侯瑞澤 鮑悅 陳啟亮 毛桂玲 韋博霖 侯雷平 李梅蘭
(山西農(nóng)業(yè)大學(xué)園藝學(xué)院,晉中 030800)
普通白菜(Brassica rapa ssp. chinensis Makino)是典型的種子春化型蔬菜,屬十字花科蕓薹屬,感受低溫后容易抽薹開(kāi)花,但春季過(guò)早抽薹影響其品質(zhì)和產(chǎn)量,會(huì)造成重大經(jīng)濟(jì)損失。因此,闡明其成花機(jī)理以防止過(guò)早抽薹至關(guān)重要。
植物的成花過(guò)程可分為花的誘導(dǎo)、成花轉(zhuǎn)變和花器官的發(fā)育3個(gè)階段,此過(guò)程關(guān)系到植物的開(kāi)花時(shí)間、開(kāi)花數(shù)量、開(kāi)花質(zhì)量和花期長(zhǎng)短[1]。在過(guò)去的幾十年里,擬南芥開(kāi)花的生理和分子機(jī)制已經(jīng)得到了研究,發(fā)現(xiàn)光周期途徑、春化途徑和環(huán)境溫度途徑主要傳遞光和溫度等外部信號(hào);內(nèi)源性信號(hào)是自主途徑、赤霉素途徑和年齡通路的主要途徑[1-8]。這些途徑既相互獨(dú)立又相互作用,形成一個(gè)復(fù)雜而獨(dú)立的調(diào)控網(wǎng)絡(luò),共同調(diào)控抽薹和開(kāi)花。開(kāi)花決定了植物生長(zhǎng)周期的長(zhǎng)短,也直接關(guān)系到植物的產(chǎn)量和品質(zhì),因此,成花機(jī)理成為了人們研究的重點(diǎn)[9]。
PRR5(PSEUDO?RESPONSE REGULATOR 5)編碼一個(gè)偽響應(yīng)調(diào)節(jié)器,其突變影響各種與晝夜節(jié)律相關(guān)的生物事件,例如長(zhǎng)日光周期條件下的開(kāi)花時(shí)間、早期光形態(tài)發(fā)生期間幼苗的紅光敏感性以及某些時(shí)鐘控制基因的自由運(yùn)行節(jié)律周期。PRR基因之所以如此命名,是因?yàn)樗鼈兙幋a類(lèi)似于“響應(yīng)調(diào)節(jié)蛋白”的蛋白質(zhì),在細(xì)菌、酵母和植物的磷酸化信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)中發(fā)揮輸出作用[10]。前人研究發(fā)現(xiàn),擬南芥PRR5是一種轉(zhuǎn)錄抑制因子,但如果VP16這一強(qiáng)轉(zhuǎn)錄激活域與PRR5(PRR5?VP)串聯(lián)融合,則PRR5?VP將充當(dāng)轉(zhuǎn)錄激活因子。超表達(dá)PRR5?VP的轉(zhuǎn)基因擬南芥具有晚開(kāi)花和長(zhǎng)下胚軸表型,這與超表達(dá)PRR5的擬南芥相反[11]。PRRs通過(guò)控制CDF來(lái)調(diào)節(jié)CO/FT從而調(diào)控開(kāi)花時(shí)間[12]。在至少2個(gè)途徑中,擬南芥PRR誘導(dǎo)FT并促進(jìn)開(kāi)花[11,13],但是在普通白菜中未見(jiàn)相關(guān)報(bào)道。
本研究以普通白菜‘75#’品系為試驗(yàn)材料,克隆PRR5的同源基因Bra009768,分析其序列、蛋白結(jié)構(gòu)和在不同器官及不同發(fā)育時(shí)期的表達(dá)情況,最后構(gòu)建超表達(dá)載體,轉(zhuǎn)化擬南芥進(jìn)行功能驗(yàn)證,以明確其在普通白菜中的功能,為了解PRR5對(duì)普通白菜成花轉(zhuǎn)變的影響奠定基礎(chǔ)。
普通白菜‘75#’和擬南芥哥倫比亞野生型為實(shí)驗(yàn)室保存種質(zhì)資源。參照Shang等[14]方法進(jìn)行材料處理,選取籽粒飽滿(mǎn)的種子均勻播種在含有雙層濾紙的培養(yǎng)皿中,催芽3 d后置于4℃低溫處理20 d,將幼苗移栽至50孔穴盤(pán),進(jìn)行常規(guī)管理。
