杜云峰　姜慧嬌　劉程豪　侯卜文　舒敏　黎廣　陳雪玲　吳向未

摘要：目的 體內(nèi)外實(shí)驗(yàn)探討舒尼替尼聯(lián)合阿苯達(dá)唑抗泡狀棘球蚴活性。方法 體外對(duì)應(yīng)藥物濃度培養(yǎng)原頭節(jié)后鏡下觀察其活性并計(jì)算成活率；腹腔感染泡狀棘球蚴小鼠治療60 d后，稱(chēng)量囊濕重并計(jì)算抑囊率。試劑盒檢測(cè)AST、ALT、 IL-2，IL-4水平。HE觀察病理學(xué)改變，免疫組化檢測(cè)CD4、CD34表達(dá)水平。結(jié)果 體外培養(yǎng)第7 d ABZ+SU11248組原頭節(jié)存活率（45.168%±3.903%）低于ABZ組（59.198%±1.894%）和SU11248組（69.232%±3.673%）；ABZ+SU11248組的囊濕重（2.566±1.080）g低于 ABZ組（4.519±0.4934）g，SU11248（5.384±0.6586）g組和Control組（10.25±1.979）g；ABZ+SU11248組抑囊率74.94%高于ABZ組55.91%和SU11248組47.47%；ABZ+SU11248組ALT、AST水平中低于其他給藥組，IL-2、IL-4水平較其他給藥組明顯升高。ABZ+SU11248組原頭節(jié)畸形改變，角質(zhì)層變薄，生發(fā)層紊亂。ABZ+SU11248組免疫組化CD4評(píng)分（10.13±1.46）高于Control組（4.00±1.07）和ABZ組（6.50±3.34）；CD34評(píng)分（1.88±1.25）低于Control組（6.38±1.85），ABZ組（6.63±1.69）和SU11248組（4.25±1.17）。結(jié)論 舒尼替尼能夠通過(guò)抑制血管新生來(lái)抑制泡狀棘球蚴的生長(zhǎng)，其與阿苯達(dá)唑聯(lián)合治療比二者單獨(dú)治療對(duì)泡狀棘球蚴活性抑制作用更強(qiáng)且造成更低的肝損傷。

關(guān)鍵詞：泡狀棘球蚴；阿苯達(dá)唑；舒尼替尼；聯(lián)合用藥

中圖分類(lèi)號(hào)：中圖分類(lèi)號(hào)R532.32文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼

Sunitinib in combination with albendazole for the treatment of alveolar echinococcosis

DU? Yunfeng 1，JIANG? Huijiao1，LIU Chenghao1，HOU Bowen1，SHU Min1，LI? Guang1，CHEN Xueling2，WU? Xiangwei 1，3*

（1 School of Medicine，Shihezi University/NHC Key Laboratory of Prevention and Treatment of Central Asia High Incidence Diseases，

Shihezi，Xinjiang 832000， China; 2 Department of Immunization， School of Medicine，

Shihezi University，Shihezi，Xinjiang 832000， China; 3 Department of Hepatobiliary Surgery， The First Affiliated Hospital of

