摘要 目的：基于核因子E2相關因子2（Nrf2）/抗氧化反應原件（ARE）通路探討橙皮素對載脂蛋白E基因敲除（ApoE-/-）小鼠動脈粥樣硬化（AS）的影響。方法：將48只ApoE-/-小鼠用高脂飲食喂養(yǎng)12周后，采用左頸總動脈縮窄性套管法建立ApoE-/-小鼠AS模型。模型制備成功后將ApoE-/-小鼠隨機分為模型組、橙皮素低劑量組、橙皮素高劑量組、鴉膽子苦醇組，每組12只。另取12只雄性C57BL/6J小鼠作為對照組，給予普通飼料喂養(yǎng)。橙皮素低、高劑量組小鼠分別給予50 mg/kg、100 mg/kg橙皮素灌胃，每日1次；鴉膽子苦醇組小鼠灌胃100 mg/kg橙皮素，隔天腹腔注射Nrf2抑制劑鴉膽子苦醇2 mg/kg，連續(xù)給藥12周；對照組和模型組給予等量0.5%羧甲基纖維素鈉灌胃。檢測各組血清血脂水平以及丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）和谷胱甘肽過氧化物酶（GSH-Px）水平；油紅O染色觀察主動脈斑塊形成和主動脈竇脂質沉積情況，并計算損傷面積百分比；熒光探針測定主動脈中活性氧（ROS）的生成；蛋白免疫印跡法（Western Blot）檢測主動脈中Nrf2/ARE通路相關蛋白表達。結果：與對照組相比，模型組小鼠主動脈ROS增加，血清總膽固醇（TC）、三酰甘油（TG）、低密度脂蛋白膽固醇（LDL-C）、氧化型低密度脂蛋白（ox-LDL）、MDA、主動脈斑塊損傷和主動脈竇脂質損傷面積百分比、Kelch樣環(huán)氧氯丙烷相關蛋白1（Keap1）的表達均明顯升高，血清SOD、GSH-Px活性、主動脈Nrf2、還原型輔酶/醌氧化還原酶（NQO1）、血紅素加氧酶1（HO-1）的表達明顯降低，差異均有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）；與模型組相比，橙皮素低、高劑量組小鼠ROS降低，血清TC、TG、LDL-C、ox-LDL、MDA水平、主動脈斑塊損傷和主動脈竇脂質損傷面積百分比、Keap1均明顯下降，HDL-C、SOD、GSH-Px活性、Nrf2、NQO1、HO-1的表達均明顯升高，差異均有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）；鴉膽子苦醇可逆轉高劑量橙皮素減輕ApoE-/-小鼠AS病變的作用。結論：橙皮素可能通過激活Nrf2/ARE通路，維持內皮細胞中的氧化還原平衡，減輕ApoE-/-小鼠AS病變，具有較好的抗AS作用。

