焦 飛， 李曉東， 李 林， 高 攀， 胡建勇

（新疆維吾爾自治區(qū)水產(chǎn)科學(xué)研究所，農(nóng)業(yè)農(nóng)村部西北地區(qū)漁業(yè)資源環(huán)境科學(xué)觀測(cè)實(shí)驗(yàn)站，新疆 烏魯木齊 830000）

扁吻魚(yú)（Aspiorhynchus laticeps）是僅分布于我國(guó)塔里木河流域特有種，屬鯉科（Cyprinidae）裂腹魚(yú)亞科 （Schizothoracinae） 扁吻魚(yú)屬（Aspiorhynchus），僅一屬一種。 裂腹魚(yú)亞科魚(yú)類(lèi)起源被認(rèn)為與青藏高原隆起有密切關(guān)系， 扁吻魚(yú)屬原始等級(jí)的裂腹魚(yú)， 該物種對(duì)于研究現(xiàn)代魚(yú)類(lèi)如何適應(yīng)高原環(huán)境具有積極意義， 故有古魚(yú)活化石之稱(chēng)（馬燕武，2009；Bain，2001；陳宜瑜，1996）。扁吻魚(yú)性成熟較晚，且繁殖周期長(zhǎng)，分布范圍狹窄； 自上世紀(jì)50 年代以來(lái)， 由于過(guò)度捕撈、 外來(lái)物種入侵、塔里木河流域的開(kāi)發(fā)等原因，導(dǎo)致該物種野生自然資源日益減少， 資源趨于枯竭 （任慕蓮，1996）。 該物種在1988 年被列入國(guó)家一級(jí)重點(diǎn)保護(hù)水生野生動(dòng)物， 在最新版《中國(guó)生物多樣性紅色目錄》中被列為—極危（CR）級(jí)別， 這意味著如果不加強(qiáng)保護(hù)工作， 該物種可能滅絕 （蔣志剛，2016）。 但該物種的人工繁育工作已取得成功，這將有利于該物種的保護(hù)工作（張人銘，2008）。

魚(yú)類(lèi)生長(zhǎng)發(fā)育過(guò)程中， 餌料中糖類(lèi)和脂類(lèi)主要的生理功能是提供和貯存能量， 僅有少部分參與組成機(jī)體。在魚(yú)體中，多種飽和脂肪酸和單不飽和脂肪酸均可以自身合成， 但許多被稱(chēng)為必需脂肪酸的多不飽和脂肪酸需要從餌料中獲取， 如亞油酸、亞麻酸等。且餌料中的多不飽和脂肪酸含量對(duì)于魚(yú)類(lèi)尤其是冷水性魚(yú)類(lèi)適應(yīng)低溫環(huán)境具有積極意義， 這也是魚(yú)類(lèi)營(yíng)養(yǎng)學(xué)研究的一個(gè)關(guān)鍵因素（Douglasr，2010）?，F(xiàn)有研究表明，裂腹魚(yú)屬的齊口裂腹魚(yú)和重口裂腹魚(yú)對(duì)脂類(lèi)的需求量遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于溫水性的草魚(yú) （蔣湘輝，2013； 寧毅，2012； 何雷，2008）。但是過(guò)多的脂類(lèi)攝入水平將不利于魚(yú)體的生長(zhǎng)發(fā)育，在芙蓉鯉鯽中，研究發(fā)現(xiàn)餌料中過(guò)高的脂類(lèi)攝入增加了魚(yú)類(lèi)的氧化壓力（何志剛，2016）；異育銀鯽中， 當(dāng)脂類(lèi)含量過(guò)高時(shí)能夠引起魚(yú)體中蛋白質(zhì)含量下降（王愛(ài)民，2010）。 此外，在脂類(lèi)代謝調(diào)控機(jī)制方面， 魚(yú)類(lèi)多種生長(zhǎng)環(huán)境均能影響?hù)~(yú)類(lèi)脂肪代謝相關(guān)基因表達(dá)，低溫條件下，軍曹魚(yú)肝臟脂肪代謝相關(guān)基因如乙酰輔酶A 羧化酶基因、肉堿脂?；D(zhuǎn)移酶-1 基因的表達(dá)均受到影響（蔡潤(rùn)佳，2021）；在不同脂肪含量飼料飼喂下，草魚(yú)固醇調(diào)控元件結(jié)合轉(zhuǎn)錄因子1（SREBP1），過(guò)氧化物酶體增殖物激活受體γ （PPARγ）， 肝X 受體α（LXRα）和ABC 轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白A1（ABCA1）表達(dá)均表現(xiàn)出顯著差異（Tang，2019）。但扁吻魚(yú)作為塔里木河水系的旗艦物種， 鮮見(jiàn)其在營(yíng)養(yǎng)學(xué)及其營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)代謝調(diào)控方面的研究報(bào)道，鑒于此，本研究利用自繁育的扁吻魚(yú)子二代群體， 研究飼料脂類(lèi)含量對(duì)其生長(zhǎng)和機(jī)體構(gòu)造的影響， 為今后研究該物種脂類(lèi)及其他營(yíng)養(yǎng)需求及代謝調(diào)控機(jī)理奠定基礎(chǔ)，以期推動(dòng)該物種保護(hù)生物學(xué)發(fā)展。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)用魚(yú) 試驗(yàn)用扁吻魚(yú)子二代群體人工繁殖于2019 年春季，經(jīng)池塘培育，于2021 年8 月拉網(wǎng)，選取大小差異不顯著的扁吻魚(yú)130 尾置于新疆水生野生動(dòng)物救護(hù)中心一號(hào)車(chē)間暫養(yǎng)用于試驗(yàn)。

