倪潔 陸定

(上海市第八人民醫(yī)院兒科,上海 200235)

雖然兒童肺炎支原體感染在發(fā)病之后存在一定特殊的臨床表現(xiàn)和影像學(xué)變化,但是與病毒、細(xì)菌等引發(fā)的感染之間存在相似性,需要通過更加科學(xué)的實驗室檢驗方法,對感染類型進行確定[1]。以往對于肺炎支原體的實驗室診斷主要依靠血清學(xué)檢測,但是兒童第2份血清標(biāo)本本身難以獲得,抗體容易受到年齡、免疫情況的影響,因此肺炎支原體抗體IgG滴度、肺炎支原體IgM使用受到影響。而肺炎支原體咽拭子DNA檢測這種生物學(xué)檢驗措施樣本獲取更加便捷,實際使用過程中效果較好[2]。本文對比分析兒童肺炎支原體感染現(xiàn)狀及其檢測方法。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取2019年7月至2020年12月我院收治的疑似兒童肺炎支原體感染患兒200例,其中男患兒102例,女患兒98例,年齡0～13歲,平均年齡(6.54±1.32)歲,病程2～12d,平均病程(6.13±1.34)d。其中≤3歲患兒58例、4～6歲患兒77例、7～11歲患兒65例。納入指標(biāo):符合實用兒科學(xué)對于呼吸道感染的診斷標(biāo)準(zhǔn)[3];臨床出現(xiàn)發(fā)熱、鼻塞、咳嗽等癥狀[4];經(jīng)X等影像學(xué)檢查確定支氣管、肺部存在疾病征象;患兒家屬知情同意。排除指標(biāo):先天性血液疾病;先天性心臟、腎臟重大疾病;先天性免疫缺陷;中途退出實驗。

1.2方法 (1)血清學(xué)檢測包括肺炎支原體抗體IgG滴度、肺炎支原體IgM,均采集患兒靜脈血并進行血清分離,將血清在2～8℃環(huán)境中保存,24h內(nèi)完成檢測。肺炎支原體抗體IgG滴度檢驗試劑為日本富士瑞必歐株式會社生產(chǎn),操作流程需要嚴(yán)格按照說明書中步驟進行操作,共12孔,取25 μl進行倍比稀釋,之后加入第1孔中,將未致敏粒子25 μl加入第2孔中,將致敏粒子25 μl加入3～12孔中,充分震蕩混勻后在室溫下等待3h,如結(jié)果第3孔滴度1:40、第4孔滴度1:80、第5孔滴度1:160、第6孔滴度1:320、第7孔滴度1:640、第8孔滴度1:1 280、第9孔滴度1:2 560、第10孔滴度1:5 120、第11孔滴度1:10 240、第12孔滴度1:20 480則表示符合檢查指標(biāo),如抗體滴度高于1:40表示陽性;肺炎支原體IgM檢驗,按照SERODIA-MYCOⅡ試劑盒說明書的要求進行操作,自2 ml全血中分離出血清,加入血清稀釋液、感作粒子、未感作粒子,30 min時間內(nèi)與血清稀釋液復(fù)溶,充分混合之后等待3 h,抗體稀釋自1:40開始至1:1 280,如高于1:160表示陽性。(2)生物學(xué)檢驗主要開展肺炎支原體咽拭子DNA檢測,在清晨未洗漱狀態(tài)下獲取咽部分泌物,接種到預(yù)溫的培養(yǎng)基中,使用PCR毛細(xì)管電泳片段分析試劑盒對逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶聯(lián)反應(yīng)進行檢測,之后使用GEXP自動化平臺進行檢測,并使用相關(guān)配套軟件對熒光數(shù)據(jù)進行分析,獲得閾值循環(huán)數(shù),如數(shù)值高于40表示陰性,低于38為陽性,38～40之間進行復(fù)檢,而復(fù)檢之后數(shù)值在38～40之間為陰性。

