封曉慧，趙兵令，郗艷菊，李育明，李紅梅，朱永明

（1.河北維爾利動(dòng)物藥業(yè)集團(tuán)有限公司，石家莊 050227；2.河北省功能性飼料添加劑技術(shù)創(chuàng)新中心，石家莊 050200；3.石家莊市獸用功能性添加劑工程技術(shù)中心，石家莊 050200；4.河北省中獸藥產(chǎn)業(yè)技術(shù)研究院，石家莊 050200）

我隨著減抗替抗的大趨勢(shì)，農(nóng)業(yè)農(nóng)村部第194號(hào)和246號(hào)公告發(fā)布，實(shí)施藥物飼料添加劑退出行動(dòng)，自2020年7月1日起，飼料生產(chǎn)企業(yè)停止生產(chǎn)含有促生長(zhǎng)類(lèi)藥物飼料添加劑（中藥類(lèi)除外）的商品飼料，2018 年啟動(dòng)實(shí)施獸用抗菌藥使用減量化行動(dòng)。家禽養(yǎng)殖業(yè)迫切需要一種綠色、無(wú)殘留的添加劑應(yīng)用于蛋雞腸道保健過(guò)程中，達(dá)到提高生產(chǎn)性能、改善蛋品質(zhì)的功效，因此益生元、益生菌、中藥等飼料添加劑應(yīng)運(yùn)而生。葛根芩連湯源于張仲景的《傷寒論》[1]，主要由葛根、黃芩、黃連、甘草組成。本方劑主要具有解表清里之功效，常用來(lái)治療濕熱泄瀉及痢疾[2]。鄭晨曦[3]研究表明，葛根芩連湯通過(guò)對(duì)乳酸桿菌、擬桿菌等一些有益菌數(shù)量的提升，來(lái)降低腸道有害菌的豐富度，調(diào)節(jié)腸道菌群紊亂狀態(tài)，增強(qiáng)腸道免疫屏障功能。張儒奇等[4]研究表明，葛根芩連湯對(duì)大鼠腸道菌群有一定影響，主要通過(guò)參與碳水化合物、氨基酸等多種代謝途徑，改善腸道菌群結(jié)構(gòu)，調(diào)節(jié)腹瀉，緩解腸道炎癥?，F(xiàn)代研究表明，改良葛根芩連湯及加減方，有提高免疫能力、改善腸道黏膜、抑制腸道炎癥、調(diào)節(jié)腸道菌群等作用[5]。

海蘭褐蛋雞具有飼料報(bào)酬高、產(chǎn)蛋多和成活率高的優(yōu)良特點(diǎn)，特別是雞蛋口感醇香、卵磷脂含量高等獨(dú)特特點(diǎn)，深受廣大消費(fèi)者青睞。河北某動(dòng)物藥業(yè)公司研發(fā)的復(fù)方中藥制劑“改良葛根芩連湯”是純中藥制劑，具有防治畜禽產(chǎn)氣莢膜梭菌引起的腸炎腹瀉、消除不明原因引起的畜禽頑固性下痢和腸道疾病的功效。本試驗(yàn)通過(guò)在飲水中添加不同水平的改良葛根芩連湯，探討其對(duì)海蘭褐蛋雞生產(chǎn)性能、蛋品質(zhì)、腸道菌群、氮磷排泄率的影響，以期為改良葛根芩連湯在海蘭褐蛋雞生產(chǎn)中的應(yīng)用提供參考依據(jù)。

1 試驗(yàn)材料

1.1 試驗(yàn)動(dòng)物及添加劑

31 周齡健康狀況良好、體重及產(chǎn)蛋率相近的海蘭褐蛋雞400只，山東煙臺(tái)某蛋雞養(yǎng)殖場(chǎng)提供。

改良葛根芩連湯，由河北省某動(dòng)物藥業(yè)公司提供，商品名為常安康，主要由葛根、馬齒莧、生白術(shù)、炙甘草、牛蒡子、黃芩、穿心蓮、功能性益生菌、黏膜修復(fù)劑等組成。產(chǎn)品中的主要成分及含量：葛根素3.0 mg·mL-1，黃芩苷6.4 mg·mL-1，甘草酸1.1 mg·mL-1，甘草苷0.4 mg·mL-1，丁酸梭菌1.0×106cfu·mL-1。

