【摘要】 背景 隨著環(huán)境及人們飲食結構的改變，急性痛風性關節(jié)炎（AGA）已成為臨床常見疾病，AGA易反復發(fā)作對患者健康造成危害，臨床工作中刺血療法結合壯醫(yī)藥線點灸對AGA有確切的療效，但其作用機制尚未明確。目的 基于Toll樣受體（TLRs）/髓樣分化因子88（MyD88）信號通路探討刺血療法結合壯醫(yī)藥線點灸治療AGA的作用機制。方法 實驗時間為2021年5月—2022年3月，將60只SD大鼠隨機分為空白組、模型組、刺血組、藥線組、秋水仙堿組、刺血結合藥線組，每組10只。除空白組外，其余各組均將尿酸鈉懸浮液注入大鼠右踝關節(jié)腔內制備AGA模型，于造模24 h后秋水仙堿組予秋水仙堿懸浮液灌胃治療，刺血療法組予阿是穴點刺放血治療，藥線組予壯醫(yī)藥線圍灸病灶處，刺血結合藥線組先予阿是穴點刺放血再行圍灸法。觀察造模后6、12、24、72 h右踝關節(jié)腫脹程度；蘇木素-伊紅染色觀察右踝關節(jié)滑膜組織病理改變；采用酶聯(lián)免疫吸附試驗檢測大鼠血清中白介素（IL）-10、IL-8及環(huán)氧化酶2（COX-2）水平；蛋白質印跡法檢測右踝關節(jié)滑膜組織中MyD88和IKK-β蛋白表達。結果 模型組、刺血組、藥線組、秋水仙堿組造模后6、12、24、48、72 h右踝關節(jié)外踝橫截面直徑均高于空白組，刺血結合藥線組造模后6、12、24、48 h右踝關節(jié)外踝橫截面直徑高于空白組，刺血組、藥線組、秋水仙堿組、刺血結合藥線組造模后48、72 h右踝關節(jié)外踝橫截面直徑低于模型組（Plt;0.05）。刺血組、藥線組、秋水仙堿組及刺血結合藥線組右踝關節(jié)其炎性細胞的浸潤情況較模型組有所改善。模型組、刺血組、藥線組、秋水仙堿組以及刺血結合藥線組大鼠IL-8、COX-2水平高于空白組，IL-10水平低于空白組，秋水仙堿組、刺血結合藥線組、刺血組、藥線組IL-8、COX-2水平低于模型組，IL-10水平高于模型組，刺血組、藥線組大鼠IL-8、COX-2水平高于秋水仙堿組，IL-10水平低于秋水仙堿組，刺血組、藥線組大鼠IL-8、COX-2水平高于刺血結合藥線組，IL-10水平低于刺血結合藥線組（Plt;0.05）。模型組、藥線組、刺血組、刺血結合藥線組MyD88、IKK-β水平高于空白組，秋水仙堿組MyD8水平高于空白組，藥線組、秋水仙堿組MyD88、IKK-β水平低于模型組，刺血組、刺血結合藥線組MyD88水平低于模型組（Plt;0.05）。結論 刺血療法結合壯醫(yī)藥線點灸能通過調節(jié)TLRs/MyD88信號通路來改善AGA關節(jié)炎性癥狀，起到治療作用，刺血療法結合壯醫(yī)藥線點灸可能是AGA的潛在替代療法。

【關鍵詞】 關節(jié)炎，痛風性；壯族醫(yī)藥學；壯醫(yī)藥線點灸療法；髓樣分化因子88；TLRs/MyD88信號通路；大鼠

【中圖分類號】 R 589.7 R 291.8 【文獻標識碼】 A DOI：10.12114/j.issn.1007-9572.2022.0775

【引用本文】 朱丹萌，黃玉瑩，羅統(tǒng)安，等. 刺血療法結合壯醫(yī)藥線點灸對急性痛風性關節(jié)炎大鼠TLRs/MyD88信號通路的影響［J］. 中國全科醫(yī)學，2023，26（20）：2525-2531. DOI：10.12114/j.issn.1007-9572.2022.0775. ［www.chinagp.net］

ZHU D M，HUANG Y Y，LUO T A，et al. Effect of pricking-bloodletting therapy combined with Zhuang-medicine-thread moxibustion on TLRs/MyD88 signal pathway in a rat model of acute gouty arthritis［J］. Chinese General Practice，2023，

26（20）：2525-2531.