關鍵詞 動脈粥樣硬化；橙皮素；氧化應激；核因子E2相關因子2，Nrf2；抗氧化反應原件，ARE；載脂蛋白E；實驗研究

doi：10.12102/j.issn.1672-1349.2023.05.011

Abstract Objective：To explore the effect of hesperetin on atherosclerosis in apolipoprotein E（ApoE） knockout mice based on nuclear factor erythroid 2 related factor 2 （Nrf2）/antioxidant response factor（ARE） pathway.Methods：Forty-eight ApoE-/- mice were fed with high-fat diet for 12 weeks，and then the atherosclerosis（AS） model of ApoE-/- mice was established by left common carotid artery constriction cannula method.After successful model preparation，ApoE-/- mice were randomly divided into model group，low- and high-dose hesperedin groups（50 mg/kg and 100 mg/kg），and Brucea Javanica alcohol group（100 mg/kg hesperedin＋Nrf2 inhibitor Brucea Javanica alcohol 2 mg/kg），with 12 mice in each group.Another 12 male C57BL/6J mice were selected as control group and fed with normal diet.The mice in low-dose and high-dose hesperedin groups were given 50 mg/kg and 100 mg/kg hesperedin by gavage，once a day.While the mice in Brucea Javanica group were given 100 mg/kg hesperetin by gavage，and 2 mg/kg Brucea Javanica by intraperitoneal injection every other day，for 12 weeks.The mice in control group and model group were given 0.5% sodium carboxymethylcellulose by gavage.The levels of serum lipid，malondialdehyde（MDA），superoxide dismutase（SOD），and glutathione peroxidase（GSH-Px） were detected.The formation of aortic plaque and lipid deposition in aortic sinus were observed by oil red O staining，and the percentage of damage area was calculated.The production of reactive oxygen species（ROS） in aorta was measured by fluorescence probe，and the expression of Nrf2/ARE pathway related proteins in aorta was detected by Western Blot.Results：Compared with control group，ROS increased in the aorta of model group，serum total cholesterol（TC），triacylglycerol（TG），low density lipoprotein cholesterol（LDL-C），oxidized low density lipoprotein（ox-LDL），MDA，percentages of aortic plaque injury and aortic sinus lipid injury，and expression of Kelch-like ECH-associated protein 1 （Keap1） were significantly increased （P＜0.05），serum SOD and GSH-Px activities，aortic Nrf2，reductive coenzyme/quinone oxidoreductase （NQO1），heme oxygenase 1（HO-1） expression were significantly decreased（P＜0.05）. compared with model group，ROS in low- and high-dose hesperetin groups were decreased in turn，serum TC，TG，LDL-C，ox-LDL，MDA levels，the percentages of aortic plaque damage and aortic sinus lipid damage area，and Keap1 were decreased in turn，HDL-C level，SOD，and GSH-Px activities，Nrf2，NQO1，HO-1 expression were increased in turn（P＜0.05）.Brucea Javanica could reverse the effect of high-dose hesperetin on AS in ApoE-/- mice.Conclusion：Hesperedin may activate Nrf2/ARE pathway，maintain redox balance in endothelial cells，alleviate AS lesions in ApoE-/- mice，and has good anti AS effect.

Keywords atherosclerosis; hesperedin; oxidative stress; nuclear factor erythroid 2 related factor 2，Nrf2; antioxidant response factor，ARE; apolipoprotein E; experiment research

動脈粥樣硬化（atherosclerosis，AS）是心血管疾?。╟ardiovascular disease，CVD）的主要病理基礎，以血脂異常和氧化應激為主要特征，是導致心血管疾病人群高死亡率的主要原因［1-2］。氧化型低密度脂蛋白（oxidized low density lipoprotein，ox-LDL）是AS中內皮功能障礙的主要因素；AS的形成是由血脂升高水平和氧化應激觸發(fā)的，并沉積在血管內皮中［3］。當內皮受到損傷時，會刺激炎癥介質的表達，包括血管細胞黏附分子1（vascular cell adhesion molecule 1，VCAM-1）、細胞間黏附分子1（intercellular adhesion molecule 1，ICAM-1）、白介素6（interleukin 6，IL-6）和腫瘤壞死因子α（tumor necrosis factor α，TNF-α），這些介質激活氧化應激和炎癥反應，并誘導血管平滑肌細胞增殖和泡沫細胞形成，導致斑塊形成并最終導致AS病變［4-5］。因此，維持內皮細胞中的氧化還原平衡是預防和治療AS的關鍵。

橙皮素（hesperetin）是一種天然的黃烷酮化合物，主要存在于檸檬和橙子等柑橘類水果中，具有抗炎、抗氧化及抗凋亡等多種藥理學作用［6-7］。近年的研究證明，橙皮素可以通過抗炎發(fā)揮抗AS的作用，可改善血脂異常，降低主動脈竇AS斑塊部位巨噬細胞浸潤［8-9］，減弱單核細胞對TNF-α激活的人臍靜脈內皮細胞的黏附［10］。核因子E2相關因子2（nuclear factor erythroid 2 related factor 2，Nrf2）是細胞抗氧化反應的關鍵轉錄因子，越來越多的證據(jù)表明，Nrf2活性降低會導致氧化應激［11-12］；而激活Nrf2/抗氧化反應原件（ARE）信號傳導可防止ox-LDL誘導的內皮細胞損傷［13］。Velusamy等［14］發(fā)現(xiàn)橙皮素可激活Nrf2信號通路并調節(jié)其下游抗氧化蛋白水平，包括醌氧化還原酶1（NADPH quinone acceptor oxidoreductase 1，NQO1）和血紅素氧化酶1（heme oxidase 1，HO-1），維持細胞氧化還原穩(wěn)態(tài)。以往的研究主要從炎癥反應的角度探究橙皮素抗AS的作用，本研究旨在從氧化應激的角度觀察橙皮素對載脂蛋白E敲除（ApoE-/-）小鼠AS的治療效果，以期為橙皮素抗AS提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 動物 8周齡雄性C57BL/6小鼠12只，ApoE-/-小鼠48只，體質量（20±2）g，購自北京維通利華實驗動物技術有限公司，許可證號為SCXK（京）2019-0009。將小鼠飼養(yǎng)在22～23 ℃、55%～60%濕度、12 h光照/12 h黑暗周期下，自由進食和飲水。適應性飼養(yǎng)1周后開始實驗。本研究獲得機構動物護理和使用委員會批準進行，并遵循《實驗動物的護理和使用指南》。C57BL/6小鼠作為對照組，ApoE-/-小鼠作為AS組。

