王 寧， 鄧 登， 馬迎飛， 鄧康裕

（1.深圳市澳華集團(tuán)股份有限公司，廣東 深圳 518054；2.中國(guó)科學(xué)院深圳先進(jìn)技術(shù)研究院，合成生物學(xué)工程研究中心，廣東 深圳 518055）

蝦類養(yǎng)殖是世界水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)的支柱產(chǎn)業(yè)，我國(guó)作為世界第一養(yǎng)蝦大國(guó)更是如此。 生產(chǎn)的迅猛發(fā)展使得優(yōu)質(zhì)種苗成為對(duì)蝦健康養(yǎng)殖發(fā)展的制約因素，而營(yíng)養(yǎng)作為親蝦培育的關(guān)鍵因素之一，直接決定著親蝦的繁殖性能和種苗質(zhì)量 （Racotta 等，2003；Wouters 等，2001）。 由于親蝦培育階段的營(yíng)養(yǎng)學(xué)和飼料學(xué)的研究嚴(yán)重滯后， 導(dǎo)致目前配合飼料在親蝦培育過(guò)程中使用率較低且多在親蝦培育前期的營(yíng)養(yǎng)強(qiáng)化階段使用（王寧等，2022），而當(dāng)前親蝦培育過(guò)程中主要使用的鮮活或冰凍天然餌料（沙蠶、魷魚(yú)、雙殼貝類等），因其價(jià)格昂貴、易引入病原和質(zhì)量不穩(wěn)定而嚴(yán)重制約對(duì)蝦種業(yè)的綠色高質(zhì)量發(fā)展（杜少波等，2002）。長(zhǎng)期的生產(chǎn)與科研實(shí)踐都毫無(wú)辯駁的證明， 要實(shí)現(xiàn)對(duì)蝦種業(yè)的綠色高質(zhì)量發(fā)展，必須提高配合飼料替代天然餌料率（杜少波等，2002），因此，就必須解決配合飼料相比于天然餌料誘食性差及營(yíng)養(yǎng)成分不足的問(wèn)題。

軟顆粒飼料是指將新鮮或冷凍的生物餌料或漿狀原料同具有特定營(yíng)養(yǎng)成分或功能的粉狀配合飼料按一定比例配在一起， 攪拌均勻后經(jīng)軟顆粒機(jī)擠壓成型， 可直接投喂或者冷凍后投喂（毛連環(huán)，2020；黃偉卿等，2018）。相比于硬顆粒飼料，軟顆粒飼料在制作過(guò)程中較大程度的保留了原料中的營(yíng)養(yǎng)成分，特別是一些活性酶、維生素及未知因子。 研究表明，軟顆粒飼料具有適口性好、營(yíng)養(yǎng)消化吸收好、水質(zhì)污染少等諸多優(yōu)點(diǎn)。 目前，在水產(chǎn)動(dòng)物如牙鲆 （Paralichthysolivaceus）（林建斌等，2006）、點(diǎn)帶石斑魚(yú)（Epinephlus coioides）（林建斌等，2007）、斜帶石斑魚(yú)（Epinephelus coioides）（陳度煌等，2013）、羅非魚(yú)（Oreochromis mossambicus）（韓金林，2015；Peters，1852）等魚(yú)類以及三疣梭子蟹（Portunustrituberculatus）（何爾榮等，2007）、擬穴青蟹（Scylla paramamosain）（毛連環(huán)，2020）等甲殼動(dòng)物上證實(shí)， 軟顆粒飼料具有提高生長(zhǎng)速率和成活率、降低養(yǎng)殖成本和水質(zhì)污染的效果。

