羅森 楊坤 李閩 肖文萱 雷偉 張紫萱 陳敏芝

摘 要：Nav1.7特異性地表達(dá)在外周傷害性感覺神經(jīng)元。臨床遺傳學(xué)、動(dòng)物模型和藥理學(xué)研究表明，Nav1.7是一個(gè)重要的鎮(zhèn)痛藥物開發(fā)靶點(diǎn)。本研究以溝紋硬皮地蛛（Calommata signata Karsch）毒液為研究對(duì)象，通過電刺激采集毒液、反相高效液相色譜分離純化、質(zhì)譜鑒定、蛋白質(zhì)測序以及全細(xì)胞膜片鉗記錄等方法，篩選并鑒定到一種對(duì)Nav1.7有抑制作用的新型多肽毒素，命名為APTX-1。質(zhì)譜鑒定該多肽毒素的分子質(zhì)量為7 815.2 Da；其N端前10位氨基酸序列為ASCKQVGEEC。APTX-1抑制Nav1.7電流具有濃度依賴性，其半數(shù)抑制濃度為（0.46±0.08） μmol/L。通道動(dòng)力學(xué)分析顯示，APTX-1并不影響Nav1.7的翻轉(zhuǎn)電位、電壓依賴性穩(wěn)態(tài)激活曲線和失活曲線，表明該多肽毒素并不影響Nav1.7的離子選擇性和電壓依賴性。綜上所述，本研究獲得了一個(gè)新型Nav1.7調(diào)制劑，并探究了其對(duì)Nav1.7的作用特點(diǎn)，為靶向Nav1.7的鎮(zhèn)痛藥物研發(fā)提供了潛在先導(dǎo)分子。

關(guān)鍵詞：溝紋硬皮地蛛；多肽毒素；Nav1.7；APTX-1；疼痛

中圖分類號(hào)：O629.72? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? 文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?DOI：10.3969/j.issn.1007-7146.2023.02.005

Discovery and Identification of a Novel Nav1.7 Peptide Inhibitor from Spider Venom

LUO Sen#， YANG Kun#， LI Min， XIAO Wenxuan， LEI Wei， ZHANG Zixuan， CHEN Minzhi*

（The National and Local Joint Engineering Laboratory of Animal Peptide Drug Development，College of Life Sciences，Hunan Normal University，Changsha 410081，China）

Abstract： Voltage-gated sodium channel Nav1.7 is preferentially expressed in peripheral nociceptors. Clinical genetics，animal models and pharmacological studies indicate that Nav1.7 is an important target for analgesic drug development. In this paper，we report the isolation and characterization of APTX-1，a novel peptide toxin from the venom of spider Calommata signata Karsch. Patch-clamp analysis confirmed that APTX-1 potently inhibits the currents of Nav1.7. Mass spectrum results showed that the molecular weight of APTX-1 was 7 815.2 Da. The first 10 amino acid positions at the N terminal were ASCKQVGEEC. APTX-1 inhibited Nav1.7 currents in a concentration-dependent manner，with a half-inhibitory concentration of （0.46±0.08） μmol/L. Channel dynamics analysis showed that APTX-1 did not affect the reversal potential，voltage-dependent steady-state activation curve，and inactivation curve of Nav1.7，indicating that the peptide toxin did not affect the ion selectivity and voltage dependence of Nav1.7. In conclusion，we found a novel Nav1.7 peptide inhibitor，and the characteristics of its action on Nav1.7 were studied to provide lead molecules for the development of analgesic drugs targeting the Nav1.7.

