王敏 母丹 孔德軍 楊莉 葉璐 賀丹

成都醫(yī)學(xué)院第二附屬醫(yī)院/核工業(yè)四一六醫(yī)院腫瘤科 （成都 610000）

宮頸癌是常見的婦科惡性腫瘤疾病之一，病發(fā)率及病死率較高，病死率僅次于乳腺癌，發(fā)達(dá)國家由于防癌疫苗的接種及宮頸抹片的篩查到位，宮頸癌發(fā)病率下降，然而我國宮頸癌發(fā)病率依然較高，宮頸癌轉(zhuǎn)移也會引起其他器官的病變［1-2］。資料顯示宮頸癌發(fā)病的主要原因是高危型人乳頭瘤病毒（human papillomavirus， HPV）感染，HPV16是高危型HPV 常見的基因型，占比約41.6%［3］。高危型HPV16 表達(dá)的致癌相關(guān)蛋白如HPV16 E6、E7蛋白在宮頸癌細(xì)胞增殖、遷移、侵襲等生物學(xué)行為過程中發(fā)揮重要調(diào)控作用，可能通過調(diào)控長鏈非編碼RNA（SNHG12 等）及微小RNA（microrna-424-5p 等）表達(dá)發(fā)揮作用［4-5］。然而HPV16 E6 蛋白影響宮頸癌遷移、侵襲的分子機(jī)制仍不完善。研究［6-7］表明miR-23a 在卵巢癌、乳腺癌、腸癌等腫瘤中表達(dá)異常，其中過表達(dá)的miR-23a 具有抑制肺癌H1650 細(xì)胞侵襲的能力。研究［8］結(jié)果顯示miR-23a在宮頸癌患者血清中表達(dá)有高有低，是宮頸癌預(yù)后的可能標(biāo)志物，因此推測miR-23a 的表達(dá)異常可能與HPV16 E6 促進(jìn)宮頸癌細(xì)胞侵襲及遷移有關(guān)。本研究通過對過表達(dá)HPV16 E6 蛋白的研究，探討該蛋白對宮頸癌細(xì)胞侵襲及遷移等不良生物學(xué)行為的促進(jìn)作用與miR-23a表達(dá)之間的關(guān)系，為探索HPV16 E6 的致病機(jī)制提供新思路。

1 材料與方法

1.1 細(xì)胞SiHa 人宮頸癌細(xì)胞系（HPV 陽性），購于上海雅吉生物科技有限公司。

1.2 組織100例宮頸癌HPV陰性患者、HPV陽性患者的組織標(biāo)本及對應(yīng)的癌旁正常組織均由本院提供。本實(shí)驗(yàn)經(jīng)成都醫(yī)學(xué)院第二附屬醫(yī)院/核工業(yè)四一六醫(yī)院倫理委員會批準(zhǔn)（編號：202203006），且獲得所有患者的知情同意。

1.3 主要試劑及儀器pcDNA3.1-myc-HisA（-）哺乳動物質(zhì)粒（貨號：YS-1314F）購于上海雅吉生物；兔源HPV16 E6（貨號：ab70）、Caspase-3（貨號：ab13847）一抗、羊抗兔二抗（貨號：ab150077）購于美國Abcam；兔源Bax、Bcl-2、MMP-2、MMP-9一抗（貨號：FNab00809、FNab00840、FNab05238、FNab05247）購于武漢菲恩生物科技有限公司；脂質(zhì)體核酸轉(zhuǎn)染試劑盒購于上海莼試生物（貨號：CS-X14488）；MTT 試劑盒（貨號：M1020）、RNA 提取試劑盒（貨號：R1200）購于北京索萊寶；細(xì)胞凋亡雙染試劑盒購于普諾賽（貨號：P-CA-201）；BCA試劑盒（貨號：P0011）、蛋白提取試劑盒（貨號：P0027）購于上海碧云天。

XElx800 酶標(biāo)儀，美國Perkin Elmer 公司；MCO-15AC 細(xì)胞培養(yǎng)箱，日本SANYO；NC-100 細(xì)胞計(jì)數(shù)器，丹麥Chemimetec；TS100 倒置顯微鏡，日本Nikon；Accuri C6 流式細(xì)胞儀，美國BD；Simpliamp-PCR儀，美國ABI；GIS-500凝膠成像儀，Miulab公司。