Medical College，Shihezi University， Shihezi，Xinjiang 832000， China）

Abstract：? Objective To investigate the anti－alveolar echinococcosis activity of sunitinib combined with albendazole in vitro and in vivo. Methods The activity was observed and the survival rate was calculated under the posterior microscope after cultured with the corresponding drug concentration in vitro. After 60 days of treatment， the wet weight of the cyst was measured and the rate of cyst inhibition was calculated. AST， ALT， IL-2 and IL-4 levels were detected by the kit. The pathological changes were observed by HE， and the expression levels of CD4 and CD34 were detected by immunohistochemistry. Results The survival rate of alveolar echinococcosis protoscoleces in ABZ+SU11248 group （45.168%±3.903%） was lower than that in ABZ group （59.198%±1.894%） and SU11248 group （69.232%±3.673%） on the 7th day of culture in vitro. The wet weight of capsule in ABZ+SU11248 group （2.566±1.080） g was lower than that in ABZ group （4.519±0.4934） g， SU11248 group （5.384±0.6586） g and Control group （10.25±1.979） g. The rate of sac inhibition in ABZ+SU11248 group 74.94% was higher than that in ABZ+SU11248 group 55.91% and SU11248 group 47.47%. The levels of ALT and AST in ABZ+SU11248 group were lower than those in other administration groups， and the levels of IL-2 and IL-4 were significantly higher than those in other administration groups. ABZ+SU11248 group was characterized by malformation， thinning of cuticle layer and disorder of germinal layer. Immunohistochemical CD4 score in ABZ+SU11248 group （10.13±1.46） was higher than that in Control group （4.00±1.07） and ABZ group （6.50±3.34）. The score of CD34 （1.88±1.25） was lower than that of Control group （6.38±1.85）， ABZ group （6.63±1.69） and SU11248 group （4.25±1.17）. Conclusion Sunitinib can inhibit the growth of alveolar echinococcosis by inhibiting angiogenesis. The combination of Sunitinib and albendazole has a stronger inhibitory effect on the activity of alveolar echinococcosis and causes less liver damage than the two treatments alone.

Key words： echinococcus alveolaris;albendazole;sunitinib;combination of drugs

棘球蚴病（Echinococciosis）一種人與動(dòng)物之間的傳染病，主要由棘球蚴的幼蟲(chóng)感染引起。其特征是細(xì)粒棘球蚴感染所引起的囊型包蟲(chóng)?。‥chinococcus granulosus，CE），以及多房棘球蚴所引起的泡狀棘球蚴?。ˋlveolar Echinococcosis，AE）［1］。人類(lèi)常因誤食蟲(chóng)卵而被感染，在人體內(nèi)的泡狀棘球蚴隨著血液運(yùn)輸至肝臟且在此定居引發(fā)肝泡狀棘球蚴病（Hepatic alveolar echinococcosis，HAE）［2］。臨床上肝泡狀棘球蚴病通常以腫瘤的形式發(fā)展，即所謂的“寄生蟲(chóng)型肝癌”，如未及時(shí)治療，90%的患者在確診后10～15年之內(nèi)就會(huì)死亡［3］。阿苯達(dá)唑（Albendazole，ABZ）是治療泡球蚴病的一線藥物，用于外科手術(shù)后的輔助治療和姑息療法，長(zhǎng)期使用ABZ會(huì)產(chǎn)生嚴(yán)重的不良反應(yīng)和耐藥性［4］。

泡狀棘球蚴的侵襲、生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移的重要機(jī)制與血管新生相關(guān)［5］。血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子（Vascular endothelial growth factor，VEGF） 在組織損傷、缺氧、炎癥等環(huán)境中的表達(dá)增強(qiáng)，與血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子受體（VEGFR1-3）結(jié)合在促進(jìn)新血管生成和淋巴管生成中起重要作用［6-7］。泡狀棘球蚴感染時(shí)，因寄生蟲(chóng)的存在，會(huì)使宿主細(xì)胞不斷產(chǎn)生VEGFA［8］、轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β（Transforming growth factor-β，TGF-β）［9-10］和基質(zhì)金屬蛋白酶2（Matrix metalloproteinase 2，MMP2）［11］，從而使其產(chǎn)生無(wú)法控制的血管新生。血管調(diào)節(jié)因子CD34是一種高度糖基化的I型糖蛋白，在人體和其它哺乳動(dòng)物的血液中選擇性表達(dá)［12］。CD34介導(dǎo)的黏附信號(hào)［13］是由酪氨酸蛋白激酶（Tyrosine protein kinase，TPK）所決定的，TPK特異性的抑制劑能阻止細(xì)胞的黏附。阿苯達(dá)唑是世界衛(wèi)生組織推薦的治療棘球蚴病的一線藥物之一，通過(guò)抑制蟲(chóng)體攝取葡萄糖，使蟲(chóng)體生發(fā)層細(xì)胞糖原耗竭、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)小體和線粒體變性，溶酶體增加，最終導(dǎo)致蟲(chóng)體死亡。能改善患者的生活品質(zhì)并延長(zhǎng)壽命。但存在胃腸道吸收率較低、半衰期較短、生物利用度低等，這些缺點(diǎn)使阿苯達(dá)唑難以在體內(nèi)達(dá)到有效的血藥濃度［14］。舒尼替尼（Sunitinib，SU11248）是一種多靶向酪氨酸激酶抑制劑，它可以選擇性地針對(duì)多個(gè)酪氨酸激酶受體（Receptor tyrosine kinases，RTK）來(lái)治療消化道基質(zhì)腫瘤和轉(zhuǎn)移性腎癌。RTK在細(xì)胞生長(zhǎng)的調(diào)節(jié)中起重要作用，突變或過(guò)度表達(dá)的RTK與多種人類(lèi)癌癥有關(guān)［15］。舒尼替尼可逆轉(zhuǎn)免疫抑制，治療荷瘤小鼠時(shí)發(fā)現(xiàn)IL-10、TGF-β和Foxp3的表達(dá)降低，CD4和CD8細(xì)胞的百分比和浸潤(rùn)程度明顯更高［16］。抑制VEGF信號(hào)途徑可以抑制腫瘤的生長(zhǎng)，血管新生和轉(zhuǎn)移［17-19］。臨床上對(duì)于舒尼替尼的不良反應(yīng)有血細(xì)胞計(jì)數(shù)減少（特別是白細(xì)胞）、腹瀉、疲勞、惡心等癥狀［20］。因此我們希望能探索一種新的藥物劑量或改良給藥方式在降低阿苯達(dá)唑和舒尼替尼藥物不良反應(yīng)的同時(shí)還能達(dá)到較好的治療效果。