Key words： Calommata signata Karsch; peptide toxin; Nav1.7; APTX-1; pain

（Acta Laser Biology Sinica， 2023， 32（2）： 139-145）

Nav1.7是一種電壓門控鈉離子通道（voltage-gated sodium channels，VGSCs），在人體內(nèi)主要表達(dá)于外周神經(jīng)系統(tǒng)，具有快速激活、快速失活和緩慢關(guān)閉狀態(tài)失活等特點(diǎn)，因此，其在動(dòng)作電位中作為“閾值通道”影響動(dòng)作電位爆發(fā)的閾值，在外周傷害感受器痛覺信號(hào)起始和傳導(dǎo)過程中發(fā)揮重要作用［1-3］。臨床遺傳學(xué)表明，Nav1.7功能獲得性突變會(huì)導(dǎo)致神經(jīng)病理性疼痛，如先天性紅斑肢痛癥（inherited erythromelalgia，IEM）和陣發(fā)性極度疼痛障礙（paroxysmal extreme pain disorder，PEPD），而功能喪失性突變則會(huì)導(dǎo)致先天性無痛癥（congenital insensitivity to pain，CIP）［4-10］。因此，Nav1.7被認(rèn)為是最具潛力的鎮(zhèn)痛藥物開發(fā)靶點(diǎn)之一。實(shí)際上，輝瑞、強(qiáng)生和默克等國際大型藥企早已針對(duì)Nav1.7的鎮(zhèn)痛藥物的研發(fā)進(jìn)行了布局，目前已有多個(gè)Nav1.7的選擇性小分子抑制劑正處于臨床前或臨床試驗(yàn)中?；诖耍Y選和鑒定新型的Nav1.7抑制劑對(duì)靶向Nav1.7的鎮(zhèn)痛藥物開發(fā)具有重要的科學(xué)理論意義和臨床應(yīng)用價(jià)值。

蜘蛛（Araneae）、蝎子（Scorpionida）等有毒動(dòng)物的毒液中含有多種活性成分，其中主要為多肽毒素，大部分多肽毒素的肽鏈結(jié)構(gòu)中含有多對(duì)二硫鍵，可以形成非常穩(wěn)定的空間框架［11-12］。大量研究表明，這些多肽毒素對(duì)VGSCs具有高親和力和高選擇性，是有毒動(dòng)物捕食和防御的分子武器，同時(shí)也是神經(jīng)藥理學(xué)研究的有利分子工具和先導(dǎo)藥物分子［13-14］。然而，目前已研究的多肽毒素僅約總量的0.01%，蜘蛛多肽毒素的開發(fā)利用仍有巨大潛力［14］。

本研究以先前鮮見報(bào)道的溝紋硬皮地蛛（Calommata signata Karsch）毒液為研究對(duì)象，通過結(jié)合反相高效液相色譜、質(zhì)譜鑒定、蛋白質(zhì)測序和全細(xì)胞膜片鉗記錄等多種方法，成功篩選和鑒定到一種對(duì)Nav1.7有強(qiáng)抑制作用的新型多肽毒素APTX-1，為靶向Nav1.7的鎮(zhèn)痛藥物開發(fā)提供了潛在的先導(dǎo)分子。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 試驗(yàn)動(dòng)物

溝紋硬皮地蛛采集自四川省雙流縣的山區(qū)，置于細(xì)竹筒內(nèi)運(yùn)至湖南，室內(nèi)人工飼養(yǎng)。將溝紋硬皮地蛛飼養(yǎng)于裝有椰土的塑料盒內(nèi)，每周給水并喂以面包蟲（Tenebrio molitor）。采用直流脈沖式電刺激的方法每兩周采集毒液一次［15］。

1.1.2 藥物與試劑

三氟乙酸（trifluoroacetic acid，TFA，色譜純）和乙腈（acetonitrile，ACN，色譜純）購自上海江萊生物科技有限公司；α-氰基-4-羥基肉桂酸［α-Cyano-4-hydroxycinnamic acid，CCA，色譜純］ 購自德國默克公司；胎牛血清、Dulbecco 改良的Eagle培養(yǎng)基（Dulbeccos modified Eagle medium，DMEM）、減血清培養(yǎng)基（Opti-MEMTM reduced serum medium）、胰蛋白酶以及LippofectamineTM 2000購自美國賽默飛世爾科技公司；磷酸緩沖鹽溶液（phosphate-buffered saline，PBS）購自于生工生物工程（上海）股份有限公司；全細(xì)胞膜片鉗記錄Nav1.7電流的細(xì)胞外液［150 mmol/L NaCl、1 mmol/L MgCl2、2 mmol/L KCl、1.5 mmol/L CaCl2、10 mmol/L 羥乙基哌嗪乙硫磺酸［4-（2-hydroxyethyl）piperazine-1-ethanesulfonic acid］，用NaOH調(diào)pH至7.4］，全細(xì)胞膜片鉗記錄Nav1.7電流的細(xì)胞內(nèi)液［105 mmol/L CsF、10 mmol/L NaCl、10 mmol/L 乙二醇四乙酸（ethylene glycol tetraacetic acid，EGTA）、10 mmol/L HEPES，用CsOH調(diào)節(jié)pH至7.4］，用于膜片鉗記錄的內(nèi)外液試劑，均購自德國默克公司。

