出蛋黃。根據(jù)總膽固醇(TC)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、谷胱甘肽過氧化酶(GSH-Px)試劑盒說明書，蛋黃液加入9倍體積的無水乙醇抽提，4 000 r/min離心10 min，取上清液檢測TC、MDA含量；蛋黃液加入9倍體積的生理鹽水勻漿，3 000 r/min離心10 min，取上清液檢測SOD、GSH-Px水平，利用Infinite-M200 Pro酶標(biāo)儀(Tecan公司，瑞士)測定相關(guān)指標(biāo)的吸光度。以上試劑盒均購自南京建成生物工程研究所。

1.6 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)與分析

采用Excel 2016對試驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行整理。使用SPSS 22.0軟件對數(shù)據(jù)進(jìn)行單因素方差分析(One-way ANOVA)和Tukey多重比較檢驗(yàn)，結(jié)果以“平均值±標(biāo)準(zhǔn)差”表示。P<0.05表示組間差異顯著，P<0.01表示組間差異極顯著。

2 結(jié)果與分析

2.1 發(fā)酵茶飼料對產(chǎn)蛋后期蛋雞生產(chǎn)性能的影響

根據(jù)圖1所示，飼喂2周后，產(chǎn)蛋率表現(xiàn)為10%茶飼料組>5%茶飼料組>對照組；平均蛋重表現(xiàn)為對照組>5%茶飼料組>10%茶飼料組。飼喂3周后，料蛋比表現(xiàn)為對照組>10%茶飼料組>5%茶飼料組。由表2可知，相比于對照組，5%茶飼料組的產(chǎn)蛋率顯著升高且料蛋比顯著降低(P<0.05)，10%茶飼料組的產(chǎn)蛋率顯著升高但平均蛋重顯著降低(P<0.05)。平均日采食量及死淘率在3組間無顯著差異(P>0.05)。

圖1 試驗(yàn)期間蛋雞每周生產(chǎn)性能變化趨勢

表2 發(fā)酵茶飼料對產(chǎn)蛋后期蛋雞生產(chǎn)性能的影響

2.2 發(fā)酵茶飼料對產(chǎn)蛋后期雞蛋質(zhì)量參數(shù)的影響

由圖2可知，整個試驗(yàn)期間，3組的蛋黃比例、蛋殼比例、蛋形指數(shù)及蛋黃顏色均無顯著差異(P>0.05)。飼喂2、4周后，3組的濃、稀蛋白比例均無顯著差異。6周后10%茶飼料組的濃蛋白比例顯著低于對照組(P<0.05)。8周后，10%茶飼料組的濃蛋白比例顯著低于5%茶飼料組(P<0.05)，稀蛋白比例顯著高于其他兩組(P<0.05)。

*表示組間差異顯著(P<0.05)。

2.3 發(fā)酵茶飼料對產(chǎn)蛋后期蛋黃生化參數(shù)的影響

根據(jù)表3可知，飼喂8周后，相比于對照組，5%、10%茶飼料組蛋黃的TC含量顯著降低(P<0.05)，MDA含量顯著降低(P<0.05)，SOD含量顯著升高(P<0.05)，GSH-Px含量無顯著差異(P>0.05)。另外，這些參數(shù)在5%、10%茶飼料組之間無顯著差異(P>0.05)。

