熊 英, 肖 偉, 任 翔, 彭麗娟, 李先耀, 鄒 瑤, 甘海娜, 李麗華

(湖南省常德市第一人民醫(yī)院風(fēng)濕免疫科, 湖南 常德 415000)

類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎(rheumatoid arthritis,RA)是一種影響著全球0.5～1%人口健康的風(fēng)濕類(lèi)疾病,該病通常伴有關(guān)節(jié)腫脹、壓痛和疼痛,降低患者活動(dòng)能力和整體生活質(zhì)量[1]。在RA疾病進(jìn)展中持續(xù)的炎癥反應(yīng)將造成不可逆的軟骨、滑膜和骨骼退化,最終使整個(gè)關(guān)節(jié)結(jié)構(gòu)變形,使患者關(guān)節(jié)活動(dòng)能力喪失和肌肉萎縮[2]。RA還會(huì)引起淋巴瘤、心血管疾病、糖尿病、貧血等并發(fā)癥,嚴(yán)重影響患者身心生活質(zhì)量[3]。早期識(shí)別RA可以在適當(dāng)治療后緩解臨床癥狀。盡管RA發(fā)病機(jī)制尚未明確,但以往研究表明免疫功能異常與RA發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)[4]。Ⅱ型膠原C端肽(type Ⅱ collagen C-terminal peptide,CTX-Ⅱ)是軟骨代謝標(biāo)志物,由軟骨組織Ⅱ型膠原降解而來(lái),已有研究證實(shí)在RA患者血清中CTX-Ⅱ水平顯著高于健康人群[5]。組蛋白去乙?；?(histone deacetylase 3,HDAC3)屬于I類(lèi)HDAC,是一種重要的轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)蛋白,參與免疫系統(tǒng)發(fā)育、細(xì)胞周期調(diào)控過(guò)程,有研究顯示,HDAC3參與骨關(guān)節(jié)炎致病過(guò)程,其能夠反映骨關(guān)節(jié)炎嚴(yán)重程度[6]。但針對(duì)CTX-Ⅱ、HDAC3與RA免疫功能、疾病活動(dòng)度關(guān)系的研究較少。本研究通過(guò)檢測(cè)RA患者血清CTX-Ⅱ、HDAC3表達(dá)變化,明確其與免疫功能指標(biāo)、疾病活動(dòng)度相關(guān)性。

1 資料與方法

1.1研究對(duì)象:2020年1月1日～2021年12月31日,選擇本院接診的84例RA患者(RA組)與84例健康體檢者(NC組),兩組間一般資料具有可比性(表1)。納入標(biāo)準(zhǔn):①RA患者均符合《2018年中國(guó)類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎診療指南》[7]中標(biāo)準(zhǔn);②年齡>18周歲;③知情同意書(shū)。排除標(biāo)準(zhǔn):①近期經(jīng)生物制劑、激素等藥物治療;②骨關(guān)節(jié)炎、腫瘤、強(qiáng)直性脊柱炎、心腦血管疾病、痛風(fēng);③其他自身免疫性疾病;④傳染性疾病或感染性疾病;⑤關(guān)節(jié)嚴(yán)重畸形者。本研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。RA組患者根據(jù)28個(gè)關(guān)節(jié)疾病活動(dòng)(disease activity score in 28 joints,DAS28)評(píng)分[8]:評(píng)分<2.6分者為緩解期(n=37,緩解組),評(píng)分≥2.6分為活動(dòng)期(n=47,活動(dòng)組),兩組性別、年齡、病程等一般資料具有可比性(表2)。

表1 RA組與NC組一般資料比較

表2 活動(dòng)組與緩解組一般資料比較

1.2觀察指標(biāo)與方法

1.2.1血清CTX-Ⅱ、HDAC3檢測(cè): NC組于體檢當(dāng)日、RA組于入院次日采集空腹外周血,5000×g離心10min,分離血清,-80℃保存待測(cè)。采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)檢測(cè)兩組CTX-Ⅱ(批號(hào):20190516,上海紀(jì)寧實(shí)業(yè)有限公司)、HDAC3(批號(hào):20190123,上海紀(jì)寧實(shí)業(yè)有限公司)水平,檢測(cè)過(guò)程嚴(yán)格按照試劑盒配套說(shuō)明步驟進(jìn)行。

