胡 賀，陳 鵬，萬 兵，袁 化

（1.江蘇福潤德科技有限公司，江蘇南京 210036；2.南京農(nóng)業(yè)大學(xué)，江蘇南京 210036；3.大連海洋大學(xué)，遼寧大連 116023）

黃金鯽（Carassius auratus）是我國傳統(tǒng)淡水鯉鯽魚類的雜交品種，具有較好的雜種優(yōu)勢。生長速度快、適應(yīng)性強(qiáng)、飼料轉(zhuǎn)化率高，是農(nóng)業(yè)農(nóng)村部向全國推廣養(yǎng)殖的淡水養(yǎng)殖品種。小肽是一類由蛋白質(zhì)水解，易被生物體消化吸收，具有多種生物活性的小分子物質(zhì)（SHEN，2019）。隨著動物營養(yǎng)學(xué)研究的不斷深入，人們認(rèn)識到小肽能以完整形式被腸道吸收進(jìn)入血液循環(huán)，用于機(jī)體蛋白質(zhì)的合成，具有促進(jìn)養(yǎng)殖動物生長，提高抗氧化能力和非特異性免疫功能的作用（敬庭森等，2021；馬良驍，2021；李晨晨等，2018）。本試驗(yàn)以黃金鯽為試驗(yàn)動物，探討營養(yǎng)小肽對養(yǎng)殖黃金鯽生長、血清生化和抗氧化能力的影響，以期為完善營養(yǎng)小肽作為飼料添加劑的理論研究提供參考依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

1.1.1 基礎(chǔ)飼料 基礎(chǔ)飼料為混養(yǎng)魚配合飼料（鹽城海大生物飼料有限公司），產(chǎn)品符合《魚用配合飼料》標(biāo)準(zhǔn)（Q/320924 YCHO 001-2021）。產(chǎn)品成分分析執(zhí)行標(biāo)準(zhǔn)為《飼料檢測結(jié)果判定的允許誤差》。檢測指標(biāo)含量：粗蛋白質(zhì)≥28.0%，粗脂肪≥2.5%，賴氨酸≥1.35%，水分≤12.2%，粗纖維≤11.5%，粗灰分≤15.0%，總磷≥0.7%。

1.1.2 營養(yǎng)小肽 試驗(yàn)用營養(yǎng)小肽由江蘇福潤德科技有限公司提供，商品名為天樂泰。部分檢測指標(biāo)含量：粗纖維0.9%，粗脂肪1.5%，粗蛋白質(zhì)4.3%，酸溶蛋白（占總蛋白）33.5%，水蘇糖和棉子糖均未檢出，活菌數(shù)乳桿菌22.6×107CFU/g，酵母1.02×107CFU/g，芽孢桿菌105CFU/g，pH=3.5。

1.1.3 檢測試劑 血清生化檢測儀器和試劑為羅氏cobas C311全自動生化分析儀?？寡趸芰z測試劑盒均由南京建成生物工程研究所提供。

1.2 方法

1.2.1 飼養(yǎng)管理 試驗(yàn)在江蘇省東臺市弶港鎮(zhèn)養(yǎng)殖區(qū)進(jìn)行，試驗(yàn)A1和A2組為2個平行組，養(yǎng)殖面積為53360 m2和56695 m2。對照組養(yǎng)殖面積57362 m2。放養(yǎng)黃金鯽魚種平均質(zhì)量為50 g/尾，放養(yǎng)量2000尾/667 m2。魚種放養(yǎng)7 d后開始投喂飼料，對照組飼喂基礎(chǔ)飼料，試驗(yàn)組飼喂添加2.0%天樂泰的飼料。

每天投餌前用自來水（靜置24 h）將天樂泰充分溶解，在基礎(chǔ)飼料中均勻噴涂，待表面干燥后投喂。投餌量按魚體重2.0%～3.0%計算。每天投餌4次，投喂時間為7：00、10：00、13：30和16：30。養(yǎng)殖期間水溫為26～33℃，溶氧為3.5～8.3 mg/L，pH為8.5～8.8。