表3 發(fā)酵茶飼料對產(chǎn)蛋后期蛋黃生化參數(shù)的影響

3 討論

3.1 發(fā)酵茶飼料對產(chǎn)蛋后期蛋雞生產(chǎn)性能的影響

蛋雞產(chǎn)蛋后期的產(chǎn)蛋率快速下降，整體生產(chǎn)性能降低，同時蛋重逐漸增加[16-17]。丁小青等[18]發(fā)現(xiàn)使用4%生物發(fā)酵飼料代替豆粕能顯著提升320日齡仙居蛋雞產(chǎn)蛋率4.92%。吳慧敏等[19]在290日齡蛋雞飼糧中添加2%發(fā)酵茶渣能顯著提高產(chǎn)蛋率。已有研究報道飼喂200 mg/kg茶多酚可以提高蛋雞的產(chǎn)蛋率和飼料轉(zhuǎn)化率[20-21]。受原料、品種、環(huán)境等因素的影響，發(fā)酵茶飼料的實(shí)際效果略有不同。本試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)在產(chǎn)蛋后期蛋雞日糧中添加5%、10%發(fā)酵茶飼料8周后，產(chǎn)蛋率分別增多了2.54個百分點(diǎn)和3.67個百分點(diǎn)，且5%發(fā)酵茶飼料能使料蛋比顯著降低，因此，發(fā)酵茶飼料可以改善蛋雞生產(chǎn)性能。茶葉中具有茶多酚、生物堿和多肽等多種活性物質(zhì)，其中多酚類物質(zhì)占茶葉干重的18%～36%，是茶葉健康功效的主要活性物質(zhì)[22]。兒茶素類占茶多酚總量的60%～80%是茶多酚的最主要成分[23]。研究表明茶多酚中的兒茶素進(jìn)入機(jī)體后能夠調(diào)節(jié)腸道微生物菌群，從而促進(jìn)營養(yǎng)物質(zhì)吸收、提高飼料利用率，同時，類黃酮具有植物雌激素活性，能促進(jìn)卵泡發(fā)育，提高產(chǎn)蛋率[24-25]。但是，高劑量茶多酚會造成蛋重降低[20，26]。本研究發(fā)現(xiàn)10%發(fā)酵茶飼料會造成蛋重顯著下降，這可能是因?yàn)椴瓒喾幽軌蛞种迫怆u肝臟脂肪相關(guān)基因的表達(dá)，降低脂肪酸合成酶和乙酰-CoA羧化酶的活性[22]。同時有學(xué)者指出，兒茶素不易被消化吸收，經(jīng)口服后在胃腸道中積累達(dá)到較高濃度，從而影響胃腸道膽固醇的吸收[27]。因此，腸道對于脂肪吸收的減少可能會導(dǎo)致蛋黃脂質(zhì)形成的降低，進(jìn)而使蛋重降低。因此，添加適宜劑量的發(fā)酵茶飼料更有利于提高蛋雞后期生產(chǎn)性能。

3.2 發(fā)酵茶飼料對雞蛋質(zhì)量參數(shù)的影響

雞蛋質(zhì)量是指雞蛋內(nèi)外部特性，涉及眾多指標(biāo)[28]。蛋清中的濃蛋白呈高黏度的膠狀結(jié)構(gòu)，由卵粘蛋白分泌產(chǎn)生。研究表明濃、稀蛋白比例與蛋重、哈氏單位、蛋白高度呈正相關(guān)，是判定雞蛋新鮮度的可靠指標(biāo)[29-30]。Ding等[31]研究認(rèn)為茶多酚可以與蛋白質(zhì)和多糖形成復(fù)合物，增加蛋白凝膠化，從而提高了蛋白高度和哈氏單位。Wang等[26]發(fā)現(xiàn)200 mg/kg茶多酚能夠提高64周齡白來航的蛋白高度和哈氏單位。Xia等[32]在20周齡仙居雞的日糧中添加1%綠茶粉，發(fā)現(xiàn)蛋白高度、哈氏單位增加。而Ariana等[33]發(fā)現(xiàn)0.5%茶多酚和1.5%綠茶粉對蛋品質(zhì)無顯著影響。但本研究發(fā)現(xiàn)，飼喂10%發(fā)酵茶飼料會造成濃蛋白比例降低、稀蛋白比例顯著升高，即蛋清變稀、品質(zhì)降低?？赡苡捎诓枞~中的咖啡因和茶多酚能夠增強(qiáng)機(jī)體能量代謝[22]，從而抑制濃蛋白合成，其作用機(jī)制還需要后續(xù)進(jìn)一步深入研究。另外，本研究發(fā)現(xiàn)，飼喂發(fā)酵茶葉對蛋黃比例、蛋殼比例、蛋形指數(shù)、蛋黃顏色無顯著影響。前3個指標(biāo)主要受遺傳因素影響，而蛋黃顏色與飼料營養(yǎng)關(guān)系密切[17]。有報道指出綠茶粉能夠顯著提高蛋黃顏色[13]。但本研究尚未觀察到發(fā)酵茶飼料對蛋黃顏色的影響，這是因?yàn)榫G茶中葉綠素及其衍生物以及類胡蘿卜素經(jīng)過發(fā)酵后發(fā)生降解反應(yīng)[34]。

