鄭華艷

寧波市鄞州兒童口腔醫(yī)院 口腔科，浙江 寧波 315199

口腔鱗狀細(xì)胞癌是最常見(jiàn)的頭頸部癌癥之一，在全球范圍內(nèi)普遍存在，嚴(yán)重威脅人類健康[1]?，F(xiàn)階段較為明確的口腔鱗狀細(xì)胞癌致病誘因是吸煙、人乳頭瘤病毒（HPV）以及鼻煙等；同時(shí)，飲酒被認(rèn)為是口腔鱗狀細(xì)胞癌的獨(dú)立危險(xiǎn)因素之一[2]。目前，關(guān)于口腔鱗狀細(xì)胞癌的治療依然以聯(lián)合治療為主，即手術(shù)、化療、放療以及免疫治療等[3]。盡管有許多不同的化療方案和分子靶向治療的不斷的被嘗試，但口腔鱗狀細(xì)胞癌的總體5 年生存率僅保持在50%～60%[4]。雖然，對(duì)于不能接受手術(shù)切除的口腔鱗狀細(xì)胞癌患者，放化療以及免疫治療可能使其生存期延長(zhǎng)約15%，但在應(yīng)用該治療方案時(shí)會(huì)出現(xiàn)多種不良反應(yīng)以及耐藥性[5]。因此，非常需要有效的治療口腔鱗狀細(xì)胞癌藥物。

去甲漢黃芩素是從黃芩Scutellaria baicalensisGeorgi 的根中分離出具有藥理活性的黃酮[6]。黃芩是一種用于治療流感和癌癥的傳統(tǒng)中草藥。但由于去甲漢黃芩素在天然植物中含量較低，其生物學(xué)活性的研究報(bào)道有限[7]。隨著對(duì)其生物學(xué)作用進(jìn)行深入探究，發(fā)現(xiàn)去甲漢黃芩素具有抗氧化和抗缺氧的作用。同時(shí)，去甲漢黃芩素具有的多種生物學(xué)活性逐漸被報(bào)道。Wang 等[8]報(bào)道，去甲漢黃芩素通過(guò)線粒體介導(dǎo)的凋亡、自噬誘導(dǎo)和G2/M 周期阻滯抑制人結(jié)腸癌細(xì)胞生長(zhǎng)。Jing 等[9]發(fā)現(xiàn)去甲漢黃芩素減輕缺氧誘導(dǎo)的PC12 細(xì)胞氧化應(yīng)激和凋亡。然而，現(xiàn)階段關(guān)于去甲漢黃芩素在口腔鱗狀細(xì)胞癌中的作用以及潛在作用機(jī)制尚未明確。

1 資料與方法

1.1 去甲漢黃芩素靶點(diǎn)基因的篩選

將“去甲漢黃芩素”導(dǎo)入PubChem 網(wǎng)站獲取SMILE 結(jié)構(gòu)，將該結(jié)構(gòu)通過(guò)Swiss 數(shù)據(jù)庫(kù)（http://www.swisstargetprediction.ch/）、SuperPred 數(shù)據(jù)庫(kù)（https://prediction.charite.de/index.php）分別預(yù)測(cè)去甲漢黃芩素的潛在作用靶點(diǎn)基因。

1.2 口腔鱗狀細(xì)胞癌靶點(diǎn)基因的獲取

在GeneCards 數(shù)據(jù)庫(kù)（https://www.genecards.org/）和OMIM 數(shù)據(jù)庫(kù)（https://omim.org/）選擇關(guān)鍵詞“oral squamous cell carcinoma”篩選口腔鱗狀細(xì)胞癌的相關(guān)靶點(diǎn)。