1.2.1 RNA提取和cDNA的合成 選取移栽后10 d的植株莖尖生長(zhǎng)點(diǎn),記作DAV10,用體視顯微鏡觀(guān)察花芽分化情況[15],取花芽分化0級(jí)(S0)和1級(jí)(S1)時(shí)的莖尖生長(zhǎng)點(diǎn),以及根、莖、葉、花和果莢進(jìn)行RT?qPCR分析,將上述樣品參照試劑盒說(shuō)明書(shū)提取RNA并反轉(zhuǎn)錄為cDNA進(jìn)行基因克隆和表達(dá)量分析。
1.2.2 過(guò)表達(dá)載體的構(gòu)建 利用大白菜數(shù)據(jù)庫(kù)(http://brassicadb.org)查找Bra009768的序列,用NCBI中的 Primer?BLAST(https:// www.ncbi.nlm.nih.gov/tools/primer?blast/)設(shè)計(jì)特異性引物(表1)。以S0 cDNA為模板,用引物C?Bra009768?F/R進(jìn)行PCR擴(kuò)增,電泳檢測(cè)、回收。將回收產(chǎn)物用同源臂引物G?Bra009768?F/R擴(kuò)增,再回收,用無(wú)縫克隆試劑盒與線(xiàn)性化pBI121載體重組,并轉(zhuǎn)化至DH5α,待菌液渾濁后進(jìn)行PCR驗(yàn)證(引物為N?YZ),將條帶大小正確且無(wú)雜帶的菌液送至北京擎科生物科技有限公司進(jìn)行測(cè)序。將測(cè)序正確的菌液,參照天根質(zhì)粒小提試劑盒說(shuō)明書(shū)步驟進(jìn)行質(zhì)粒提取,使用NanoDrop 2000檢測(cè)質(zhì)粒溶液濃度,?20℃保存,備用。
表1 Bra009768引物列表Table 1 Primers of Bra009768
上述過(guò)程反應(yīng)體系為(共20 μL):2×Phanta Max Master Mix 10 μL、Reverse/Forward Primer(10 μmol/L)各0.8 μL、cDNA 1 μL和RNase Free dH2O 7.4 μL。反應(yīng)程序?yàn)椋?4℃ 5 min;94℃ 30 s,54℃ 30 s,72℃ 90 s,35個(gè)循環(huán);72℃ 10 min,4℃保存。
1.2.3 基因序列的生信分析 使用DNAMAN軟件對(duì)Bra009768進(jìn)行蛋白質(zhì)翻譯,以NCBI數(shù)據(jù)庫(kù)為基礎(chǔ),利用MEGA 7.0軟件對(duì)Bra009768蛋白序列進(jìn)行比對(duì)并構(gòu)建進(jìn)化樹(shù)。利用在線(xiàn)軟件ExPASy(https://www.expasy.org/)進(jìn)行蛋白序列的理化性質(zhì)分析。利用在線(xiàn)軟件SOPMA(https://npsa?prabi.ibcp.fr/cgi?bin/npsa_automat.pl?page=npsa_sopma.html)預(yù)測(cè)二級(jí)結(jié)構(gòu),SWISS?MODEL(https://swissmodel.expasy.org/interactive)預(yù)測(cè)三級(jí)結(jié)構(gòu)。利用在線(xiàn)分析工具Plant?mPLoc(http://www.csbio.sjtu.edu.cn/bioinf/plant?multi/)進(jìn)行亞細(xì)胞定位預(yù)測(cè)分析。
1.2.4 基因的表達(dá)分析 為了解Bra009768在普通白菜中的功能,取普通白菜‘75#’的根、莖、葉、花和果莢進(jìn)行RT?qPCR檢測(cè)該基因在不同部位的表達(dá)情況,以DAV10、S0和S1三個(gè)時(shí)期的cDNA為模板,測(cè)定該基因在不同發(fā)育時(shí)期的表達(dá)情況,以大白菜ACTIN作為內(nèi)參基因,相對(duì)定量使用內(nèi)參基因的2-△△CT算法計(jì)算[16]。特異性引物見(jiàn)表2。