1.2.2 生長評估 飼養(yǎng)黃金鯽52、128 d，試驗(yàn)組和對照組隨機(jī)抽樣檢測各10尾，進(jìn)行體質(zhì)量和體長檢測。通過增重率（WGR）和特定生長率（SGR）進(jìn)行生長情況評估。

WGR/%=[（終末體重—初始體重）／初始體重]×100；

SGR/%=[（ln平均末體重-ln平均初體重）／養(yǎng)殖天數(shù)]×100。

1.2.3 血清制備 投餌養(yǎng)殖黃金鯽52、128 d時，試驗(yàn)組和對照組隨機(jī)取5尾，一次性注射器尾靜脈取血（無抗凝劑），4℃靜置24 h后2500 r/min，-5℃離心5 min，取上層血清，-20℃保存，備用。

1.2.4 血清生化檢測 對養(yǎng)殖128 d黃金鯽進(jìn)行血清總蛋白（TP2）、白蛋白（ALB2）和脂肪酶（LIPC）檢測。

1.2.5 血清抗氧化性能檢測 對養(yǎng)殖52 d和128 d黃金鯽進(jìn)行血清總超氧化物歧化酶（T-SOD）活性、氧化氫酶（CAT）活力、谷胱甘肽過氧化物酶（GSH-PX）活力、總抗氧化能力（T-AOC）、丙二醛（MDA）和一氧化氮（NO）含量檢測。

1.2.6 數(shù)據(jù)統(tǒng)計與分析 試驗(yàn)數(shù)據(jù)用Excel軟件進(jìn)行整理，采用GraphPad prism 8.0軟件進(jìn)行單因素方差分析（one-way ANOVA）和t檢驗(yàn)（T-test），結(jié)果以“平均值±標(biāo)準(zhǔn)差”表示。P＜0.01表示差異極顯著，0.01＜P＜0.05表示差異顯著，P＞0.05表示無顯著差異。

2 結(jié)果

2.1 對生長性能的影響 由表1可知，養(yǎng)殖52 d和128 d，試驗(yàn)組黃金鯽體質(zhì)量、體長、WGR和SGR檢測結(jié)果均大于對照組，且養(yǎng)殖52 d，試驗(yàn)組間、試驗(yàn)組與對照組間均無顯著差異（P＞0.05）。養(yǎng)殖128 d，試驗(yàn)組間無顯著差異（P＞0.05），試驗(yàn)組與對照組顯著差異（0.01＜P＜0.05）。

表1 營養(yǎng)小肽對黃金鯽生長性能的影響

2.2 對血清生化指標(biāo)的影響 由表2可知，投喂?fàn)I養(yǎng)小肽養(yǎng)殖128 d的黃金鯽，試驗(yàn)組血清總蛋白、白蛋白和脂肪酶均高于對照組，A1組血清總蛋白和白蛋白與對照組差異極顯著（P＜0.01），A2組與對照組相比無顯著差異（P＞0.05），試驗(yàn)組間無顯著差異（P＞0.05）。試驗(yàn)組血清脂肪酶與對照組相比無顯著差異，試驗(yàn)組間也無顯著差異（P＞0.05）。

表2 營養(yǎng)小肽對黃金鯽血液生化指標(biāo)的影響

2.3 對血清抗氧化指標(biāo)的影響

2.3.1 對血清T-SOD活力的影響 由表3可知，養(yǎng)殖52 d，對照組血清T-SOD活性高于試驗(yàn)組。飼養(yǎng)126 d，試驗(yàn)組T-SOD活性均高于對照組。隨著投喂時間的增加，A1組提高了14.94%，A2組提高了1.50%，對照組降低了13.70%，但均無顯著差異（P＞0.05）。

表3 營養(yǎng)小肽對黃金鯽血清抗氧化指標(biāo)的影響

2.3.2 對血清CAT活力的影響 由表3可知，養(yǎng)殖52 d和126 d，對照組血清CAT活力均高于試驗(yàn)組隨著投喂時間的增加，對照組降低了11.86%，試驗(yàn)組（A1和A2）分別降低了8.77%和3.43%，但均無顯著差異（P＞0.05）。

