韓 磊,韓 靜,岳 斌,郭 翠

由于兒童生長發(fā)育迅速,因此處于不同年齡階段的兒童對同種疾病易感性差異性較大［1］。基于呼吸系統(tǒng)解剖特點及兒童免疫能力低下等諸多原因,兒童容易發(fā)生下呼吸道感染。下呼吸道感染作為臨床常見的感染性疾病,可由多種病原體引起,包括常見細(xì)菌、真菌、衣原體、支原體及病毒等,具有病原構(gòu)成復(fù)雜、臨床癥狀缺乏特異性的特點,因此難以憑借臨床特征進行疾病診斷［2-5］。該病亦是導(dǎo)致5歲以下患兒死亡的主要病因之一［4-5］。研究顯示,對于下呼吸道感染,不僅成人與兒童間病原菌菌譜差異顯著,不同年齡段的兒童間病原譜同樣有此情形［6-7］。兒童成長至3歲左右,其免疫力可達成人水平,這也就導(dǎo)致3歲及以下兒童與3歲以上兒童的下呼吸道感染病原譜間存在顯著差異。寧夏地處西北半干旱地區(qū),氣候有著明顯的地理特點,不同年齡階段人群的下呼吸道感染病原譜尚不明確,給臨床對于下呼吸道感染患者的快速診斷及治療帶來了較大影響。本研究以3歲為年齡分水嶺,通過芯片法檢測分析了銀川市某醫(yī)院不同年齡段患兒的病原譜差異及其對不同病原菌的易感性,旨在有針對性地為該院不同年齡段下呼吸道感染患兒診療提供快速準(zhǔn)確的病原學(xué)依據(jù)和指導(dǎo),并為之后流行病學(xué)研究提供翔實數(shù)據(jù)。

1 資料與方法

1.1 一般資料

1.1.1 樣本來源:樣本來源于2021年5月到2022年10月在銀川市婦幼保健院普兒科就診的515例下呼吸道感染患兒。按照年齡分為2組,≤3歲為A組,共316例(61.4%);>3歲為B組,共199例(38.6%)。患兒最小年齡為6天12時,最大年齡為13歲9月。臨床癥狀表現(xiàn)為肺炎、支氣管炎、毛細(xì)支氣管炎、發(fā)熱、支氣管哮喘等。

1.1.2 納入標(biāo)準(zhǔn):14周歲以下;患兒符合下呼吸道感染的診斷標(biāo)準(zhǔn);病理資料完整,家屬知情同意且簽署知情同意書。

1.1.3 排除標(biāo)準(zhǔn):中途轉(zhuǎn)院、放棄治療等原因造成資料有所缺失的患兒;外市患兒;已接受抗生素治療患兒。

1.2 研究方法

1.2.1 痰液采集:受檢者入院2 h內(nèi),予以生理鹽水清潔口腔。之后醫(yī)護人員持無菌吸痰管經(jīng)鼻腔在負(fù)壓條件下采集氣道深部痰液(對于月齡較小或缺乏自主咳痰能力的患兒,醫(yī)護人員應(yīng)當(dāng)對其進行咽部吸取痰標(biāo)本采集),置于一次性無菌痰盒中,此時對樣本進行視檢,需無明顯泡沫、口水及食物殘渣等,同時樣本量需≥0.6 mL。之后在顯微鏡下對所采集痰液標(biāo)本再度檢查,當(dāng)滿足低倍視野下白細(xì)胞數(shù)>25且上皮細(xì)胞<10時視為合格樣本。

1.2.2 肺泡灌洗液采集:患兒按要求術(shù)前8h禁止飲食,經(jīng)鼻腔送入支氣管鏡,在通過支氣管鏡充分觀察后于肺部病灶處注入常溫0.9% NaCl溶液進行灌洗。灌洗量由患兒體重決定,按每次每千克0.5～1 mL標(biāo)準(zhǔn)進行,且每次灌洗時間不得超過10 min,灌洗三次后即可結(jié)束,注意總灌洗液用量不得超過20 mL。首次灌洗過后,需將灌洗液留存,轉(zhuǎn)入到送檢用標(biāo)本管內(nèi),及時送至實驗室。

1.2.3 恒溫擴增芯片法病原檢測:采用呼吸道病原菌核酸檢測試劑盒(北京博奧生物集團有限公司)及RTisochipTM-A恒溫擴增芯片核酸分析儀(北京博奧生物集團有限公司)。依照說明書提取痰液等標(biāo)本中的核酸,進行病原菌核酸檢測。芯片法檢測抗原包括流感嗜血桿菌、肺炎鏈球菌、耐甲氧西林葡萄球菌、金黃色葡萄球菌等共計十三種病原體,配套軟件可對其檢測結(jié)果進行自動化判讀。

1.2.4 痰培養(yǎng)法:收集合格標(biāo)本分別接種于血平板、麥康凱平板、加萬古霉素巧克力平板和羅氏培養(yǎng)基(法國梅里埃生物公司),于35 ℃、5% CO2條件在CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng),觀察培養(yǎng)基并篩選可能的致病菌使用VIT-EK2-Compact全自動微生物鑒定儀(法國梅里埃生物公司)進行鑒定。

2 結(jié)果

2.1 芯片法與痰培養(yǎng)法比較:同時行芯片法與痰培養(yǎng)法檢測的共有509例。其中芯片法陽性共335例(65.8%),痰培養(yǎng)法陽性共125例(24.6%),見表1。