1.3 “成分-靶點(diǎn)-疾病”網(wǎng)絡(luò)的構(gòu)建和拓?fù)鋵傩苑治?/h3>

將去甲漢黃芩素和口腔鱗狀細(xì)胞癌的共同靶點(diǎn)導(dǎo)入String 平臺(tái)（https://string-db.org/）構(gòu)建“成分-靶點(diǎn)-疾病”的蛋白質(zhì)相互作用（PPI）網(wǎng)絡(luò)，過(guò)濾條件被選擇為“智人”，最終構(gòu)建PPI 網(wǎng)絡(luò)圖，以“節(jié)點(diǎn)”信息為目標(biāo)，節(jié)點(diǎn)之間的關(guān)系用“邊”表示，將PPI 網(wǎng)絡(luò)輸入Cytoscape 軟件進(jìn)行拓?fù)浣Y(jié)構(gòu)分析，創(chuàng)建可視化顯示，分析出核心度最高的部分蛋白，最終預(yù)測(cè)出潛在的核心靶點(diǎn)。

1.4 基因表達(dá)譜交互分析（GEPIA）

GEPIA 是多維癌癥基因組學(xué)數(shù)據(jù)集，其整合了來(lái)自癌癥基因組圖譜（TCGA）和基因型-組織表達(dá)項(xiàng)目（GTEx，http://gepia.cancer-pku.cn/）的大量數(shù)據(jù)。采用GEPIA 法對(duì)口腔鱗狀細(xì)胞癌組織以及癌旁組織中的不同基因表達(dá)進(jìn)行方差分析。

1.5 基因本體（GO）和京都基因和基因組百科全書(shū)（KEGG）的富集分析

利用注釋、可視化和集成R 包“ClusterProfiler”進(jìn)行GO 功能和KEGG 途徑富集分析。GO 功能分析主要用于描述所鑒定基因可能具有的功能類型，包括細(xì)胞功能（CC）、分子功能（MF）、生物過(guò)程（BP）。KEGG 富集分析用于獲得去甲漢黃芩素在口腔鱗狀細(xì)胞癌的潛在信號(hào)通路，將P＜0.05 作為篩選閾值。

1.6 分子對(duì)接

將小分子的質(zhì)子化狀態(tài)設(shè)置為pH＝7.4，并使用Open Babel 將化合物擴(kuò)展為3D 結(jié)構(gòu)。使用Autodock Vina（1.2.0）進(jìn)行分子對(duì)接。選取最優(yōu)結(jié)合構(gòu)象分析相互作用。最后，通過(guò)PyMOL 生成蛋白-配體相互作用圖。

1.7 Kaplan-Meier 生存曲線的繪制

Kaplan-Meier 生存曲線可用于評(píng)估不同基因?qū)Σ煌┌Y的預(yù)后影響（http://kmplot.com）。根據(jù)5 個(gè)Hub 基因的表達(dá)水平將口腔鱗狀細(xì)胞癌樣品分為2組（低表達(dá)組和高表達(dá)組）?？偵嫫冢∣S）被認(rèn)為是至死亡的時(shí)間或自口腔鱗狀細(xì)胞癌初始診斷的末次隨訪時(shí)間。

2 實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證

2.1 試劑

去甲漢黃芩素購(gòu)自上海源葉生物科技有限公司（質(zhì)量分?jǐn)?shù)≥98%，貨號(hào)B50295）。將去甲漢黃芩素溶于無(wú)菌二甲基亞砜（DMSO，賽維爾生物有限公司，貨號(hào)GC203002-100 mL）中，儲(chǔ)存在-20 ℃。

2.2 細(xì)胞培養(yǎng)及細(xì)胞活性檢測(cè)