1.4 方法

1.4.1 細(xì)胞培養(yǎng)SiHa 細(xì)胞于37 ℃復(fù)蘇，然后在DMEM 培養(yǎng)液，于37 ℃、5% CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。培養(yǎng)基中含有10%胎牛血清、100 IU/mL 青霉素和100 mg/mL 鏈霉素。

1.4.2 HPV16 E6 質(zhì)粒構(gòu)建及細(xì)胞轉(zhuǎn)染參考文獻(xiàn)［9］進(jìn)行pcDNA3 1-myc-HisA-HPV16 E6 質(zhì)粒的構(gòu)建，根據(jù)Homo HPV16 E6 基因序列，以pcDNA3 1-myc-HisA（-）哺乳動物質(zhì)粒為載體構(gòu)建HPV16 E6重組質(zhì)粒；取生長至對數(shù)期的SiHa 細(xì)胞，接種于24 孔，每孔1.2 × 105細(xì)胞，常規(guī)培養(yǎng)至粘合度達(dá)到90%以上時(shí)根據(jù)脂質(zhì)體核酸轉(zhuǎn)染試劑盒中的要求進(jìn)行細(xì)胞轉(zhuǎn)染，并分為E6 過表達(dá)組（HPV16 E6 基因過表達(dá)）、空白組（常規(guī)培養(yǎng)，不轉(zhuǎn)染）、陰性轉(zhuǎn)染組，轉(zhuǎn)染6 h 后更換新鮮培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)24 h。

根據(jù)脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染試劑盒中說明書的要求進(jìn)行操作，建立E6+miR-23a mimics 組（SiHa 細(xì)胞同時(shí)轉(zhuǎn)染HPV16 E6、miR-23a mimics）。

1.4.3 RT-PCR 法測定宮頸癌組織、癌旁正常組織miR-23a 及各組細(xì)胞內(nèi)HPV16 E6、miR-23a mRNA 表達(dá)從癌旁正常組織、宮頸癌組織及各組SiHa 細(xì)胞中提取總RNA，具體操作步驟見RNA提取試劑盒說明書。然后用逆轉(zhuǎn)錄試劑盒將RNA逆轉(zhuǎn)錄為cDNA，采用RT-PCR 法對HPV16 E6、miR-23a 進(jìn)行擴(kuò)增，分別以β-actin、U6 為內(nèi)參，HPV16 E6 引物序列：正向引物：5'-TTGCTTTTCGGGATTTATGC-3'，反向引物：5'-TCAGGACACAGTGGCTTTTG-3'，內(nèi)參β-actin 引物序列：正向引物：5'-CACGATGGAGGGGCCGGACTCATC-3'，反向引物：5'-TAAAGACCTCTATGCCAACACAGT-3'；miR-23a 引物序列：正向引物：5'-GCGAGATCTGGCTCCTGCATATGAG-3'，反向引物：5'-GATGAATTCCAGGCACAGG CTTCGG-3'；內(nèi)參U6 引物序列：上游引物5'-CTCGCTTCGGCAGCACA-3'，下游引物5'-AACGCTTCACGAATTTGCGT-3'。采用2-ΔΔCT法對miR-23a、HPV16 E6 表達(dá)水平進(jìn)行定量分析。

1.4.4 MTT 法測量細(xì)胞增殖收集1.4.2 各組SiHa 細(xì)胞，以2 × 103細(xì)胞/孔的密度接種到96 孔板中。培養(yǎng)48 h 后，分別添加MTT 溶液（5 mg/mL）20 μL，在37 ℃下進(jìn)一步孵育4 h。隨后，將MTT 形成的晶體溶解在100 μL DMSO 中，使用全自動酶標(biāo)儀在450 nm 處測定每孔的OD值，并根據(jù)OD值計(jì)算增殖抑制率。增殖抑制率=（OD值空白對照組-OD值實(shí)驗(yàn)組）/OD值空白對照組×100%。

1.4.5 流式細(xì)胞儀測定細(xì)胞凋亡參考文獻(xiàn)［10］和AnnexinV-FITC/PI 細(xì)胞凋亡雙染試劑盒說明書測定各組SiHa 細(xì)胞凋亡率。在1.5 mL EP 管中加入1 × 106個(gè)/mL 的SiHa 細(xì)胞，用3 mL 預(yù)冷PBS 洗滌2 次，離心去PBS，加入預(yù)冷的70%乙醇固定，4 ℃，2 h。離心棄固定液，3 mL PBS 重懸5 min，分別添加RNA 酶和Triton X-100，靜置45 min 后，用2 μL PI 染液染色，4 ℃避光1 h。即刻上細(xì)胞流式儀檢測細(xì)胞凋亡。