1.2.2免疫功能指標(biāo)及疾病活動(dòng)度相關(guān)指標(biāo)檢測(cè):兩組患者采血后均送至檢驗(yàn)科,按照以下方法檢測(cè):使用流式細(xì)胞儀(型號(hào):NovoCyte Quanteon,安捷倫)及其配套試劑檢測(cè)T淋巴細(xì)胞亞群:CD3+、CD4+、CD8+T細(xì)胞比例,CD3+T細(xì)胞比例正常范圍為60～80%,CD4+T細(xì)胞比例正常范圍為35～55%,CD8+T細(xì)胞比例正常范圍為20%～30%。全自動(dòng)生化分析儀(型號(hào):ADVIA?XPT,西門(mén)子公司)上采用免疫散射比濁法檢測(cè)免疫球蛋白(immunoglobulin,Ig)A、IgM、IgG,配套試劑盒購(gòu)自上海江萊生物科技有限公司,IgA參考值為0.7～3.8g/L,IgM參考值為0.6～2.5g/L,IgG參考值為7.0～17.0g/L。采用雙抗夾心定量法檢測(cè)C反應(yīng)蛋白(C-reactive protein,CRP)水平(批號(hào):20191021,華美生物公司),其正常范圍為0.068～8.2mg/L。采用血細(xì)胞自動(dòng)分析儀以魏氏法檢測(cè)血沉(erythrocyte sedimentation rate,ESR),男性正常范圍為0～15mm/h,女性為0～20mm/h。

2 結(jié) 果

2.1兩組血清CTX-Ⅱ、HDAC3水平分析:RA組患者血清CTX-Ⅱ、HDAC3水平均明顯高于NC組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見(jiàn)表3。

表3 RA組與NC組血清CTX-Ⅱ HDAC3水平比較

2.2RA組不同病情程度患者血清CTX-Ⅱ、HDAC3水平比較:RA組不同病情程度患者血清CTX-Ⅱ、HDAC3水平比較結(jié)果顯示,緩解組患者血清CTX-Ⅱ、HDAC3水平均明顯低于活動(dòng)組(P<0.05)。見(jiàn)表4。

表4 RA組不同病情程度患者血清CTX-Ⅱ HDAC3水平比較

2.3各組免疫指標(biāo)水平分析:RA組CD3+、CD4+T細(xì)胞比例低于NC組,而CD8+T細(xì)胞比例以及IgM、IgA、IgG水平高于NC組(P<0.05)。見(jiàn)表5。與緩解組相比,活動(dòng)組CD3+、CD4+T細(xì)胞比例降低,IgM、IgA、IgG水平升高(P<0.05)。見(jiàn)表6。

表5 RA組與NC組免疫指標(biāo)水平比較

表6 RA組不同病情程度免疫指標(biāo)水平比較

2.4RA組血清CTX-Ⅱ、HDAC3水平與免疫功能指標(biāo)相關(guān)性:相關(guān)性分析顯示,血清HDAC3與CD3+、CD4+T細(xì)胞比例均呈負(fù)相關(guān)(r值分別為-0.529、-0.464,P<0.05),與IgM、IgA、IgG均呈正相關(guān)(r值分別為0.460、0.491、0.445,P<0.05),與CD8+T細(xì)胞比例無(wú)相關(guān)性(r值為0.173,P>0.05);血清CTX-Ⅱ與CD3+、CD4+T、CD8+T細(xì)胞比例、IgM、IgA、IgG均無(wú)相關(guān)性(r值分別為-0.107、-0.182、0.149、0.215、0.178、0.156,P>0.05)。

2.5各組疾病活動(dòng)度相關(guān)指標(biāo)分析:RA組患者ESR、CRP水平顯著高于NC組,而活動(dòng)組患者ESR、CRP水平高于緩解組(P<0.05)。見(jiàn)表7、8。

表7 RA組與NC組疾病活動(dòng)度相關(guān)指標(biāo)水平比較

表8 RA組不同病情程度患者的疾病活動(dòng)度相關(guān)指標(biāo)水平比較

2.6RA組血清CTX-Ⅱ、HDAC3水平與疾病活動(dòng)度的相關(guān)性:Pearson分析顯示,RA組患者血清CTX-Ⅱ與ESR、CRP、DAS28評(píng)分均呈正相關(guān)(r值分別為0.572、0.495、0.809,P<0.05)。血清HDAC3與ESR、CRP、DAS28評(píng)分均呈正相關(guān)(r值分別為0.540、0.519、0.864,P<0.05)。