3.3 發(fā)酵茶飼料對蛋黃生化參數(shù)的影響

雞蛋營養(yǎng)豐富，但是蛋黃膽固醇含量(200～400 mg/枚)相對較高[35]。盡管當(dāng)前關(guān)于雞蛋膽固醇增加人體健康風(fēng)險的論述仍存在爭議，但是專家建議患有心血管疾病的人群應(yīng)該控制蛋黃膽固醇的攝入量[36]。Kuhn等[37]證實(shí)茶多酚通過降低低密度脂蛋白受體使得人體血漿膽固醇降低。何柳青等[38]發(fā)現(xiàn)飼喂200、400 mg/kg茶多酚4周，使蛋黃膽固醇含量分別顯著降低16.5%、31.4%。Chen等[13]發(fā)現(xiàn)1%綠茶粉飼喂12周后，蛋黃膽固醇含量顯著下降13.9%。盧垚[39]研究發(fā)現(xiàn)飼喂300 mg/kg茶多酚4周后，蛋黃膽固醇含量下降18.06%。本研究觀察到飼喂5%和10%發(fā)酵茶飼料8周后的蛋黃膽固醇含量分別顯著下降13.37%、10.98%，與上述結(jié)果研究一致。有學(xué)者研究認(rèn)為茶葉中的茶多酚能夠通過調(diào)控血漿中胰島素的水平和肝臟膽固醇代謝相關(guān)核受體和轉(zhuǎn)錄因子表達(dá)，促進(jìn)蛋雞脂質(zhì)分解代謝，抑制低密度脂蛋白膽固醇，減少卵細(xì)胞從血漿中對于膽固醇的獲取，最終降低蛋黃中的膽固醇含量[39]。

蛋黃富含多不飽和脂肪酸，特別是產(chǎn)蛋后期階段，更易受到自由基的攻擊，引起脂質(zhì)過氧化反應(yīng)，不利于雞蛋儲存保鮮[36，40]。茶多酚中兒茶素B環(huán)和C環(huán)上的酚羥基具有供氫體的活性，能夠在氧化過程中生成鄰醌類及聯(lián)苯酚醌，使其具有強(qiáng)大的抗氧化能力[41]。本研究發(fā)現(xiàn)發(fā)酵茶飼料能顯著降低蛋黃中MDA含量，提高SOD含量。這一結(jié)果與之前使用綠茶粉或茶多酚能減少禽蛋中脂質(zhì)過氧化的研究結(jié)果相同[40，42]。動物機(jī)體內(nèi)的抗氧化酶之間相互影響和相互作用，形成機(jī)體對抗自由基的第一道防線。在蛋雞日糧中添加茶多酚能夠提高血漿中GSH-Px含量，降低了MDA含量[39]，而兒茶素分子量小有利于吸收，經(jīng)血液轉(zhuǎn)移至卵巢后提升蛋黃的抗氧化能力。

總之，本試驗(yàn)研究認(rèn)為給予產(chǎn)蛋后期母雞發(fā)酵茶飼料可以降低蛋黃膽固醇含量和脂質(zhì)過氧化反應(yīng)，使其表現(xiàn)出更好的營養(yǎng)價值和儲存特性，進(jìn)一步提升蛋品質(zhì)等級。

4 結(jié)論

日糧中添加5%發(fā)酵茶飼料能提高55周齡新楊黑羽蛋雞的生產(chǎn)性能和蛋品質(zhì)，表現(xiàn)在產(chǎn)蛋率提高、料蛋比降低、蛋黃膽固醇含量和脂質(zhì)過氧化水平降低；添加10%發(fā)酵茶飼料在一定程度上能提高生產(chǎn)性能，但同時會造成蛋重和蛋品質(zhì)下降。因此，在蛋雞生產(chǎn)過程中，日糧中添加5%發(fā)酵茶飼料為宜。