凡納濱對(duì)蝦（Litopenaeus vannamei）作為我國(guó)養(yǎng)殖對(duì)蝦的主要品種之一（Liao 等，2011），每年對(duì)凡納濱對(duì)蝦親蝦的需求量約150 萬(wàn)對(duì)， 并且主要依賴于從國(guó)外高價(jià)進(jìn)口， 國(guó)內(nèi)自主選育品種的市場(chǎng)占有率不高（冀德偉等，2021）。親蝦選育已成為制約我國(guó)對(duì)蝦產(chǎn)業(yè)發(fā)展的“卡脖子”問(wèn)題。 本試驗(yàn)旨在探討軟顆粒飼料配方對(duì)親蝦培育階段的凡納濱對(duì)蝦生長(zhǎng)性能、 體組成和血清非特異性免疫的影響， 以期為實(shí)現(xiàn)親蝦飼料精準(zhǔn)設(shè)計(jì)和對(duì)蝦種業(yè)的綠色高質(zhì)量發(fā)展提供技術(shù)支撐。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)飼料 試驗(yàn)所用魚(yú)粉為超級(jí)紅魚(yú)粉，其原料為智利鐵甲魚(yú)。 酶解魚(yú)漿（FPH）其原料為鳀魚(yú)和野雜魚(yú)，酶解蝦漿（SPH）其原料為太平洋磷蝦， 二者均由益爾生物科技有限公司研制。 白鰱[Hypophthalmichthys molitrix（Valenciennes，1844），LY]購(gòu)自深圳市南澳海鮮市場(chǎng)，取軀干部魚(yú)肉放入絞肉機(jī)絞碎后置于-80 ℃保存， 使用時(shí)置于4 ℃溶化后使用。 杜氏槍烏賊（Loligo duvaucelii，YY）（魷魚(yú)）購(gòu)自深圳市南澳海鮮市場(chǎng)，去除內(nèi)臟后放入絞肉機(jī)絞碎后置于-80 ℃保存， 使用時(shí)置于4 ℃融化后使用。 原料的常規(guī)營(yíng)養(yǎng)成分組成見(jiàn)表1。

表1 原料的常規(guī)營(yíng)養(yǎng)成分

對(duì)照組（FM）飼料配方由深圳市澳華集團(tuán)股份有限公司提供。 分別以FPH、SPH、LY 以及YY替代FM 組15%魚(yú)粉蛋白設(shè)計(jì)四個(gè)替代組。 以上共設(shè)計(jì)5 組等氮等脂飼料。 各組飼料氨基酸組成見(jiàn)表2。

表2 試驗(yàn)飼料氨基酸組成（干物質(zhì)）%

將飼料原料進(jìn)行超微粉碎后過(guò)80 目篩，按表1 配方將干料按梯度混勻法逐級(jí)擴(kuò)大混勻后，之后依次加入溶有大豆卵磷脂的魚(yú)油、 鮮料或者水，人工充分混勻。將混勻后的飼料原料通過(guò)軟顆粒制粒機(jī)（EL-400 型，山東威海高科技產(chǎn)業(yè)開(kāi)發(fā)區(qū)友誼機(jī)械廠）制成軟顆粒飼料，放于-80 ℃冰箱保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2 試驗(yàn)過(guò)程與管理 凡納濱對(duì)蝦及養(yǎng)殖試驗(yàn)由深圳市澳華集團(tuán)股份有限公司提供和完成。 在試驗(yàn)正式開(kāi)始前，暫養(yǎng)2 周。試驗(yàn)使用體格健壯無(wú)損傷、性腺未開(kāi)始發(fā)育的（25.0±0.33）g 凡納濱對(duì)蝦親蝦300 尾，隨機(jī)分配于15 個(gè)養(yǎng)殖桶中（3 重復(fù)/處理，20 尾/重復(fù)）。 每天飽食投喂4 次（6：00、10：00、14：00 和18：00）至表觀飽食。養(yǎng)殖周期為8周。養(yǎng)殖系統(tǒng)為室內(nèi)養(yǎng)殖系統(tǒng)。在養(yǎng)殖過(guò)程中，水溫保持在25 ～27 ℃， 鹽度為28‰～30‰， 溶氧≥6 mg/L，氨氮≤0.05 mg/L。 每日換水1 次。

1.3 樣品采集 養(yǎng)殖試驗(yàn)正式結(jié)束時(shí)，對(duì)蝦饑餓24 h 后記錄每桶凡納濱對(duì)蝦的數(shù)量和重量。 每桶隨機(jī)抽取6 尾蝦置于-20 ℃冷藏用作全蝦體常規(guī)成分分析。 另每桶隨機(jī)抽取6 尾蝦，用1 mL 無(wú)菌注射器從蝦圍心腔內(nèi)取血液置于離心管中， 并放置于4 ℃環(huán)境中靜置24 h 后2500 r/min 離心10 min， 收集上層清液置于-80 ℃保存以備血淋巴免疫指標(biāo)的檢測(cè)。