Effect of Pricking-bloodletting Therapy Combined with Zhuang-medicine-thread Moxibustion on TLRs/MyD88 Signal Pathway in a Rat Model of Acute Gouty Arthritis ZHU Danmeng1，HUANG Yuying1，LUO Tong'an1，HE Changyuan1，CHEN Rilan2*

1.Guangxi University of Chinese Medicine，Nanning 530001，China

2.Department of Acupuncture and Moxibustion，Ruikang Hospital Affiliated to Guangxi University of Chinese Medicine，Nanning 530011，China

*Corresponding author：CHEN Rilan，Chief physician/Professorr；E-mail：lanlani10000@163.com

【Abstract】 Background With the change of people's environment and diet structure，acute gouty arthritis（AGA）has become a common clinical disease，which is prone to recurrence，causing harm to patients' health. Pricking-bloodletting therapy combined with Zhuang-medicine-thread moxibustion（moxibustion with a threat prepared with Zhuang herbal medicine） has proven to have a definite therapeutic effect on AGA clinically，but the mechanism of action is not very clear. Objective To assess the effect of pricking-bloodletting therapy combined with Zhuang-medicine-thread moxibustion on toll-like receptors /myeloid differentiation factor 88 （TLRs/MyD88） signal pathway in a rat model of AGA to explore the mechanism of action of this treatment in AGA. Methods The experiment lasted from May 2021 to March 2022，sixty SD rats were equally randomized into 6 groups：blank group，model group，pricking-bloodletting group，medicated thread group，colchicine group and pricking-bloodletting with medicated thread group. Except for the blank group，the other groups received sodium urate suspension injected into the right ankle cavity to prepare the AGA model. Twenty-four hours after the modelling，colchicine group received intragastric administration of colchicine suspension，pricking-bloodletting group received bloodletting after pricking the Ashi acupoint with a needle，medicated thread group received Zhuang-medicine-thread moxibustion at the site of lesion，and pricking-bloodletting with medicated thread group first received bloodletting after pricking the Ashi acupoint with a needle，then Zhuang-medicine-thread moxibustion at the site of lesion. The swelling degree of the right ankle joint was observed at 6，12，24 h and 72 h after modeling. Hematoxylin-eosin staining was used to observe the pathological changes of the synovium of the right ankle joint. The serum levels of interleukin（IL）-10，IL-8 and cyclooxygenase-2（COX-2） were determined by ELISA. The expressions of MyD88 and IKK-β in the synovium of the right ankle were detected by western blotting. Results The transverse diameter of right lateral malleolus in model group，pricking-bloodletting group，medicated thread group or colchicine group was larger than that in blank group at 6，12，24，48 h and 72 h after modeling（Plt;0.05）. The transverse diameter of right lateral malleolus in pricking-bloodletting with medicated thread group was larger than that in blank group at 6，12，24 h and 48 h after modeling（Plt;0.05）. The transverse diameter of the right lateral malleolus of the pricking-bloodletting group，medicated thread group，colchicine group or pricking-bloodletting with medicated thread group was smaller than that of the model group at 48 h and 72 h after modeling（Plt;0.05）. Compared with model group，the inflammatory cell infiltration of right ankle in pricking-bloodletting group，medicated thread group，colchicine group and pricking-bloodletting with medicated thread group was improved. The blank group had lower levels of IL-8 and COX-2 and higher level of IL-10 than each of the other 5 groups（Plt;0.05）. The model group had higher levels of IL-8 and COX-2 and lower level of IL-10 than colchicine group，pricking-bloodletting with medicated thread group，pricking-bloodletting group or medicated thread group（Plt;0.05）. The colchicine group had lower levels of IL-8 and COX-2 and higher level of IL-10 than pricking-bloodletting group or medicated thread group（Plt;0.05）. The pricking-bloodletting with medicated thread group had lower levels of IL-8 and COX-2 and higher level of IL-10 than pricking-bloodletting group or medicated thread group（Plt;0.05）. The blank group had lower level of MyD88 than each of the other 5 groups（Plt;0.05）. The blank group had lower level of IKK-β than model group，medicated thread group，pricking-bloodletting group or pricking-bloodletting with medicated thread group（Plt;0.05）. The model group had higher IKK-β level than medicated thread group or colchicine group（Plt;0.05）. The model group had higher MyD8 level than medicated thread group，colchicine group，pricking-bloodletting group or pricking-bloodletting with medicated thread group（Plt;0.05）. Conclusion Pricking-bloodletting with Zhuang-medicine-thread moxibustion is effective in improving the symptoms of AGA by regulating the TLRs/MyD88 signaling pathway，which may be a potential alternative therapy for AGA.

