周 州，宋 怡，羅 舒，姚 珂，羅 霞，許曉燕

（四川省中醫(yī)藥科學(xué)院，四川 成都 610041）

靈芝（Ganoderma lucidum）為擔(dān)子菌綱多孔菌科靈芝屬真菌，始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》，我國(guó)在20 世紀(jì)50 年代首先成功實(shí)現(xiàn)了野生靈芝的馴化栽培。在栽培過(guò)程中，為滿足自身生長(zhǎng)發(fā)育的需求，靈芝菌絲需將木材等基質(zhì)中的纖維素、木質(zhì)素、蛋白質(zhì)等大分子物質(zhì)分解為小分子的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，從而進(jìn)行吸收和轉(zhuǎn)化，這一分解利用和轉(zhuǎn)化過(guò)程與菌絲分泌的胞外酶活性緊密相關(guān)。

近年來(lái)，隨著靈芝成為我國(guó)受眾最廣、市場(chǎng)接受度最高的食藥用菌之一，靈芝栽培在我國(guó)迅速發(fā)展，年產(chǎn)量已達(dá)約12 萬(wàn)t，靈芝產(chǎn)業(yè)年產(chǎn)值超百億元[1]。 隨著靈芝產(chǎn)業(yè)規(guī)?；l(fā)展，繼代培養(yǎng)在靈芝菌種保藏和擴(kuò)繁中頻繁使用，導(dǎo)致生產(chǎn)用靈芝菌種退化，造成靈芝減產(chǎn)，質(zhì)量問(wèn)題多發(fā)。 因此，深入研究菌種繼代培養(yǎng)對(duì)靈芝菌絲胞外酶活力變化規(guī)律的影響，明確胞外酶活與靈芝產(chǎn)量和品質(zhì)的相關(guān)性非常必要。

目前關(guān)于靈芝栽培技術(shù)的研究主要集中在高產(chǎn)菌種選育[2-5]、栽培基質(zhì)篩選[6-8]、栽培技術(shù)[9]等方面，尚未見(jiàn)菌種繼代培養(yǎng)對(duì)靈芝胞外酶活力及品質(zhì)影響的深入研究報(bào)道。 作者通過(guò)靈芝菌種連續(xù)繼代培養(yǎng)，研究傳代次數(shù)對(duì)菌絲胞外酶活力的影響，探討胞外酶活力與子實(shí)體產(chǎn)量和品質(zhì)之間的相關(guān)性，為靈芝高產(chǎn)、高質(zhì)栽培提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 儀器

LDZX-30KBS 型立式蒸汽壓力滅菌器：上海申安醫(yī)療器械廠產(chǎn)品；RTOP 型人工氣候箱：浙江托普儀器有限公司產(chǎn)品；MODULYOD-230 型冷凍干燥機(jī)：賽默飛世爾科技公司產(chǎn)品；AL104 型電子分析天平：梅特勒-托利多儀器（上海）有限公司產(chǎn)品；5810R 型臺(tái)式冷凍離心機(jī)：德國(guó)艾本德公司產(chǎn)品；2802S 型紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)：尤尼柯（上海）儀器有限公司產(chǎn)品；Waters 1525 高效液相色譜儀：美國(guó)Waters 公司產(chǎn)品。

1.2 試劑

馬鈴薯葡萄糖瓊脂（Potato Dextrose Agar，PDA）培養(yǎng)基：購(gòu)自北京奧博鑫生物技術(shù)有限責(zé)任公司；總蛋白質(zhì)定量測(cè)定試劑盒（考馬斯亮藍(lán)法）：購(gòu)自南京建成生物工程研究所；2，2-二氮-雙（3-乙基苯并噻唑-6-磺酸）二銨鹽（ABTS）和木聚糖：購(gòu)自Sigma公司；齊墩果酸對(duì)照品和D-無(wú)水葡萄糖對(duì)照品：購(gòu)自中國(guó)食品藥品檢定研究院； 靈芝酸A 對(duì)照品、靈芝酸D 對(duì)照品：靈芝酸F 對(duì)照品、靈芝烯酸A 對(duì)照品、靈芝烯酸D 對(duì)照品：均購(gòu)自成都普思生物科技股份有限公司；木屑、棉籽殼、玉米芯、麥麩、石灰：購(gòu)自農(nóng)資市場(chǎng)；乙腈，色譜純：購(gòu)自安徽天地高純?nèi)軇┯邢薰荆涣蛩?、蒽酮等：?guó)產(chǎn)分析純，購(gòu)自成都科隆化學(xué)品有限公司。

