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        基于GC-IMS技術(shù)解析青棗不同菌種發(fā)酵關(guān)鍵風(fēng)味物質(zhì)差異

        2023-11-22 12:15:12張江寧葉崢張愛鳳
        中國調(diào)味品 2023年11期
        關(guān)鍵詞:酵母菌產(chǎn)品

        張江寧,葉崢,張愛鳳

        (山西農(nóng)業(yè)大學(xué)山西功能食品研究院,太原 030031)

        青棗果實(shí)有豐富的營養(yǎng)成分且清脆可口,富含維生素C、鈣、磷、維生素B、胡蘿卜素等,素有“維生素丸”之稱[1-2]。食用適量青棗可以有效地促進(jìn)食欲,促進(jìn)腸道蠕動,緩解便秘,還可以增加血管的彈性,對于心腦血管疾病有一定的預(yù)防作用。

        目前青棗加工產(chǎn)品較少,發(fā)酵是有效加工途徑之一,果蔬經(jīng)乳酸菌或酵母菌發(fā)酵不僅可以改善食品的風(fēng)味,而且能代謝產(chǎn)生多種生物活性化合物并具有一定功能性[3-4]。因此,研究開發(fā)酵母菌和乳酸菌發(fā)酵青棗具有重要的意義[5]。

        風(fēng)味是發(fā)酵產(chǎn)品的關(guān)鍵指標(biāo)之一,直接影響產(chǎn)品的可接受度、市場前景等,因此將風(fēng)味納入評價(jià)體系對新產(chǎn)品的開發(fā)具有重要意義[6-8]。傳統(tǒng)通過感官評價(jià)風(fēng)味主觀性強(qiáng),易出現(xiàn)偏差,目前可通過氣相色譜-離子遷移譜技術(shù)實(shí)現(xiàn)風(fēng)味定量分析,為產(chǎn)品風(fēng)味的精準(zhǔn)把控提供了條件。目前關(guān)于青棗風(fēng)味成分的研究主要聚焦在青棗果酒和青棗果醋產(chǎn)品方面。原潞[9]采用頂空固相微萃取和氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用(gas chromatography-mass spectrometry, GC-MS)技術(shù)對青棗果酒發(fā)酵過程中的主要香氣物質(zhì)進(jìn)行了鑒定。燕妮[10]采用高效液相色譜法(high performance liquid chromatography,HPLC)研究了青棗果醋發(fā)酵過程中有機(jī)酸的變化規(guī)律,研究表明果品原料經(jīng)不同菌種發(fā)酵風(fēng)味差異顯著。目前對青棗經(jīng)乳酸菌、酵母菌發(fā)酵后主要風(fēng)味成分的研究較少,風(fēng)味差異未見報(bào)道。

        氣相色譜-離子遷移譜(gas chromatography-ion mobility spectroscopy,GC-IMS)是一種分析技術(shù),是以不同的氣相離子在電場的作用下發(fā)生遷移且速率不同為基礎(chǔ),主要用于痕量氣體以及化學(xué)離子物質(zhì)表征的檢測[11],進(jìn)一步結(jié)合了氣相色譜與離子遷移譜技術(shù)[12-14]。本研究以青棗汁、棗汁酵母菌發(fā)酵產(chǎn)品和棗汁乳酸菌發(fā)酵產(chǎn)品為研究對象,采用氣相色譜-離子遷移譜方法,通過對不同樣品間的譜圖差異、指紋圖譜以及動態(tài)主成分分析(principal component analysis,PCA)圖和相似度分析圖的比較,分析不同樣品之間的風(fēng)味物質(zhì)差異,以期為青棗發(fā)酵產(chǎn)品開發(fā)的發(fā)展提供數(shù)據(jù)支撐和理論依據(jù)。

        1 材料與方法

        1.1 材料與試劑

        青棗:采自山西農(nóng)業(yè)大學(xué)園藝學(xué)院太原棗園;乳酸菌、酵母菌:實(shí)驗(yàn)室自有。

        苯酚、氫氧化鈉、亞硫酸氫鈉、氯化鉀、偏重亞硫酸鉀(K2S2O5)、3,5-二硝基水楊酸、酒石酸鉀鈉、芥子酸(98%)、單寧酸(99%):均為分析純,上海國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司。

        1.2 儀器與設(shè)備

        1.3.1.2 乳酸菌、酵母菌單獨(dú)發(fā)酵

        Jiang G M等[31]用硫酸鐵在640 ℃下焙燒含鋅渣1 h,在硫酸鐵/鐵酸鋅摩爾比為1.2的條件下,進(jìn)行水浸提取有價(jià)值的金屬硫酸鹽進(jìn)行回收,鋅的回收率可達(dá)92.4%。