1.4.6 Transwell 小室實(shí)驗(yàn)檢測細(xì)胞侵襲能力［11］將各組SiHa 細(xì)胞分離并重懸于不含胎牛血清的DMEM 中，并在Transwell 板上預(yù)涂50 μg Matrigel。隨后，將2 × 105細(xì)胞/孔在Transwell 板的上腔（孔徑為8 μm）中，而底部腔中填充500 μL 含有10%胎牛血清的DMEM。細(xì)胞在37 ℃下培養(yǎng)24 h，使用棉簽擦拭未侵襲細(xì)胞，將侵襲到底部腔的細(xì)胞用4%多聚甲醛中在室溫下固定20 min，用結(jié)晶紫在室溫下浸染20 min。光學(xué)顯微鏡下觀察并計(jì)數(shù)。

1.4.7 劃痕實(shí)驗(yàn)檢測細(xì)胞遷移［12］將SiHa 細(xì)胞置于6 孔板中，培養(yǎng)至95%融合。然后使用200 μL移液管尖端在細(xì)胞單層上形成劃痕，用冰冷的PBS 洗滌2 次后，細(xì)胞在不含胎牛血清的DMEM 中于37 ℃孵育24 h，以盡量減少劃痕實(shí)驗(yàn)中細(xì)胞增殖的影響。在倒置光學(xué)顯微鏡下，隨機(jī)選擇8 個(gè)顯微鏡視野（放大倍數(shù)，× 100），在0 和24 h 時(shí)間點(diǎn)測量劃痕。使用Image J 對圖像進(jìn)行分析，并計(jì)算劃痕愈合率。

1.4.8 WB 測定HPV16 E6、細(xì)胞凋亡相關(guān)因子（Caspase-3、Bax、Bcl-2）、遷移相關(guān)蛋白（MMP-9、MMP-2）表達(dá)SiHa 細(xì)胞按照1.4.2 的方法轉(zhuǎn)染。轉(zhuǎn)染后48 h，按照制造商的說明，使用RIPA 裂解液從轉(zhuǎn)染的細(xì)胞中分離總蛋白，以檢測蛋白表達(dá)。用10% SDS-PAGE 分離蛋白質(zhì)，并將其轉(zhuǎn)移到PDVF膜上。用5%脫脂奶粉在室溫下封閉膜2 h。用TBST 洗滌膜，并與兔抗鼠HPV16 E6、Caspase-3、Bax、Bcl-2、MMP-2、MMP-9、GAPDH（均為1∶500）一抗一起在4 ℃下孵育過夜。然后用TBST洗滌膜，常溫下用辣根過氧化物酶標(biāo)記的二抗（1∶5 000）孵育2 h。使用蛋白成像凝膠儀定量分析上述蛋白表達(dá)。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法所有統(tǒng)計(jì)分析均使用SPSS 22.0進(jìn)行。所有計(jì)量資料以3 個(gè)獨(dú)立實(shí)驗(yàn)的平均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示。組間比較行單因素方差分析和LSD-t檢驗(yàn)，以P＜ 0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 miR-23a 在宮頸癌組織中的表達(dá)比較與癌旁正常組織相比，宮頸癌HPV 陰性組織、宮頸癌HPV 陽性組織中miR-23a 表達(dá)水平降低（0.67 ±0.14）、（0.18 ± 0.09）比（1.01 ± 0.31），F(xiàn)= 421.198，P＜ 0.05），其中宮頸癌HPV 陽性組織中miR-23a 的表達(dá)更低。

2.2 轉(zhuǎn)染后各組宮頸癌SiHa 細(xì)胞中HPV16 E6表達(dá)水平及其對miR-23a 表達(dá)水平的影響與空白組、陰性轉(zhuǎn)染組比較，E6 過表達(dá)組SiHa 細(xì)胞中HPV16 E6 mRNA 及蛋白表達(dá)水平升高，miR-23a mRNA 表達(dá)水平降低（P＜ 0.05）；與E6 過表達(dá)組相比，E6+miR-23a mimics 組SiHa 細(xì)胞中HPV16 E6 mRNA 及蛋白表達(dá)差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞ 0.05），miR-23a mRNA 表達(dá)水平升高（P＜ 0.05），見表1、圖1。