1.3 供試菌株

靈芝菌株由四川省中醫(yī)藥科學(xué)院菌類(lèi)藥材系統(tǒng)研究與開(kāi)發(fā)實(shí)驗(yàn)室保藏和提供。

1.4 供試培養(yǎng)基

1.4.1 PDA 綜合培養(yǎng)基 PDA 培養(yǎng)基37 g、蛋白胨2 g、磷酸二氫鉀1.5 g、硫酸鎂0.5 g、蒸餾水1 L。

1.4.2 菌袋培養(yǎng)料 木屑質(zhì)量分?jǐn)?shù)20%、棉籽殼質(zhì)量分?jǐn)?shù)55%、玉米芯質(zhì)量分?jǐn)?shù)15%、麥麩質(zhì)量分?jǐn)?shù)9%、石灰質(zhì)量分?jǐn)?shù)1%，水質(zhì)量分?jǐn)?shù)60%~65%，pH 5~6。 棉籽殼和玉米芯預(yù)濕24 h 后，加入木屑和麥麩，混合均勻，并堆料發(fā)酵3 d，摻入石灰拌勻，選用17 cm× 33 cm×0.05 cm 的聚丙烯袋，每袋裝濕料0.8 kg，121 ℃高壓滅菌3 h。

1.5 方法

1.5.1 菌種繼代培養(yǎng) 將靈芝菌種（F0）接于PDA綜合培養(yǎng)基斜面上，置于24 ℃人工氣候箱中培養(yǎng)至菌絲長(zhǎng)滿斜面，記為F1；繼續(xù)將菌種F1接于PDA 綜合培養(yǎng)基斜面上，培養(yǎng)至菌絲長(zhǎng)滿斜面，記為F2；以此類(lèi)推繼代接種培養(yǎng)，并依次編號(hào)F3、F4、…、F11、F12。

1.5.2 栽培管理 將靈芝菌種F0至F12分別接種于菌袋培養(yǎng)料中，置于25 ℃人工氣候箱中培養(yǎng)，濕度65%，每代菌種接40 個(gè)菌袋。

1.5.3 菌絲胞外酶活測(cè)定

1）粗酶液制備 靈芝菌絲長(zhǎng)滿菌袋后，每代菌種各取20 個(gè)菌袋。 取上層5 cm 基質(zhì)，冷凍干燥后低溫粉碎過(guò)20 目篩，混合均勻后取適量基質(zhì)粉末，按質(zhì)量體積比1∶10 加入蒸餾水或提取液，40 ℃恒溫水浴浸提2 h，8 000 r/min 離心15 min，上清液即為粗酶液[10]。

2）酶活測(cè)定 采用Bradford 法測(cè)定粗酶液中的蛋白質(zhì)含量[11]；采用ABTS 法測(cè)定漆酶活力[12]，將每毫克蛋白質(zhì)每分鐘氧化1 μmoL 底物ABTS 所需的酶量定義為一個(gè)酶活力單位；采用3，5-二硝基水楊酸比色法測(cè)定濾紙酶、纖維素酶、木聚糖酶和淀粉酶活力[13-16]，將每毫克蛋白質(zhì)每分鐘催化產(chǎn)生1 mg 葡萄糖所需的酶量分別定義為一個(gè)濾紙酶、纖維素酶和淀粉酶酶活力單位；每分鐘催化產(chǎn)生1 μmol 木糖所需的酶量定義為一個(gè)木聚糖酶酶活力單位。

1.5.4 產(chǎn)量和質(zhì)量分析

1）出芝管理及子實(shí)體采收 靈芝菌絲長(zhǎng)滿菌袋后，每代菌種各取20 個(gè)菌袋，置于27 ℃人工氣候箱中出芝培養(yǎng)，濕度80%，光照800 lx。 子實(shí)體成熟后采收，置于50 ℃干燥箱中干燥，備用。