1 材料與方法

1.1 主要實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及來(lái)源

泡狀棘球蚴腹腔感染6月的沙鼠購(gòu)自新疆維吾爾地區(qū)疾控中心。雌性C57BL/6小鼠購(gòu)于北京福貝斯公司，體重（20±2）g、6～8 周齡［動(dòng)物生產(chǎn)許可證號(hào)：SCXK （京）2019-0030］，在SPF級(jí)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物房飼養(yǎng)。

1.2 主要試劑

舒尼替尼（Sunitinib，SU11248）、阿苯達(dá)唑（Albendazole，ABZ）購(gòu)于美國(guó)APExBIO公司；DMEM高糖培養(yǎng)液、磷酸鹽緩沖液（PBS）、10%胎牛血清、青鏈霉素、購(gòu)于美國(guó)Life－Gibco公司；伊紅染液購(gòu)于中國(guó)北京索來(lái)寶公司；谷草轉(zhuǎn)氨酶（AST/GOT）測(cè)試盒、谷丙轉(zhuǎn)氨酶（ALT/GPT）測(cè)試盒購(gòu)于中國(guó)南京建成公司；Anti－CD4、Anti－CD34抗體、IL-2 ELISA Kit檢測(cè)試劑盒、IL-4 ELISA Kit檢測(cè)試劑盒購(gòu)于美國(guó)Abcam公司。

1.3 方法

1.3.1 泡狀棘球蚴原頭蚴的提取與活性鑒定

無(wú)菌操作取已保種泡狀棘球蚴沙鼠腹腔中泡球蚴組織，進(jìn)行洗滌、剪切、研磨、過(guò)濾、沉淀，重復(fù)3次。取10 μL懸浮液滴于玻片上，用0.1%伊紅染液對(duì)泡狀棘球蚴進(jìn)行染色，染色率<5%，泡狀棘球蚴活性好。一部分泡狀棘球蚴原頭節(jié)放入含青霉素和鏈霉素各100 U·mL-1和10%胎牛血清的高糖DMEM培養(yǎng)基，于37℃、5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)2 d后用于體外試驗(yàn)；另一部分泡狀棘球蚴加無(wú)菌生理鹽水配制成20%混合液用于體內(nèi)實(shí)驗(yàn)。

