鄭蘇,黃琴,胥婧,謝謹(jǐn),張剛

1.十堰市太和醫(yī)院,湖北醫(yī)藥學(xué)院附屬醫(yī)院,湖北 十堰 442000; 2.黃石市婦幼保健院,湖北 黃石 435000

缺血性腦卒中是臨床腦血管疾病中的常見病、多發(fā)病,具有“三高一低”(高發(fā)病、高致殘、高死亡、低治愈)的特點(diǎn),給患者家庭和社會帶來痛苦和沉重的負(fù)擔(dān)。近年來,腦卒中的發(fā)病率呈上升的趨勢[1-2]。隨著現(xiàn)代醫(yī)學(xué)的發(fā)展和科技的進(jìn)步,腦卒中患者死亡率明顯降低,但存活的患者多伴有不同程度的運(yùn)動功能障礙,嚴(yán)重影響患者的生活能力和生存質(zhì)量[3]。因此,卒中后患者運(yùn)動功能障礙的恢復(fù)是患者迫切的需求和亟待解決的問題,也是康復(fù)的重要目標(biāo)[4]。運(yùn)動訓(xùn)練是現(xiàn)代康復(fù)治療運(yùn)動功能障礙的重要手段之一,療效確切。穴位埋線是針灸學(xué)的延伸和發(fā)展,其利用羊腸線對腧穴進(jìn)行持續(xù)刺激,可減輕患者針刺的痛苦,同時(shí)可對穴位進(jìn)行緩慢持續(xù)長久的刺激。本實(shí)驗(yàn)研究采用運(yùn)動訓(xùn)練配合穴位埋線的方法干預(yù)缺血性腦卒中大鼠,探討兩者聯(lián)合運(yùn)用對大鼠運(yùn)動功能障礙的影響,為運(yùn)動訓(xùn)練配合穴位埋線治療缺血性腦卒中運(yùn)動功能障礙提供理論基礎(chǔ)。

1 材料

1.1 實(shí)驗(yàn)動物選取60只SPF級健康雄性SD大鼠,體質(zhì)量(250±20) g,由湖北醫(yī)藥學(xué)院實(shí)驗(yàn)動物中心提供,許可證號:SCXK(鄂)2011- 0008,飼養(yǎng)于溫度(23±1) ℃,相對濕度50%的動物實(shí)驗(yàn)中心,本研究經(jīng)湖北醫(yī)藥學(xué)院實(shí)驗(yàn)動物福利倫理審查委員會審批通過,動物福利審查批號:湖北醫(yī)藥學(xué)院動(福)第2022-實(shí)15號。

1.2 藥物與試劑無水乙醇、二甲苯、中性樹膠(國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司,貨號:10009218、10023418、10004160);蘇木精-伊紅(hematoxylin-eosin,HE)染色液、PBS(武漢云克隆科技股份有限公司,貨號:B001、B006)。

1.3 儀器線栓(廣州佳靈生物科技有限公司,規(guī)格:L3400);轉(zhuǎn)輪式跑步機(jī)(淮北九百電子科技有限公司,型號:JB-PT);組織石蠟包埋機(jī)(寰熙醫(yī)療,型號:HBM-200L);倒置光學(xué)顯微鏡(德國徠卡公司,型號:Leica dmi6000B);成像系統(tǒng)(廣州市明美科技有限公司,型號:TVO.63XC-MO);平衡木實(shí)驗(yàn)裝置、小動物氣體麻醉機(jī)(上海玉研科學(xué)儀器有限公司,型號:YAN-PHM-2、ACS-4)。

2 方法

2.1 動物分組及造模將60只SD大鼠隨機(jī)分為假手術(shù)組、模型組、穴位埋線組、運(yùn)動訓(xùn)練組和聯(lián)合組,每組各12只。除假手術(shù)組外,其余組大鼠參照Zea Longa法[5]制備缺血性腦卒中大鼠模型,具體如下:利用異氟烷吸入性誘導(dǎo)將SD大鼠麻醉后仰臥位于手術(shù)操作臺上進(jìn)行固定,剃毛后頸部皮膚消毒,顯微鏡下小心分離出左側(cè)頸總動脈、頸內(nèi)/外動脈,然后夾閉頸總動脈近心端頸內(nèi)動脈遠(yuǎn)心端,結(jié)扎頸外動脈遠(yuǎn)心端并將頸外動脈離斷,從頸外動脈殘端將已消毒的線栓置入頸內(nèi)動脈,直至入顱有阻力后停止,然后結(jié)扎、固定、縫合傷口、消毒,待1 h后取出線栓。造模大鼠清醒后,參照Longa五級評分法對造模大鼠進(jìn)行評定,1～3分為造模成功[6]。假手術(shù)組的操作方法如同上,暴露動脈,但頸內(nèi)動脈不插入線栓。