【Key words】 Arthritis，gouty；Chuang medicine；Zhuang thread moxibustion therapy；Myeloid differentiation factor 88；TLRs/MyD88 signal pathway；Rats

痛風性關節(jié)炎（GA）是一種代謝性疾病，是由于尿酸鈉晶體（MSU）沉積在關節(jié)腔引起的關節(jié)炎［1］，急性發(fā)作時常表現(xiàn)為病變關節(jié)紅腫、局部皮膚溫度升高、疼痛劇烈，具有起病急、易反復、預后差的特點。在我國大約有1.1%的人口患有GA［2］，發(fā)病率逐年升高［3］，并且年輕化趨勢越發(fā)明顯。有研究表明，隨著GA發(fā)病率的上升，并發(fā)肥胖、高血壓、高脂血癥、糖尿病等疾病的概率升高［4-5］，嚴重影響患者的健康、生活質量，造成沉重的經(jīng)濟負擔［6］。

中醫(yī)認為GA急性發(fā)作時其病機主要為毒熱、痰濕交結于關節(jié)，以實熱證為主。刺血療法是中醫(yī)外治療法中的一種，即在病變部位迅速點刺以泄出一定量的血液來達到泄熱、活血化瘀作用。壯醫(yī)藥線點灸為極具嶺南地區(qū)特色的一種民族醫(yī)藥療法，選取相關穴位利用壯醫(yī)藥線來進行點灸，通過藥線的溫熱及藥效對穴位進行刺激，使通路傳導通暢、三氣復歸同步來引熱外出、散瘀活血、消炎止痛等。

Toll樣受體（TLRs）/髓樣分化因子88（MyD88）信號通路調控著GA的發(fā)生發(fā)展［7］，GA急性發(fā)作時MSU直接激活TLR，激活的TLR可通過MyD88的C端Toll/白介素-1受體（TIR）結構域形成復合物，最終激活核因子κB（NF-κB）［8］。NF-κB被活化后，啟動相關基因的轉錄，促進炎癥細胞因子的釋放，不斷增強放大炎癥反應。IκB激酶β（IKK-β）在NF-κB激活的過程中作為關鍵元件和雙向調節(jié)分子，在整個信號通路的表達當中起到至關重要的調節(jié)作用。有研究表明蠲痹歷節(jié)清方具有很好的降尿酸效果，同時還可減輕痛風關節(jié)的局部炎癥，其干預靶點為TLR4、MyD88、IKK-β和NF-κB抑制物α同分異構體（IκB-α）［9］。壯醫(yī)藥線點灸及刺血療法對GA具有確切的療效可能是其通過上調局部抗炎因子來發(fā)揮其抗炎作用，減少炎癥細胞浸潤，改善GA局部組織壞死，促進受損關節(jié)功能恢復［10-12］。在本研究中通過將尿酸鈉懸浮液注入關節(jié)腔構建急性痛風性關節(jié)炎（AGA）大鼠模型，探討基于TLRs/MyD88信號通路上刺血療法以及壯醫(yī)藥線點灸對AGA的治療作用和抗炎機制。無論是刺血療法亦或是壯醫(yī)藥線點灸，其操作均十分簡便，具有顯著的療效，不良反應較小，經(jīng)濟負擔較輕，尤為適合在基層醫(yī)院推廣。