1.4 生化組成指標(biāo) 試驗(yàn)飼料和蝦體的生化分析方法參照程逍妹等（2018）的方法。 粗蛋白質(zhì)含量采用凱氏定氮法（GB/T 6432-94）測(cè)定，粗脂肪含量采用索氏抽提法（GB/T 6433-2006）測(cè)定，水分含量采用烘干法（GB/T 6435-2014）測(cè)定，灰分含量采用馬弗爐灼燒法（GB/T 6438-2007）測(cè)定，飼料的氨基酸組成采用鹽酸水解法（GB/T 18246-2019）測(cè)定。

1.5 非特異性免疫酶活力測(cè)定 血清中谷丙轉(zhuǎn)氨酶（ALT）、谷草轉(zhuǎn)氨酶（AST）、堿性磷酸酶（AKP）、酸性磷酸酶（ACP）、超氧化物歧化酶（SOD）和溶菌酶（LZM）活性的測(cè)定均采用南京建成生物公司的試劑盒，相應(yīng)操作均參照說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。

1.6 數(shù)據(jù)計(jì)算與統(tǒng)計(jì)分析 生長(zhǎng)性能的相關(guān)計(jì)算公式如下：

試驗(yàn)數(shù)據(jù)用 “平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤” 表示。 采用SPSS 20.0 版軟件統(tǒng)計(jì)分析試驗(yàn)數(shù)據(jù)。采用單因子方差分析（ANOVA）對(duì)試驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行方差分析，采用Tukey’s 法進(jìn)行多重比較。P＜0.05 表示差異性顯著。

2 試驗(yàn)結(jié)果

2.1 生長(zhǎng)性能 不同處理組對(duì)凡納濱對(duì)蝦生長(zhǎng)性能的影響見(jiàn)表3。 研究表明，F(xiàn)PH 和SPH 替代15%魚(yú)粉蛋白后其增重率高于FM 組但二者之間的差異不顯著（P＞0.05）。 LY、YY 組增重率分別較FM組提高11.6%、15.3%（P＜0.05），并且YY 組的增重率比LY 組高3.7%但二者之間差異不顯著 （P＞0.05）。 LY 組增重率比FPH 和SPH 組分別高9.6%和7.6%，但同SPH 組之間差異不顯著（P＞0.05）。各組的成活率無(wú)顯著性差異（P＞0.05）。

表3 不同處理對(duì)凡納濱對(duì)蝦生長(zhǎng)和存活的影響

2.2 全蝦體組成 不同處理組對(duì)凡納濱對(duì)蝦全蝦體組成的影響見(jiàn)表4。 檢測(cè)凡納濱對(duì)蝦全蝦體成分的結(jié)果表明，各處理間凡納濱對(duì)蝦的水分、脂肪和灰分沒(méi)有顯著差異 （P＞0.05）。 SPH、LY 和YY 組的蛋白含量分別比FM 組高1.43%、1.58%和1.80%（P＜0.05）；SPH 組和FM 組的全蝦體蛋白質(zhì)含量沒(méi)有顯著性差異（P＞0.05）。

表4 不同處理對(duì)凡納濱對(duì)蝦全蝦體組成的影響%

2.3 血清非特異性免疫酶活力 不同處理組對(duì)凡納濱對(duì)蝦血清非特異性免疫酶活力的影響見(jiàn)表5。 不同處理組對(duì)凡納濱對(duì)蝦血清中的AST 和ALT 的活力無(wú)顯著影響（P＞0.05）。 LY、YY 組的AKP 活力分別比FM 組提高20.5%和21.1%（P＜0.05）， 但同SPH 組和FPH 組相比無(wú)顯著性差異（P＞0.05）。FM 組ACP 活力要顯著低于其余各組（相比于FPH、SPH、LY 和YY 組，F(xiàn)M 組分別低8.3%、7.0%、15.2%和16.1%）（P＜0.05），此外，LY組和YY 組的ACP 活力要顯著高于SPH 組（LY組8.1%、YY 組10.4%） 和FPH 組 （LY 組7.4%、YY 組9.7%）（P＜0.05）。 FM 組和FPH 組的SOD活力要顯著低于LY 組 （FM 組20.0%、FPH 組12.6%）和YY 組（FM 組19.3%、FPH 組11.8%）（P＜0.05）， 但同SPH 組無(wú)顯著性差異（P＞0.05）。LY 組和YY 組LZM 的活力相比于FM 組分別提高16.0%和22.5%（P＜0.05），但同SPH 組和FPH組無(wú)顯著性差異（P＞0.05）。