口腔鱗狀細(xì)胞癌細(xì)胞系CAL-27、SCC-4 細(xì)胞購(gòu)自北納生物有限公司。將細(xì)胞在37 ℃、98%濕度、5% CO2下維持在Dulbecco 改良的Eagle 培養(yǎng)基（DMEM，美國(guó)Gibco 公司）中。通過(guò)MTT（Biosharp 生物科技有限公司，貨號(hào)BS86）測(cè)定法評(píng)估去甲漢黃芩素對(duì)口腔鱗狀細(xì)胞癌細(xì)胞毒性作用?？谇击[狀細(xì)胞癌在不同濃度（0、5、10、15、30、50 μmol/L）的去甲漢黃芩素刺激下，使用酶標(biāo)儀（賽默飛世爾公司）在490 nm 處取吸光度（A）來(lái)測(cè)定細(xì)胞活性。

研究組患者在對(duì)照組基礎(chǔ)上，采取雙歧桿菌四聯(lián)活菌片（國(guó)藥準(zhǔn)字：S20060010；生產(chǎn)廠家：杭州龍達(dá)新科生物制藥有限公司；規(guī)格：每片重0.5 g）治療，劑量為1.5 g/d，每天3次。

2.3 吖啶橙/溴化乙錠（AO/EB）染色

將細(xì)胞密度為1×106個(gè)細(xì)胞/mL 的CAL-27 和SCC-4 細(xì)胞置于含有無(wú)菌蓋玻片的6 孔板中并生長(zhǎng)24 h。將細(xì)胞暴露于去甲漢黃芩素15 μmol/L 中24 h。然后，將30 μL 細(xì)胞培養(yǎng)物置于載玻片上，并分別用AO/EB（源葉生物科技有限公司，貨號(hào)R20292-100T）染色。然后將載玻片用蓋玻片覆蓋并在PH-YGD 熒光顯微鏡（中國(guó)鳳凰光學(xué)有限公司）下，隨機(jī)選擇5 個(gè)位置進(jìn)行拍照。

2.4 細(xì)胞熱轉(zhuǎn)移實(shí)驗(yàn)

采用10 μg/mL 去甲漢黃芩素處理CAL-27 細(xì)胞1 h 后，用含有蛋白酶抑制劑PBS 懸浮CAL-27細(xì)胞。將DMSO 和去甲漢黃芩素組的口腔鱗狀細(xì)胞癌細(xì)胞分成9 個(gè)PCR 管（賽維爾生物有限公司，貨號(hào)PCR-0803-FC），在不同溫度下（43、46、49、52、55、58、61、64、67 ℃）加熱3 min，立即放入液氮中冷卻。將所有樣品接受3 個(gè)凍融循環(huán)后，離心（12 000 r/min，20 min）。取上層清液用于免疫蛋白印記分析。

2.5 免疫蛋白印跡檢測(cè)

使用RIPA（碧云天生物技術(shù)有限公司，貨號(hào)P0013 K）與苯甲磺酰氟（PMSF）和磷酸酶抑制劑（美國(guó)Abcam 公司，貨號(hào)ab 201112）提取細(xì)胞中的總蛋白質(zhì)。使用BCA 試劑盒（碧云天生物技術(shù)有限公司，貨號(hào)P0013 K）檢測(cè)蛋白質(zhì)濃度。每個(gè)泳道添加樣品中含有30 μg 總蛋白，并且使用RIPA 將每個(gè)樣品體積相同。蛋白質(zhì)在8%～15% SDS-PAGE（中國(guó)雅酶生物醫(yī)藥科技有限公司，貨號(hào)PG112）凝膠上分離，然后轉(zhuǎn)移到聚偏二氟乙烯（PVDF，中國(guó)雅酶生物醫(yī)藥科技有限公司，貨號(hào)WJ001）膜上。室溫下，在5% BSA 中孵育2 h 后，將膜與相應(yīng)的一抗Bcl-2 相關(guān)X 蛋白（Bax）、B 淋巴細(xì)胞瘤-2（Bcl-2）、表皮生長(zhǎng)因子受體（EGFR）（中國(guó)正能生物技術(shù)有限公司，貨號(hào)R22708、381702、201012-6H11）、β-actin（賽維爾生物技術(shù)有限公司，貨號(hào)GB15003）在4 ℃孵育過(guò)夜。用1×TBST 洗滌3 次（10 min）；然后與二抗（中國(guó)正能生物技術(shù)有限公司）在室溫孵育1 h。使用β-actin 作為參照測(cè)量每種靶蛋白的相對(duì)表達(dá)。