1 材料與方法

1.1 實驗材料

1.1.1 實驗動物 2021年5月—2022年3月選取SPF級SD雄性大鼠60只，體質量（200±20）g，購于湖南斯萊克公司〔實驗動物許可證號：SCXK（湘）2019-0004〕。本研究取得廣西中醫(yī)藥大學倫理委員會批準（DW20210426-055）。實驗大鼠均分籠飼養(yǎng)于廣西中醫(yī)藥大學科學實驗中心動物實驗室，飼養(yǎng)條件：室溫（22±1）℃，濕度（50±10）%，實行12 h∶12 h 光暗照明循環(huán)，保持動物房環(huán)境安靜，飼養(yǎng)期間自由進食飲水，定期清潔、消毒。

1.1.2 實驗試劑 秋水仙堿（合肥博美生物科技有限公司，貨號：QC8624）；尿酸鈉（美國Sigma-Aldrich公司，貨號：U2875）；蘇木素-伊紅（HE）染色試劑盒（武漢百仟度生物科技有限公司，貨號：B1002）；環(huán)氧化酶2（COX-2）（貨號：RA22955）、白介素（IL）-8（貨號：RA20553）、IL-10（貨號：RA20090）酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）試劑盒購自Biowamp公司；BCA蛋白定量試劑盒購自BIOSHARP公司（貨號：BL521A）；MyD88（貨號：bs-1047R）、IKK-β（貨號：bs-4880R）抗體購于北京博奧森生物技術有限公司；GAPDH（貨號：60004-1-lg）購于武漢三鷹生物技術有限公司；辣根過氧化物酶標記山羊抗兔（貨號：A0208）、辣根過氧化物酶標記山羊抗小鼠（貨號：A0216）均購于上海碧云天生物技術有限公司。

1.2 實驗方法

1.2.1 實驗動物分組 適應性飼養(yǎng)7 d后，將60只大鼠隨機分為6組：空白組、模型組、刺血組、藥線組，秋水仙堿組、刺血結合藥線組，每組10只。

1.2.2 AGA大鼠模型制備 將0.9%氯化鈉溶液0.2 mL注射至空白組大鼠右側踝關節(jié)腔內。將剩余4組大鼠放至小動物麻醉機中，吸入異氟烷麻醉后抽取0.2 mL的尿酸鈉懸浮液，于大鼠右側踝關節(jié)后側30°～40°方向進針進入關節(jié)腔，針下有明顯的落空感時將尿酸鈉懸浮液注入到關節(jié)腔內，踝關節(jié)對側關節(jié)囊鼓起即為AGA大鼠造模成功。

1.2.3 右踝關節(jié)內外踝橫截面直徑 觀察造模6、12、24、48、72 h后右踝關節(jié)腫脹度，在干預治療前采取游標卡尺測量各組大鼠右踝關節(jié)內外踝橫截面直徑，每只大鼠連續(xù)測量右踝關節(jié)3次，讀取數(shù)值取平均值并記錄。

1.2.4 干預治療方式 于造模24、48、72 h后進行干預治療，每次治療前對大鼠進行稱重，灌胃標準為每100 g給藥1 mL。秋水仙堿組給予5%秋水仙堿混懸液進行灌胃；刺血組選取AGA大鼠右踝關節(jié)局部最腫脹點即阿是穴，用6號注射針頭在該處進行點刺放血，放血量約為0.1 mL。藥線組沿著大鼠阿是穴采用壯醫(yī)梅花圍灸法進行藥線點灸，即以阿是穴為中心點，圍著中心點環(huán)形均勻點灸6壯。刺血結合藥線組則為兩種治療方法結合進行治療，操作方法與刺血組和藥線組一致，即在阿是穴處先進行刺血療法后再進行壯醫(yī)藥線梅花圍灸法治療。除秋水仙堿組以外的各組大鼠均以等量純水灌胃。