1.2 主要試劑及儀器 橙皮素，上海源葉生物科技有限公司生產(chǎn)，CAS號：520-33-2）；Nrf2抑制劑鴉膽子苦醇（Brusatol），美國MedChemExpress生產(chǎn)，CAS號：14907-98-3；硅膠套管（山東山德醫(yī)療器械研究所）；OCT包埋劑（北京索萊寶科技有限公司，貨號：4583）；油紅O染色試劑盒（Sigma-Aldrich，貨號MAK194-1KT）；二氫乙啶（dihydroethidium，DHE），北京百奧萊博科技有限公司生產(chǎn)（KFS377）；三酰甘油（triglyceride，TG）、總膽固醇（total cholesterol，TC）、高密度脂蛋白膽固醇（high density lipoprotein cholesterol，HDL-C）、低密度脂蛋白膽固醇（low density lipoprotein cholesterol，LDL-C）試劑盒均購自南京建成生物工程研究所；ox-LDL、丙二醛（malondialdehyde，MDA）、超氧化物歧化酶（superoxide dismutase，SOD）和谷胱甘肽過氧化物酶（glutathione peroxidase，GSH-Px）酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）試劑盒均購自上海酶聯(lián)生物科技有限公司；兔抗大鼠Kelch樣環(huán)氧氯丙烷相關蛋白1（Kelch-like ECH-associated protein 1，Keap1）、Nrf2、HO-1、β-actin、羊抗兔免疫球蛋白G（IgG） Hamp;L辣根過氧化物酶（HRP）（ab205718）均購自英國Abcam公司。

Vevo770超高分辨率小動物彩色多普勒超聲實時影像系統(tǒng)（加拿大Visualsonics）；iMark680多功能酶標儀；蛋白轉膜裝置（美國Bio-Rad公司）；熒光顯微鏡（日本Olympus公司）。

1.3 模型制備及分組給藥 實驗開始時，對照組小鼠給予正常飼料喂養(yǎng)，ApoE-/-小鼠用高脂飲食（21%脂肪和0.15%膽固醇）持續(xù)喂養(yǎng)12周。采用左頸總動脈縮窄性套管法［15］誘導AS形成建立ApoE-/-小鼠AS模型。小鼠用戊巴比妥鈉（50 mg/kg）腹腔注射麻醉后，以仰臥姿勢固定，行頸正中切口，分離左側頸總動脈，將硅膠套管（長3 mm，內徑0.3 mm）放置在左頸總動脈上并固定，縫合皮膚，繼續(xù)給予高脂喂養(yǎng)。術后6周，超聲探測發(fā)現(xiàn)ApoE-/-小鼠頸動脈有狹窄，管腔內有明顯斑塊形成，且頸動脈內膜中層厚度（IMT）明顯增加，說明AS模型制備成功；然后將小鼠隨機分為模型組、橙皮素低劑量組、橙皮素高劑量組、鴉膽子苦醇組，每組12只。小心地去除左頸總動脈上的硅膠套管。橙皮素低、高劑量組小鼠分別給予50 mg/kg、100 mg/kg橙皮素（用0.5%羧甲基纖維素鈉制成混懸液）灌胃［9］，每日1次；鴉膽子苦醇組小鼠灌胃100 mg/kg橙皮素，隔天腹腔注射Nrf2抑制劑鴉膽子苦醇2 mg/kg（溶于1%二甲基亞砜100 μL中）［16］，連續(xù)給藥12周；對照組和模型組給予等量0.5%羧甲基纖維素鈉灌胃。

1.4 取材及指標檢測

1.4.1 血清脂質測定 給藥結束后，小鼠禁食12 h，在麻醉下通過眼眶后靜脈叢穿刺采血，靜置后以3 000 r/min離心15 min，分離血清，并使用生化試劑盒定量分析TG、TC、LDL-C和HDL-C濃度。