2.3.3 對血清GSH-PX活力的影響 由表3可知，養(yǎng)殖52 d，對照組血清GSH-PX活力略高于試驗(yàn)組。飼養(yǎng)126 d，試驗(yàn)組GSH-PX活力均高于對照組。隨著投喂時間的增加，對照組提高25.33%，試驗(yàn)組（A1和A2）分別提高33.94%和30.75%，但均無顯著差異（P＞0.05）。

2.3.4 對血清T-AOC能力的影響 養(yǎng)殖52 d，對照組血清T-AOC能力高于試驗(yàn)組。飼養(yǎng)126 d，試驗(yàn)組均高于對照組（表1）。隨著投喂時間的增加，對照組降低了45.71%，試驗(yàn)組（A1和A2）分別提高了12.5%和4.35%。單因素方差分析和t檢驗(yàn)顯示，均無顯著差異（P＞0.05）。

2.3.5 對血清MDA含量的影響 由表3可知，飼養(yǎng)52 d，A1組血清MDA含量大于對照組，A2組小于對照組。飼養(yǎng)126 d，試驗(yàn)組均大于對照組。隨著投喂時間的增加，對照組提高80.85%，試驗(yàn)組（A1和A2）分別提高了45.19%和56.65%，但均無顯著差異（P＞0.05）。

2.3.6 對血清NO含量的影響 由表3可知，飼養(yǎng)52 d和126 d，對照組血清NO含量均高于試驗(yàn)組。隨著投喂時間的增加，對照組降低了11.25%，試驗(yàn)組（A1和A2）分別提高了126.38%和38.91%，且試驗(yàn)組（A1和A2）與對照組均有極顯著差異（P＜0.01），試驗(yàn)組間無顯著差異（P＞0.05）。

3 討論

3.1 營養(yǎng)小肽對黃金鯽生長的影響 營養(yǎng)小肽具有提高養(yǎng)殖動物餌料轉(zhuǎn)化率，促進(jìn)養(yǎng)殖動物生長和提高生產(chǎn)性能等作用（馬良驍，2021；甘暉，2005）。用營養(yǎng)小肽飼養(yǎng)黃金鯽，試驗(yàn)組體質(zhì)量、體長、增重率和特定生長率均高于對照組。在飼料中添加2%營養(yǎng)小肽對黃金鯽生長有一定的促進(jìn)作用。

3.2 營養(yǎng)小肽對黃金鯽血清生化的影響 魚類的血液與營養(yǎng)狀況密切相關(guān)，不僅反映魚類的生理代謝狀態(tài)，還表現(xiàn)出營養(yǎng)對機(jī)體代謝變化的作用機(jī)制。血清總蛋白是反映動物營養(yǎng)水平、對蛋白質(zhì)的消化程度以及健康狀況的指標(biāo)（黃林等，2009；尾崎久雄，1982）。檢測數(shù)據(jù)分析，血清總蛋白含量試驗(yàn)組為（28.26±1.37）g/L和（25.54±3.41）g/L，對照組（25.20±0.92）g/L，均低硬骨魚類血清總蛋白含量30～50 g/L范圍（尾崎久雄，1982）。由于黃金鯽生長速度高于普通鯽2～3倍，基礎(chǔ)飼料28%的粗蛋白質(zhì)和2%的營養(yǎng)小肽添加量，沒有滿足35%飼料蛋白的需求量（程鎮(zhèn)燕等，2013）。天樂泰作為飼料添加劑，對不同的基礎(chǔ)飼料和養(yǎng)殖魚類的添加量還有待深入研究。脂肪酶的活性與餌料中的脂肪含量呈正相關(guān)（李成等，2018；孫翰昌等，2010；李芹等，2009）。試驗(yàn)組血清脂肪酶略高于與對照組，多重比較無顯著差異（P＞0.05），反映了黃金鯽的脂質(zhì)代謝狀況良好，處于健康水平。