1.2.5 大鼠標本采集 末次干預治療結束后，腹腔注射10%水合氯醛對大鼠麻醉后于腹主動脈采血，4 ℃，

3 000 r/min（離心半徑8 cm），離心15 min，取上清液放入-80 ℃冰箱凍存。取血結束后立即處死大鼠，充分打開右踝關節(jié)腔，可看到關節(jié)軟骨下的淡黃透亮光滑有韌性的組織，即為關節(jié)滑膜，每組隨機選取7只大鼠右踝關節(jié)滑膜組織放至凍存管保存于液氮中用于蛋白免疫印跡法（Western blot）檢測，將剩下3只大鼠右踝關節(jié)取下后，放至離心管中，加入4%的多聚甲醛溶液使組織固定用于HE染色。

1.2.6 右踝關節(jié)滑膜組織病理改變 將固定好的大鼠右踝關節(jié)依次梯度乙醇進行脫水，將樣品包埋在石蠟中并切片。按照HE染色試劑盒說明書步驟進行操作，中性樹膠封片，顯微鏡下觀察右踝關節(jié)滑膜組織病理改變。

1.2.7 血清IL-8、IL-10、COX-2水平 按照ELISA試劑盒說明書進行操作，檢測各組大鼠血清IL-8、IL-10、COX-2水平。

1.2.8 右踝關節(jié)滑膜組織MyD88、IKK-β水平 取各組大鼠右踝關節(jié)滑膜組織，加入裂解液進行組織裂解提取總蛋白，使用BCA試劑盒進行蛋白濃度測定，上樣、電泳、轉膜，5%脫脂牛奶封閉1 h。加入MyD88、IKK-β、GAPDH一抗，4 ℃低溫孵育過夜，將膜用TBS-T緩沖液沖洗5次，加入相應的二抗在37 ℃下孵育1 h，洗膜后，使用ECL發(fā)光液使蛋白質條帶可視化并采用一體式化學發(fā)光儀拍攝照片，運用Image J軟件進行分析。

1.3 統(tǒng)計學方法 采用SPSS 21.0統(tǒng)計學軟件進行數(shù)據(jù)分析，符合正態(tài)分布的計量資料采用（x-±s）表示，多組間比較采用單因素方差分析，組間兩兩比較使用LSD-t檢驗；重復測量資料采用兩因素重復測量方差分析。以Plt;0.05 為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 各組大鼠的一般情況 空白組大鼠正常進食飲水，精神狀態(tài)方面良好，毛發(fā)顏色自然有光澤，活動自如，反應迅速，動作敏捷；造模大鼠精神狀態(tài)不佳，進食減少，毛發(fā)粗糙、暗黃、雜亂無序，右踝局部膚溫升高，發(fā)紅腫脹，活動量明顯減少；干預治療后刺血組、藥線組，秋水仙堿組、刺血結合藥線組大鼠較模型組一般情況均改善明顯；秋水仙堿組大鼠出現(xiàn)腹瀉，刺血組、藥線組及刺血結合藥線組大鼠二便正常。