1.2 飼料制備 市售魚(yú)粉、豆粕、菜籽粕委托烏魯木齊譜尼測(cè)試科技有限公司測(cè)定粗蛋白質(zhì)、粗脂肪含量， 魚(yú)油作為脂肪源。 飼料原料充分粉碎后， 利用萊州市旺豐農(nóng)牧機(jī)械制造有限公司生產(chǎn)的顆粒飼料機(jī)（KL150）制備2 mm 粒徑等蛋白、不同脂類(lèi)含量沉性飼料。飼料營(yíng)養(yǎng)成分見(jiàn)表1。飼料自然風(fēng)干后置于-20 ℃冰箱冷藏備用。

表1 飼料組成及營(yíng)養(yǎng)水平%

1.3 養(yǎng)殖試驗(yàn) 將長(zhǎng)490 cm、寬70 cm、高42 cm矩形槽按長(zhǎng)分為三等分，使用紗窗網(wǎng)隔離。前述試驗(yàn)用魚(yú)分為6 組，每組20 尾，每組重復(fù)3 次。每天按體重1%投喂前述Z1 飼料，適應(yīng)一周后，稱(chēng)重，進(jìn)行為期76 d 的養(yǎng)殖試驗(yàn)，養(yǎng)殖試驗(yàn)每天早中晚飽食投喂。 其中，養(yǎng)殖水深為40 cm，水流恒速為0.1 m/s，水溫（20±1）℃，每10 d 清洗一次矩形槽并換水。

1.4 樣品采集 試驗(yàn)結(jié)束后，禁食24 h，對(duì)每組試驗(yàn)魚(yú)稱(chēng)重，每個(gè)重復(fù)組隨機(jī)選擇3 尾魚(yú)，苯氧乙醇（300 μL/L）麻醉、稱(chēng)重、斷尾致死，解剖，對(duì)內(nèi)臟團(tuán)、肝臟稱(chēng)重后剪取0.5 cm×0.5 cm×0.5 cm 大小肝臟組織，pH 7.4 1×PBS 緩沖液清洗后，置于4%多聚甲醛中，委托武漢賽維爾生物科技有限公司制作HE染色石蠟切片，尼康顯微成像系統(tǒng)（DS-U3）成像；每個(gè)重復(fù)組隨機(jī)選擇3 尾魚(yú)，苯氧乙醇（300 μL/L）麻醉，液氮冷凍后，置于-80 ℃冰箱保存，委托烏魯木齊譜尼測(cè)試科技有限公司進(jìn)行魚(yú)體水分（GB5009.3 -2016 第一法）、灰分（GB 5009.4-2016 第一法）、脂肪（GB 5009.6-2016 第二法）、蛋白質(zhì)（GB5009.5 -2016 第一法）含量分析。

1.5 數(shù)據(jù)處理 試驗(yàn)魚(yú)生物學(xué)數(shù)據(jù)以“平均值±標(biāo)準(zhǔn)差”表示。使用Microsoft Excel 2010 及SPSS PRO在線(xiàn)分析系統(tǒng)處理數(shù)據(jù)。 其中相關(guān)數(shù)據(jù)計(jì)算公式如下：

式中：Wt、W0、WV、WH、T 分別為試驗(yàn)魚(yú)末期體重（g）、初始體重（g）、內(nèi)臟團(tuán)重量（g）、肝臟重量（g）、養(yǎng)殖天數(shù)（d）。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同脂含量飼料對(duì)扁吻魚(yú)生長(zhǎng)性能的影響由表2 可知，增重率（WGR）、特定生長(zhǎng)率（SGR）、臟體比（VSI）、肝體比（HSI）在該養(yǎng)殖周期下，飼料脂肪水平對(duì)其影響不顯著（P＞0.05），但是也發(fā)現(xiàn)F3 組在生長(zhǎng)方面表現(xiàn)出一定的優(yōu)勢(shì)。