2.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

3 結(jié)果

3.1 基于網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)分析口腔鱗狀細(xì)胞癌與去甲漢黃芩素潛在靶點(diǎn)

為了獲取有效化合物的靶基因，根據(jù)有效成分SMLIE 結(jié)構(gòu)使用Swiss 數(shù)據(jù)庫(kù)（probability＞0）和SuperPred 數(shù)據(jù)庫(kù)（probability＞60%）對(duì)潛在靶基因進(jìn)行檢索預(yù)測(cè)，并取交集處理。所有成分基因取并集共得到137 個(gè)候選基因，即去甲漢黃芩素的潛在靶點(diǎn)基因。

為了獲取口腔鱗狀細(xì)胞癌潛在靶基因，根據(jù)關(guān)鍵詞“oral squamous cell carcinoma”在GeneCards數(shù)據(jù)庫(kù)和OMIM 數(shù)據(jù)庫(kù)分別得到各自靶基因[10]。其中口腔鱗狀細(xì)胞癌在GeneCards 數(shù)據(jù)庫(kù)得到了3 255 個(gè)靶點(diǎn)基因，OMIM 數(shù)據(jù)庫(kù)得到了763 個(gè)靶點(diǎn)基因，取并集共得到3 826 個(gè)靶點(diǎn)基因，即口腔鱗狀細(xì)胞癌表型的潛在靶點(diǎn)基因。將去甲漢黃芩素靶基因和口腔鱗狀細(xì)胞癌靶基因相互映射得到交集基因即去甲漢黃芩素抗口腔鱗狀細(xì)胞癌的潛在靶基因，共得到71 個(gè)靶點(diǎn)基因，見(jiàn)圖1。

圖1 去甲漢黃芩素和口腔鱗狀細(xì)胞癌交集靶點(diǎn)Venn 圖Fig.1 Venn diagram of intersection target of norwogonin and oral squamous cell carcinoma

3.2 成分-疾病-靶點(diǎn)網(wǎng)絡(luò)圖的構(gòu)建

將去甲漢黃芩素抗口腔鱗狀細(xì)胞癌的潛在靶基因?qū)隨tring 數(shù)據(jù)庫(kù)構(gòu)建PPI 網(wǎng)絡(luò)，共有節(jié)點(diǎn)70個(gè)，邊2 498 條。經(jīng)過(guò)網(wǎng)絡(luò)拓?fù)鋵傩苑治?，該網(wǎng)絡(luò)的degree 平均值為71.37，節(jié)點(diǎn)平均介數(shù)為16.69，邊的平均介數(shù)為1.43，全局聚類系數(shù)為0.74，平均緊密度為0.001，見(jiàn)圖2。degree 值排名前10 位的基因?yàn)槿ゼ诐h黃芩素治療口腔鱗狀細(xì)胞癌的潛在高置信靶基因，即表皮生長(zhǎng)因子受體（EGFR）、雌激素受體1（ESR1）、非受體酪氨酸激酶（SRC）、前列腺素內(nèi)過(guò)氧化物酶2（PTGS2）、基質(zhì)金屬蛋白酶9（MMP9）、激酶插入結(jié)構(gòu)域受體（KDR）、基質(zhì)金屬蛋白酶2（MMP2）、KIT 基因、信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)和轉(zhuǎn)錄激活因子1（STAT1）、雄激素受體（AR），見(jiàn)圖3。而EGFR、ESR1、SRC、PTGS2、MMP9 的degree值排名前5 位，分別為132、132、128、122、120。

圖2 PPI 網(wǎng)絡(luò)中70 個(gè)基因degree 值Fig.2 Degree values of 70 genes in PPI network