2.2 干預(yù)方法手術(shù)1 d后對大鼠進(jìn)行不同的干預(yù),其中穴位埋線組:將大鼠麻醉、固定,剃去頂部毛發(fā)并消毒后,在顯微鏡下將穴位消毒線(長2 mm)埋置于右側(cè)頂顳前斜線,埋線時(shí)間持續(xù)14 d[7];運(yùn)動訓(xùn)練組:大鼠進(jìn)行跑輪訓(xùn)練,初始轉(zhuǎn)速10 r·min-1,具體跑步機(jī)速度根據(jù)大鼠耐力進(jìn)行適當(dāng)調(diào)整,每次 30 min,期間每10 min休息1次,每天1次,連續(xù) 14 d[8];聯(lián)合組:大鼠分別按照穴位埋線組和運(yùn)動訓(xùn)練組的干預(yù)方法對大鼠進(jìn)行穴位埋線后跑輪訓(xùn)練,連續(xù)14 d;假手術(shù)組和模型組不進(jìn)行治療方法干預(yù)。所有大鼠單籠飼養(yǎng),定期觀察大鼠生命體征。

2.3 大鼠神經(jīng)功能損傷評分根據(jù) Garcia評分法[9]分別于第1天、第7天和第14天對大鼠的四肢對稱性、自主活動、攀籠功能、前肢對稱性、軀體感覺功能及觸須感覺等6個(gè)部分進(jìn)行綜合評估,得分越低,說明神經(jīng)功能損傷越嚴(yán)重。

2.4 網(wǎng)屏實(shí)驗(yàn)分別于第1天、第7天、第14天根據(jù)改良網(wǎng)屏實(shí)驗(yàn)對大鼠前肢肌力的損傷程度進(jìn)行評估。實(shí)驗(yàn)操作過程中,將網(wǎng)屏在30°、45°、60°三個(gè)角度放置,大鼠右側(cè)肢體用醫(yī)用膠帶輕柔纏縛然后放在網(wǎng)屏上,觀察大鼠60 s內(nèi)在網(wǎng)屏上的保持情況,從而評價(jià)大鼠的左側(cè)肢體的前爪抓握能力及肌力變化。

2.5 平衡木實(shí)驗(yàn)分別于第1天、第7天、第14天進(jìn)行平衡木實(shí)驗(yàn)[10],對大鼠平衡穩(wěn)定性進(jìn)行評估。平衡木長165 cm,寬 1.75 cm,離地 90 cm,在平衡木下放置一個(gè)緩沖的安全箱,以減輕老鼠墜落對機(jī)體的影響。在平衡木的遠(yuǎn)端是一個(gè)黑暗目標(biāo)箱,目標(biāo)箱有一個(gè)狹窄的入口,而平衡木前端有一個(gè)明亮的光源,激勵動物穿過光束進(jìn)入目標(biāo)箱。當(dāng)老鼠的前腳進(jìn)入目標(biāo)箱后,立即關(guān)燈,實(shí)驗(yàn)結(jié)束。實(shí)驗(yàn)結(jié)束后,讓大鼠在目標(biāo)箱中休息5 min,然后再從開始位置重復(fù)上述步驟2次。

2.6 HE染色觀察各組大鼠腦組織形態(tài)學(xué)變化于第14天進(jìn)行神經(jīng)行為能力評估后,將大鼠麻醉、固定、然后斷頭,分離出大腦組織,隨后將大鼠腦組織置于40 ng·L-1多聚甲醛中固定,固定好后進(jìn)行石蠟包埋,切片,常規(guī)脫蠟、復(fù)水,HE染色,封片后顯微鏡下觀察各組大鼠腦組織形態(tài)學(xué)變化。