        1.3 實(shí)驗(yàn)方法

        Gallery Plot插件:通過比對指紋圖譜,可以直觀且定量地分析出不同樣品之間的揮發(fā)性有機(jī)化合物的差異[17]。

        1.3.1.1 青棗汁制備

        稱取500 g的青棗,清洗去核,按照料液比1∶5加入一定量水,打漿,過濾,濾液備用。

        社會工作服務(wù)機(jī)構(gòu)不但是社會福利服務(wù)的傳遞者,其還是社會公平與正義的維護(hù)者。社會工作服務(wù)機(jī)構(gòu)能對創(chuàng)新社區(qū)治理的重要意義在于其在開展專業(yè)服務(wù)過程中發(fā)揮了政策倡導(dǎo)的功能,扮演著政策倡導(dǎo)者的角色。通過參與城市社區(qū)治理的過程,社會工作服務(wù)機(jī)構(gòu)能夠積極為服務(wù)對象提供專業(yè)服務(wù)和相應(yīng)的政策性支持,呼吁改善或改變政策和規(guī)定中不合理的部分,保護(hù)服務(wù)對象的合法權(quán)益。因此,廣西社會工作服務(wù)機(jī)構(gòu)積極倡導(dǎo)開展政府購買社區(qū)社會工作服務(wù)的探索,建議加快推進(jìn)社區(qū)社會工作崗位開發(fā),提倡社會福利資源優(yōu)先向邊遠(yuǎn)貧困地區(qū)、邊疆民族地區(qū)、革命老區(qū)、城市少數(shù)民族社區(qū)傾斜,努力推進(jìn)廣西社會工作事業(yè)的發(fā)展。

        FlavourSpec?GC-IMS風(fēng)味分析儀 德國GAS公司;JE2002電子天平(2 kg/0.01 g) 上海浦春計(jì)量儀器有限公司;MXT-5色譜柱(15 m×0.53 mm,1 μm) 美國Restek公司;SPX-300F小型生化培養(yǎng)箱 上海東麓儀器設(shè)備有限公司;HU-910IV-M多功能原汁機(jī)/榨汁機(jī) 韓國惠人公司;TGL-18M臺式高速冷凍離心機(jī) 上海盧湘儀離心機(jī)儀器有限公司。

        VOCal:用于分析數(shù)據(jù)和譜圖的定性和定量分析,同時(shí)應(yīng)用軟件中內(nèi)置的NIST數(shù)據(jù)庫和IMS數(shù)據(jù)庫對揮發(fā)性有機(jī)物進(jìn)行定性分析[15]。

        將一定量青棗汁分別接種活化后的不同乳酸菌發(fā)酵劑(接種量0.5%)和酵母菌(接種量0.5%),其中,接種了乳酸菌的青棗汁置于35 ℃發(fā)酵罐中培養(yǎng)100 h,接種了酵母菌的青棗汁置于28 ℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24 h。

        姚曉冬的家鄉(xiāng)在嘉興,雖與蘭溪同屬江南,但兩地的自然風(fēng)貌還是有所不同。在姚曉冬看來,嘉興是水鄉(xiāng),蘭溪多丘陵,他說道:“除了花鳥以外,我也非常喜歡畫山水,蘭溪丘陵山泉的獨(dú)特韻味很吸引我,所以常常來這里轉(zhuǎn)轉(zhuǎn),找找感覺。多年來,也在蘭溪交到了一些好朋友,可以說我與蘭溪結(jié)下了不解之緣……我曾與其他好友一起在蘭溪辦過畫展,但是個(gè)人作品展,這還是第一次。希望通過這次展覽的機(jī)會,與更多的書畫愛好者有一次密切的交流和互動?!薄?/p>

        1.3.2 色譜條件

        1.3.2.1 氣相色譜-離子遷移譜(GC-IMS)分析

        取1 mL樣品并轉(zhuǎn)移至20 mL頂空進(jìn)樣瓶中。自動頂空進(jìn)樣單元見表1。

        表1 自動頂空進(jìn)樣單元Table 1 Automatic headspace sampling unit

        Dynamic PCA插件:動態(tài)PCA和相似度分析圖,用于樣品的聚類分析和相似度分析,并可迅速確定未知樣品的種類[18]。

        【劇情回顧】《天龍八部》里的“六脈神劍”乃大理段氏的最高武學(xué),由不同的手指隔空激發(fā)內(nèi)力,變化精微。吐蕃國師鳩摩智就是為了搶到這門絕學(xué),一直苦苦糾纏男主角段譽(yù)。