1.3.2 實(shí)驗(yàn)分組及治療方案

將體外實(shí)驗(yàn)分5組：Blank組（空白對(duì)照組）、DMSO組（溶劑對(duì)照組）、25 μg·mL-1 ABZ組（阿苯達(dá)唑粉劑組）、50 ng·mL-1 SU11248組（舒尼替尼組）［21］，25 μg·mL-1 ABZ+50 ng·mL-1 SU11248（阿苯達(dá)唑粉劑聯(lián)合舒尼替尼粉劑組）。按上述濃度配制各組培養(yǎng)基，加入6孔板中，每孔加入體外已培養(yǎng)2d的泡狀棘球蚴原頭節(jié)約5 000個(gè)，于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，每隔24h取原頭節(jié)用0.1%伊紅染液鑒定其活性，操作重復(fù)3次，泡狀棘球蚴原頭蚴活性率%=（未染色的泡狀棘球蚴原頭節(jié)數(shù)量／泡狀棘球蚴原頭節(jié)總數(shù)量）×100%；將40只腹腔接種泡狀棘球蚴的C57BL/6小鼠隨機(jī)分成5組：Blank組（空白對(duì)照組）、Control組（模型對(duì)照組）、ABZ組（阿苯達(dá)唑粉劑組）、SU11248組（舒尼替尼粉劑組）、ABZ+SU11248組（阿苯達(dá)唑聯(lián)合舒尼替尼粉劑組），每組8只。阿苯達(dá)唑給藥濃度為100mg·kg-1，舒尼替尼給藥濃度為50mg·kg-1，聯(lián)合用藥組為每天單藥交替給藥，給藥方式均為經(jīng)口灌胃。給藥治療60d后取各組小鼠血清、肝臟、腹腔泡狀棘球蚴組織備用。

1.3.3 檢測(cè)小鼠血清AST、ALT水平

各組C57BL/6小鼠于離心機(jī)中12 000 r·min-1離心后，取上清液，按照谷草轉(zhuǎn)氨酶（AST/GOT）、谷丙轉(zhuǎn)氨酶（ALT/GPT）測(cè)試盒說(shuō)明進(jìn)行檢測(cè)。

1.3.4 ELISA檢測(cè)小鼠血清中IL-2、IL-4水平

取小鼠上清液，按照測(cè)Mouse IL-2 ELISA Kit檢測(cè)試劑盒（酶聯(lián)免疫吸附法）、Mouse IL-4 ELISA Kit檢測(cè)試劑盒（酶聯(lián)免疫吸附法）說(shuō)明進(jìn)行檢測(cè)。

1.3.5 泡狀棘球蚴組織病理學(xué)變化及CD4、CD34水平檢測(cè)

取出泡狀棘球蚴組織后用4%多聚甲醛固定組織48 h，石蠟包埋切片，對(duì)組織進(jìn)行HE染色，顯微鏡下觀察其病理學(xué)變化。以CD4（1∶1 000），CD34 （1∶2 000）抗體作為一抗，免疫組織化學(xué)檢測(cè)泡狀棘球蚴組織CD4、CD34表達(dá)水平，評(píng)判標(biāo)準(zhǔn)參考文獻(xiàn)［22］。細(xì)胞質(zhì)不顯色或者顯示不清記 0分，淺黃色記1分，黃色記2分，棕黃色記3分；選3個(gè)視野，高倍鏡下每個(gè)視野計(jì)數(shù)細(xì)胞200個(gè)，計(jì)算陽(yáng)性細(xì)胞百分率：＜5%記0分，6%～25%記1分，26%～50%記2分，51%～75%記3分，＞76%記4分。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

利用SPSS 25.0軟件對(duì)上述各項(xiàng)實(shí)驗(yàn)進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)和分析，分析結(jié)果統(tǒng)一用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（X±S）表示；多組之間的比較采用單因素方差分析（ANOVA），結(jié)果顯示P＜0.05說(shuō)明差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

1.5 倫理批準(zhǔn)

本研究經(jīng)石河子大學(xué)醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院倫理審查會(huì)批準(zhǔn) （批準(zhǔn)號(hào)為 A2018-166），不涉及患者知情同意。