3 結(jié)果

3.1 各組大鼠神經(jīng)功能評分比較與假手術(shù)組比較,各造模大鼠的神經(jīng)功能評分降低,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。與模型組比較,第7天和第14天,運(yùn)動訓(xùn)練組、穴位埋線組和聯(lián)合組大鼠神經(jīng)功能評分升高,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);與運(yùn)動訓(xùn)練組比較,第7天和第14天,穴位埋線組和聯(lián)合組大鼠神經(jīng)功能評分升高,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);與穴位埋線組比較,聯(lián)合組大鼠神經(jīng)功能評分升高,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),見表1。

表1 各組大鼠神經(jīng)功能評分比較分)

3.2 各組大鼠網(wǎng)屏實(shí)驗(yàn)得分比較網(wǎng)屏傾斜30°、45°、60°時(shí),與假手術(shù)組比較,模型組大鼠網(wǎng)屏實(shí)驗(yàn)得分降低,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。網(wǎng)屏傾斜30°、45°、60°時(shí),與模型組比較,第7天和第14天,運(yùn)動訓(xùn)練組、穴位埋線組和聯(lián)合組大鼠網(wǎng)屏實(shí)驗(yàn)得分升高,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);與運(yùn)動訓(xùn)練組比較,第7天和第14天,穴位埋線組和聯(lián)合組大鼠網(wǎng)屏實(shí)驗(yàn)得分升高,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);與穴位埋線組比較,聯(lián)合組大鼠網(wǎng)屏實(shí)驗(yàn)得分升高,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表2—表4。

表2 各組大鼠網(wǎng)屏傾斜30° 得分比較 分)

表3 各組大鼠網(wǎng)屏傾斜45° 得分比較 分)

表4 各組大鼠網(wǎng)屏傾斜60° 得分比較 分)

3.3 各組大鼠平衡木實(shí)驗(yàn)結(jié)果比較與假手術(shù)組比較,各組大鼠平衡功能評分、平衡木實(shí)驗(yàn)到達(dá)時(shí)間和平衡木實(shí)驗(yàn)誤足次數(shù)均升高,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。與模型組比較,第7天和第14天,穴位埋線組和聯(lián)合組平衡功能評分、平衡木實(shí)驗(yàn)到達(dá)時(shí)間和平衡木實(shí)驗(yàn)誤足次數(shù)均有所降低,運(yùn)動訓(xùn)練組平衡功能評分、平衡木實(shí)驗(yàn)到達(dá)時(shí)間降低,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);與運(yùn)動訓(xùn)練組比較,第7天和第14天,穴位埋線組和聯(lián)合組平衡功能評分、平衡木實(shí)驗(yàn)到達(dá)時(shí)間和平衡木實(shí)驗(yàn)誤足次數(shù)均有所降低,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);與穴位埋線組比較,聯(lián)合組平衡功能評分、平衡木實(shí)驗(yàn)到達(dá)時(shí)間和平衡木實(shí)驗(yàn)誤足次數(shù)均有所降低,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),見表5—表7。

表5 各組大鼠平衡功能評分比較分)

表6 各組大鼠平衡木實(shí)驗(yàn) 到達(dá)時(shí)間比較

表7 各組大鼠平衡木實(shí)驗(yàn) 誤足次數(shù)比較 次)

3.4 各組大鼠海馬組織病理形態(tài)學(xué)改變情況HE染色顯示,假手術(shù)組大鼠腦組織海馬細(xì)胞排列整齊有序,結(jié)構(gòu)大致正常。模型組、運(yùn)動訓(xùn)練組、穴位埋線組、聯(lián)合組大鼠腦組織海馬神經(jīng)細(xì)胞排列紊亂,細(xì)胞結(jié)構(gòu)大部分不完整、有空泡狀、神經(jīng)元數(shù)量減少,聯(lián)合組病理損害最輕,見圖1。

A:假手術(shù)組;B:模型組;C:運(yùn)動訓(xùn)練組;D:穴位埋線組;E:聯(lián)合組。圖1 各組大鼠海馬組織病理形態(tài)學(xué)改變(HE染色,×200)