2.2 各組大鼠造模后右踝關節(jié)內外踝橫截面直徑 組間與時間對大鼠造模后右踝關節(jié)外踝橫截面直徑存在交互作用（Plt;0.05），組間和時間對大鼠造模后右踝關節(jié)外踝橫截面直徑主效應均顯著（Plt;0.05）。6組間造模后右踝關節(jié)外踝橫截面直徑比較，差異有統(tǒng)計學意義（Plt;0.05）；6組各時間點造模后右踝關節(jié)外踝橫截面直徑比較，差異均有統(tǒng)計學意義（Plt;0.05）。模型組、刺血組、藥線組、秋水仙堿組造模后6、12、24、48 h、72 h右踝關節(jié)外踝橫截面直徑均高于空白組，刺血結合藥線組造模后6、12、24、48 h右踝關節(jié)外踝橫截面直徑高于空白組，刺血組、藥線組、秋水仙堿組、刺血結合藥線組造模后48、72 h右踝關節(jié)外踝橫截面直徑低于模型組，差異均有統(tǒng)計學意義（Plt;0.05），見表1。

2.3 各組大鼠右踝關節(jié)滑膜組織病理變化影響 空白組大鼠右踝關節(jié)滑膜組織及細胞結構完整，膠原纖維有序排列，組織未見有明顯炎性細胞；模型組大鼠右踝關節(jié)滑膜組織嚴重損傷，大面積壞死脫落，可見大量炎性細胞浸潤。刺血組、藥線組、秋水仙堿組及刺血結合藥線組右踝關節(jié)其炎性細胞的浸潤情況較模型組有所改善，滑膜組織結構輕度異常，炎性細胞浸潤較少，詳見圖1。

2.4 各組大鼠血清IL-8、IL-10、COX-2水平比較 6組大鼠血清IL-8、IL-10、COX-2水平比較，差異有統(tǒng)計學意義（Plt;0.05）。模型組、刺血組、藥線組、秋水仙堿組以及刺血結合藥線組大鼠IL-8、COX-2水平高于空白組，IL-10水平低于空白組，秋水仙堿組、刺血結合藥線組、刺血組、藥線組IL-8、COX-2水平低于模型組，IL-10水平高于模型組，刺血組、藥線組大鼠IL-8、COX-2水平高于秋水仙堿組，IL-10水平低于秋水仙堿組，刺血組、藥線組大鼠IL-8、COX-2水平高于刺血結合藥線組，IL-10水平低于刺血結合藥線組，差異有統(tǒng)計學意義（Plt;0.05），見表2。

2.5 各組大鼠滑膜組織MyD88、IKK-β水平比較 6組間MyD88、IKK-β水平比較，差異有統(tǒng)計學意義（Plt;0.05）。模型組、藥線組、刺血組、刺血結合藥線組MyD88、IKK-β水平高于空白組，秋水仙堿組MyD88水平高于空白組，藥線組、秋水仙堿組MyD88、IKK-β水平低于模型組，刺血組、刺血結合藥線組MyD88水平低于模型組，差異均有統(tǒng)計學意義（Plt;0.05），見圖2、表3。

3 討論

AGA的發(fā)生和發(fā)展是飲食、遺傳、環(huán)境等多種因素共同作用的結果［13］，中醫(yī)學認為AGA屬于“痹癥”“白虎歷節(jié)風”等范疇，“痛風”這一概念最早是由朱丹溪提出來的，《格致余論·痛風論》中記載：“痛風者，大率因血受熱……寒涼外搏，熱血得寒，汗?jié)崮郎?，所以作痛”，其病因病機主要為先天稟賦不足或機體感受外邪，邪氣滯留關節(jié)，或內傷飲食，嗜食肥甘厚味，日久積而化熱生痰，瘀毒痰濁相雜痹阻關節(jié)所致。而西醫(yī)學上則認為MSU結晶沉積是導致AGA發(fā)生的關鍵因素，體內巨噬細胞可識別并吞噬MSU，激活相關炎性信號轉導通路并釋放炎性因子，產(chǎn)生強烈的炎癥反應，引起劇烈疼痛，臨床上一般表現(xiàn)為皮膚局部紅腫，皮膚溫度升高，劇痛拒按等癥狀。本研究通過將MSU注射至大鼠右踝關節(jié)制備AGA大鼠模型，其右踝表現(xiàn)與AGA臨床癥狀基本相符合，結合滑膜組織病理學的改變，即滑膜組織表現(xiàn)不同程度損傷壞死、存在大量炎癥細胞浸潤，說明造模成功。在本次研究中，模型組在造模后逐漸出現(xiàn)右踝關節(jié)腫脹，12 h達到高峰，經(jīng)治療后，秋水仙堿組、刺血組、藥線組及刺血結合藥線組均能不同程度緩解關節(jié)腫脹，其中造模72 h后，空白組與刺血結合藥線組大鼠右踝關節(jié)腫脹度比較，差異無統(tǒng)計學意義，說明刺血療法結合壯醫(yī)藥線點灸在改善踝關節(jié)腫脹方面最優(yōu)。秋水仙堿組大鼠在治療期間出現(xiàn)腹瀉，考慮為秋水仙堿引起的胃腸道反應，而余治療各組大便正常，說明在刺血療法及壯醫(yī)藥線點灸不僅能有效改善AGA關節(jié)癥狀，且不良反應少。