表5 不同處理對(duì)凡納濱對(duì)蝦血清非特異性免疫酶活力的影響

3 討論

研究表明，海產(chǎn)蛋白酶解物富含游離氨基酸、小肽、?；撬岬葼I(yíng)養(yǎng)因子（吳代武，2018），在飼料中添加適量的海產(chǎn)蛋白酶解物能夠有效提高水產(chǎn)動(dòng)物的生長(zhǎng)率和攝食率 （Kousoulaki 等，2012；Berge 等，1996）。 在本試驗(yàn)中，飼料中添加適宜的酶解魚(yú)漿和酶解蝦漿代替魚(yú)粉提高了南美白對(duì)蝦的終末體重。其中，SPH 組增重率要高于FPH 組，這可能是由于酶解蝦膏的原料磷蝦中富含蝦青素（劉志東等，2021），蝦青素被證實(shí)可以提高包括南美白對(duì)蝦在內(nèi)的水產(chǎn)養(yǎng)殖動(dòng)物的生長(zhǎng)速度（王海芳等，2016）。 魷魚(yú)作為南美白對(duì)蝦培育過(guò)程中一直使用的天然餌料， 在親蝦繁育過(guò)程中取得了較好的效果（杜少波等，2002）。 陳泳先等（2011b）在研究中發(fā)現(xiàn)，以鰱魚(yú)卵、鰱魚(yú)肉、水絲蚓、蚯蚓、水絲蚓+鰱魚(yú)卵、 配合親蝦飼料共計(jì)六種餌料飼喂南美白對(duì)蝦親蝦，投喂鰱魚(yú)肉組的綜合表現(xiàn)最好。在本試驗(yàn)中，LY 組和YY 組均取得了較好的養(yǎng)殖效果。研究表明，飼料原料的新鮮度直接影響?zhàn)B殖動(dòng)物的生長(zhǎng)效果（葉元土，2006）。 在本試驗(yàn)中，鰱魚(yú)肉和魷魚(yú)的揮發(fā)性鹽基氮值更低， 取材更為新鮮， 這可能是LY 組和YY 組均取得了較好的養(yǎng)殖效果的原因。此外，鰱魚(yú)肉和魷魚(yú)的氨基酸含量豐富， 且必需氨基酸模式同雞蛋蛋白氨基酸模式相近（邱月等，2016；韓素珍等，1999；金慶華等，1998）。同時(shí)，研究表明，鰱魚(yú)肉和魷魚(yú)均富含高不飽和脂肪酸（邱月等，2016；陳泳先等，2011b）。 這可能是導(dǎo)致LY 組和YY 組均取得了較好的養(yǎng)殖效果的原因。

飼料中的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)被水產(chǎn)動(dòng)物消化吸收后用作自身生長(zhǎng)和組織更新， 因此蝦體組織生化含量的變化在一定程度上反映了其對(duì)飼料營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的利用情況（李二超等，2009）。 海產(chǎn)蛋白酶解物替代魚(yú)粉對(duì)水產(chǎn)養(yǎng)殖動(dòng)物體成分的影響在不同試驗(yàn)條件下結(jié)果不一致。 Refstie 等（2004）對(duì)大西洋鮭（Salmo salar）的研究結(jié)果顯示，使用酶解魚(yú)蛋白替代飼料中15%的魚(yú)粉可顯著提高魚(yú)體的粗蛋白質(zhì)含量。 Aires Oliva-Tele 等（1999）對(duì)大菱鲆（Scophthalmus maximus）的研究表明， 使用酶解魚(yú)蛋白替代魚(yú)粉未對(duì)大菱鲆體組成中的水分、粗蛋白質(zhì)、粗脂肪和灰分產(chǎn)生顯著影響。 相似的結(jié)果也見(jiàn)于符策峰等（2021）在珍珠龍膽石斑魚(yú) （Epinephelus fuscoguttatus♀×Epinephelus lanceolatus♂）飼料中使用酶解蝦膏替代一定比例的魚(yú)粉和周露陽(yáng) （2019） 在黃顙魚(yú)（Pelteobagrus fulvidraco）中使用酶解蝦膏和酶解魚(yú)膏替代一定比例的魚(yú)粉的研究中。 本試驗(yàn)條件下， 飼料中添加一定比例的酶解魚(yú)漿和酶解蝦漿代替魚(yú)粉顯著提高了蝦體粗蛋白質(zhì)含量， 而對(duì)水分、 粗脂肪和灰分均未產(chǎn)生顯著影響，表明試驗(yàn)對(duì)象、海產(chǎn)蛋白酶解物替代水平、飼料配方組成及工藝等的差異都會(huì)影響?zhàn)B殖動(dòng)物體組成。 此外，在本試驗(yàn)中使用鰱魚(yú)肉和魷魚(yú)替代一定比例的魚(yú)粉未對(duì)南美白對(duì)蝦體組成中的水分、粗脂肪和灰分造成顯著影響，但顯著提高了蝦體粗蛋白質(zhì)含量， 并且效果優(yōu)于酶解魚(yú)漿組和酶解蝦漿組。 這可能是由于鰱魚(yú)和魷魚(yú)更新鮮，組胺含量更低，而飼料中組胺含量升高能夠顯著降低養(yǎng)殖動(dòng)物腸道蛋白酶活性 （馬德英等，2020）。