圖3 核心靶點(diǎn)Fig.3 Core target

3.3 Hub 基因的表達(dá)以及患者預(yù)后的關(guān)系

圖4 Hub 基因在口腔鱗狀細(xì)胞癌中的表達(dá)Fig.4 Expression of Hub gene in oral squamous cell carcinoma

除Hub 基因在口腔鱗狀細(xì)胞癌組織中的表達(dá)結(jié)果外，使用Kaplan-Meier 方法評(píng)價(jià)不同表達(dá)的EGFR、SRC、PTGS2、MMP9 對(duì)口腔鱗狀細(xì)胞癌患者預(yù)后的影響。如圖5 所示，具有EGFR 低表達(dá)組的患者具有比高表達(dá)組更好的OS，而其他基因（SRC、PTGS2、MMP9）的表達(dá)與OS 之間沒(méi)有顯著相關(guān)性。

圖5 Hub 基因?qū)谇击[狀細(xì)胞癌患者生存的影響Fig.5 Effect of Hub gene on survival of patients with oral squamous cell carcinoma

3.4 GO 功能和KEGG 通路富集分析

將去甲漢黃芩素治療口腔鱗狀細(xì)胞癌的70 個(gè)潛在靶基因進(jìn)行功能富集并將結(jié)果可視化。GO 注釋分析中 BP 包括蛋白質(zhì)自身磷酸化（protein autophosphorylation）、對(duì)氧化應(yīng)激的反應(yīng)（response to oxidative stress）等；MF 包括跨膜受體蛋白酪氨酸激酶活性（transmembrane receptor protein tyrosine kinase activity）、蛋白酪氨酸激酶活性（protein tyrosine kinase activity）等；CC 包括轉(zhuǎn)移酶復(fù)合物（transferase complex）、轉(zhuǎn)移含磷基團(tuán)（transferring phosphorus-containing groups）、絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶復(fù)合物（serine/threonine protein kinase complex）等。KEGG 通路分析70 個(gè)潛在靶基因涉及幽門(mén)螺桿菌感染中的上皮細(xì)胞信號(hào)傳導(dǎo)（epithelial cell signaling inHelicobacter pyloriinfection）等通路，見(jiàn)圖6。

圖6 GO 功能和KEGG 通路分析Fig.6 GO function and KEGG path analysis

3.5 去甲漢黃芩素直接靶向EGFR

通過(guò) AutoDockTools 進(jìn)行去甲漢黃芩素與EGFR 間的分子對(duì)接（圖7）。發(fā)現(xiàn)EGFR 與去甲漢黃芩素結(jié)合能較高（-6.6 kcal/mol，1 cal＝4.4 J），說(shuō)明EGFR 可能與去甲漢黃芩素的關(guān)系更密切。此外，細(xì)胞熱位移實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步驗(yàn)證去甲漢黃芩素與EGFR 之間的相互作用。結(jié)果顯示，隨著溫度升高，與DMSO 組相比，去甲漢黃芩素處理的CAL-27 細(xì)胞中的EGFR 變得更穩(wěn)定。表明去甲漢黃芩素可能直接結(jié)合口腔鱗狀細(xì)胞癌細(xì)胞中的EGFR（圖8）。

圖7 去甲漢黃芩素與EGFR 對(duì)接構(gòu)象Fig.7 Docking conformation of norwogonin and EGFR

圖8 各組EGFR 蛋白凝膠電泳圖Fig.8 EGFR protein gel electrophoresis of each group

3.6 去甲漢黃芩素對(duì)口腔鱗狀細(xì)胞癌細(xì)胞活性的影響

去甲漢黃芩素在0、5、10、15、30、50 μmol/L的濃度下，分別作用CAL-27、SCC-4 細(xì)胞24 h 后，通過(guò)MTT 方法檢測(cè)去甲漢黃芩素對(duì)CAL-27、SCC-4 細(xì)胞活性的影響。結(jié)果表明，去甲漢黃芩素顯著抑制口腔鱗狀細(xì)胞癌細(xì)胞活性（P＜0.05、0.01）；且呈濃度相關(guān)性（圖9），CAL-27、SCC-4 細(xì)胞的IC50為15 μmol/L。