        MXT-5色譜柱(15 m×0.53 mm,1 μm);柱溫60 ℃;載氣/漂移氣:N2;IMS溫度:45 ℃。

        1.3.2.3 IMS條件

        漂移氣為N2;漂移氣流速為150 mL/min。

        1.4 數(shù)據(jù)處理

        2) 壓載水中3種致病菌的分布具有鮮明的特點(diǎn),即隨壓載水深度的增加菌落數(shù)量與檢出率逐漸增加,且隨時(shí)間推移此態(tài)勢明顯加強(qiáng),其間若發(fā)生壓載水置換行為或水齡<10 d時(shí)則這一勢態(tài)不明顯。

        Reporter插件:直接比較樣品間的譜圖差異(二維俯視圖、三維譜圖和差異譜圖)[16]。

        要在重視學(xué)校創(chuàng)新創(chuàng)業(yè)教育的基礎(chǔ)上加大社區(qū)創(chuàng)客教育與高校創(chuàng)新創(chuàng)業(yè)教育的聯(lián)動機(jī)制,激發(fā)合力,努力將社區(qū)創(chuàng)新教育糅合到社會經(jīng)濟(jì)結(jié)構(gòu)的各個(gè)環(huán)節(jié)中去,不斷進(jìn)化和完善社區(qū)教育體制,構(gòu)建社區(qū)教育資源共享機(jī)制[1]。

        學(xué)生希望可以通過自己的發(fā)現(xiàn)、研究和探索得到答案,但是在傳統(tǒng)教學(xué)模式中,教師往往都將問題及其解決方式提前準(zhǔn)備好,直接提供給學(xué)生,這并不利于學(xué)生的個(gè)性化發(fā)展,機(jī)械式的解決問題,會使所有探索行為變得毫無意義。因此,教師應(yīng)當(dāng)結(jié)合新課改的三維教學(xué)目標(biāo),將知識和能力的培養(yǎng)放在同等重要的地位,讓學(xué)生在獲取數(shù)學(xué)知識的過程中,能夠有效利用這些知識,全面提升小學(xué)生的數(shù)學(xué)學(xué)習(xí)能力和數(shù)學(xué)綜合素質(zhì)。

        1.3.1 樣品的前處理

        我國校園足球競賽多以學(xué)校為基本參賽單位,這會導(dǎo)致足球競賽成績優(yōu)勢學(xué)校與劣勢學(xué)校差距進(jìn)一步加大,影響學(xué)校參賽積極性,造成劣勢學(xué)校優(yōu)秀足球人才流失。建議增設(shè)以區(qū)級、市級、省級為單位的校園足球競賽體系,尤其是以區(qū)為單位的校園足球賽事,促進(jìn)片區(qū)內(nèi)學(xué)校間足球優(yōu)勢資源共享,將散落于區(qū)域內(nèi)的各學(xué)校優(yōu)秀球員集中起來,為他們提供一同訓(xùn)練與比賽的機(jī)會,通過高水平校園足球競賽體系的構(gòu)建,也為職業(yè)足球發(fā)現(xiàn)與選拔基層青少年人才提供平臺。

        1.3.2.2 GC條件

        2 結(jié)果與分析

        2.1 對比樣品的揮發(fā)性有機(jī)物差異(GC-IMS圖譜分析)

        應(yīng)用VOCal分析軟件中的Reporter插件程序?qū)η鄺椫?、棗汁酵母菌發(fā)酵產(chǎn)品和棗汁乳酸菌發(fā)酵產(chǎn)品中的揮發(fā)性成分進(jìn)行三維對比,得到GC-IMS三維譜圖(保留時(shí)間、遷移時(shí)間和峰強(qiáng)度,見圖1),可以看出不同樣品風(fēng)味物質(zhì)的差異[19-22]。與此同時(shí),進(jìn)一步降低數(shù)據(jù)維度,得到俯視圖(見圖2),進(jìn)行差異對比。橫坐標(biāo)1.0處的豎線為RIP峰(反應(yīng)離子峰),RIP峰兩側(cè)的每個(gè)點(diǎn)代表一種揮發(fā)性有機(jī)化合物。顏色表示物質(zhì)的濃度,淺色表示濃度較低,深色表示濃度較高,顏色越深表示濃度越大[23-24]。將樣品0作為對照,在剩下的譜圖中去除樣品0中的信號峰,從而得到二者的差異譜圖(見圖3)。