方解：葛根生津止渴，熱瀉熱痢，脾虛泄瀉；馬齒莧解毒消腫、消炎；生白術(shù)健脾益氣，燥濕利水；黃芩、穿心蓮清熱燥濕、瀉火解毒；功能性益生菌具有抑菌、抗菌功效；黏膜修復(fù)劑對(duì)黏膜有修復(fù)和還原作用；諸藥合用共奏消炎、止瀉和強(qiáng)脾胃之功效。

1.2 主要儀器

游標(biāo)卡尺（型號(hào)為530-108），日本三豐公司產(chǎn)品；蛋品質(zhì)測(cè)定儀（型號(hào)為EA-O1）、蛋殼強(qiáng)度測(cè)定儀（型號(hào)為EFR-01），以色列奧卡公司產(chǎn)品；電子計(jì)重秤（型號(hào)為JM-C15 kg），余姚市貝奇計(jì)量衡器有限公司產(chǎn)品；蛋殼厚度測(cè)定儀（型號(hào)為MA3），南京銘奧儀器設(shè)備有限公司產(chǎn)品；蛋黃分離器（型號(hào)為RB4001），廣州萊貝有限公司產(chǎn)品；紫外分光光度計(jì)（型號(hào)為T(mén)6新世紀(jì)），北京普析儀器有限公司產(chǎn)品；生化培養(yǎng)箱（型號(hào)為SPX-150B-Z），上海博迅實(shí)業(yè)有限公司產(chǎn)品；凱氏定氮儀（型號(hào)為ZDDN-11），浙江托普云農(nóng)科技有限公司產(chǎn)品。

2 試驗(yàn)方法

2.1 試驗(yàn)設(shè)計(jì)及日糧組成

選取31 周齡的海蘭褐蛋雞400 只，隨機(jī)分為4組（對(duì)照組、試驗(yàn)1組、試驗(yàn)2組和試驗(yàn)3組），每組4個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)25只雞。4組蛋雞飼喂相同基礎(chǔ)日糧，對(duì)照組正常飲水不添加任何藥物，3個(gè)試驗(yàn)組分別在飲水中添加0.1%、0.2%和0.3%的改良葛根芩連湯，試驗(yàn)分組情況詳見(jiàn)表1。預(yù)試期7 d，正試期14 d。飼糧營(yíng)養(yǎng)水平參照NY/T 33—2004《雞飼養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)》和NRC（1994）標(biāo)準(zhǔn)配制，飼糧組成及營(yíng)養(yǎng)水平見(jiàn)表2。

表1 試驗(yàn)分組情況

表2 飼糧組成及營(yíng)養(yǎng)水平（風(fēng)干基礎(chǔ)）

2.2 飼養(yǎng)管理

試驗(yàn)蛋雞采用三層全階梯式籠養(yǎng)，每籠2 只，日喂3 次（07: 00、11: 00 和16: 00），自由采食和飲水。采用人工光照+自然光照方式，光照強(qiáng)度為15 lx，光照時(shí)間為16 h，雞舍溫度控制在25 ℃左右。自然通風(fēng)，人工清糞，常規(guī)免疫。開(kāi)產(chǎn)后每天16:00撿蛋。

2.3 指標(biāo)測(cè)定

2.3.1 生產(chǎn)性能

在相同管理?xiàng)l件下，以重復(fù)為單位記錄每天試驗(yàn)蛋雞產(chǎn)蛋總數(shù)，并在試驗(yàn)結(jié)束后計(jì)算平均產(chǎn)蛋率。統(tǒng)計(jì)各組每天的沙皮蛋、破殼蛋數(shù)量，試驗(yàn)結(jié)束后計(jì)算每組平均的沙皮蛋和破殼蛋數(shù)量。記錄每天的采食量，計(jì)算平均日采食量。

平均日采食量=總采食量/（試驗(yàn)天數(shù)×蛋雞數(shù)量）

平均產(chǎn)蛋率=產(chǎn)蛋數(shù)/蛋雞數(shù)量×100%

2.3.2 蛋品質(zhì)