3 討 論

ESR與CRP均是評(píng)價(jià)RA活動(dòng)期的重要指標(biāo),其水平在機(jī)體發(fā)生炎癥或組織損傷時(shí)可在外周血中檢測(cè)到明顯上升,且會(huì)隨病情輕重而呈現(xiàn)出升降變化[9]。本研究中,RA組患者ESR、CRP水平顯著高于NC組,活動(dòng)組患者ESR、CRP水平高于緩解組,與以往研究一致。RA作為一種自身免疫性疾病,免疫功能紊亂與其發(fā)病、進(jìn)展密切相關(guān),研究表明,T細(xì)胞(CD3+、CD4+、CD8+)、免疫球蛋白(IgA、IgG、IgM)均參與RA病理過(guò)程[10]。本研究發(fā)現(xiàn),與NC組相比,RA組CD8+T細(xì)胞比例、IgM、IgA、IgG水平升高,CD3+、CD4+T細(xì)胞比例降低;緩解組CD3+、CD4+T細(xì)胞比例高于活動(dòng)組,而IgM、IgA、IgG水平低于活動(dòng)組,與王曉亮等[10]和鄒曉軍等[11]研究結(jié)果一致,進(jìn)一步驗(yàn)證RA發(fā)病過(guò)程與體液免疫、細(xì)胞免疫紊亂有關(guān)。因此,探究與RA免疫功能紊亂、疾病活動(dòng)度相關(guān)的分子標(biāo)志物,對(duì)于臨床治療及病情評(píng)價(jià)極其重要。

血清中CTX-Ⅱ含量是綜合反映關(guān)節(jié)軟骨損傷累計(jì)程度標(biāo)志物,能夠準(zhǔn)確預(yù)測(cè)關(guān)節(jié)軟骨受損情況。趙伊婷等[12]認(rèn)為,膝關(guān)節(jié)骨性關(guān)節(jié)炎患者血清、尿液CTX-Ⅱ水平均增加,并與病程、軟骨損傷嚴(yán)重程度有關(guān),可考慮用其評(píng)估早期膝關(guān)節(jié)骨性關(guān)節(jié)炎發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)。本研究發(fā)現(xiàn)與上述研究結(jié)果一致,說(shuō)明CTX-Ⅱ與該病發(fā)病和病情進(jìn)展有關(guān)。HDAC是一種通過(guò)去除組蛋白乙酰基來(lái)調(diào)節(jié)染色體結(jié)構(gòu)和轉(zhuǎn)錄因子活性的酶,可以調(diào)節(jié)多種信號(hào)通路,包括核因子κB(nuclearfactor kappa-B,NF-κB),并影響細(xì)胞凋亡。張赫等[6]研究發(fā)現(xiàn),HDAC3可以促進(jìn)軟骨組織中NF-κB介導(dǎo)的炎癥反應(yīng),是運(yùn)動(dòng)治療骨關(guān)節(jié)炎的重要靶點(diǎn)。本研究中,RA患者血清HDAC3水平增加,說(shuō)明HDAC3可能參與RA發(fā)病過(guò)程。本研究活動(dòng)組HDAC3水平升高,說(shuō)明血清HDAC3水平可能參與RA病情的活動(dòng)、發(fā)展過(guò)程。進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn),CTX-Ⅱ、HDAC3均與ESR、CRP、DAS28評(píng)分呈正相關(guān),說(shuō)明二者與疾病活動(dòng)度密切相關(guān),并對(duì)RA患者的病情有一定預(yù)測(cè)價(jià)值。以往研究發(fā)現(xiàn),在免疫系統(tǒng)中,HDAC3對(duì)外周T細(xì)胞成熟、調(diào)節(jié)性T細(xì)胞發(fā)育和功能較為重要[13]。本研究進(jìn)一步發(fā)現(xiàn),RA組血清HDAC3與CD3+、CD4+、IgM、IgA、IgG存在相關(guān)性,提示HDAC3參與RA免疫調(diào)節(jié)過(guò)程,HDAC3水平增加可能導(dǎo)致免疫指標(biāo)水平升高,同時(shí)臨床中對(duì)HDAC3有效控制,可在一定程度上抑制RA進(jìn)展。

綜上所述,RA患者血清CTX-Ⅱ、HDAC3水平升高,HDAC3與RA免疫功能紊亂、疾病活動(dòng)度密切相關(guān),CTX-Ⅱ僅與RA疾病活動(dòng)度有關(guān)。但本研究所取樣本量較小,且為單中心研究,可能導(dǎo)致結(jié)果有所偏倚,有待后續(xù)多中心大樣本研究加以驗(yàn)證;仍未明確CTX-Ⅱ、HDAC3參與RA發(fā)生、發(fā)展具體調(diào)控機(jī)制,尚需后續(xù)開(kāi)展基礎(chǔ)研究。