圖9 去甲漢黃芩素對(duì)口腔鱗狀細(xì)胞癌細(xì)胞活性的影響（，n =6）Fig.9 Effect of norwogonin on the activity of oral squamous cell carcinoma cells (,n =6)

3.7 去甲漢黃芩素對(duì)細(xì)胞凋亡的影響

AO/EB 染色結(jié)果表明，去甲漢黃芩素使口腔鱗狀細(xì)胞癌細(xì)胞發(fā)生凋亡（P＜0.05），而DMSO 組細(xì)胞未顯示凋亡跡象（圖10）。為了證實(shí)該分子確實(shí)誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的結(jié)果，采用蛋白質(zhì)印跡測(cè)定方法檢測(cè)口腔鱗狀細(xì)胞癌細(xì)胞中DMSO 組和去甲漢黃芩素組中Bax 和Bcl-2 蛋白表達(dá)的情況。結(jié)果顯示，去甲漢黃芩素使口腔鱗狀細(xì)胞癌細(xì)胞中的Bax 表達(dá)增加，Bcl-2 表達(dá)降低（P＜0.05）（圖11）。

圖10 去甲漢黃芩素對(duì)口腔鱗狀細(xì)胞癌細(xì)胞凋亡的影響（，n =6）Fig.10 Effect of norwogonin on apoptosis of oral squamous cell carcinoma cells (,n =6)

圖11 去甲漢黃芩素對(duì)口腔鱗狀細(xì)胞癌細(xì)胞Bax/Bcl-2 蛋白表達(dá)的影響（，n =6）Fig.11 Effect of norwogonin on expression of Bax/Bcl-2 protein in oral squamous cell carcinoma cells (,n =6)

4 討論

口腔鱗狀細(xì)胞癌是一種嚴(yán)重威脅人類健康的疾病，因其發(fā)病位置特殊，影響患者的生活質(zhì)量。手術(shù)主要用于早期治療[11]；而聯(lián)合治療（化療和放療）通常用于預(yù)防復(fù)發(fā)以及提高口腔鱗狀細(xì)胞癌的治療效果，現(xiàn)階段關(guān)于口腔鱗狀細(xì)胞癌的聯(lián)合治療往往伴隨著不良反應(yīng)[12]。因此，開(kāi)發(fā)新的口腔鱗狀細(xì)胞癌治療藥物以降低口腔鱗癌的發(fā)病率以及死亡率是非常必要的。

現(xiàn)階段表明，中藥單體對(duì)于腫瘤細(xì)胞的活性抑制作用有著明顯的優(yōu)勢(shì)[13]，因?yàn)槠湟种坪蜌⑺滥[瘤細(xì)胞的同時(shí)還能夠減少放療和化療的不良反應(yīng)[14]；并且還可提高癌癥患者的生活質(zhì)量和提高免疫力，減輕臨床癥狀，延長(zhǎng)生存時(shí)間[15]。去甲漢黃芩素是已報(bào)道具有抗癌以及抗氧化的中藥單體之一[6-8]。