1.4.2 血清氧化指標測定 ELISA試劑盒測定血清ox-LDL、MDA、SOD和GSH-Px水平。

1.4.3 油紅O染色 采血結束后，每組隨機選取6只小鼠，以生理鹽水經(jīng)左心室灌注主動脈，將整個主動脈分離（包括主動脈弓、胸廓和腹部區(qū)域），仔細除去黏附在血管周圍的組織后，縱向打開并將其平釘在干凈的表面上，進行油紅O染色并用玻璃密封后，拍攝主動脈的正面圖像，觀察主動脈斑塊形成情況。采用Image-pro Plus 6.0軟件測定主動脈斑塊面積，并計算主動脈斑塊損傷面積百分比。

為了測量主動脈竇的AS病變，將心臟的上半部分包埋在OCT化合物中并冷凍在－20 ℃環(huán)境下。收集切片（厚度為10 μm），從主動脈根開始，延伸400 μm。用油紅O進行染色（0.5%的異丙醇溶液，用雙蒸餾水以3∶2的比例稀釋）染色1 h，然后用蘇木精復染2 min，觀察主動脈竇脂質沉積情況，然后使用Image-pro Plus 6.0軟件進行定量，計算主動脈竇脂質損傷面積百分比。計算公式：斑塊損傷面積比＝斑塊面積/主動脈管腔總面積×100%；脂質損傷面積比＝脂質紅染面積/主動脈竇管腔總面積×100%。

1.4.4 熒光探針測定主動脈中活性氧（ROS）的生成 將主動脈根部的冰凍橫切片用10 μmol/L的DHE在37 ℃的暗室中孵育30 min，磷酸緩沖鹽溶液（PBS）洗去多余的DHE，抗熒光淬滅劑封片。熒光顯微鏡觀察紅色熒光標記的ROS并拍照。

1.4.5 蛋白免疫印跡法（Western Blot）檢測主動脈中Nrf2/ARE通路相關蛋白的表達 選取剩余6只小鼠，分離主動脈并置于1.5 mL的EP管中，加入RIPA裂解緩沖液（含苯甲基磺酰氟）研磨，在4 ℃下以20 000 r/min的速度離心30 min。取上清液，二喹啉甲酸（BCA）法檢測蛋白質濃度。取蛋白質含量相同的裂解樣品與5倍上樣緩沖液混合并煮沸10 min，在聚丙烯酰胺凝膠（SDS-PAGE）上進行蛋白質分離，轉移到聚偏二氟乙烯（PVDF）膜上。5%脫脂奶粉封閉，加入相應一抗（Keap1、Nrf2、HO-1、NQO1按1∶1 000的比例稀釋，β-actin 1∶5 000按比例進行稀釋）于4 ℃下孵育過夜，HRP標記的羊抗兔IgG二抗（1∶5 000）室溫孵育2 h，增強型化學發(fā)光試劑（ECL）顯色，以β-actin為內參，通過與內參的灰度比，得出目的條帶的相對表達水平。

1.5 統(tǒng)計學處理 所得數(shù)據(jù)使用IBM SPSS Statistics 22.0和Image-Pro Plus 6.0軟件進行分析，兩組之間數(shù)據(jù)分布的正態(tài)性和方差分別通過Kolmogorov-Smirnov檢驗和Levene檢驗進行分析（P＞0.05），符合正態(tài)分布的以均數(shù)±標準差（x±s）表示，兩組間比較采用t檢驗，多組間比較采用單因素方差分析（One-way ANOVA），并使用Tukey事后檢驗。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結 果

2.1 動脈超聲評估模型的建立 手術前，對照組小鼠的頸動脈內膜很光滑，手術后6周，ApoE-/-小鼠管腔內出現(xiàn)大量AS病變，表現(xiàn)為頸動脈出現(xiàn)狹窄，在長軸水平上探測到狹窄局部血管壁上明顯有斑塊形成，短軸將縮窄處局部放大，進一步發(fā)現(xiàn)管腔內有斑塊形成。與對照組小鼠相比，ApoE-/-小鼠的頸動脈IMT明顯增加［（76.05±6.17）μm 與（95.83±7.42）μm，P＜0.05）］，說明AS模型制備成功。詳見圖1。