《靈樞·小針解》中指出：“滿則泄之者，氣口盛則當泄之也。宛陳則除之者，去血脈也”，道出了對于血實、熱毒、濕熱、氣滯血瘀等的實證的疾病應當予刺血療法來治療，起到泄熱、活血化瘀、調節(jié)氣血、淤血去則新生等作用。在嶺南地區(qū)因其特殊的地理環(huán)境氣候造就了疾病多具有濕熱瘀毒特征，壯醫(yī)學認為“寒手熱背腫在梅”，指的是腫塊類型的疾病，可選擇以最腫脹部位為中心，圍著腫塊圍灸，呈梅花形分布，能軟堅散結、活血消腫、解毒消炎。故從中醫(yī)學結合民族醫(yī)學的角度出發(fā)，刺血療法結合壯醫(yī)藥線點灸可用于AGA的治療。GA急性發(fā)作期間，MSU晶體的吞噬作用能誘導細胞膜的溶解、溶酶體和炎性遞質的釋放，以及單核細胞趨化蛋白1、趨化因子蛋白8、IL-8等趨化因子把中性粒細胞募集到炎性組織中，這些過程都會引起持續(xù)的炎癥反應［14-15］。在免疫系統(tǒng)中，細胞因子在炎癥和感染期間參與免疫反應，是最重要的信使分子和效應分子。TLRs參與機體的固有免疫，激活后既可促進多種炎性因子如IL-1β、IL-8等大量釋放，進而在AGA炎癥過程中產(chǎn)生炎癥級聯(lián)反應。故觀察刺血療法以及壯醫(yī)藥線點灸能否降低炎癥反應，便可確定該治療方法對AGA的應用價值。有研究表明對于內毒素致熱的家兔，與單純拔罐療法相比，刺血療法結合拔罐療法能抑制粒細胞-巨噬細胞集落刺激因子、IL-1β、腫瘤壞死因子α（TNF-α）、IL-6的水平，抗炎、退熱作用更優(yōu)［16］。在沈谷豐等［17］研究中采用中藥結合刺絡放血法治療GA患者能有效降低促炎因子TNF-α、IL-8、IL-1β水平，利于尿酸的排泄，改善GA的臨床癥狀。在壯醫(yī)藥線點灸聯(lián)合針刺療法治療膝骨性關節(jié)炎研究當中，IL-1β、IL-18水平明顯下降，關節(jié)炎癥得到改善，關節(jié)軟骨的修復功能得到恢復［18］。在本研究當中，IL-10作為典型的抗炎細胞因子，減少炎癥反應，改善臨床癥狀［19］。IL-8是趨化因子中的一種，參與著炎癥反應的整個過程。COX-2是一種誘導酶，調節(jié)著細胞的生長、遷移、增殖、自噬、凋亡和免疫反應，能促進前列腺素的合成，在組織損傷、炎癥反應時表達較高，從而誘發(fā)明顯的疼痛［20-21］。ELISA檢測結果顯示模型組大鼠中IL-8和COX-2水平升高，IL-10水平降低，說明AGA大鼠右踝關節(jié)出現(xiàn)過度的炎癥反應，給予大鼠干預治療后，AGA大鼠IL-8和COX-2水平降低，IL-10水平升高，提示刺血療法及壯醫(yī)藥線點灸對AGA炎癥反應具有一定的抑制作用，且秋水仙堿組與刺血結合藥線組之間差異無統(tǒng)計學意義，說明在兩者療效相當，相比單純刺血療法或壯醫(yī)藥線點灸療法，兩者結合療效最好。通過本次研究，證實了刺血療法結合壯醫(yī)藥線點灸治療AGA大鼠能有效抑制促炎因子分泌以及促進抗炎因子的釋放。對于炎癥反應來說，降低炎癥因子，控制炎癥風暴反應至關重要，本研究為刺血療法結合壯醫(yī)藥線點灸治療AGA提供了一定的可靠依據(jù)。