表1 陽性檢測結(jié)果一致性分析[n(%)]

2.2 芯片法檢測結(jié)果:515例標(biāo)本中,芯片法共檢出陽性341例(66.2%),其中A組193例,陽性檢出率61.1%,B組148例,陽性檢出率74.4%,A組總陽性檢出率高于B組(χ2=5.73,P<0.05),見表2。

表2 總陽性檢出率比較[n(%)]

2.3 2組病原體陽性檢出率比較:A組陽性檢出率前5位病原體依次是流感嗜血桿菌、金黃色葡萄球菌、耐甲氧西林葡萄球菌、大腸埃希氏菌及肺炎支原體;B組陽性檢出率前5位病原體依次是肺炎鏈球菌、流感嗜血桿菌、肺炎支原體、金黃色葡萄球菌及耐甲氧西林葡萄球菌。A組大腸埃希氏菌陽性檢出率高于B組(χ2=9.270,P<0.05),流感嗜血桿菌、肺炎鏈球菌和肺炎支原體的檢出率低于B組(P<0.05),見表3。

表3 2組病原體陽性檢出率比較[n(%)]

2.4 感染形式比較:A組單一感染檢出121例(38.3%),混合感染檢出72例(22.8%);B組單一感染檢出63例(31.7%),混合感染檢出85例(42.7%)。A組混合感染陽性檢出率顯著低于B組(χ2=22.88,P<0.05),見表4。

表4 感染形式比較[n(%)]

3 討論

隨著兒童年齡的增長,免疫系統(tǒng)也逐漸發(fā)育完善。3歲前兒童免疫系統(tǒng)發(fā)育很差,3歲時其免疫系統(tǒng)發(fā)育已趨于完善,接近于成人。下呼吸道感染作為全球兒童最常見的疾病之一,具有病原譜廣、人群差異性大等特點。若能及時對致病的病原菌種類進行有效分析,便可對患兒采取有針對性的治療方案。

本研究以3歲為年齡分界,利用恒溫擴增芯片法對銀川市不同年齡段呼吸道感染患兒進行病原譜檢測分析。515例下呼吸道感染患兒分泌物樣本的檢測結(jié)果顯示,≤3歲患兒的總陽性檢出率為56.6%,顯著高于>3歲患兒(P<0.05),說明≤3歲兒童較>3歲兒童更易發(fā)生下呼吸道感染,這與趙毅梅［8］、楊曉華［9］等的研究結(jié)果一致。造成此差異的原因與低年齡兒童母傳抗體逐漸消失,皮膚屏障功能發(fā)育不完善,皮膚黏膜屏障能力弱,體內(nèi)IgG、IgA及IgE水平較低,免疫能力低下等有關(guān),故年齡越小就越容易受到病原菌的侵襲。

病原譜分析顯示,≤3歲患兒易感的前5位病原體依次是流感嗜血桿菌、肺炎鏈球菌、金黃色葡萄球菌、耐甲氧西林葡萄球菌及大腸埃希氏菌,>3歲患兒易感的前5位病原體依次是肺炎鏈球菌、流感嗜血桿菌、肺炎支原體、金黃色葡萄球菌及耐甲氧西林葡萄球菌。患兒感染的病原菌均以革蘭氏陰性菌為主,其中≤3歲患兒的大腸埃希氏菌陽性檢出率顯著高于>3歲患兒(P<0.05),而流感嗜血桿菌、肺炎鏈球菌和肺炎支原體的陽性檢出率則顯著低于>3歲患兒(P<0.05),這與張冰［10］、張金峰［11］、岑敏［12］等的研究結(jié)果基本一致。說明≤3歲兒童較>3歲兒童對大腸埃希氏菌更易感染,而>3歲兒童則較≤3歲兒童對流感嗜血桿菌、肺炎鏈球菌和肺炎支原體更易感染。隨著年齡的增長,病原菌譜出現(xiàn)了由革蘭氏陰性菌向革蘭氏陽性菌和非典型病原體的過渡,使得處于不同年齡段的下呼吸道感染患兒病原譜構(gòu)成存在較大差異。造成該差異的原因可能是由于兒童在3歲以內(nèi),特別是新生兒時期,正常菌群尚未很好建立,皮膚黏膜產(chǎn)生的特異性IgM匱乏,導(dǎo)致個體易受大腸埃希氏菌、肺炎克雷伯菌等腸桿菌科細(xì)菌感染。3歲以上兒童由于來自母體的抗體IgG逐漸消耗,而自身的抗體生成系統(tǒng)尚未成熟,加之該年齡段開始集體生活,使之對流感嗜血桿菌和肺炎鏈球菌的攜帶率明顯增加,因此易受這些莢膜條件致病菌感染［13］。

感染形式的差異分析顯示,>3歲患兒的混合感染檢出率為42.7%,顯著高于≤3歲患兒(P<0.05)。說明>3歲兒童較≤3歲兒童更易發(fā)生混合感染。推測該現(xiàn)象的原因可能是由于>3歲兒童開始進入集體生活后接觸病原體種類較之前增多,部分機會致病菌如流感嗜血桿菌以定植菌的形式存在于體內(nèi),因此檢測時往往更易呈現(xiàn)混合感染的趨勢。

綜上所述,不同年齡階段的兒童下呼吸道感染病原菌分布具有顯著的差異性。病原譜的繪制將幫助臨床醫(yī)生對實驗室結(jié)果實現(xiàn)準(zhǔn)確判讀,實現(xiàn)對患兒有針對性的治療。