表2 RT-qPCR驗(yàn)證引物Table 2 Primers of real time quantitative PCR
1.2.5 蘸花法轉(zhuǎn)化擬南芥
1.2.5.1 菌株準(zhǔn)備 將1.2.2提取的pBI121?Bra0097 68質(zhì)粒轉(zhuǎn)化至農(nóng)桿菌感受態(tài)GV3101菌株,擴(kuò)繁至菌液渾濁后使用特異性引物N?YZ?F/R進(jìn)行菌液PCR驗(yàn)證,用瓊脂糖凝膠電泳驗(yàn)證PCR產(chǎn)物,將條帶大小正確且無(wú)雜帶的GV3101?pBI121?Bra009768菌液?80℃保存?zhèn)溆谩?/p>
1.2.5.2 植物材料準(zhǔn)備 將野生型擬南芥種子用消毒液消毒后均勻播種至MS固體培養(yǎng)基中,先置于黑暗環(huán)境下4℃春化2 d,隨后移至光照16 h/黑暗8 h、溫度25℃、相對(duì)濕度55%的組培室中生長(zhǎng)5-7 d。待植株兩片真葉展開(kāi)后移栽至營(yíng)養(yǎng)缽中進(jìn)行常規(guī)管理。
1.2.5.3 擬南芥花序侵染 侵染菌液制備:將培養(yǎng)至OD600≈0.9的GV3101?pBI121?Bra009768菌體離心后重懸沉淀菌體至OD600≈0.8,加入0.05%Silwet?77,充分混勻后備用。
轉(zhuǎn)化植株準(zhǔn)備:當(dāng)野生型擬南芥移栽6周后,選擇長(zhǎng)勢(shì)良好、抽薹期基本一致的野生型擬南芥進(jìn)行花序侵染,然后將植株避光培養(yǎng)24 h后取出,進(jìn)行常規(guī)管理。
1.2.6 轉(zhuǎn)基因擬南芥植株篩選及分子鑒定 將收獲的T0種子于MS固體選擇培養(yǎng)基上篩選獲得T1轉(zhuǎn)基因植株,觀(guān)察T1轉(zhuǎn)基因植株生長(zhǎng)狀況,單株收種并繼續(xù)篩選得到T2植株。
使用DNA提取試劑盒提取野生型植株,T1和T2轉(zhuǎn)基因植株總DNA,以野生型擬南芥DNA為陰性對(duì)照,pBI121?Bra00976質(zhì)粒為陽(yáng)性對(duì)照,陽(yáng)性轉(zhuǎn)基因植株總DNA為模板,引物為N?YZ?F/R,進(jìn)行PCR分子鑒定。
1.2.7 轉(zhuǎn)基因擬南芥表達(dá)量分析 切取野生型、T1和T2轉(zhuǎn)基因擬南芥蓮座葉片,參照說(shuō)明書(shū)提取蓮座葉片總RNA。使用NanoDrop 2000檢測(cè)RNA濃度,瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)RNA完整性,質(zhì)檢合格且完整性良好的RNA使用反轉(zhuǎn)錄試劑盒構(gòu)建cDNA文庫(kù),以擬南芥ACTIN基因?yàn)閮?nèi)參基因(表2),Bra009768為目標(biāo)基因,以T1和T2轉(zhuǎn)基因株系cDNA文庫(kù)為模板進(jìn)行RT?qPCR驗(yàn)證。
經(jīng)瓊脂糖凝膠電泳驗(yàn)證PCR擴(kuò)增產(chǎn)物,發(fā)現(xiàn)目的條帶大小約為1 700 bp,與目的片段大小一致(圖1?A),可進(jìn)行后續(xù)的試驗(yàn)。對(duì)pBI121?Bra009768的大腸桿菌菌液進(jìn)行PCR驗(yàn)證(圖1?B),該基因所對(duì)應(yīng)條帶大小約2 000 bp且沒(méi)有雜帶,與目的基因大小相同,說(shuō)明該基因已成功轉(zhuǎn)入大腸桿菌,可進(jìn)行基因測(cè)序。
圖1 Bra009768的克隆及其菌液檢測(cè)結(jié)果Fig. 1 Cloning of Bra009768 and detection results of its broth
2.2.1 基因序列分析 克隆片段經(jīng)測(cè)序后得到核苷酸序列,片段大小為1 701 bp,使用DNAMAN軟件對(duì)Bra009768進(jìn)行蛋白質(zhì)翻譯,結(jié)果表明,Bra009768共編碼566個(gè)氨基酸,將該基因命名為BrcPRR5,GenBank ID: OQ715277。