1.1.3 材料與儀器

XXJ-3型蝎子提毒儀（石家莊蜂富生物科技）用于毒液采集；HPLC system高效液相色譜儀（美國沃特世公司）和C18反相柱 ［月旭科技（上海）股份有限公司］ 用于毒液的分離純化；5800基質(zhì)輔助激光解吸/電離飛行時(shí)間串聯(lián)質(zhì)譜儀（美國應(yīng)用生物系統(tǒng)公司）用于多肽毒素的分子質(zhì)量鑒定；PPSQ-51A蛋白質(zhì)測序儀（日本島津公司）用于多肽毒素序列測定；EPC 10 USB雙通道膜片鉗放大器（德國HEKA公司）和PatchMaster膜片鉗數(shù)據(jù)采集軟件用于膜片鉗分析。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 溝紋硬皮地蛛毒液的采集與分離純化

通過蝎子提毒儀（參數(shù)為中等強(qiáng)度頻率，20 V電壓）采集溝紋硬皮地蛛毒液，并于-20℃保存。毒液用PBS稀釋100倍，于4℃條件下以10 000 r/min離心10 min后，取上清液進(jìn)行色譜分離。使用高效液相色譜儀進(jìn)行毒液分離純化，色譜柱采用C18反相柱（10 mm×250 mm，5 μm）。分離過程采用兩相洗脫系統(tǒng)。流動(dòng)相：A液為含0.1% 三氟乙酸的雙蒸水；B液為含0.1% 三氟乙酸的乙腈。A、B液都通過加入高純度氦氣去除溶液中的空氣。進(jìn)行分離時(shí)，上樣體積為100 μL。先用5%的B液平衡色譜柱5 min，然后再進(jìn)行梯度洗脫。洗脫流速為1.0 mL/min，檢測波長為215 nm和280 nm，洗脫時(shí)柱溫為25℃。洗脫梯度依次為：0～5 min，10%的B液；5～55 min，10%～60%的B液；55～60 min，95%的B液；60～65 min，10%的B液。分別收集各洗脫峰，冷凍干燥后保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2.2 質(zhì)譜鑒定

通過基質(zhì)輔助激光解吸/電離飛行時(shí)間質(zhì)譜（matrix-assisted laser desorption ionization time-of flight mass spectrometry，MALDI-TOF-MS）對(duì)多肽毒素的分子質(zhì)量進(jìn)行鑒定，配制含有0.1% 三氟乙酸和50% 乙腈的飽和α-CCA溶液，超聲溶解后高速離心5～10 min，取上清液作為基質(zhì)溶液。然后，取1 μL的待測樣品，與1 μL基質(zhì)溶液按1∶1的體積比充分混合后點(diǎn)樣于金屬靶盤上，在室溫下自然干燥后上機(jī)檢測。

1.2.3 氨基酸序列測定

氨基酸序列測定在島津PPSQ-51A蛋白質(zhì)測序儀上自動(dòng)進(jìn)行。用PTH C18柱通過LC20A對(duì)苯異內(nèi)酰硫脲（phenylthiohydantoin，PTH）氨基酸進(jìn)行反相高效液相色譜分析，通過與標(biāo)準(zhǔn)氨基酸色譜圖比較確定每個(gè)測定循環(huán)的氨基酸，從而得到測試樣品的氨基酸序列。

1.2.4 細(xì)胞傳代與轉(zhuǎn)染

采用含10%胎牛血清、1%青霉素、1%鏈霉素和1% L-谷氨酰胺的DMEM培養(yǎng)基培養(yǎng)HEK293T細(xì)胞（人胚胎腎細(xì)胞293T）。添加培養(yǎng)基后，將細(xì)胞置于37℃、含5% CO2的細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)，每3 d進(jìn)行1次傳代培養(yǎng)。

Nav1.7表達(dá)質(zhì)粒是通過將編碼人源Nav1.7的cDNA序列亞克隆至pcDNA3.1（+）載體上構(gòu)建而成的。利用陽離子脂質(zhì)體載體LipofectamineTM 2000將Nav1.7表達(dá)質(zhì)粒與增強(qiáng)的綠色熒光蛋白（enhanced green fluorescent protein，eGFP）質(zhì)粒瞬時(shí)轉(zhuǎn)染進(jìn)入HEK293T細(xì)胞，培養(yǎng)約24 h，挑選有綠色熒光的細(xì)胞進(jìn)行電生理試驗(yàn)。