圖1 各組宮頸癌SiHa 細(xì)胞中HPV16 E6 蛋白表達(dá)水平比較Fig.1 Comparison of HPV16 E6 protein expression levels in cervical cancer SiHa cells of all groups

表1 各組宮頸癌SiHa 細(xì)胞中HPV16 E6 mRNA、蛋白及miR-23a mRNA 表達(dá)水平比較Tab.1 Comparison of expression levels of HPV16 E6 mRNA， protein and miR-23a mRNA in cervical cancer SiHa cells of all groups ±s， n = 3

表1 各組宮頸癌SiHa 細(xì)胞中HPV16 E6 mRNA、蛋白及miR-23a mRNA 表達(dá)水平比較Tab.1 Comparison of expression levels of HPV16 E6 mRNA， protein and miR-23a mRNA in cervical cancer SiHa cells of all groups ±s， n = 3

注：與空白組相比，aP ＜ 0.05；與陰性轉(zhuǎn)染組相比，bP ＜ 0.05；與E6過表達(dá)組相比，cP ＜ 0.05

組別空白組陰性轉(zhuǎn)染組E6過表達(dá)組E6+miR-23a mimics組F值P值HPV16 E6/β-actin 1.02 ± 0.20 1.01 ± 0.19 1.56 ± 0.25ab 1.55 ± 0.26ab 5.659 0.022 HPV16 E6/GAPDH 1.01 ± 0.20 1.02 ± 0.21 1.52 ± 0.24ab 1.54 ± 0.25ab 5.200 0.028 miR-23a/U6 1.03 ± 0.21 1.03 ± 0.18 0.32 ± 0.06ab 0.65 ± 0.13abc 14.494 0.001

2.3 各組宮頸癌SiHa細(xì)胞增殖情況比較空白組、陰性轉(zhuǎn)染組、E6 過表達(dá)組和E6+miR-23a mimics 組的增殖抑制率分別是（18.16 ± 1.94）%、（17.98 ±1.66）%、（10.20 ± 0.23）%、（14.01 ± 0.47）%，組間比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F= 10.327，P＜ 0.05）。與空白組、陰性轉(zhuǎn)染組比較，E6 過表達(dá)組增殖抑制率降低（P＜ 0.05）；與E6 過表達(dá)組相比，E6+miR-23a mimics 組增殖抑制率升高（P＜ 0.05）。

2.4 各組宮頸癌SiHa 細(xì)胞凋亡情況比較E6 過表達(dá)組與空白組、陰性轉(zhuǎn)染組比較，Bax、Caspase-3蛋白表達(dá)及凋亡率下降，Bcl-2 蛋白表達(dá)增高（P＜0.05）；E6+miR-23a mimics 組與E6 過表達(dá)組相比，Bax、Caspase-3 蛋白表達(dá)及凋亡率增高，Bcl-2 蛋白表達(dá)下降（P＜ 0.05），見圖2、3、表2。

圖2 各組宮頸癌SiHa 細(xì)胞凋亡比較Fig.2 Comparison of apoptosis of cervical cancer SiHa cells in each group

圖3 各組宮頸癌SiHa 細(xì)胞凋亡蛋白表達(dá)比較Fig.3 Comparison of apoptosis protein expression in cervical cancer SiHa cells in all groups

表2 各組宮頸癌SiHa 細(xì)胞凋亡情況比較Tab.2 Comparison of apoptosis of cervical cancer SiHa cells in each group ±s， n = 3

注：與空白組相比，aP ＜ 0.05；與陰性轉(zhuǎn)染組相比，bP ＜ 0.05；與E6過表達(dá)組相比，cP ＜ 0.05

組別空白組陰性轉(zhuǎn)染組E6過表達(dá)組E6+miR-23a mimics組F值P值細(xì)胞凋亡率（%）18.28 ± 1.23 19.01 ± 1.25 8.44 ± 0.75ab 15.33 ± 1.01abc 59.854 0.001凋亡相關(guān)因子蛋白表達(dá)Caspase-3/GAPDH 0.98 ± 0.15 1.01 ± 0.10 0.26 ± 0.07ab 0.71 ± 0.08abc 33.041 0.000 Bax/GAPDH 1.03 ± 0.14 0.99 ± 0.13 0.30 ± 0.05ab 0.65 ± 0.08abc 30.685 0.000 Bcl-2/GAPDH 0.94 ± 0.07 1.00 ± 0.08 1.64 ± 0.11ab 1.25 ± 0.09abc 38.636 0.000