表2 不同脂類(lèi)含量飼料對(duì)扁吻魚(yú)生長(zhǎng)性能的影響

2.2 不同脂含量飼料對(duì)扁吻魚(yú)體成分的影響由表3 可知，在該養(yǎng)殖周期下，飼料脂肪水平對(duì)魚(yú)體水分影響不顯著（P＞0.05），但對(duì)脂肪、蛋白質(zhì)和灰分含量影響顯著（P＜0.05），隨著飼料脂肪含量的升高， 魚(yú)體灰分含量呈現(xiàn)先升高后下降的趨勢(shì)，F(xiàn)4 組魚(yú)體灰分含量最高， 比F1 和F2 組、F3和F5 組、F6 組分別提高13.67%、8.13%、17.70%；而魚(yú)體蛋白質(zhì)含量隨著飼料脂肪含量的升高，呈現(xiàn)出下降的趨勢(shì)，F(xiàn)5 組魚(yú)體蛋白質(zhì)含量比其他組低7.89% ～20.74%；最為關(guān)鍵的是，飼料脂肪含量較高的兩個(gè)組（F5 組、F6 組）其對(duì)應(yīng)的魚(yú)體脂肪含量也較高， 并且與其他組呈現(xiàn)了顯著的差異性（P＜0.05），F(xiàn)5、F6 組魚(yú)體脂肪含量分別比其他組提高23.71% ～218.72%、5.74% ～172.41%。 為了進(jìn)一步驗(yàn)證結(jié)果的可靠性，對(duì)數(shù)據(jù)、飼料粗脂肪含量彼此進(jìn)行了相關(guān)性分析， 發(fā)現(xiàn)飼料粗脂肪含量與魚(yú)體脂肪含量呈現(xiàn)顯著性正相關(guān)（P＜0.05），但是， 魚(yú)體脂肪含量與蛋白質(zhì)含量之間呈現(xiàn)出極顯著的負(fù)相關(guān)（P＜0.01）。

表3 不同脂類(lèi)含量飼料對(duì)扁吻魚(yú)體成分的影響%

2.3 不同脂含量飼料對(duì)扁吻魚(yú)肝臟結(jié)構(gòu)的影響由圖1a 可知，在不同脂含量飼料投喂下，各試驗(yàn)組扁吻魚(yú)肝臟未出現(xiàn)脂肪空泡。 但在高倍鏡（400×）下（圖1b）顯示，各組細(xì)胞形狀未見(jiàn)異常改變，同樣也未發(fā)現(xiàn)脂肪空泡的存在。

圖1 不同脂含量飼料投喂下肝臟切片

3 討論

3.1 飼料脂肪含量對(duì)扁吻魚(yú)生長(zhǎng)的影響 脂肪作為魚(yú)類(lèi)必需的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)， 在魚(yú)類(lèi)生長(zhǎng)發(fā)育中起到不可替代的作用，飼料中過(guò)高、過(guò)低的脂肪水平均不利于魚(yú)類(lèi)的健康生長(zhǎng)， 但不同魚(yú)類(lèi)對(duì)脂肪需求量和耐受性差異極大。 異育銀鯽在飼料脂肪含量為2.16%、9.88%時(shí)， 其生長(zhǎng)相比飼料脂肪在4.08% ～7.96%時(shí)受到顯著抑制（P＜0.05），但在該含量范圍內(nèi)， 其生長(zhǎng)差異亦不顯著（P＞0.05）（王愛(ài)民，2010）； 俄羅斯鱘在飼料脂肪含量為5.45% ～14.37%時(shí)，其飼料脂肪含量對(duì)增重率的影響不顯著（P＞0.05） ，當(dāng)飼料脂肪含量為16.34% ～20.15%時(shí)，該物種的體增重受到抑制（P＜0.05）（朱婷婷，2017）。 本研究也發(fā)現(xiàn)，扁吻魚(yú)魚(yú)種在飼料脂肪含量為4.32% ～14.32%時(shí)，其飼料脂肪含量對(duì)該物種增重率、特定生長(zhǎng)率影響不顯著（P＞0.05），這說(shuō)明扁吻魚(yú)對(duì)脂肪的耐受性較高，這種耐受性可能與其原棲息地年均水溫較低有關(guān)（任慕蓮，1996）， 現(xiàn)有研究已證實(shí)冷水性魚(yú)類(lèi)對(duì)脂類(lèi)的需求量要遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于溫水性魚(yú)類(lèi)（Meng，2019；朱婷婷，2017）。此外，脂肪對(duì)魚(yú)類(lèi)生長(zhǎng)的影響與養(yǎng)殖模式、脂肪源類(lèi)型密切相關(guān)，這已在軍曹魚(yú)（鄭一民，2010）、鱘魚(yú)（鄧希海，2022）、鳙魚(yú)（類(lèi)延菊，2022）、大西洋鮭（馬駿，2017）、虹鱒（向利，2019）中得到驗(yàn)證。再者，本研究也發(fā)現(xiàn)，相比其他魚(yú)類(lèi)，扁吻魚(yú)在該養(yǎng)殖條件下生長(zhǎng)速度明顯偏慢， 這也是裂腹魚(yú)亞科魚(yú)類(lèi)的一個(gè)顯著特點(diǎn)， 齊口裂腹魚(yú)在人工養(yǎng)殖條件下其7 ～10 月間增重率也僅為80.53%（張建明，2019）；在自然條件下，該亞科多種魚(yú)類(lèi)呈現(xiàn)出前期生長(zhǎng)速度快、 后期生長(zhǎng)慢的特點(diǎn)（張俊英，2021），筆者認(rèn)為這也是相關(guān)研究者選擇該亞科物種小規(guī)格魚(yú)種（＜5 g）開(kāi)展?fàn)I養(yǎng)學(xué)研究的關(guān)鍵所在（寧毅，2012；何雷，2008）。