1.2.5 全細(xì)胞膜片鉗

本研究的電生理試驗(yàn)均使用全細(xì)胞膜片鉗完成。試驗(yàn)在室溫下進(jìn)行。試驗(yàn)前先將細(xì)胞培養(yǎng)基更換為1.5 mL的鈉離子通道細(xì)胞外液。記錄電極由玻璃電極經(jīng)電極拉制儀兩步拉制而成。電極入水前給予一定的正壓，使電極尖端不易被堵塞，入水電阻以1.8～3.0 MΩ為宜。入水后進(jìn)行液間電位補(bǔ)償，在顯微鏡下調(diào)節(jié)微操，使電極接近細(xì)胞。輕輕擠壓細(xì)胞，當(dāng)電極電阻增加0.3 MΩ左右時(shí)停止。然后給予持續(xù)的負(fù)壓，當(dāng)電極電阻上升至100.0～300.0 MΩ且不再增加時(shí)釋放負(fù)壓，待電阻阻值變?yōu)榧獨(dú)W（GΩ）時(shí)，表示已建立高阻封接。進(jìn)行快電容補(bǔ)償后調(diào)為全細(xì)胞模式，并給予-90 mV的鉗制電壓。向電極內(nèi)部施加一個(gè)稍大于封接時(shí)的負(fù)壓，進(jìn)行破膜。破膜后進(jìn)行慢電容、串聯(lián)電阻（補(bǔ)償65%～70%）和漏電流補(bǔ)償，使電流曲線位于零位的基線處，等待4～5 min后進(jìn)行電流記錄。記錄的Nav1.7電流經(jīng)過3 kHz和10 kHz的雙重濾波過濾，采用P/4漏減去除漏電流。應(yīng)用Patchmaster軟件進(jìn)行電流的記錄和采集。試驗(yàn)結(jié)果分析采用GraphPad Prism7.00軟件完成。數(shù)據(jù)均采用平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤（x±sx）表示。

電生理試驗(yàn)中，HEK293T細(xì)胞均被鉗制于-90 mV。在篩選Nav1.7調(diào)制組分、測定APTX-1對(duì)Nav1.7的半數(shù)抑制濃度的試驗(yàn)中，使用持續(xù)時(shí)間為50 ms、電壓為-10 mV的方波電壓刺激記錄Nav1.7電流。為了測定APTX-1對(duì)Nav1.7電壓依賴性和穩(wěn)態(tài)激活曲線的影響，本研究施加從-80 mV至+80 mV的一系列測試電壓，步階為 5 mV，持續(xù)時(shí)間為50 ms，各測試脈沖之間的時(shí)間間隔為5 s。取各電壓下的峰電流值繪制電流-電壓曲線。計(jì)算各電壓下的電導(dǎo)值G，繪制穩(wěn)態(tài)激活曲線，公式為：G＝I/（V-Vrev），其中I為某一刺激電壓下的通道峰電流，Vrev為翻轉(zhuǎn)電位。采用雙脈沖刺激方式測定APTX-1對(duì)Nav1.7穩(wěn)態(tài)失活曲線的影響。第一部分是一個(gè)持續(xù)時(shí)間為500 ms的方波，從-100 mV逐級(jí)遞增至+40 mV，作為條件脈沖誘導(dǎo)鈉通道失活；第二部分為一持續(xù)時(shí)間為50 ms的-10 mV去極化刺激，用于檢測通道失活后的剩余電流。

1.3 數(shù)據(jù)分析

1.3.1 抑制的濃度效應(yīng)曲線分析

通過Hill常數(shù)方程擬合毒素抑制Nav1.7的濃度效應(yīng)曲線。Hill常數(shù)方程的表達(dá)式如下：

y=fmax-（fmax- fmin）/（1+（x/IC50）n）

在該方程中，y代表歸一化的電流值，x代表多肽毒素的濃度；fmax和 fmin分別代表Nav1.7對(duì)多肽毒素的最大與最小反應(yīng)率，本研究中fmin設(shè)置為0；n為Hill常數(shù)。