試驗(yàn)結(jié)束時(shí)，每個(gè)重復(fù)隨機(jī)取20 枚雞蛋進(jìn)行蛋品質(zhì)測(cè)定。

采用游標(biāo)卡尺測(cè)量雞蛋最大長(zhǎng)徑和短徑，統(tǒng)計(jì)蛋形指數(shù)；使用蛋品質(zhì)測(cè)定儀對(duì)蛋黃顏色進(jìn)行評(píng)價(jià)；使用蛋黃分離器分離出蛋黃，并稱(chēng)量蛋黃的重量，統(tǒng)計(jì)蛋黃重量；用電子計(jì)重秤稱(chēng)量蛋殼的重量并統(tǒng)計(jì)；使用蛋殼強(qiáng)度測(cè)定儀測(cè)定蛋殼強(qiáng)度；用蛋殼厚度測(cè)定儀分別測(cè)量除去殼膜的蛋殼銳端、中部、鈍端3 個(gè)部位的蛋殼厚度，計(jì)算平均值。

哈氏單位=100×lg（濃蛋白的高度+7.56-1.7×平均蛋重0.37）

2.3.3 腸道菌群數(shù)量

在相同管理?xiàng)l件下，以重復(fù)為單位采集雞糞，并將采好的雞糞放入無(wú)菌試管中，-20 ℃保存。在無(wú)菌條件下采用涂布法進(jìn)行檢測(cè)，試驗(yàn)用1 g雞糞中所含細(xì)菌總數(shù)的對(duì)數(shù)表示[lg（cfu·g-1）]。通過(guò)檢測(cè)對(duì)照組、試驗(yàn)組糞便中細(xì)菌總數(shù)、大腸桿菌數(shù)、沙門(mén)氏菌數(shù)、乳酸菌數(shù)，檢驗(yàn)改良葛根芩連湯在調(diào)節(jié)腸道菌群平衡方面的作用。

2.3.4 腸道氮磷排泄率

在相同的管理?xiàng)l件下，試驗(yàn)結(jié)束前3 d進(jìn)行連續(xù)采樣，以每組的重復(fù)為單位，每24 h 收集一次雞糞（樣品中無(wú)其他雜物），將3 d 糞樣進(jìn)行混合，混勻后按照四分法進(jìn)行取樣100 g，100 g鮮糞中加入10%HCl 進(jìn)行固氮，剩余糞便不加HCl，等待檢測(cè)其他指標(biāo)。

糞樣于65 ℃條件下烘干至恒重，粉碎后制成風(fēng)干樣品，依據(jù)康永剛等[6]的氮磷排泄率檢測(cè)方法，采用凱氏定氮法和分光光度法分別測(cè)定氮、磷的含量，統(tǒng)計(jì)匯總數(shù)據(jù)。

2.4 數(shù)據(jù)處理

采用Excel 2020軟件進(jìn)行試驗(yàn)數(shù)據(jù)整理，使用SPSS 20.0 軟件進(jìn)行單因素方差分析，采用鄧凱氏法（Duncan's）進(jìn)行數(shù)據(jù)多重比較，結(jié)果以“平均值±標(biāo)準(zhǔn)差”表示，P＜0.05表示差異顯著，P＞0.05表示差異不顯著。

3 結(jié)果與分析

3.1 改良葛根芩連湯對(duì)海蘭褐蛋雞生產(chǎn)性能的影響

試驗(yàn)雞生產(chǎn)性能測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表3。由表3 可知，水線(xiàn)中添加不同比例的改良葛根芩連湯對(duì)平均產(chǎn)蛋率和平均日采食量影響均不顯著（P＞0.05），試驗(yàn)3 組平均日產(chǎn)蛋率最高，較對(duì)照組、試驗(yàn)1 組、試驗(yàn)2 組分別提高3.60%、0.64%、0.05%（P＞0.05）。使用不同水平的改良葛根芩連湯平均日沙皮蛋數(shù)逐漸降低，其中試驗(yàn)3組平均日沙皮蛋數(shù)比對(duì)照組降低了28.07%（P＜0.05），試驗(yàn)2組平均日沙皮蛋數(shù)比對(duì)照組降低了27.20%（P＜0.05），但是試驗(yàn)3 組較試驗(yàn)2 組變化差異不顯著（P＞0.05）。考慮到用藥成本，推薦使用試驗(yàn)2組的用量，即水線(xiàn)中添加0.2%的改良葛根芩連湯。