2.5 各組宮頸癌SiHa 細(xì)胞遷移及侵襲情況比較與陰性轉(zhuǎn)染組、空白組比較，E6 過表達(dá)組細(xì)胞穿膜數(shù)量、劃痕愈合率、MMP-2、MMP-9 表達(dá)升高（P＜ 0.05）；與E6 過表達(dá)組相比，E6+miR-23a mimics 組細(xì)胞穿膜數(shù)量、劃痕愈合率、細(xì)胞侵襲相關(guān)蛋白表達(dá)降低（P＜ 0.05），見表3、圖4-6。

圖4 各組宮頸癌SiHa 細(xì)胞侵襲情況Fig.4 SiHa cell invasion in each group

圖5 各組宮頸癌SiHa 細(xì)胞遷移情況Fig.5 SiHa cell migration in each group

圖6 各組宮頸癌SiHa 細(xì)胞侵襲相關(guān)蛋白表達(dá)Fig.6 Expression of invasion-related proteins in SiHa cells in each group

表3 各組宮頸癌SiHa 細(xì)胞侵襲及遷移情況比較Tab.3 Comparison of cervical cancer SiHa cell invasion and migration in each group ±s， n = 3

表3 各組宮頸癌SiHa 細(xì)胞侵襲及遷移情況比較Tab.3 Comparison of cervical cancer SiHa cell invasion and migration in each group ±s， n = 3

注：與空白組相比，aP ＜ 0.05；與陰性轉(zhuǎn)染組相比，bP ＜ 0.05；與E6過表達(dá)組相比，cP ＜ 0.05

組別空白組陰性轉(zhuǎn)染組E6過表達(dá)組E6+miR-23a mimics組F值P值侵襲細(xì)胞數(shù)（個(gè)）85.40 ± 4.50 83.70 ± 4.73 120.94 ± 6.55ab 102.66 ± 5.03abc 32.883 0.000劃痕愈合率（%）19.86 ± 2.11 18.81 ± 2.01 31.35 ± 3.07ab 25.58 ± 1.03abc 21.194 0.000細(xì)胞侵襲相關(guān)蛋白表達(dá)MMP-2/GAPDH 1.02 ± 0.13 0.96 ± 0.10 1.65 ± 0.18ab 1.30 ± 0.11abc 16.710 0.001 MMP-9/GAPDH 0.96 ± 0.12 0.93 ± 0.09 1.61 ± 0.16ab 1.29 ± 0.10abc 21.114 0.000

3 討論

宮頸癌是全球第四大婦科惡性腫瘤疾病，嚴(yán)重威脅女性健康［13-15］。資料顯示約70%的宮頸癌與高危型HPV16、18 感染有關(guān)，HPV16 表達(dá)的E6蛋白在HPV 腫瘤中起到關(guān)鍵作用，HPV16 E6 的促癌機(jī)制復(fù)雜，可誘導(dǎo)抑癌基因p53失活、下調(diào)宮頸癌HeLa 細(xì)胞的Rap1GAP 蛋白等的表達(dá)來參與腫瘤的形成，但其具體機(jī)制仍需深入研究［16］。有研究［17］表明miRNA 穩(wěn)定存在于尿液、分泌物、血清等體液中，對宮頸癌、胃癌等腫瘤具有特異性，是一種較好的生物標(biāo)志物，對腫瘤疾病的發(fā)生發(fā)展起到一定的調(diào)控作用。支亞麗等［18］研究發(fā)現(xiàn)宮頸癌組織中miR-23b 表達(dá)低于癌旁正常組織，高表達(dá)的miR-23b 具有抑制宮頸癌發(fā)生發(fā)展的作用。種楠等［19］研究發(fā)現(xiàn)槲皮素抑制宮頸癌細(xì)胞增殖、侵襲、遷移的作用機(jī)制可能與下調(diào)miR-23b 有關(guān)，miR-23 包括兩種亞型：miR-23a 和miR-23b，二者相差一個(gè)核苷酸，因此推測miR-23a 可能與宮頸癌之間存在一定的聯(lián)系。本研究結(jié)果顯示，宮頸癌組織中miR-23a 表達(dá)水平降低，其中宮頸癌HPV 陽性組織中miR-23a 表達(dá)水平更低，表明miR-23a 在宮頸癌中的表達(dá)水平和miR-23b 類似，提示低表達(dá)miR-23a 與宮頸癌的發(fā)展密切相關(guān)，可能與HPV16 E6 的促癌作用存在一定的關(guān)聯(lián)［20］。

