沈勇 徐佳琦 何帥帥 付立波 王紫怡 王可 呂航 王雪純

(1長春師范大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院,吉林 長春 130032;2深圳桃源居中澳實驗學(xué)校)

枳實是一種常見中藥,產(chǎn)于四川、湖南和山西等地,屬蕓香科植物,是酸橙栽培變種的干燥幼果〔1〕。枳實具有破氣消積和化痰散痞,可用于治療大便不通順、氣管痰的阻礙、胸部麻痹、肝臟器官下垂等〔2,3〕。枳實的揮發(fā)油有祛痰、抗菌及中樞抑制作用〔4〕,枳實煎劑可使胃腸平滑肌收縮節(jié)律增強(qiáng)〔5〕,與枳實和桂枝、人參等配伍可治療心絞痛,改善家兔心臟損傷〔6,7〕,而枳實梔子豉湯還具有潛在的抗抑郁作用〔8〕,枳實黃酮提取物可有效抑制 6-OHDA 誘導(dǎo)的PC12 細(xì)胞損傷〔9〕。炎癥是身體常見的癥狀,本試驗探討枳實對正常和炎癥痛模型大鼠痛覺的調(diào)節(jié)作用。

1 材料與方法

1.1試驗動物 6只成年雄性Wistar大鼠,體質(zhì)量180～200 g,由吉林大學(xué)白求恩醫(yī)學(xué)院動物中心提供。每只鼠單獨(dú)分籠飼養(yǎng),并且提供12 h的光照、自由進(jìn)食和飲水,飼養(yǎng)室內(nèi)的溫度保持在20～22 ℃。

1.2藥品與實驗器材 枳實購于吉林大藥房。將枳實制成水煮液母液,并用母液配制成15.5、31.0、62.0和118.0 mg/ml的枳實水煮液,大鼠灌胃3 ml枳實水煮液,灌胃針由深圳瑞沃德公司提供;YLS-6B熱板儀由山東省濟(jì)南市益延科技發(fā)展有限公司制造,YLS-3E電子壓痛儀由山東省醫(yī)學(xué)科學(xué)院設(shè)備站制造。

1.3試驗方法

1.3.1試驗前訓(xùn)練大鼠 為了減小試驗誤差,能夠讓大鼠適應(yīng)實驗步驟及環(huán)境,在正式開始實驗過程中,需要對大鼠進(jìn)行行為痛覺測試訓(xùn)練,即灌胃的訓(xùn)練、熱板和壓板測試訓(xùn)練3個步驟。將連有灌胃針的注射器充滿生理鹽水,頭后仰,將灌胃針放入食道,食道保持平直,灌胃針從左側(cè)口角進(jìn)入,順上顎后壁插入咽部,輕移灌胃針前端進(jìn)入食道,插入胃部,這時大鼠沒有抵觸感。對大鼠進(jìn)行連續(xù)5 d、每天5輪、每輪3次的訓(xùn)練。經(jīng)過訓(xùn)練后的大鼠HWL會維持在一個相對較穩(wěn)定的范圍。

1.3.2行為學(xué)痛覺測試 6只正常大鼠試驗前訓(xùn)練結(jié)束后第1天,均灌胃3 ml生理鹽水,作為生理鹽水組。第2、3、4、5天,分別灌胃3 ml 15.5、31.0、62.0、118.0 mg/ml枳實水煮液,分別作為15.5、31.0、62.0、118.0 mg/ml組。分別進(jìn)行壓力和熱板測試。正常大鼠行為學(xué)痛覺測試結(jié)束后第1天,6只大鼠左后爪注射0.1 ml的0.2%角叉菜膠至炎,建立炎癥痛大鼠模型。3～4 h后大鼠均灌胃3 ml生理鹽水,作為生理鹽水-Y組。第2、3、4、5天,大鼠同上方法建立炎癥痛模型,均灌胃3 ml 15.5、31.0、62.0、118.0 mg/ml枳實水煮液,分別作為15.50、31.0、62.0、118.0 mg/ml-Y組。均進(jìn)行壓力和熱板測試。