1.3.2 穩(wěn)態(tài)激活與失活曲線分析

通過Boltzmann方程擬合得出多肽毒素處理前后的Nav1.7的電壓依賴性穩(wěn)態(tài)激活與失活曲線。Boltzmann方程表達(dá)式如下：

y = 1/ {1 + exp［（V - V50）/ κ］}

在該方程中，y為歸一化的電導(dǎo)值或電流值；V50在穩(wěn)態(tài)激活曲線中代表半激活電位，在穩(wěn)態(tài)失活曲線中代表半失活電位；κ代表曲線的斜率因子。

2 結(jié)果與分析

2.1 APTX-1的分離純化與篩選

本試驗(yàn)采用電刺激法采集溝紋硬皮地蛛毒液。毒液為橙色黏稠液體，有特殊香味，易溶于水。使用分析型RP-HPLC對(duì)毒液進(jìn)行分離純化，共獲得48個(gè)組分（圖1a）。對(duì)各分離組分進(jìn)行冷凍干燥。在全細(xì)胞膜片鉗模式下檢測各分離組分對(duì)表達(dá)于HEK293T細(xì)胞的Nav1.7電流的抑制活性，篩選到一個(gè)抑制活性最強(qiáng)的組分（圖1a中*標(biāo)記組分）。通過對(duì)該組分進(jìn)行MALDI-TOF-MS質(zhì)譜分析，得到其分子質(zhì)量為7 815.2 Da（圖1b）。該組分的質(zhì)譜結(jié)果顯示僅含1個(gè)信號(hào)峰，由此可以確定分離的組分為單一組分，純度較高。

2.2 APTX-1的N端序列測定

根據(jù)鑒定到的分子質(zhì)量大小，我們推測，該多肽可能含有70余個(gè)氨基酸殘基。對(duì)其進(jìn)行Edman降解法測序后，得到其N端前十位氨基酸序列為ASCKQVGEEC（圖2）。根據(jù)得到的氨基酸序列進(jìn)行BLAST搜索，結(jié)果未匹配到已報(bào)道的毒素序列，表明該多肽為一條新型序列特征的多肽毒素。根據(jù)國際多肽毒素的標(biāo)準(zhǔn)系統(tǒng)命名法［16］，我們將其命名為β-ApTx-Cs1，簡稱APTX-1。由于Edman測序的局限性，APTX-1全長序列尚未得出，后續(xù)將進(jìn)行蜘蛛毒腺轉(zhuǎn)錄組和cDNA文庫的構(gòu)建，期望從基因水平獲取該多肽毒素的全長序列。

2.3 APTX-1對(duì)Nav1.7的親和力

APTX-1是一個(gè)新型的Nav1.7多肽抑制劑，我們對(duì)APTX-1抑制Nav1.7的親和力進(jìn)行了研究。利用全細(xì)胞膜片鉗技術(shù)測定不同濃度的APTX-1對(duì)Nav1.7電流的抑制率，發(fā)現(xiàn)1.00 μmol/L APTX-1可以完全抑制Nav1.7電流（圖3a）；利用Hill常數(shù)方程對(duì)不同毒素濃度作用下Nav1.7電流的抑制率進(jìn)行擬合，繪制APTX-1抑制Nav1.7的濃效曲線（圖3b），測定出APTX-1對(duì) Nav1.7的半數(shù)抑制濃度為（0.46±0.08） μmol/L。

2.4 APTX-1對(duì)Nav1.7電壓依賴性的影響

已報(bào)道的絕大多數(shù)蜘蛛毒素主要與VGSCs的電壓敏感結(jié)構(gòu)域結(jié)合，并改變VGSCs激活與失活的電壓依賴性，被稱為“門控調(diào)制型毒素”［17-19］。本研究選用接近半數(shù)抑制濃度的0.40 μmol/L毒素溶液進(jìn)行下一步研究。利用全細(xì)胞膜片鉗技術(shù)，記錄并分析APTX-1處理前后Nav1.7的各電壓下代表性電流曲線（圖4a）、電流-電壓曲線（圖4b）、電壓依賴性穩(wěn)態(tài)激活曲線（圖4c）和穩(wěn)態(tài)失活曲線（圖4d）。如圖4a所示：加入0.40 μmol/L APTX-1后，各電壓下的Nav1.7電流均被APTX-1所抑制；加入APTX-1前后，通道的起始激活電壓、峰電流激活電壓以及翻轉(zhuǎn)電位并沒有發(fā)生顯著變化（圖4b）。這些結(jié)果表明，APTX-1顯著抑制Nav1.7電流，但不改變Nav1.7的電壓依賴性，同時(shí)也不影響Nav1.7的離子選擇性。此外，如圖4c和圖4d所示，Nav1.7在APTX-1處理后的半激活與半失活電壓分別為-25.4 mV與-66.8 mV，對(duì)照組的半激活與半失活電壓分別為-24.3 mV與-65.8 mV。這些結(jié)果表明，APTX-1也不改變Nav1.7激活與失活的電壓依賴性。