2.2 各組小鼠血脂水平比較 與對照組相比，模型組、橙皮素低劑量組、橙皮素高劑量組和鴉膽子苦醇組血清TC、TG、LDL-C水平明顯升高（P＜0.05）；與模型組相比，橙皮素低劑量組、橙皮素高劑量組血清TC、TG、LDL-C水平均明顯降低（P＜0.05），HDL-C水平明顯升高（P＜0.05）；與橙皮素高劑量組相比，鴉膽子苦醇組TC、TG、LDL-C水平明顯升高（P＜0.05），HDL-C水平明顯下降（P＜0.05）。詳見表1。

2.3 各組小鼠血清氧化應激水平比較 與對照組相比，模型組、橙皮素低劑量組、橙皮素高劑量組和鴉膽子苦醇組血清ox-LDL、MDA水平明顯升高，SOD、GSH-Px活性明顯降低，差異均有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）；與模型組相比，橙皮素低、高劑量組及鴉膽子苦醇組小鼠血清ox-LDL、MDA水平均明顯下降，SOD、GSH-Px活性均明顯升高，差異均有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）；與橙皮素高劑量組相比，鴉膽子苦醇組ox-LDL、MDA水平明顯升高，SOD、GSH-Px活性明顯下降，差異均有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。詳見表2。

2.4 各組小鼠主動脈根部ROS的產(chǎn)生情況 DHE染色結果顯示，與對照組相比，模型組、橙皮素低劑量組、橙皮素高劑量組和鴉膽子苦醇組小鼠的DHE熒光強度增加，表明主動脈ROS的產(chǎn)生增加；與模型組相比，橙皮素低、高劑量組小鼠內皮熒光強度明顯降低；而鴉膽子苦醇組熒光強度較橙皮素高劑量組增加。詳見圖2。

2.5 各組小鼠主動脈和主動脈竇病變面積百分比比較 與對照組相比，模型組、橙皮素低劑量組、橙皮素高劑量組和鴉膽子苦醇組主動脈斑塊形成明顯，主動脈竇脂質沉積嚴重，主動脈斑塊損傷和主動脈竇脂質損傷面積百分比均明顯升高（P＜0.05）；與模型組相比，橙皮素低、高劑量組小鼠主動脈和主動脈竇病變面積百分比均依次降低（P＜0.05）；與橙皮素高劑量組相比，鴉膽子苦醇組主動脈和主動脈竇病變面積百分比增加（P＜0.05）。詳見圖3、圖4、表3。

2.6 各組小鼠主動脈Nrf2/ARE通路相關蛋白的表達 與對照組相比，模型組、橙皮素低、高劑量組和鴉膽子苦醇組小鼠主動脈中Keap1蛋白表達明顯升高，Nrf2、NQO1、HO-1蛋白表達明顯降低，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）；與模型組相比，橙皮素低、高劑量組小鼠Keap1蛋白表達均降低，Nrf2、NQO1、HO-1蛋白表達均升高，差異均有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）；與橙皮素高劑量組相比，鴉膽子苦醇組Keap1蛋白表達明顯升高，Nrf2、NQO1、HO-1蛋白表達明顯降低，差異均有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。詳見圖5、表4。

3 討 論

氧化應激和炎癥反應是導致AS的兩個重要因素；血脂異常即血液中TG、TC和LDL-C升高，HDL-C降低，是AS的主要危險因素［17］。血脂水平升高可導致ox-LDL水平升高?？紤]到人的AS發(fā)展需要數(shù)月至數(shù)年甚至數(shù)十年的時間，并且存在個體差異，而且研究發(fā)現(xiàn)僅高脂刺激不能自發(fā)形成粥樣硬化斑塊。近年研究發(fā)現(xiàn)，血流剪切力改變與不穩(wěn)定斑塊的形成密切相關；改變局部血流剪切力，損傷血管內皮可促使小鼠頸動脈粥樣斑塊形成，并且斑塊表現(xiàn)為不穩(wěn)定［15］。因此，本研究通過模仿人類AS的危險因素，在給予富含高脂和高膽固醇的飲食喂養(yǎng)ApoE-/-小鼠的基礎上，采用頸總動脈套管建立動脈縮窄模型加速斑塊形成。頸動脈IMT是AS的替代標志物，頸動脈IMT的增加與內皮功能障礙有關，兩者分別從解剖學和功能的不同方面評估AS過程。超聲檢查是一種基于高分辨率掃描和計算機圖像分析系統(tǒng)的非侵入性方法，已成為評估小鼠AS的有力工具［18］。本研究通過超聲成像系統(tǒng)獲得的長軸視圖來測量頸動脈IMT。結果顯示，術后ApoE-/-小鼠主動脈管腔內有明顯斑塊形成，頸動脈IMT明顯增加。進一步檢測ApoE-/-小鼠血脂水平、氧化應激水平及主動脈、主動脈竇的病變發(fā)現(xiàn)，小鼠表現(xiàn)出明顯的血脂異常、氧化和抗氧化失衡，且出現(xiàn)脂質蓄積、斑塊形成等嚴重的AS病變，表明成功建立了AS模型。