資料顯示HPV16 E6 具有調(diào)控宮頸上皮細(xì)胞癌變、增殖、惡性轉(zhuǎn)化等作用，在宮頸癌病變中起到重要作用，HPV16 E6 可通過與E6 相關(guān)蛋白（E6-AP）結(jié)合形成復(fù)合物，再通過蛋白酶體降解使P53功能失活或抑制其活性來促進(jìn)癌細(xì)胞的增殖，同時(shí)激活人端粒逆轉(zhuǎn)錄酶的轉(zhuǎn)錄，起到促進(jìn)宮頸上皮細(xì)胞永生化的作用［21］。宮頸癌細(xì)胞中HPV16 E6 的表達(dá)可影響多種miRNA 的表達(dá)，HPV16 E6 基因沉默具有上調(diào)miR-23a-3p的作用［22］。ANAU等［23］研究顯示高表達(dá)的HPV16 E6 可降低miR-23b 的表達(dá)，從而誘導(dǎo)人宮頸癌細(xì)胞的遷移。與此一致的是，本研究通過HPV16 E6 過表達(dá)發(fā)現(xiàn)SiHa 細(xì)胞中miR-23a mRNA 表達(dá)水平下降，表明HPV16 E6 過表達(dá)具有下調(diào)miR-23a 的作用，可能與SiHa 細(xì)胞增殖、遷移、侵襲等不良生物學(xué)行為相關(guān)。

對各組細(xì)胞增殖、凋亡、侵襲、遷移情況進(jìn)行測定發(fā)現(xiàn)，E6 過表達(dá)可促進(jìn)SiHa 細(xì)胞增殖、遷移和侵襲，并抑制細(xì)胞凋亡，而miR-23a mimics 逆轉(zhuǎn)了E6 過表達(dá)對SiHa 細(xì)胞增殖、凋亡、侵襲遷移能力的影響，提示HPV16 E6 可能通過下調(diào)miR-23a促進(jìn)宮頸癌細(xì)胞的增殖、侵襲、遷移并阻滯細(xì)胞凋亡。Bcl-2是抑制凋亡的調(diào)節(jié)因子，Bax和Caspase-3是促進(jìn)細(xì)胞凋亡的主要調(diào)控因子，以上3 個(gè)指標(biāo)的蛋白水平能夠從側(cè)面評估細(xì)胞凋亡的進(jìn)展情況［24］?；|(zhì)金屬蛋白酶（matrix metalloproteinases，MMPs）是腫瘤細(xì)胞完成侵襲遷移過程的重要調(diào)控分子，MMP-2、MMP-9 表達(dá)升高，腫瘤細(xì)胞的侵襲能力增強(qiáng)［25-26］。通過Western blot 測定各組細(xì)胞中凋亡、侵襲相關(guān)蛋白表達(dá)發(fā)現(xiàn)，E6 過表達(dá)降低了Caspase-3、Bax 蛋白表達(dá)，提高了Bcl-2、MMP-2、MMP-9 蛋白表達(dá)，同時(shí)過表達(dá)E6 和miR-23a 后上述蛋白表達(dá)呈現(xiàn)相反的趨勢，進(jìn)一步表明HPV16 E6 可能通過下調(diào)miR-23a 調(diào)節(jié)相關(guān)蛋白的表達(dá)促進(jìn)宮頸癌細(xì)胞增殖和遷移、抑制凋亡。

綜上所述，HPV16 E6 過表達(dá)宮頸癌細(xì)胞具有下調(diào)miR-23a 表達(dá)的作用，可能通過調(diào)控miR-23a表達(dá)發(fā)揮其促宮頸癌作用，為宮頸癌的治療提供新的潛在靶點(diǎn)。但HPV16 E6 促宮頸癌細(xì)胞增殖、遷移的作用機(jī)制復(fù)雜，仍需深入研究。未來我們也將通過動物實(shí)驗(yàn)證實(shí)HPV16 E6 在宮頸癌中的作用及分子機(jī)制。

【Author contributions】WANG Min and MU Dan conducted the experiments and wrote the article. KONG Dejun presided over the experiments. YANG Li and YE Lu revised the article. HE Dan designed the study and reviewed the paper. All authors read and approved the final manuscript as submitted.

【Conflict of interest】The authors declare no conflict of interest.