2 結(jié)果

2.1 聯(lián)合用藥對(duì)體外泡狀棘球蚴原頭節(jié)形態(tài)的影響

從給藥第三天開(kāi)始，隨著給藥時(shí)間增加，鏡下可見(jiàn)泡狀棘球蚴原頭節(jié)形態(tài)發(fā)生明顯改變。Blank組和DMSO組鏡下原頭節(jié)形態(tài)結(jié)構(gòu)完整，有活動(dòng)，伊紅染液不染色，表明其活性良好。ABZ組，SU11248組和ABZ+SU11248組鏡下原頭節(jié)表現(xiàn)為不同程度的伊紅著色。在ABZ+SU11248組中明顯發(fā)現(xiàn)隨著培養(yǎng)時(shí)間加長(zhǎng)，鏡下原頭節(jié)染色程度加深，結(jié)構(gòu)紊亂，吸盤(pán)外翻，活力下降易被伊紅染色（圖1）。

2.2 聯(lián)合用藥顯著抑制體外泡狀棘球蚴原頭節(jié)的活性

泡狀棘球蚴原頭節(jié)在各組藥物治療1～7 d中，每24 h用0.1%伊紅染色計(jì)算原頭節(jié)生存率。重復(fù)測(cè)量后方差分析，各給藥組原頭節(jié)存活率與對(duì)照組差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，隨著給藥時(shí)間增加，原頭節(jié)活性逐步下降（F=804.9，P ＜0.05）（圖2A）。在第7 d發(fā)現(xiàn)Blank組、DMSO組，ABZ組和SU11248組的泡狀棘球蚴原頭節(jié)活力為（97.357%±0.903%）、（97.133%±0.696%）、（59.198%±1.894%）、（69.232%±3.673%），與ABZ+SU11248聯(lián)合組泡狀棘球蚴原頭節(jié)活力（45.168%±3.903%）相比差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=480，P ＜0.001）。隨著給藥時(shí)間的增加，ABZ+SU11248聯(lián)合用藥組對(duì)泡狀棘球蚴原頭蚴的活力抑制作用更明顯（圖2B）。

2.3 聯(lián)合用藥顯著抑制小鼠體內(nèi)泡狀棘球蚴的生長(zhǎng)

Control組的泡狀棘球蚴囊泡較大，數(shù)目多，呈菜花樣，囊壁有較高的張力，其表面可見(jiàn)新生血管形成。ABZ+SU11248組的囊泡較其他組小，數(shù)目少，囊壁張力低，其表面少見(jiàn)血管新生（圖3A）。ABZ+SU11248組小鼠囊濕重為（2.566±1.080）g低于Control組（10.25±1.979）g，低于ABZ組（4.519±0.4934）g和SU11248組（5.384±0.6586）g（P ＜0.05）。ABZ+SU11248組囊泡的抑制率為74.94%，高于ABZ組55.91%和SU11248組47.47%（P ＜0.05），ABZ組與SU11248組囊濕重比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。

2.4 聯(lián)合用藥對(duì)小鼠肝損傷更低

小鼠血清ALT濃度中的Blank組與Control組、ABZ組，SU11248組和ABZ+SU11248組相比具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=24.17，P ＜0.001）。ABZ+SU11248組小鼠血清ALT濃度（51.73±6.309）U·L-1低于Control組（83.36±10.65）U·L-1，低于ABZ組（73.96±10.26）U·L-1和SU11248組（72.67±7.758）U·L-1（P ＜0.05）（圖4A）。小鼠血清AST濃度中的Blank組與Control組、ABZ組，SU11248組和ABZ+SU11248組相比差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=31.14，P ＜0.001），ABZ+SU11248組小鼠血清中AST濃度（96.60±9.880）U·L-1低于Control組（159.4±17.78）U·L-1和ABZ組（131.5±8.106）U·L-1和SU11248組（126.7±12.34）U·L-1（P ＜0.05）（圖4B）。

2.5 聯(lián)合用藥使小鼠血清IL-2、IL-4水平升高

ELISA檢測(cè)結(jié)果示：在IL-2表達(dá)水平中ABZ+SU11248組與Control組、ABZ組，SU11248組相比具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=63.63，P ＜0.05），ABZ+SU11248組小鼠血清中IL-2濃度（171.00±9.502）U·L-1高于Control組（82.35±7.830）U·L-1，高于ABZ組（147.50±7.902）U·L-1和SU11248組（148.70±13.30）U·L-1（P ＜0.05），而與Blank組（170.40±11.22）U·L-1相比差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P ＞0.05）（圖5A）。在IL-4表達(dá)水平中ABZ+SU11248組與Control組、ABZ組，SU11248組相比具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=18.88，P ＜0.05），ABZ+SU11248組小鼠血清中IL-4濃度（63.10±4.946）U·L-1高于Control組（37.05±4.752）U·L-1，高于ABZ組（49.66±3.992）U·L-1和SU11248組（49.67±6.789）U·L-1（P ＜0.05），而與Blank組（67.64±6.916）U·L-1相比差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P ＞0.05）。