2.2.2 氨基酸多重序列比對(duì) BrcPRR5與BpPRR5(大白菜,Brassica pekinensis)、BnPRR5(歐洲油菜,Brassica napus)、AtPRR5(擬南芥,Arabidop?sis thaliana)、CsPRR5(亞麻芥,Camelina sativa)、RsPRR5(蘿卜,Raphanus sativus)、GaPRR5(棉花,Gossypium arboreum)、CsPRR5(歐洲栗,Castanea sativa)、FaPRR5(草莓,F(xiàn)ragaria ananassa)和Cc?PRR5(山核桃,Carya cathayensis Sarg)同源性分別為99.29%、98.41%、73.06%、71.19%、61.65%、38.81%、35.57%、34.44%和34.26%,同源性高,說(shuō)明克隆片段是普通白菜的PRR5基因片段(圖2?A)。
2.2.3 蛋白質(zhì)親緣關(guān)系分析 為進(jìn)一步了解Bra009768編碼蛋白與其同源蛋白在不同植物之間的進(jìn)化關(guān)系,用DNAMAN軟件構(gòu)建該蛋白在不同植物物種間的系統(tǒng)進(jìn)化樹(shù)。與Bra009768編碼蛋白親緣關(guān)系最近的是大白菜(Brassica pekinensis),其次是歐洲油菜(Brassica napus),它們同屬一個(gè)分支。與歐洲栗(C. sativa)、草莓(F. ananassa)和山核桃(C.cathayensis Sarg)親緣關(guān)系較遠(yuǎn)(圖2?B)。
2.2.4 蛋白質(zhì)理化性質(zhì)分析 Bra009768蛋白由566個(gè)氨基酸組成,分子量為62 788.90 Da,理論等電點(diǎn)為6.98,脂肪指數(shù)為62.86,親水性總平均值為?0.792;帶負(fù)電荷的殘基總數(shù)為70,帶正電荷的殘基總數(shù)為69,不穩(wěn)定指數(shù)為58.62,此類(lèi)蛋白質(zhì)為不穩(wěn)定蛋白質(zhì)。
2.2.5 二、三級(jí)結(jié)構(gòu)及亞細(xì)胞定位預(yù)測(cè) 使用SOPMA預(yù)測(cè)蛋白質(zhì)的二級(jí)結(jié)構(gòu),Bra009768編碼蛋白(圖2?C)的二級(jí)結(jié)構(gòu)主要包括25.44%的α-螺旋、57.42%的無(wú)規(guī)則卷曲和13.25%的延伸鏈。使用SWISS?MODEL預(yù)測(cè)蛋白質(zhì)的三級(jí)結(jié)構(gòu)(圖2?D),二者結(jié)果相吻合。使用Plant?mPLoc對(duì)Bra009768進(jìn)行亞細(xì)胞定位發(fā)現(xiàn),其定位在細(xì)胞核上。
為了解Bra009768在普通白菜不同器官與不同生育期中的表達(dá)情況,使用RT?qPCR方法對(duì)其進(jìn)行定量分析(圖3?A),發(fā)現(xiàn)該基因在莖中的表達(dá)量最高,花中次之,在葉和果夾中的表達(dá)量最低,對(duì)比該基因在DAV10、S0和S1時(shí)期莖尖生長(zhǎng)點(diǎn)的相對(duì)表達(dá)量(圖3?B),發(fā)現(xiàn)該基因在S0時(shí)表達(dá)量最高,這與RT?qPCR中莖和花表達(dá)量高相吻合,說(shuō)明其對(duì)成花轉(zhuǎn)變有促進(jìn)作用,有利于植株提早開(kāi)花。
圖3 Bra009768在普通白菜不同器官(A)及不同發(fā)育時(shí)期(B)的表達(dá)Fig. 3 Expressions of Bra009768 in different organs(A)and different developmental stages(B)of pakchoi