3.2 飼料脂肪含量對(duì)扁吻魚(yú)機(jī)體構(gòu)造的影響 眾所周知，肝臟在脂肪蓄積、代謝及轉(zhuǎn)運(yùn)中起核心作用。當(dāng)魚(yú)體攝入脂肪過(guò)多時(shí)，脂肪會(huì)在肝臟、腸系膜等部位沉積，進(jìn)而影響?hù)~(yú)類(lèi)健康。本研究結(jié)果表明，扁吻魚(yú)魚(yú)種在飼料脂肪含量為4.32%～14.32%時(shí)，其飼料脂肪含量對(duì)扁吻魚(yú)肝體比、臟體比的影響不顯著 （P＞0.05）， 這與鱘魚(yú)在餌料脂肪含量為5.45%～14.37%（朱婷婷，2017）、 異育銀鯽在餌料脂肪含量為4.08%～9.88%（王愛(ài)民，2010） 得到的結(jié)果類(lèi)似； 但吉富羅非魚(yú)在餌料脂肪含量為3.35% ～15.35%，其肝體比、臟體比顯著增加（P＜0.05）（Ding，2021），這也從另一個(gè)方面說(shuō)明了魚(yú)類(lèi)對(duì)脂肪的耐受性與物種關(guān)系極大。 在細(xì)胞層面，攝入過(guò)多的脂肪會(huì)在肝臟細(xì)胞堆積形成脂滴，嚴(yán)重者可發(fā)生脂肪肝（李鈺，2017），由圖1 可知，在飼料脂肪含量為4.32%～14.32%時(shí)，扁吻魚(yú)肝臟既未見(jiàn)脂肪滴的形成，又未見(jiàn)細(xì)胞形態(tài)發(fā)生改變，這也證明了扁吻魚(yú)對(duì)飼料中該含量的脂肪含量是耐受的。此外，由于脂肪能夠參與機(jī)體組成，由表2 可知，隨著飼料脂肪含量的增加，魚(yú)體脂肪含量呈現(xiàn)顯著增加趨勢(shì)（P＜0.05），與之相反的是，魚(yú)體蛋白含量呈現(xiàn)顯著下降趨勢(shì) （P＜0.05）， 這與羅非魚(yú)（Tian，2015）、齊口裂腹魚(yú)（段彪，2007）的研究結(jié)果相一致，雖然有研究者認(rèn)為出現(xiàn)這一現(xiàn)象的原因是魚(yú)體肌肉和肝臟中脂肪的積累使得蛋白質(zhì)水平下降（Chaiyapechara，2003），但在羅非魚(yú)（Tian，2015）的研究中得到的結(jié)果與這一說(shuō)法相悖，這意味著有一未知代謝途徑在調(diào)控魚(yú)類(lèi)脂肪與蛋白的分配，這恐將是今后魚(yú)類(lèi)營(yíng)養(yǎng)學(xué)研究的關(guān)鍵所在。

4 結(jié)論

本試驗(yàn)中， 在飼料脂肪含量為4.32% ～14.32%時(shí)，飼料脂肪含量對(duì)扁吻魚(yú)生長(zhǎng)的影響不顯著，肝臟及肝臟細(xì)胞形態(tài)正常，表明扁吻魚(yú)對(duì)餌料脂肪含量的耐受度高于14.32%，這將為后續(xù)開(kāi)展相關(guān)研究奠定基礎(chǔ)。