        圖1 樣品的三維譜圖Fig.1 Three-dimensional spectrogram of samples

        圖2 樣品的GC-IMS譜圖(俯視圖)Fig.2 GC-IMS spectra of samples (top view)

        圖3 樣品的GC-IMS譜圖(差異圖)Fig.3 GC-IMS spectra of samples (difference diagram)

        2.2 樣品中的揮發(fā)性有機(jī)物指紋圖譜對比

        應(yīng)用VOCal分析軟件中的Gallery Plot插件程序,對鮮棗汁(樣品1)、棗汁酵母菌發(fā)酵產(chǎn)品(樣品2)和棗汁乳酸菌發(fā)酵產(chǎn)品(樣品3)的指紋圖譜進(jìn)行對比分析,可以分析出不同樣品間的風(fēng)味物質(zhì)差異[25]。由圖4可知,在a區(qū)域中,樣品1富含2-甲?;?5-甲基噻吩、6-甲基-5-庚烯-2-酮、丙酮、3-戊酮、2-甲基-1-丁醇、二甲基二硫醚、1-丙醇、丁酸甲酯、苯乙烯等風(fēng)味物質(zhì),而樣品2和樣品3相對缺少這些風(fēng)味物質(zhì)。b區(qū)域中,樣品2富含Z-3-己烯-1-醇、異丁醇、1-辛烯-3-醇、乙酸異戊酯、乙酸異丁酯、異丁酸乙酯、丙酸乙酯、己醛等風(fēng)味物質(zhì),而樣品1和樣品3相對缺少這些風(fēng)味物質(zhì)。c區(qū)域中,樣品3富含3-甲基丁酸、2-戊酮、羥基丙酮、甲醇等風(fēng)味物質(zhì),而樣品1和樣品2相對缺少這些風(fēng)味物質(zhì)。根據(jù)指紋圖譜還可以得出:樣品1和樣品3的共同風(fēng)味物質(zhì)有環(huán)己烯-2-酮;樣品2和樣品3的共同風(fēng)味物質(zhì)有2,3-戊二酮、己酸乙酯、甲酸乙酯、乙酸乙酯、乙縮醛[26-27]。

        圖4 樣品的Gallery Plot圖(指紋圖)Fig.4 Gallery plot of samples (fingerprint)

        通過整理不同樣品中的物質(zhì)出峰位置及峰體積數(shù)據(jù)可以準(zhǔn)確地得知:樣品1中6-甲基-5-庚烯-2-酮、2-辛酮、3-戊酮、2-甲基丁醛、E-2-庚烯醛、E-2-己烯醛、二甲基二硫醚、苯乙烯、苯、2-甲基-1-丁醇、1-丙醇、丁酸甲酯、丙酸、甲基吡嗪等物質(zhì)的含量較高;樣品2中苯乙醛、2,3-二乙基-5-甲基吡嗪、1-辛烯-3-醇、Z-3-己烯-1-醇、2-辛醇、異丁醇、異戊醇、己醛、乙酸異戊酯、乙酸異丁酯、異丁酸乙酯、丙酸乙酯等物質(zhì)的含量較高;樣品3中己酸乙酯、甲酸乙酯、2-戊酮等物質(zhì)的含量較高[28]。

        2.3 樣品的聚類分析(動態(tài)主成分分析PCA)

        由圖5可知,青棗汁、棗汁酵母菌發(fā)酵產(chǎn)品和棗汁乳酸菌發(fā)酵產(chǎn)品3種樣品中各個(gè)區(qū)域內(nèi)點(diǎn)之間的離散度都較小。青棗汁位于PC1的正向軸,棗汁酵母菌發(fā)酵產(chǎn)品和棗汁乳酸菌發(fā)酵產(chǎn)品都位于PC1的負(fù)向軸,且三者距離都很遠(yuǎn),表明青棗汁、棗汁酵母菌發(fā)酵產(chǎn)品和棗汁乳酸菌發(fā)酵產(chǎn)品三者的風(fēng)味存在較大差異。由動態(tài)主成分分析圖可知,兩種主成分累計(jì)貢獻(xiàn)率為99%,這表明PCA分析既能有效地反映出樣品的整體信息,又能較好地區(qū)分出加入不同菌種的青棗發(fā)酵樣品[29]。