4 討論

缺血性腦卒中是臨床常見的腦血管疾病,且存活者存在不同程度的功能障礙,運(yùn)功功能障礙尤為凸顯[11]。現(xiàn)今,卒中后功能障礙的治療方法較多,中醫(yī)治療方法有針灸、功法、推拿、中藥等,現(xiàn)代康復(fù)治療方法有肌電生物反饋療法、經(jīng)顱磁刺激、PT、OT等[12-14]?？傮w來說,目前缺血性腦卒中治療方法較多,且治療療效尚可[15-17],但多以治療師治療為主,在治療期間有治療及刺激,治療后持續(xù)性刺激一般都因治療師結(jié)束而終止,故不因治療師停止而終止的持續(xù)性刺激治療項(xiàng)目有待進(jìn)一步研究。

穴位埋線是在中醫(yī)針灸學(xué)的基礎(chǔ)上延伸的一種療法。與普通針刺比較,其可在安全的情況下進(jìn)行留針,保持對埋線部位的穴位進(jìn)行持續(xù)刺激,從而達(dá)到足夠的刺激量,并且減少了反復(fù)針刺治療進(jìn)針的痛苦;同時(shí)其埋置于皮下,后期人體可吸收,不影響患者的正常生活和工作,患者可根據(jù)自身情況進(jìn)行自行按壓,增強(qiáng)刺激,保證刺激強(qiáng)度[18]。近年來,埋線療法已經(jīng)逐漸廣泛應(yīng)用于腦卒中的治療,且研究證明埋線療法可以提高腦卒中患者臨床療效,改善運(yùn)動功能障礙、提高生活質(zhì)量[19-20]?，F(xiàn)代研究證實(shí),穴位埋線可增強(qiáng)激活腦卒中后大腦皮質(zhì)運(yùn)動區(qū)[21]。腦卒中屬于中醫(yī)學(xué)“中風(fēng)”范疇,病位在腦,病機(jī)為氣血逆亂,經(jīng)脈失養(yǎng)。頭為諸陽之會,頂顳前斜線是臨床治療卒中后運(yùn)動障礙常用的頭針之一,其位于前神聰(百會前1寸)與顳部懸厘之間的連線,刺之增強(qiáng)腦區(qū)活動功能,提高中樞興奮性,利于神經(jīng)功能的恢復(fù)[22]。

運(yùn)動訓(xùn)練是治療腦卒中后功能障礙的重要治療方法之一,可有效改善患者ADL評分和Brunnstrom分期,提高臨床療效[23]。研究顯示,運(yùn)動訓(xùn)練可以抑制神經(jīng)細(xì)胞凋亡、促進(jìn)神經(jīng)血管再生、抑制神經(jīng)炎癥發(fā)生,從而緩解神經(jīng)損傷,實(shí)現(xiàn)神經(jīng)功能重塑[24-25]。跑臺訓(xùn)練可使大鼠進(jìn)行自由蹬、爬等主動運(yùn)動,其跑臺的運(yùn)動強(qiáng)度可以進(jìn)行調(diào)整,跑速和時(shí)間可以進(jìn)行準(zhǔn)確的調(diào)節(jié),跑輪訓(xùn)練與和游泳設(shè)備相比,在運(yùn)動生理學(xué)、神經(jīng)生理學(xué)和行為學(xué)等方面有著較為突出的優(yōu)勢[26]。故本實(shí)驗(yàn)采用跑輪訓(xùn)練作為腦卒中大鼠的運(yùn)動訓(xùn)練。

本研究采用的局灶性腦缺血再灌注模型可以最大程度上模擬腦卒中患者缺血再灌注損傷后的一系列生理病理性變化,為深入研究缺血性腦卒中后遺癥的康復(fù)方法及具體作用機(jī)制提供了強(qiáng)有力支持。通過運(yùn)動訓(xùn)練和穴位埋線對腦缺血模型大鼠進(jìn)行治療表明,聯(lián)合組大鼠第7天和第14天神經(jīng)功能評分、網(wǎng)屏實(shí)驗(yàn)得分、平衡木實(shí)驗(yàn)得分等顯著改善,缺血區(qū)腦組織病理損傷減輕。以上研究結(jié)果表明,運(yùn)動訓(xùn)練聯(lián)合穴位埋線可以減輕缺血腦組織的損傷,改善神經(jīng)功能,提高神經(jīng)行為功能,有效改善腦卒中后運(yùn)動功能障礙,為臨床運(yùn)動訓(xùn)練聯(lián)合穴位埋線治療腦卒中提供理論基礎(chǔ)。