TLRs是一個特征明確的模式識別受體家族，在TLRs中除了TLR3外，其他TLR均需利用MyD88依賴性信號通路［22］。TLRs屬于Ⅰ型跨膜蛋白，MyD88是機體內十分重要的信號傳導蛋白，也是TLRs先天免疫反應信號途徑和信號通路中介導的關鍵接頭分子，其是經(jīng)典激活途徑中炎癥遞質NF-κB所必需的，而IKK-β作為NF-κB抑制物激酶復合物的主要催化亞基，又是激活NF-κB所必需的，從而誘導許多促炎因子分泌和其他免疫相關蛋白產(chǎn)生效應［23-24］。TLR/MyD88信號轉導通路是目前GA發(fā)病機制研究最多的信號通路，GA急性發(fā)作時TLRs激活，并與通過MyD88依賴性途徑觸發(fā)先天免疫反應并啟動下游信號通路，調節(jié)多種炎癥相關基因的表達，通過MyD88的TIR結構域傳遞細胞內信號，進而激活轉錄因子，促進IL-8、IL-1β、IL-6、TNF-α等多種炎性因子的釋放，產(chǎn)生炎癥反應［25］。有研究表明痛風發(fā)作與體內MSU對Ⅰ型跨膜蛋白受體及激活其下游信號通路有關，異牡荊素可以降低關節(jié)腫脹程度，減輕炎癥反應，改善AGA癥狀［26］。由此可知，TLRs/MyD88信號通路是改善AGA病情及減輕炎癥的作用靶點。本研究刺血療法結合壯醫(yī)藥線點灸能顯著抑制AGA大鼠滑膜MyD88、IKK-β蛋白的表達。此外，刺血療法結合壯醫(yī)藥線點灸可以抑制相關炎性因子以及促進對抗炎因子的分泌，對TLRs/MyD88信號傳導通路起到抑制作用，調節(jié)炎性因子，對AGA起到治療作用。

綜上所述，本研究結果表明刺血療法結合壯醫(yī)藥線點灸能更好降低關節(jié)腫脹程度，減輕炎癥反應，與下調MyD88和IKK-β表達有關，TLRs/MyD88炎癥反應信號轉導通路的多靶點拮抗作用可能是該信號通路治療AGA的抗炎機制之一。中醫(yī)藥以及民族醫(yī)藥是中國獨有的寶庫，希望通過本研究能為刺血療法結合壯醫(yī)藥線點灸治療AGA在臨床工作中提供新的思路和相關理論依據(jù)，以期中醫(yī)以及民族醫(yī)學能得到更進一步的發(fā)展。

作者貢獻：朱丹萌負責文章的構思、論文撰寫及論文的修訂；黃玉瑩、羅統(tǒng)安、賀長源進行整理數(shù)據(jù)、研究結果的分析；陳日蘭負責文章的質量控制及審校，對文章整體質量進行監(jiān)督管理。

本文無利益沖突。

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（收稿日期：2022-09-13；修回日期：2023-01-05）

（本文編輯：鄒琳）