3.2 營養(yǎng)小肽對黃金鯽抗氧化性能的影響 養(yǎng)殖動物機(jī)體的抗氧化能力與健康程度存在密切聯(lián)系。大量研究表明，在飼料中添加一定量的營養(yǎng)小肽具有促進(jìn)養(yǎng)殖水生動物生長，提高抗氧化能力和非特異性免疫的功能（李文成等，2021；Ighodaro，2018；林浩然，1999）。血清T-SOD、CAT和GSH-Px是主要的內(nèi)源性抗氧化酶，共同作用來保護(hù)機(jī)體免受氧化應(yīng)激產(chǎn)生的損傷，對機(jī)體的氧化與抗氧化平衡具有重要作用（Halliwell，2012）。

飼料中添加營養(yǎng)小肽，隨著養(yǎng)殖時間的增加，試驗(yàn)組血清T-SOD和GSH-PX活性提高，反映出機(jī)體清除自由基能力和細(xì)胞防御能力增強(qiáng)。CAT活力降低，顯示試驗(yàn)組抗氧化酶活性有一定提高，提高了機(jī)體的抗氧化能力。試驗(yàn)結(jié)果與何吉祥等（2012）的研究結(jié)果一致。

T-AOC是衡量機(jī)體抗氧化功能的綜合性指標(biāo)，反映了酶促和非酶促兩個防御體系協(xié)同防護(hù)魚體的抗氧化能力。隨著投喂?fàn)I養(yǎng)小肽時間的增加，試驗(yàn)組分別提高了12.5%和4.35%（P＞0.05），對照組降低了45.71%（P＞0.05）。表現(xiàn)出黃金鯽機(jī)體抗氧化能力的增強(qiáng)，而且T-AOC能力與細(xì)胞抗氧化能力正相關(guān)，與機(jī)體脂質(zhì)過氧化負(fù)相關(guān)。

MDA是體內(nèi)自由基作用于脂肪發(fā)生過氧化反應(yīng)的氧化終產(chǎn)物，其含量反映了機(jī)體細(xì)胞中氧自由基含量及受自由基攻擊的嚴(yán)重程度（林浩然，1999）。隨著投喂?fàn)I養(yǎng)小肽時間的增加，試驗(yàn)組分別提高了45.19%和56.65%（P＞0.05），對照組提高了80.85%（P＞0.05）。MDA含量的升高表明黃金鯽體內(nèi)產(chǎn)生了過多的氧自由基，生物膜系統(tǒng)受到氧自由基的攻擊是否產(chǎn)生脂質(zhì)過氧化還有待進(jìn)一步擴(kuò)大樣本檢測。

NO具有高度活躍的屬性，能與多種自由基和金屬離子發(fā)生反應(yīng)，在免疫調(diào)節(jié)等方面具有十分重要的生物學(xué)作用。飼養(yǎng)52 d時，對照組高于試驗(yàn)組，飼養(yǎng)126 d時，試驗(yàn)組高于對照組（P＜0.01）。對照組降低了11.25%，試驗(yàn)組分別提高了126.38%和38.91%。營養(yǎng)小肽中富含乳酸桿菌和芽孢桿菌，是影響試驗(yàn)組血清NO含量顯著升高的主要原因，也是NO對脂質(zhì)過氧化和組織器官保護(hù)作用的表現(xiàn)。朱宏友（2006）報道，NO可以增強(qiáng)水產(chǎn)動物自身抗病能力，減少抗菌藥物的使用。但NO也可影響肝細(xì)胞蛋白質(zhì)合成和能量代謝（鐘慈聲等，1977）。因此，NO對水產(chǎn)動物生理生化及代謝特征影響的研究具有重要的理論研究價值和應(yīng)用前景。

營養(yǎng)活性小肽進(jìn)入機(jī)體后主要發(fā)揮營養(yǎng)功能和生理調(diào)節(jié)功能。不同的小肽制品其生產(chǎn)工藝和營養(yǎng)成分不同，同時添加量的作用效果與養(yǎng)殖動物對小肽的最適量有關(guān)。作為一種新型的綠色營養(yǎng)添加劑應(yīng)用于水生動物養(yǎng)殖，還需要進(jìn)一步探討營養(yǎng)小肽的添加劑量、添加周期和添加方式等，使其在魚類不同的生長階段和生理狀態(tài)下充分發(fā)揮作用。