親蝦繁育過(guò)程應(yīng)激大、繁育時(shí)間長(zhǎng)，因此親蝦的免疫水平和健康程度直接影響親蝦繁育的幼體質(zhì)量和數(shù)量（Racotta 等，2003）。 甲殼動(dòng)物缺少特異性淋巴細(xì)胞，因而不具備特異性免疫，僅依賴于非特異性免疫機(jī)制來(lái)抵抗病原菌入侵（Somboonwiwat 等，2006；Young 等，2002）。其中，ACP、AKP、SOD 和LZM 活力是衡量甲殼動(dòng)物免疫機(jī)能的重要指標(biāo) （程逍妹等，2018；Vallejos-Vidal等，2016； 黃旭雄等，2007；Giannini 等，2005；Rengpipat 等，2000）。此外，AST 和ALT 作為氨基酸代謝中的關(guān)鍵酶， 當(dāng)肝胰臟等受到損傷時(shí)轉(zhuǎn)氨酶會(huì)釋放到血液中從而造成血清中轉(zhuǎn)氨酶活性的升高， 因而常被用來(lái)表征甲殼動(dòng)物及其他動(dòng)物肝胰腺的損傷程度（Barcellos 等，2004）。 在本試驗(yàn)中， 各替代組的AST 和ALT 活力指標(biāo)同對(duì)照組相比無(wú)顯著性差異， 表明鮮料替代魚(yú)粉未對(duì)南美白對(duì)蝦肝胰腺產(chǎn)生損傷， 機(jī)體處于較為健康的狀態(tài)下，這與存活率的結(jié)果相一致。 這與許聰?shù)龋?022）在大菱鲆上的研究結(jié)果相似，在高魚(yú)粉組飼料中適宜的鮮料替代魚(yú)粉比例不會(huì)對(duì)大菱鲆的代謝造成損傷。 研究表明，海洋水解蛋白能夠有效保持魚(yú)蛋白水解物新鮮度和魚(yú)體特殊活性成分， 適宜比例的替代魚(yú)粉可以有效提高水產(chǎn)養(yǎng)殖動(dòng)物的非特異性免疫（Zheng等，2013）。 在本試驗(yàn)中SPH 組和FPH 組替代魚(yú)粉后均顯著提高了南美白對(duì)蝦的非特異性免疫能力， 這與之前在水產(chǎn)動(dòng)物上的研究結(jié)果相似（Khosravi 等，2015）。 研究表明，軟顆粒飼料可以提高甲殼類動(dòng)物的存活率（毛連環(huán)，2020；黃偉卿等，2018）。 此外，軟顆粒飼料還被證明可以有效降低水產(chǎn)養(yǎng)殖動(dòng)物的病蟲(chóng)害的感染率 （施學(xué)文，2013）。 在本研究中，使用LY 和YY 制作的軟顆粒飼料顯著提高了南美白對(duì)蝦的非特異性免疫， 這與軟顆粒飼料提高甲殼動(dòng)物的存活率相對(duì)應(yīng)。

4 結(jié)論

以生長(zhǎng)性能、 體組成和免疫指標(biāo)作為判斷依據(jù)， 使用軟顆粒飼料投喂選育中間養(yǎng)成階段的凡納濱對(duì)蝦時(shí)，飼料中添加一定比例的酶解魚(yú)漿、酶解蝦漿、 鰱魚(yú)和魷魚(yú)來(lái)替代魚(yú)粉可以顯著提高飼料的投喂效果，其中以鰱魚(yú)和魷魚(yú)效果最佳。