將擬南芥T1、T2代轉(zhuǎn)基因種子播種于MS固體篩選培養(yǎng)基上,10 d后觀(guān)察種子發(fā)芽及植株生長(zhǎng)情況。此時(shí),抗性植株兩片真葉展開(kāi)且葉片及根系發(fā)育良好,長(zhǎng)勢(shì)健壯,而非抗性植株整株表現(xiàn)為黃化,葉片與根系生長(zhǎng)發(fā)育停滯(圖4?A, B)。
圖4 轉(zhuǎn)基因擬南芥抗性植株篩選Fig. 4 Selection of transgenic Arabidopsis thaliana resistant plants
T0植株收種后進(jìn)行T1轉(zhuǎn)基因植株篩選繼而進(jìn)行T2植株篩選,均于生長(zhǎng)室中進(jìn)行常規(guī)管理,提取T1和T2轉(zhuǎn)基因植株的蓮座葉片總DNA作為模板,以同期生長(zhǎng)的野生型擬南芥蓮座葉片總DNA為陰性對(duì)照,以pBI121?Bra009768質(zhì)粒為陽(yáng)性對(duì)照,以引物N?YZ?F/R進(jìn)行PCR擴(kuò)增,對(duì)抗性株系進(jìn)行轉(zhuǎn)基因植株鑒定。結(jié)果表明,電泳條帶大小為2 000 bp,與陽(yáng)性對(duì)照大小一致,陰性對(duì)照未檢測(cè)到條帶,說(shuō)明BrcPRR5已經(jīng)成功整合至擬南芥基因組中且能夠穩(wěn)定遺傳。
將T1抗性植株收種后再次播種于MS固體篩選培養(yǎng)基以獲得T2轉(zhuǎn)基因植株,進(jìn)行后續(xù)試驗(yàn)。共篩選獲得T1抗性植株4株,T2抗性植株40株。
通過(guò)表型觀(guān)察和統(tǒng)計(jì)學(xué)分析發(fā)現(xiàn)T1植株個(gè)體間存在差異,平均抽薹時(shí)間約為移栽后(12.50±2.38)d,早于野生型植株,蓮座葉片數(shù)明顯多于野生型植株,但是側(cè)薹數(shù)、株高和莖粗無(wú)明顯區(qū)別(表3,圖5?A-C)。
圖5 轉(zhuǎn)基因植株的表型觀(guān)察及BrcPRR5的RT-qPCR驗(yàn)證Fig. 5 Phenotypic observation of transgenic plants and RT-qPCR validation of BrcPRR5
表3 T1、T2轉(zhuǎn)基因植株表型統(tǒng)計(jì)Table 3 Phenotypic statistics of T1 and T2 transgenic plants
觀(guān)察T2轉(zhuǎn)基因植株,發(fā)現(xiàn)其抽薹時(shí)間平均為(15.72±0.78)d,早于野生型約1.5 d;株高、莖粗均顯著高于野生型;與T1相比個(gè)體間差異明顯縮小,但是側(cè)薹數(shù)與野生型無(wú)顯著差別(表3,圖5?D-E)。
綜上所述,與野生型相比,轉(zhuǎn)基因植株的開(kāi)花時(shí)間提前,株高和莖粗增加,說(shuō)明在擬南芥中過(guò)表達(dá)BrcPRR5可以使擬南芥提早抽薹,花期提前,表明該基因具有促進(jìn)開(kāi)花的功能。
為了進(jìn)一步驗(yàn)證BrcPRR5在擬南芥轉(zhuǎn)基因植株中的表達(dá)情況,提取經(jīng)PCR分子鑒定的T1和T2轉(zhuǎn)基因植株和野生型擬南芥蓮座葉片的總RNA,以反轉(zhuǎn)錄總RNA獲得的cDNA為模板,進(jìn)行RT?qPCR檢測(cè),鑒定T1和T2轉(zhuǎn)基因株系中BrcPRR5的相對(duì)表達(dá)量(圖5?F)。結(jié)果表明,T1和T2轉(zhuǎn)基因株系中BrcPRR5表達(dá)量顯著高于野生型株系,說(shuō)明BrcPRR5在擬南芥轉(zhuǎn)基因早花株系中過(guò)表達(dá),從而促進(jìn)開(kāi)花,增加植株高度和莖粗。