1.3.3壓力、熱板測試 打開壓板儀器開關(guān),讓其穩(wěn)定1 h后,將有機(jī)玻璃壓在大鼠后爪的跗趾關(guān)節(jié)處,大鼠感覺到疼痛時后爪便會發(fā)生縮回現(xiàn)象,此時立即停止計時。將熱板儀器的溫度穩(wěn)定在52 ℃左右,將大鼠的后爪緊貼在熱板上后便開始計時,直到大鼠后爪感到疼痛主動縮回并且離開熱板時立即停止計時。分別記錄5、10、15、20、30、45、60 min 7個時間點(diǎn)的后爪縮爪潛伏期(HWL)。

1.4統(tǒng)計學(xué)方法 采用SPSS18.0軟件進(jìn)行t檢驗及雙因素方差分析。

2 結(jié) 果

2.1枳實水煮液對正常大鼠HWL的影響 與生理鹽水組比較,15.5、31.0 mg/ml組不同時間熱板及壓板測試HWL差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05);62.0、118.0 mg/ml組15、20、30 min熱板HWL顯著延長(P<0.05,P<0.01),62.0、118.0 mg/ml組20 min壓板HWL顯著延長(P<0.05,P<0.01)。見表1、表2。

表1 各組灌胃不同濃度枳實水煮液不同時刻左、右后爪熱板測試HWL比較

表2 各組灌胃不同濃度枳實水煮液不同時刻左、右后爪壓板測試HWL變化百分比比較

2.2枳實水煮液對炎癥痛模型大鼠HWL的影響 與生理鹽水-Y組比較,15.5、31.0 mg/ml-Y組不同時間熱板及壓板測試HWL差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05);與生理鹽水-Y組比較,62.0、118.0 mg/ml-Y組20 min熱板HWL顯著延長(P<0.05,P<0.01),62.0、118.0 mg/ml-Y組20 min壓板HWL顯著延長(P<0.05,P<0.01)。見表1、表2。

3 討 論

臨床上目前鎮(zhèn)痛藥物多為嗎啡、哌替啶(度冷丁)等阿片類藥物,使患者不再感覺痛感的時候,但能引發(fā)抗藥和藥癮效果〔8〕。中藥三七參與了炎癥痛大鼠痛覺調(diào)節(jié)作用,對慢性痛之一炎癥痛大鼠具有鎮(zhèn)痛作用〔10〕。本試驗結(jié)果表明,枳實水煮液對正常與炎癥痛模型大鼠熱和壓板反應(yīng)均具有疼痛敏感性的調(diào)節(jié)作用,枳實水煮液對正常與炎癥痛模型大鼠均延長了大鼠的HWL,表明枳實參與了疼痛敏感性的變化,對正常與炎癥痛模型大鼠均具有鎮(zhèn)痛調(diào)節(jié)作用,且均存在劑量依賴性,在20 min時鎮(zhèn)痛效果最佳。

以往研究發(fā)現(xiàn),枳實擁有消除身體胸部和肺部膨腫,疼痛感,食物積累不順等作用〔9〕。枳實的有效成分主要有揮發(fā)油、黃酮苷、生物堿等幾類〔11〕,有實驗證明枳實的揮發(fā)油具有一定程度的鎮(zhèn)痛和抗炎癥作用,枳實通降顆粒能顯著促進(jìn)術(shù)后腸梗阻大鼠模型小腸功能的恢復(fù),并具有較好的抗炎作用〔12〕。本試驗證實枳實有鎮(zhèn)痛作用,可能與其中有效成分包括黃酮苷,揮發(fā)油及生物堿等發(fā)揮作用有關(guān),但是具體作用需要進(jìn)一步加以驗證,本研究結(jié)果可為臨床鎮(zhèn)痛中藥的開發(fā)與研究提供理論依據(jù)。