2）干基生物學(xué)效率測(cè)定 測(cè)定每袋靈芝子實(shí)體質(zhì)量，計(jì)算干基生物學(xué)效率。

式中：W 為干基生物學(xué)效率，%；m1為每袋子實(shí)體干品質(zhì)量，g；m2為每袋干培養(yǎng)料質(zhì)量，g。

3）品質(zhì)評(píng)價(jià) 觀察子實(shí)體形態(tài)，測(cè)定大?。徊捎脽峤╗17]測(cè)定子實(shí)體的浸出物質(zhì)量分?jǐn)?shù)；采用硫酸蒽酮法[18]測(cè)定子實(shí)體多糖質(zhì)量分?jǐn)?shù)；采用齊墩果酸法[17]測(cè)定子實(shí)體三萜及甾醇質(zhì)量分?jǐn)?shù)；參照張景麗等[19]的方法測(cè)定子實(shí)體靈芝酸質(zhì)量濃度。

1.5.5 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì) 采用SPSS 26.0 軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 繼代培養(yǎng)對(duì)菌絲胞外酶活的影響

靈芝菌絲通過(guò)分泌纖維素酶、木聚糖酶、漆酶等降解酶分解基質(zhì)中的纖維素、木質(zhì)素等糖類(lèi)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，用于滿足生長(zhǎng)代謝需要。 由圖1 可知，纖維素酶、漆酶、濾紙酶和淀粉酶的活力隨著靈芝菌種繼代培養(yǎng)次數(shù)的增加而降低。 由于這些降解酶酶活力的下降，大分子營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的分解利用和轉(zhuǎn)化能力降低，菌絲生長(zhǎng)速度減慢，濃密度減弱，對(duì)外界環(huán)境污染的抵抗力下降。 菌絲胞外木聚糖酶的酶活力未隨菌種繼代培養(yǎng)次數(shù)的增加而變化，但整體酶活力較低。

圖1 菌種繼代培養(yǎng)對(duì)菌絲胞外酶活力的影響Fig. 1 Effects of subculture on extracellular enzyme activity of mycelium

2.2 繼代培養(yǎng)對(duì)靈芝產(chǎn)量、品質(zhì)的影響

如表1~3，通過(guò)干基生物學(xué)效率和成分測(cè)定可以發(fā)現(xiàn)，菌種繼代培養(yǎng)次數(shù)不影響子實(shí)體三總萜及甾醇質(zhì)量分?jǐn)?shù)。 但隨著繼代培養(yǎng)次數(shù)的增加，靈芝干基生物學(xué)效率下降，子實(shí)體形態(tài)由大變小，出現(xiàn)分枝、原基不開(kāi)片等現(xiàn)象，多糖和浸出物質(zhì)量分?jǐn)?shù)降低，靈芝酸A、靈芝酸D、靈芝酸F、靈芝烯酸A、靈芝烯酸D 質(zhì)量濃度降低。 可見(jiàn)，繼代培養(yǎng)對(duì)靈芝產(chǎn)量和品質(zhì)影響較大。

表1 菌種繼代培養(yǎng)對(duì)靈芝形態(tài)大小與干基生物學(xué)效率的影響Table 1 Effects of subculture on morphological size and biological efficiency of G. lucidum

表2 菌種繼代培養(yǎng)對(duì)靈芝浸出物、多糖和三萜及甾醇質(zhì)量分?jǐn)?shù)的影響Table 2 Effects of subculture on contents of extract，polysaccharide，triterpene and sterol of G. lucidum

表3 菌種繼代培養(yǎng)對(duì)靈芝酸質(zhì)量濃度的影響Table 3 Effect of subculture of strain on content of ganoderma acid

2.3 胞外酶活與靈芝產(chǎn)量和質(zhì)量的相關(guān)性分析

為考察不同胞外酶活對(duì)靈芝產(chǎn)量和質(zhì)量的影響，采用SPSS 26.0 軟件對(duì)靈芝菌種繼代培養(yǎng)過(guò)程中的5 種胞外酶酶活力與所得靈芝子實(shí)體的干基生物學(xué)效率、 浸出物質(zhì)量分?jǐn)?shù)、 多糖質(zhì)量分?jǐn)?shù)等9個(gè)指標(biāo)進(jìn)行Peaeson 相關(guān)性分析。結(jié)果如表4 所示，纖維素酶、漆酶、濾紙酶和淀粉酶的酶活力與靈芝子實(shí)體干基生物學(xué)效率 （產(chǎn)量指標(biāo)） 及浸出物、多糖、靈芝酸A、靈芝酸D、靈芝酸F、靈芝烯酸A 和靈芝烯酸D 質(zhì)量濃度等7 個(gè)靈芝質(zhì)量指標(biāo)呈極顯著正相關(guān)（P<0.01），與三萜及甾醇質(zhì)量分?jǐn)?shù)的相關(guān)性不顯著（P>0.05）。 木聚糖酶酶活力與靈芝子實(shí)體質(zhì)量分?jǐn)?shù)指標(biāo)和質(zhì)量指標(biāo)的相關(guān)性不顯著（P>0.05）。