3 討論

本研究通過對(duì)溝紋硬皮地蛛毒液進(jìn)行分離純化、質(zhì)譜鑒定、蛋白質(zhì)測序以及Nav1.7活性篩選和作用的門控特性研究，發(fā)現(xiàn)了一個(gè)對(duì)Nav1.7具有抑制活性的新型多肽毒素APTX-1。其對(duì)Nav1.7的半數(shù)抑制濃度約為（0.46±0.08）μmol/L，且對(duì)Nav1.7的穩(wěn)態(tài)激活、失活和電壓依賴性無明顯影響，與之前報(bào)道的海南捕鳥蛛毒素HNTX-III和虎紋捕鳥蛛毒素HWTX-IV對(duì)Nav1.7的作用特征類似［20-22］。但APTX-1是通過抑制電壓敏感元件還是堵塞孔道區(qū)抑制Nav1.7電流，需要進(jìn)一步通過對(duì)作用位點(diǎn)進(jìn)行分析來確定。深入分析APTX-1與Nav1.7相互作用的分子機(jī)制，也可為基于結(jié)構(gòu)與功能研究設(shè)計(jì)靶向Nav1.7的抑制劑提供基礎(chǔ)。

有毒動(dòng)物多肽毒素是有毒動(dòng)物在億萬年生存競爭中進(jìn)化的產(chǎn)物，具有高度的分子多樣性和活性多樣性。以蜘蛛為例，目前仍未發(fā)現(xiàn)在不同的蜘蛛物種中存在完全相同的多肽毒素；此外，蜘蛛多肽毒素對(duì)多種離子通道，如電壓門控鈉、鉀、鈣和瞬時(shí)感受器陽離子通道等具有調(diào)控作用，甚至有些多肽具有強(qiáng)的抗菌和抗腫瘤活性。因此，蜘蛛等有毒動(dòng)物多肽毒素不僅是其自身捕食與防御的分子武器，同時(shí)也能為我們所用，可作為分子工具研究離子通道等的生理病理功能，以及作為新型藥物研發(fā)的先導(dǎo)分子。換言之，蜘蛛等有毒動(dòng)物的毒液是豐富的資源寶庫。我們從溝紋硬皮地蛛毒液中新發(fā)現(xiàn)的Nav1.7抑制劑APTX-1具有新的氨基酸序列，也暗示其可能區(qū)別于已報(bào)道的Nav1.7抑制劑，具有新穎的三維結(jié)構(gòu)。Nav1.7主要表達(dá)在外周傷害性感受神經(jīng)元中，在疼痛信號(hào)通路上扮演重要角色，被認(rèn)為是最具潛力的鎮(zhèn)痛靶點(diǎn)。藥理學(xué)研究表明，抑制Nav1.7電流可顯著抑制傷害感受神經(jīng)元的動(dòng)作電位爆發(fā)，在多種疼痛動(dòng)物模型中具有良好的鎮(zhèn)痛效果。因此，我們新發(fā)現(xiàn)的Nav1.7抑制劑APTX-1具有開發(fā)為靶向Nav1.7以治療疼痛新藥物的潛力。

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收稿日期：2022-12-07；修回日期：2022-12-23。

基金項(xiàng)目：國家自然科學(xué)基金項(xiàng)目（31800655）；國家級(jí)大學(xué)生創(chuàng)新創(chuàng)業(yè)訓(xùn)練計(jì)劃支持項(xiàng)目（S202110542020）。

作者簡介：＃為并列第一作者。羅森，碩士研究生；楊坤，本科生。

* 通信作者：陳敏芝，實(shí)驗(yàn)師，主要從事多肽毒素結(jié)構(gòu)與功能研究以及藥物研發(fā)。E-mail： chenmz@hunnu.edu.cn。