通過(guò)整合網(wǎng)絡(luò)分析，發(fā)現(xiàn)去甲漢黃芩素與口腔鱗狀細(xì)胞癌相關(guān)的作用靶點(diǎn)作用于多個(gè)信號(hào)通路，主要是EGFR、ESR1、SRC、PTGS2、MMP9，這些潛在的核心靶基因可能在口腔鱗狀細(xì)胞癌的發(fā)展中起關(guān)鍵作用。Sinto 等[16]報(bào)道，吉非替尼和Bay11-7085 聯(lián)合治療通過(guò)調(diào)控EGFR/核因子-κB（NF-κB）信號(hào)軸使吉非替尼耐藥口腔鱗狀細(xì)胞癌細(xì)胞增敏。Tiwar 等[17]發(fā)現(xiàn)miRNA-125a 通過(guò)靶向雌激素相關(guān)受體α 抑制口腔鱗癌細(xì)胞的增殖和侵襲。Li 等[18]提出漆黃素通過(guò)抑制Met/Src 信號(hào)通路抑制口腔鱗狀細(xì)胞癌惡性增殖。Aparnadevi 等[19]發(fā)現(xiàn)PTGS2 能夠參與口腔黏膜下纖維化和口腔鱗狀細(xì)胞癌病理生理學(xué)過(guò)程。Allen 等[20]報(bào)道MMP9 是一種潛在的頭頸部鱗狀細(xì)胞癌侵襲因素之一。上述基因與炎癥、細(xì)胞增殖、侵襲、血管生成等相關(guān)，與口腔鱗癌的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)。

本研究中，KEGG 富集分析表明在71 個(gè)共同的目標(biāo)主要是磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）/蛋白激酶（Akt），氧化應(yīng)激以及細(xì)胞凋亡信號(hào)通路。說(shuō)明去甲漢黃芩素可能通過(guò)PI3K-Akt 信號(hào)通路抑制口腔鱗狀細(xì)胞癌細(xì)胞增殖，使口腔鱗癌細(xì)胞中的程序性凋亡相關(guān)蛋白Bax 表達(dá)上調(diào)，而B(niǎo)cl-2 表達(dá)下調(diào)。在以往的研究中報(bào)道，口腔鱗狀細(xì)胞癌的凋亡中PI3K/Akt 信號(hào)通路起著至關(guān)重要的作用。P13K/Akt信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的下游分子mTOR 在腫瘤發(fā)生中起著至關(guān)重要的作用[21]，尤其是在口腔鱗狀細(xì)胞癌細(xì)胞侵襲、轉(zhuǎn)移以及血管生成中，磷酸化的mTOR（pmTOR）過(guò)表達(dá)與口腔鱗狀細(xì)胞癌預(yù)后不良相關(guān)[22]。通路富集分析結(jié)果表明，氧化應(yīng)激相關(guān)通路也參與了去甲漢黃芩素抗口腔鱗狀細(xì)胞癌的生物學(xué)過(guò)程。氧化應(yīng)激及其誘導(dǎo)氧化損傷為口腔鱗狀細(xì)胞癌形成的重要因素[22]。

在本研究中，網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)確定了去甲漢黃芩素和口腔鱗狀細(xì)胞癌靶向的71 個(gè)靶基因。通過(guò)網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)的整合，發(fā)現(xiàn)這些基因多富集于PI3K/Akt、氧化應(yīng)激以及細(xì)胞凋亡相關(guān)通路。同時(shí)，從復(fù)雜網(wǎng)絡(luò)中獲得的5 個(gè)核心靶點(diǎn)EGFR、ESR1、SRC、PTGS2、MMP9。此外，對(duì)于Hub 基因進(jìn)行分析時(shí)發(fā)現(xiàn)，EGFR 的異常表達(dá)與口腔鱗狀細(xì)胞癌患者預(yù)后有明確關(guān)系。分子對(duì)接的結(jié)果進(jìn)一步揭示了去甲漢黃芩素對(duì)EGFR 表現(xiàn)出優(yōu)異的親和力，是去甲漢黃芩素抗口腔鱗狀細(xì)胞癌的重要靶點(diǎn)。以上的結(jié)果闡明了去甲漢黃芩素治療口腔鱗癌的潛在作用以及機(jī)制，為開(kāi)發(fā)治療口腔鱗癌的新藥提供了依據(jù)。

利益沖突所有作者均聲明不存在利益沖突