表4 胞外酶活與靈芝產(chǎn)量和質(zhì)量的Peaeson 相關(guān)性分析Tabel 4 Peaeson analysis of correlation between extracellular enzyme activity and yield and quality of G. lucidum

2.4 胞外酶活與靈芝品質(zhì)的通徑分析

相關(guān)性分析可以解釋胞外酶活與靈芝品質(zhì)之間的直接關(guān)系，但對(duì)不同胞外酶之間相互作用對(duì)靈芝產(chǎn)量和質(zhì)量的影響沒(méi)有直觀表現(xiàn)。 作者在分析胞外酶活與靈芝品質(zhì)相關(guān)性基礎(chǔ)上，采用通徑分析進(jìn)一步研究不同胞外酶活的相互作用對(duì)靈芝品質(zhì)的效應(yīng)大小。

分別以靈芝品質(zhì)指標(biāo)——干基生物學(xué)效率、浸出物質(zhì)量分?jǐn)?shù)、多糖質(zhì)量分?jǐn)?shù)、三萜和甾醇質(zhì)量分?jǐn)?shù)、靈芝酸A 質(zhì)量濃度、靈芝酸D 質(zhì)量濃度、靈芝酸F 質(zhì)量濃度、靈芝烯酸A 質(zhì)量濃度和靈芝烯酸D 質(zhì)量 濃 度 為 因 變 量Y1、Y2、Y3、Y4、Y5、Y6、Y7、Y8和Y9，纖維素酶、漆酶、濾紙酶、淀粉酶和木聚糖酶酶活力為自變量X1、X2、X3、X4和X5，采用偏回歸分析法建立Y1、Y2、Y3、Y4、Y5、Y6、Y7、Y8和Y9的最優(yōu)多元回歸方程 （剔除偏回歸系數(shù)不顯著的自變量），分別為Y1=2.803+0.007X2+4.159X3（F=424.148，P<0.001），Y2=3.022+0.001X2+0.010X2+1.523X4（F=156.063，P<0.001），Y3=-0.022-0.004X2+5.425X3（F=135.340，P<0.001），Y4=-0.650-5.886×10-5X1+0.010X2-2.510X5（F=3.734，P<0.1），Y5=-13.221+0.042X2+4.999X4+81.230X5（F=82.850，P<0.001），Y6=-1.665+0.015X2+0.861X4（F=89.848，P<0.001），Y7=-0.468-0.001X1+0.003X2+4.578X3（F=217.878，P<0.001），Y8=-0.164+0.001X1+0.004X2（F=102.328，P<0.001），Y9=-1.717+0.004X2+0.605X4+7.487X5（F=169.466，P<0.001），除Y4（三萜和甾醇質(zhì)量分?jǐn)?shù)）外，其余8 個(gè)方程的顯著性檢驗(yàn)表明具有顯著差，進(jìn)一步做通徑分析。

由表5 可見(jiàn)，與干基生物學(xué)效率（Y1）的簡(jiǎn)單相關(guān)性中，自變量濾紙酶（X3）大于漆酶（X2），直徑和間接通徑作用X3＞X2，同時(shí)兩個(gè)變量的直徑和間接通徑系數(shù)均為正值，說(shuō)明漆酶和濾紙酶對(duì)靈芝干基生物學(xué)效率均表現(xiàn)為正效應(yīng)，栽培基質(zhì)中的漆酶和濾紙酶活力高時(shí)，將增加靈芝干基生物學(xué)效率。 決策系數(shù)是通徑分析中的決策指標(biāo)，用于自變量對(duì)因變量的綜合作用進(jìn)行排序，確定主要決策變量和限制變量[20-21]。 自變量X3對(duì)Y1的決策性大于X2，說(shuō)明濾紙酶變量對(duì)Y1的綜合作用是最大的，這種影響效應(yīng)包括直接作用以及與其他胞外酶的協(xié)同作用。

表5 以干基生物學(xué)效率為因變量的通徑分析Tabel 5 Path analysis with biological efficiency of fruiting body as dependent variable