內皮功能障礙是AS的早期階段，內皮功能障礙的進展涉及許多因素，包括血脂異常、氧化應激和炎癥［19］。本研究發(fā)現(xiàn)橙皮素可降低ApoE-/-小鼠血清TG、TC和LDL-C水平，升高HDL-C水平，說明橙皮素可改善血脂異常，這與以往的研究結果［8-9］一致。血清中血脂濃度升高會導致ROS產(chǎn)生增加，而血液中升高的低密度脂蛋白則沉積在內皮下基質中，通過增加ROS的生成而被氧化形成ox-LDL。ox-LDL直接損傷內皮細胞，并通過過表達凝集素樣氧化型低密度脂蛋白受體1（LOX-1）導致內皮功能障礙，從而誘導細胞內ROS進一步升高［20］。另一方面，ROS能夠觸發(fā)核因子κB（NF-κB）激活多種促炎細胞因子，如IL-6、E-選擇素、ICAM-1和VCAM-1，從而激活炎癥反應［5］。AS的氧化應激和炎癥之間存在惡性循環(huán)。MDA是一種穩(wěn)定的脂質過氧化的終產(chǎn)物，經(jīng)常被用作ROS產(chǎn)生的標志物；SOD、GSH-Px是清除自由基的細胞保護酶。本研究在經(jīng)橙皮素干預的ApoE-/-小鼠中檢測到主動脈ROS的產(chǎn)生減少以及血清MDA和ox-LDL水平降低，SOD、GSH-Px活性升高，證明了橙皮素的抗氧化特性，這可能是橙皮素改善內皮功能障礙的機制。

Nrf2/ARE是主要的抗氧化應激軸，其激活對抑制炎癥反應起到重要作用［21］。Nrf2為細胞抗氧化損傷的關鍵因子，其主要生理特征是對體內氧化應激和外源性有毒物質的高度敏感性。ROS的中央轉錄調控靶標之一是Nrf2［22］，多項研究表明，Nrf2活性降低會導致氧化應激，有利于AS的病理發(fā)展［11-12］，而Nrf2的激活可保護內皮細胞免受氧化損傷［13］。橙皮素可通過激活Nrf2，上調NQO1和HO-1表達，上調心臟的抗氧化能力，減輕異丙腎上腺素誘導的大鼠心肌肥厚［14］。Keap1是Nrf2的主要受體之一，正常情況下，Nrf2與其抑制蛋白Keap1以二聚體形式存在于細胞質中，暴露于氧化應激后，Nrf2從其抑制劑Keap-1上解離并轉移到細胞核中，刺激ARE，啟動Nrf2下游靶基因如SOD、GSH-Px、NQO1和HO-1等表達，發(fā)揮抗氧化作用［23-24］。本研究發(fā)現(xiàn)ApoE-/-小鼠脂質過氧化作用增強的同時伴隨著Keap1表達的上調，Nrf2和HO-1、NQO1表達的下調；橙皮素可抑制Keap1表達，上調Nrf2和HO-1、NQO1表達；而且Nrf2抑制劑鴉膽子苦醇能明顯逆轉橙皮素的抗氧化活性和抗AS作用，提示橙皮素可能通過激活Nrf2/ARE通路，抑制氧化應激反應，減輕ApoE-/-小鼠AS病變。

綜上所述，橙皮素可能通過激活Nrf2/ARE通路，維持內皮細胞中的氧化還原平衡，減輕ApoE-/-小鼠AS病變，具有較好的抗AS作用，橙皮素是否還能通過其他途徑發(fā)揮作用，有待進一步研究。

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（收稿日期：2021-02-25）

（本文編輯郭懷?。?/p>