1.3觀察指標(biāo) 分析各年齡段兒童肺炎支原體感染感染率;分析各年齡段不同檢測方法檢出率;分析各年齡段聯(lián)合檢測結(jié)果。

2 結(jié) 果

2.1分析各年齡段兒童肺炎支原體感染感染率 ≤3歲兒童肺炎支原體感染感染率最高為82.12%,其次為4～6歲患兒感染率為74.14%,7～11歲患感染率最低為66.15%,總感染率為75.00%。

2.2分析各年齡段不同檢測方法檢出率 ≤3歲患兒生物學(xué)檢測檢出率更高,7～11歲患兒血清學(xué)檢測準(zhǔn)確率更高(P<0.05);4～6歲患兒血清學(xué)檢測、生物學(xué)檢測準(zhǔn)確率之間對比無差異(P>0.05)。見表1。

表1 分析各年齡段不同檢測方法檢出率n(%)

2.3分析各年齡段聯(lián)合檢測結(jié)果 聯(lián)合檢測在≤3歲、4～6歲、7～11歲年齡段檢出率均較高。見表2。

表2 分析各年齡段聯(lián)合檢測結(jié)果

3 討 論

肺炎支原體是一種介于病毒和細(xì)菌之間的無細(xì)胞壁型微生物,因自身的體積較小,可通過飛沫傳播,因此在兒童集體中的爆發(fā)率較高。但是對該病的臨床疾病特征進行分析,發(fā)現(xiàn)典型性不足,影像學(xué)檢查也無明顯的特異性,無法準(zhǔn)確將其與細(xì)菌、病毒感染區(qū)分[5]。實驗室檢驗對于該病的診斷具有積極作用,常規(guī)使用血清學(xué)檢驗和分子生物學(xué)檢驗,需要對兩種檢測方法的使用價值進行分析,更好的對疾病急性診斷[6]。

實驗室對肺炎支原體感染的診斷金標(biāo)準(zhǔn)為培養(yǎng)法,但是需要耗費較長的時間,操作過程也非常復(fù)雜,陽性率低,不利于快速檢測,而血清學(xué)檢驗包括肺炎支原體抗體IgG滴度、肺炎支原體IgM檢驗[7],檢測試劑盒成熟,成本低,具有較好的應(yīng)用價值。但是該檢測方法在0～3歲兒童中檢出率較低,這是因為該年齡段兒童自身的免疫應(yīng)答水平較低,使IgM、IgG的檢出率不高,而7～11歲患兒自身免疫系統(tǒng)發(fā)育逐步完善,對于IgM、IgG的檢出率則顯著提升[8];從DNA檢測陽性率分析,7～11歲陽性率較高,這是因為該階段患兒自身的抵抗能力較好,對于疾病存在一定抗體,自身攜帶肺炎支原體抗體的概率較高[9],而肺炎支原體在呼吸道中分布,因此容易檢出。但是肺炎支原體DNA檢測雖然可以確定患兒攜帶和感染病原菌,沒有一個確切的區(qū)域確定患兒是否感染,因此該指標(biāo)陽性意義不大;為了提升疾病的診斷質(zhì)量,可將兩種方法進行結(jié)合[10],對比分析血清學(xué)檢驗、分子生物學(xué)檢驗的陽性檢出結(jié)果,結(jié)合不同年齡選擇適合的檢測措施,聯(lián)合應(yīng)用2種方法進行早期檢測,提升疾病的診斷質(zhì)量,規(guī)范漏檢的問題,減少假陽性的出現(xiàn),提升檢驗的準(zhǔn)確性[11]。

綜上,肺炎支原體抗體IgG滴度、肺炎支原體IgM、肺炎支原體咽拭子DNA檢測在兒童肺炎支原體感染中診斷率均較高,均可用于疾病診斷,為了提升檢驗質(zhì)量,可以將3種檢測方法進行結(jié)合,提升診斷準(zhǔn)確率。