2.6 小鼠腹腔泡狀棘球蚴組織病理學(xué)觀察

伊紅染色下Control組可見(jiàn)明顯的原頭節(jié)生成，囊泡周?chē)慕琴|(zhì)層結(jié)構(gòu)和生發(fā)層結(jié)構(gòu)清晰。ABZ組可見(jiàn)明顯的炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，囊泡內(nèi)原頭節(jié)呈發(fā)育不良的狀態(tài)。SU11248組角質(zhì)層變薄，囊泡內(nèi)原頭節(jié)也呈發(fā)育不良狀態(tài)。ABZ+SU11248組的炎性反應(yīng)帶變窄，且明顯可見(jiàn)囊泡生角質(zhì)層變薄，囊泡內(nèi)偶見(jiàn)少量畸形原頭節(jié)生成（圖6）。

2.7 聯(lián)合用藥腹腔泡狀棘球蚴組織中CD4水平高表達(dá)，CD34水平低表達(dá)

免疫組組化結(jié)果顯示，各組小鼠腹腔內(nèi)泡狀棘球蚴組織中均可檢測(cè)到CD4、CD34的表達(dá)。

ABZ+SU11248組的CD4評(píng)分結(jié)果與ABZ組和和Control組間相比差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=8.09，P＜0.05），ABZ+SU11248組CD4評(píng)分（10.13±1.46）高于Control組（4.00±1.07）和ABZ組（6.50±3.34）（P＜0.05）。ABZ+SU11248組與SU11248組間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P ＞0.05）。ABZ+SU11248組的CD34評(píng)分結(jié)果與ABZ組，SU11248組和Control組間相比差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=17.08，P ＜0.05），ABZ+SU11248組CD34評(píng)分（1.88±1.25）低于Control組（6.38±1.85），低于ABZ組（6.63±1.69）和SU11248組（4.25±1.17）（P ＜0.05）。ABZ組泡狀棘球蚴CD34評(píng)分與Control組組間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）（圖7）。

3 討論

泡狀棘球蚴病是一種人畜共患寄生蟲(chóng)病，常因誤食多房棘球絳蟲(chóng)蟲(chóng)卵而被傳染的，其生物學(xué)行為與腫瘤類(lèi)似，故有“蟲(chóng)癌”之稱(chēng)［23］。目前治療方式主要為根治性切除術(shù)，對(duì)不能手術(shù)者行化療［4］。藥物治療主要為苯并咪唑類(lèi)藥物，阿苯達(dá)唑是棘球蚴病的首選治療藥物，進(jìn)入人體后轉(zhuǎn)化成為阿苯達(dá)唑亞砜從而發(fā)揮殺蟲(chóng)作用，該藥在腸道的溶解性差，吸收度低，體內(nèi)廣泛分布，從而導(dǎo)致蟲(chóng)體周?chē)幬餄舛炔桓?，治愈難度大，但臨床治療效果欠佳，且需長(zhǎng)期服藥，不良反應(yīng)風(fēng)險(xiǎn)提高［24］，急需開(kāi)發(fā)新藥來(lái)提高療效。泡狀棘球蚴的生長(zhǎng)依賴(lài)新血管的生成且血管中的養(yǎng)分能進(jìn)一步促使泡狀棘球蚴生長(zhǎng)發(fā)育，本次實(shí)驗(yàn)通過(guò)使用舒尼替尼抑制血管生成的作用來(lái)觀察其對(duì)泡狀棘球蚴的原頭節(jié)的抑制作用。在體外實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)舒尼替尼對(duì)泡狀棘球蚴原頭節(jié)也存在抑制作用，具體機(jī)制有待進(jìn)一步探究。在體內(nèi)實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)阿苯達(dá)唑聯(lián)合舒尼替尼組的治療對(duì)泡狀棘球蚴生長(zhǎng)抑制作用最強(qiáng)，泡狀棘球蚴囊泡周?chē)慕琴|(zhì)層顯著變薄，囊泡內(nèi)原頭節(jié)呈畸形發(fā)育。