        圖5 樣品的PCA分析圖Fig.5 PCA analysis diagram of samples

        由圖6可知,棗汁酵母菌發(fā)酵產(chǎn)品、棗汁乳酸菌發(fā)酵產(chǎn)品和青棗汁樣品的距離都很遠(yuǎn),說明3種樣品的相似度較低,因此,3種樣品的風(fēng)味相對來說差異較大。

        圖6 樣品的最近鄰-歐氏距離圖(距離越近,相似度越高)Fig.6 Nearest neighbor-Euclidean distance diagram of samples (the closer the distance, the higher the similarity)

        2.4 樣品的揮發(fā)性有機(jī)物定性分析(GC×IMS Library Search)

        通過匹配GC-IMS數(shù)據(jù)庫,進(jìn)而定性分析樣品中的揮發(fā)性有機(jī)物,見圖7~圖9。

        李金枝的話把我弄糊涂了,我趕緊順著李金枝手指的方向看去。我腦袋里嗡了一下。即使沒戴眼鏡,我也知道自己是光著身子的。為了確認(rèn)事實(shí),我又用手摸了摸自己。壞了,真壞了,不僅光著身子,而且光得非常徹底,真正的一絲不掛。

        圖7 青棗汁樣品氣相離子遷移Fig.7 Gas phase ion migration of green jujube juice samples

        圖8 棗汁酵母菌發(fā)酵樣品氣相離子遷移Fig.8 Gas phase ion migration of jujube juice samples fermented by yeast

        圖9 棗汁乳酸菌發(fā)酵樣品氣相離子遷移Fig.9 Gas phase ion migration of jujube juice samples fermented by lactic acid bacteria

        由圖7~圖9可知,青棗汁、棗汁酵母菌發(fā)酵產(chǎn)品和棗汁乳酸菌發(fā)酵產(chǎn)品3種樣品都有45個(gè)揮發(fā)性化合物特征峰位置點(diǎn)。整理表2數(shù)據(jù),共計(jì)檢測出44種揮發(fā)性成分,其中包括酯類9種、醇類11種、酮類8種、烯類1種、醛類8種、羧酸類2種、其他5種,其中一種化合物同時(shí)檢出了單體和二聚體,即辛酸乙酯[30]。

        表2 鑒別不同樣品中的揮發(fā)性成分Table 2 Identification of volatile components in different samples

        3 結(jié)論與討論

        本文采用GC-IMS技術(shù)對青棗汁、棗汁酵母菌發(fā)酵產(chǎn)品和棗汁乳酸菌發(fā)酵產(chǎn)品進(jìn)行揮發(fā)性有機(jī)物組成分析,根據(jù)揮發(fā)性有機(jī)物定性分析(GC×IMS Library Search)共計(jì)檢測出44種風(fēng)味物質(zhì)[31];采用氣相色譜-離子遷移譜技術(shù)構(gòu)建揮發(fā)性有機(jī)物的風(fēng)味指紋圖譜,獲得了不同樣品的揮發(fā)性化合物指紋譜圖,由此得出:鮮棗汁中6-甲基-5-庚烯-2-酮、2-辛酮、3-戊酮、2-甲基丁醛、E-2-庚烯醛、E-2-己烯醛、二甲基二硫醚、苯乙烯、苯、2-甲基-1-丁醇、1-丙醇、丁酸甲酯、丙酸、甲基吡嗪等物質(zhì)的含量較高;棗汁酵母菌發(fā)酵產(chǎn)品中苯乙醛、2,3-二乙基-5-甲基吡嗪、1-辛烯-3-醇、Z-3-己烯-1-醇、2-辛醇、異丁醇、異戊醇、己醛、乙酸異戊酯、乙酸異丁酯、異丁酸乙酯、丙酸乙酯等物質(zhì)的含量較高;棗汁乳酸菌發(fā)酵產(chǎn)品中己酸乙酯、甲酸乙酯、2-戊酮等物質(zhì)的含量較高。采用動態(tài)主成分分析(PCA)方法對樣品進(jìn)行聚類分析,可以有效地區(qū)分添加不同菌種的青棗汁發(fā)酵樣品。根據(jù)樣品的最近鄰-歐氏距離圖可以看出,棗汁酵母菌發(fā)酵產(chǎn)品、棗汁乳酸菌發(fā)酵產(chǎn)品和青棗汁樣品的距離都很遠(yuǎn),由此表明3種樣品的相似度較低,風(fēng)味相對來說差異較大,為青棗發(fā)酵產(chǎn)品的相關(guān)研究提供了新的理論依據(jù)和數(shù)據(jù)支持[32-33]。

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