由表6 可見(jiàn)，與浸出物質(zhì)量分?jǐn)?shù)（Y2）的簡(jiǎn)單相關(guān)性中，3 個(gè)自變量與Y2的相關(guān)性系數(shù)X1＞X4＞X2，直徑通徑作用的系數(shù)X4＞X1＞X2；分析各間接通徑系數(shù)可知，3 個(gè)變量的間接通徑系數(shù)均為正值，且X4＞X1＞X2（0.791＞0.653＞0.377），同時(shí)，X4對(duì)Y2的決策系數(shù)最高為0.895，由此可知X4對(duì)Y2的綜合作用最大，說(shuō)明淀粉酶對(duì)靈芝浸出物質(zhì)量分?jǐn)?shù)有最大影響。

表6 以浸出物質(zhì)量分?jǐn)?shù)為因變量的通徑分析Tabel 6 Path analysis with extract content as dependent variable

由表7 可見(jiàn)，與多糖質(zhì)量分?jǐn)?shù)（Y3）的簡(jiǎn)單相關(guān)性中，2 個(gè)自變量與Y3的相關(guān)性系數(shù)X3＞X2（0.966＞0.791），直徑通徑作用的系數(shù)X3＞X2，其中X2與Y3的直接通徑系數(shù)和間接通徑系數(shù)分別為-0.436、-0.391，X2對(duì)Y3綜合作用表現(xiàn)抑制；濾紙酶對(duì)靈芝多糖質(zhì)量分?jǐn)?shù)的綜合影響最大。

靈芝酸類(lèi)成分是靈芝的主要功效成分，其中靈芝酸A、靈芝酸D、靈芝酸F、靈芝烯酸A、靈芝烯酸D 是常見(jiàn)的靈芝酸，常用于靈芝質(zhì)量檢測(cè)[22-26]。 由表8 可知，與靈芝酸A 質(zhì)量濃度（Y5）的簡(jiǎn)單相關(guān)性中，3 個(gè)自變量與Y5的相關(guān)性系數(shù)X2＞X4＞X5；直接和間接通徑作用的系數(shù)X4＞X2＞X5； 決策系數(shù)X4＞X2＞X5，表明X4對(duì)Y5的綜合作用影響較大。 對(duì)間接通徑作用 分 析 可 知，X4通 過(guò)X2、X5分 別 對(duì)Y5的 作 用 為0.494、-0.051，表明淀粉酶與漆酶的交互對(duì)提升靈芝酸A 具有正相關(guān)影響，淀粉酶通過(guò)木聚糖酶的間接作用對(duì)靈芝酸A 質(zhì)量濃度有抑制作用。

由表9 可見(jiàn)，與靈芝酸D（Y6）的簡(jiǎn)單相關(guān)性中，自變量漆酶（X2）大于濾紙酶（X4），直接和間接通徑作用均X2＞X4，同時(shí)兩個(gè)變量的間接通徑系數(shù)均為正值，說(shuō)明漆酶和淀粉酶對(duì)靈芝酸D 質(zhì)量濃度均有影響。其中漆酶對(duì)靈芝的靈芝酸D 質(zhì)量濃度的綜合影響最大，表明提高栽培基質(zhì)中的漆酶活力，能夠提升靈芝酸D 質(zhì)量濃度。

表9 以靈芝酸D 質(zhì)量濃度為因變量的通徑分析Tabel 9 Path analysis with ganoderic acid D content as dependent variable

由表10 可見(jiàn)，與靈芝酸F（Y7）的簡(jiǎn)單相關(guān)性中，3 個(gè)自變量與Y7的相關(guān)性系數(shù)X3＞X2＞X1，直徑通徑作用的系數(shù)X3＞X2＞X1，其中X1對(duì)Y7直接通徑作用和間接通徑作用均為負(fù)值，這表明X1對(duì)Y7的直接通徑作用和間接通徑作用呈現(xiàn)負(fù)影響，而X2和X3對(duì)Y7的綜合影響呈正向性。

表11 表明纖維素酶對(duì)靈芝烯酸A 質(zhì)量濃度的綜合影響最大。

表11 以靈芝烯酸A 質(zhì)量濃度為因變量的通徑分析Tabel 11 Path analysis with ganoderentic acid A content as dependent variable