在感染泡狀棘球蚴后各個(gè)治療組血清ALT、AST均升高，經(jīng)過(guò)藥物治療后發(fā)現(xiàn)阿苯達(dá)唑聯(lián)合舒尼替尼組的肝功指標(biāo)較阿苯達(dá)唑組、舒尼替尼組和模型對(duì)照組均低，說(shuō)明阿苯達(dá)唑聯(lián)合舒尼替尼用藥能有效抑制泡狀棘球蚴的生長(zhǎng)從而降低其對(duì)肝臟的損傷。同時(shí)舒尼替尼組與阿苯達(dá)唑組的肝功指標(biāo)相比無(wú)差異，表明舒尼替尼對(duì)小鼠無(wú)明顯藥物毒性作用。

在被泡狀棘球蚴感染時(shí)，輔助性T細(xì)胞1 （T helper type 1， Th1）細(xì)胞免疫應(yīng)答的激活與Th2細(xì)胞免疫應(yīng)答的激活不平衡，導(dǎo)致細(xì)胞因子的不同釋放。研究表明，藥物的治療效果可以通過(guò)監(jiān)測(cè)血清中IL-4的水平來(lái)評(píng)估［25-27］，在泡狀棘球蚴感染的晚期IL-4水平的降低有利于泡狀棘球蚴囊泡的生長(zhǎng)［28］在本實(shí)驗(yàn)，模型對(duì)照組血漿IL-4含量顯著低于空白組，與之前的試驗(yàn)結(jié)果相符［29-31］。既往實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)在棘球蚴感染后期，IL-4水平和嗜酸性粒細(xì)胞百分比的升高有利于宿主［32］。IL-2是大多數(shù)感染性疾病中重要的炎癥和免疫應(yīng)答因子，具有增強(qiáng)宿主免疫，抑制腫瘤和寄生蟲(chóng)生長(zhǎng)的功能［33］。當(dāng)受到泡狀棘球蚴感染時(shí)其會(huì)增加宿主體內(nèi)IL-2受體的表達(dá)使IL-2大量消耗，進(jìn)而抑制了T淋巴細(xì)胞的免疫活性，并觸發(fā)泡狀棘球蚴的免疫逃逸［34］。本實(shí)驗(yàn)中，模型對(duì)照組的IL-2低表達(dá)表明泡狀棘球蚴能降低宿主IL-2水平，符合既往實(shí)驗(yàn)結(jié)果。與模型對(duì)照組相比，其余各給藥組均IL-2表達(dá)水平明顯升高，阿苯達(dá)唑聯(lián)合舒尼替尼組的IL-2水平高表達(dá)，證明聯(lián)合用藥能提高宿主的免疫應(yīng)答，其增強(qiáng)免疫能力比單藥模式效果更好。盡管對(duì)泡狀棘球蚴的免疫已經(jīng)有了一定的了解，但許多免疫機(jī)制仍不清楚，需進(jìn)行更深入的研究。

伊紅染色下觀察到模型對(duì)照組有明顯的泡狀棘球蚴原頭節(jié)生成，囊泡內(nèi)可見(jiàn)完整的生發(fā)層其周?chē)梢?jiàn)清晰的角質(zhì)層結(jié)構(gòu)。經(jīng)過(guò)用藥治療后發(fā)現(xiàn)舒尼替尼組能使泡狀棘球蚴囊泡周?chē)慕琴|(zhì)層變薄，而阿苯達(dá)唑聯(lián)合舒尼替尼組的囊泡中觀察到囊泡內(nèi)的原頭節(jié)成畸形改變，周?chē)琴|(zhì)層明顯變薄。推測(cè)其原因是舒尼替尼組抑制血管生成阻斷營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)運(yùn)輸而導(dǎo)致囊泡的角質(zhì)層發(fā)育不良而變薄，同時(shí)變薄的角質(zhì)層更有利于阿苯達(dá)唑的滲透從而更好的抑制泡狀棘球蚴的生長(zhǎng)使其發(fā)育畸形。