在擬南芥中,PRR蛋白由5個(gè)基因家族編碼,被定義為生物鐘的核心組成部分(TIMING OF CAB EXPRESSION 1(TOC1)、PRR3、PRR5、PRR7和PRR9)[17-21]。在長(zhǎng)日照植物中,TOC1(也稱(chēng)PRR1)的衰減會(huì)導(dǎo)致晚花并增加生物量[22],在PRR7/PRR3亞組中,擬南芥prr7突變體和PRR7過(guò)表達(dá)品系的開(kāi)花時(shí)間表明PRR7促進(jìn)開(kāi)花[23-24]。但PRR3的過(guò)度表達(dá)導(dǎo)致開(kāi)花晚[20]。
前人研究表明,在長(zhǎng)日照條件下,CO轉(zhuǎn)錄受時(shí)鐘控制的藍(lán)光感光器FLAVIN?BINDING、KELCH REPEAT、F?BOX1(FKF1)、時(shí)鐘控制的循環(huán)自由因子CYCLING DOF FACTOR(CDF)和時(shí)鐘蛋白GIGANTEA(GI)控制。在這種機(jī)制中,F(xiàn)KF1?GI蛋白復(fù)合物通過(guò)以光依賴(lài)性方式結(jié)合并啟動(dòng)CD(CO轉(zhuǎn)錄抑制因子)的降解來(lái)促進(jìn)CO的轉(zhuǎn)錄[25-27]。CO通過(guò)其激活“成花素”基因FLOWERING LOCUS T(FT)轉(zhuǎn)錄的能力直接促進(jìn)花的轉(zhuǎn)變[28],也就是說(shuō),CO與FT結(jié)合可促進(jìn)植株提早開(kāi)花。
在PRR9/PRR5亞群中,擬南芥PRR蛋白被稱(chēng)為開(kāi)花啟動(dòng)子[29],PRR介導(dǎo)的CO與FT啟動(dòng)子結(jié)合,可增加其穩(wěn)定性,使FT增強(qiáng)轉(zhuǎn)錄和早花。此外,PRR將光照信息直接耦合到計(jì)時(shí)院并允許識(shí)別長(zhǎng)日照[30]。PRR9/PRR5亞組基因可以控制短日照水稻的開(kāi)花時(shí)間,促進(jìn)長(zhǎng)日照擬南芥開(kāi)花(圖6)[11,23]。
圖6 PRR9/PRR5亞群對(duì)開(kāi)花時(shí)間和植株生物量影響的模型Fig. 6 Model for the effect of the PRR9/PRR5 sub-group on flowering time and plant biomass
在轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)中,通過(guò)GO注釋分析差異表達(dá)基因發(fā)現(xiàn),PRR5的差異倍數(shù)較高,由此推斷這可能會(huì)造成普通白菜花芽分化提前,因此,對(duì)該基因進(jìn)行了克隆,并將克隆得到的1 701 bp開(kāi)放閱讀框,編碼566個(gè)氨基酸,然后進(jìn)行氨基酸序列多重比對(duì)、親緣關(guān)系分析、蛋白結(jié)構(gòu)預(yù)測(cè)等生物信息學(xué)分析,確定克隆得到的基因?yàn)槠胀ò撞薖RR5基因。對(duì)于該基因在不同部位的RT?qPCR結(jié)果發(fā)現(xiàn),該基因在花中、莖中都有高表達(dá),這和PRR5在2個(gè)部位上的作用有關(guān),除卻其在開(kāi)花時(shí)間上發(fā)揮的作用,其對(duì)于植物莖粗也有一定的影響。之后進(jìn)行超表達(dá)載體構(gòu)建及轉(zhuǎn)基因功能驗(yàn)證,通過(guò)統(tǒng)計(jì)植株生長(zhǎng)指標(biāo),轉(zhuǎn)基因植株的莖粗要明顯高于野生植株,這印證了之前的結(jié)論,同時(shí)發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)基因植株確實(shí)會(huì)使花期提前,這與前人研究的結(jié)果一致。研究結(jié)果為深入研究普通白菜成花機(jī)理奠定基礎(chǔ)。
普通白菜BrcPRR5在莖和花蕾中的表達(dá)量高于葉和果莢。在S0時(shí)表達(dá)量最高,說(shuō)明其對(duì)成花轉(zhuǎn)變有促進(jìn)作用,有利于植株提早抽薹開(kāi)花。