由表12 可見(jiàn)，與靈芝烯酸D 質(zhì)量濃度（Y9）的簡(jiǎn)單相關(guān)性中，3 個(gè)自變量與Y9的相關(guān)性系數(shù)、直接通徑和間接通徑作用的系數(shù)排序均為X4＞X2＞X5。其中X2對(duì)Y5的綜合作用呈正相關(guān)，表明漆酶可能是影響靈芝烯酸D 的重要因素，在提高以靈芝烯酸D 為品質(zhì)提升的目標(biāo)中應(yīng)著重把握； 間接通徑作用分析可知，X4通過(guò)X2、X5分別對(duì)Y5的作用為0.405、-0.042，表明淀粉酶與漆酶的交互對(duì)提升靈芝烯酸D 具有正相關(guān)影響，淀粉酶通過(guò)木聚糖酶的間接作用對(duì)靈芝烯酸D 質(zhì)量濃度有呈抑制作用，但負(fù)影響較小，同時(shí)由決策系數(shù)大小為X4＞X2＞X5可知，X4對(duì)Y5的綜合作用影響較大，表明淀粉酶對(duì)提升靈芝的靈芝烯酸D 質(zhì)量濃度具有重要影響。

表12 以靈芝烯酸D 質(zhì)量濃度為因變量的通徑分析Tabel 12 Path analysis with ganoderentic acid D content as dependent variable

3 結(jié) 語(yǔ)

食藥用菌在菌絲生長(zhǎng)階段，通過(guò)分解基質(zhì)內(nèi)的纖維素、木質(zhì)素等來(lái)合成、儲(chǔ)存子實(shí)體發(fā)育所需的能量物質(zhì)[27]，胞外酶酶活力的強(qiáng)弱常能反映出菌絲生理生化的活躍程度，影響食藥用菌生長(zhǎng)發(fā)育[21]。通過(guò)對(duì)靈芝菌種繼代培養(yǎng)過(guò)程中胞外酶活力、靈芝子實(shí)體產(chǎn)量與質(zhì)量的測(cè)定，發(fā)現(xiàn)菌種連續(xù)繼代培養(yǎng)會(huì)引起漆酶、濾紙酶、纖維素酶和淀粉酶的酶活力降低，進(jìn)而減少靈芝子實(shí)體產(chǎn)量，引起靈芝品質(zhì)下降，與斑玉蕈[28]、真姬菇[29]、草菇[30]、蠶花[31]等食藥用菌的研究結(jié)果相似。

為進(jìn)一步研究胞外酶酶活力與靈芝子實(shí)體品質(zhì)之間的關(guān)系，作者在分析漆酶、濾紙酶等胞外酶酶活力與靈芝干基生物學(xué)效率、浸出物、多糖等品質(zhì)指標(biāo)的相關(guān)性基礎(chǔ)上，采用逐步線性回歸法進(jìn)行通徑分析。 結(jié)果發(fā)現(xiàn)，纖維素酶、漆酶、濾紙酶和淀粉酶的酶活力與靈芝子實(shí)體產(chǎn)量及浸出物、 多糖、靈芝酸A、靈芝酸D、靈芝酸F、靈芝烯酸A 和靈芝烯酸D 質(zhì)量濃度呈極顯著正相關(guān)，但與三萜及甾醇質(zhì)量分?jǐn)?shù)相關(guān)性不顯著；通徑分析進(jìn)一步表明，濾紙酶是影響靈芝產(chǎn)量及多糖質(zhì)量分?jǐn)?shù)、靈芝酸F 質(zhì)量濃度的關(guān)鍵胞外酶，纖維素酶是影響靈芝烯酸A 質(zhì)量濃度的關(guān)鍵胞外酶。

綜上所述，隨著靈芝菌種繼代培養(yǎng)次數(shù)的增加，基質(zhì)中主要胞外酶酶活力降低，進(jìn)而降低靈芝子實(shí)體產(chǎn)量和品質(zhì)。 因此，在實(shí)際生產(chǎn)中，為獲得高產(chǎn)、優(yōu)質(zhì)的靈芝子實(shí)體，應(yīng)將靈芝菌種繼代培養(yǎng)次數(shù)控制在5 代以內(nèi)。 同時(shí)，鑒于濾紙酶、纖維素酶等胞外酶與靈芝品質(zhì)之間的相關(guān)性，還可以通過(guò)調(diào)節(jié)栽培溫度、改良基質(zhì)配方等技術(shù)手段，提升濾紙酶、纖維素酶等胞外酶酶活力，以達(dá)到提產(chǎn)增質(zhì)的目的。