CD34是最敏感的、具有最強(qiáng)抗原特異性的內(nèi)皮標(biāo)記物，它被廣泛應(yīng)用于標(biāo)記新生血管生成中的微血管和內(nèi)皮細(xì)胞［35］。本實(shí)驗(yàn)研究中，CD34在聯(lián)合用藥組中表達(dá)最低，舒尼替尼組的CD34的表達(dá)低于模型對(duì)照組和阿苯達(dá)唑組且具有顯著性差異，表明舒尼替尼抑制酪氨酸激酶受體使CD34表達(dá)下調(diào)，從而抑制血管內(nèi)皮細(xì)胞增生阻遏泡狀棘球蚴周?chē)律苌伞?/p>

CD4在人體免疫調(diào)節(jié)系統(tǒng)中起著重要作用，被稱(chēng)為輔助T細(xì)胞，因其對(duì)適應(yīng)性免疫系統(tǒng)的顯著作用而被關(guān)注，研究表明促進(jìn)CD4向Th1細(xì)胞分化后可抑制腫瘤生長(zhǎng)［36］。實(shí)驗(yàn)中阿苯達(dá)唑聯(lián)合舒尼替尼組的CD4表達(dá)水平明顯高于空白對(duì)照組、模型對(duì)照組，阿苯達(dá)唑組和舒尼替尼組，與既往結(jié)果一致。在腫瘤中舒尼替尼可活化Th1細(xì)胞增加CD4細(xì)胞浸潤(rùn)［16］。CD4高表達(dá)向Th1分化能更好的抑制泡狀棘球蚴生長(zhǎng)發(fā)育，然而其具體機(jī)制仍然不太清楚，尤其是那些涉及寄生蟲(chóng)與宿主關(guān)系的機(jī)制，因?yàn)樗鼈兎浅?fù)雜。因此，需進(jìn)一步深入研究這些機(jī)制。

綜上所述，在體外對(duì)泡狀棘球蚴原頭節(jié)進(jìn)行給藥處理中，阿苯達(dá)唑與舒尼替尼聯(lián)合用藥既降低了給藥劑量又比單藥給藥對(duì)泡狀棘球蚴原頭節(jié)的活性的抑制效果更好，在對(duì)小鼠腹腔泡狀內(nèi)泡狀棘球蚴的治療中，阿苯達(dá)唑聯(lián)合舒尼替尼能更好抑制泡狀棘球蚴的生長(zhǎng)，其囊泡內(nèi)的原頭節(jié)成畸形發(fā)育，治療效果比單藥模式更佳。阿苯達(dá)唑聯(lián)合舒尼替尼給藥模式降低劑量同時(shí)擁有更佳的治療效果，有望為泡狀棘球蚴病的治療與預(yù)后提供一種新的策略和理論依據(jù)。

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（責(zé)任編輯：編輯唐慧）

收稿日期：中文收稿日期2023-03-17

基金項(xiàng)目：國(guó)家自然基金項(xiàng)目（81760570），中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院中央級(jí)公益性科研院所基本科研業(yè)務(wù)費(fèi)專(zhuān)項(xiàng)（2020-PT330-003），新疆生產(chǎn)建設(shè)兵團(tuán)促進(jìn)科技成果轉(zhuǎn)化引導(dǎo)計(jì)劃項(xiàng)目（2021BB006），新疆生產(chǎn)建設(shè)兵團(tuán)中青年領(lǐng)軍人才項(xiàng)目（2018CB017）

作者簡(jiǎn)介：杜云峰（1997—），男，碩士研究生，專(zhuān)業(yè)方向?yàn)槠胀ㄍ饪萍膊⊙芯俊?/p>

*通信作者：吳向未（1973—），男，教授，博士生導(dǎo)師，從事肝膽外科良惡性疾病的臨床與基礎(chǔ)研究，e－mail： wxwshz@126.com。