表3 改良葛根芩連對(duì)海蘭褐蛋雞生產(chǎn)性能的影響

3.2 改良葛根芩連湯對(duì)海蘭褐蛋雞蛋品質(zhì)的影響

蛋品質(zhì)測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表4。由表4 可知，水線(xiàn)中加入不同比例改良葛根芩連湯對(duì)蛋重、蛋殼強(qiáng)度、蛋黃顏色、蛋殼厚度、蛋白高度的影響均不顯著（P＞0.05）；水線(xiàn)中添加改良葛根芩連湯對(duì)哈氏單位影響顯著，其中試驗(yàn)3組增加最明顯，較對(duì)照組提高2.64%（P＜0.05），試驗(yàn)2 組次之，較對(duì)照組提高2.19%（P＜0.05），但試驗(yàn)3組較試驗(yàn)2組變化差異不顯著（P＞0.05）。根據(jù)蛋品質(zhì)檢測(cè)數(shù)據(jù)分析，推薦使用試驗(yàn)2組用量，即水線(xiàn)中添加0.2%的改良葛根芩連湯。

表4 改良葛根芩連湯改對(duì)海蘭褐蛋雞蛋品質(zhì)的影響

3.3 改良葛根芩連湯對(duì)海蘭褐蛋雞糞便中菌群的影響

改良葛根芩連對(duì)海蘭褐糞便中菌群數(shù)量的影響見(jiàn)表5。試驗(yàn)組的大腸桿菌、沙門(mén)氏菌等有害菌數(shù)量相比對(duì)照組呈降低的趨勢(shì)，乳酸菌和雙歧桿菌數(shù)量呈上升的趨勢(shì)。與對(duì)照組相比，試驗(yàn)組雞糞便中的大腸桿菌數(shù)分別降低了13.46%（P＞0.05）、25.70%（P＜0.05）和27.27%（P＜0.05），沙門(mén)氏菌數(shù)分別降低了25.04%（P＜0.05）、39.09%（P＜0.05）和38.80%（P＜0.05），乳酸菌數(shù)量分別提高了24.61%（P＜0.05）、35.42%（P＜0.05）和33.71%（P＜0.05），雙歧桿菌數(shù)量分別提高了23.36%（P＜0.05）、34.11%（P＜0.05）和33.33%（P＜0.05）。說(shuō)明改良葛根芩連湯可以調(diào)節(jié)腸道內(nèi)環(huán)境、調(diào)節(jié)腸道菌群平衡。

表5 糞便中菌群種類(lèi)及數(shù)量的檢測(cè)結(jié)果lg(cfu·g-1)

3.4 改良葛根芩連湯對(duì)海蘭褐腸道氮磷排泄率的影響

糞便中氮磷排泄率檢測(cè)結(jié)果見(jiàn)表6。通過(guò)表6可以看出，試驗(yàn)組的氮磷排泄率低于對(duì)照組，其中氮排泄率存在顯著差異，試驗(yàn)2組、試驗(yàn)3組較對(duì)照組分別降低了13.71%（P＜0.05）、14.28%（P＜0.05）；磷排泄率呈下降趨勢(shì)，但較對(duì)照組下降的差異不顯著（P＞0.05）。說(shuō)明水線(xiàn)中加入改良葛根芩連湯能在一定程度上促進(jìn)蛋雞對(duì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的吸收，尤其是含氮營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，減少氮磷的排放，降低對(duì)環(huán)境的污染。

表6 糞便中氮磷排泄率的檢測(cè)結(jié)果%

4 討 論

4.1 改良葛根芩連湯對(duì)海蘭褐蛋雞平均蛋重及產(chǎn)蛋率的影響

對(duì)于蛋雞養(yǎng)殖行業(yè)，提高產(chǎn)蛋率可以獲得最直接的經(jīng)濟(jì)效益，提升海蘭褐蛋雞的生產(chǎn)性能和蛋品質(zhì)是提高養(yǎng)殖效益的關(guān)鍵。中草藥飼料添加劑對(duì)海蘭褐蛋雞的蛋品質(zhì)有一定影響，蛋重、哈氏單位、蛋黃顏色、蛋比重有顯著提高[7]。葛根素在抗氧化、提高免疫力方面有很大的作用，能夠提高雞的生長(zhǎng)性能[8]。王建[9]研究發(fā)現(xiàn)，在日糧中添加50 g·kg-1葛根粉，較未添加組產(chǎn)蛋率提高4.81%，平均蛋重提高5.46%，說(shuō)明葛根粉能夠顯著提高林地海蘭褐蛋雞的生產(chǎn)性能。梁麗芬等[10]研究表明，菌酶協(xié)同發(fā)酵通過(guò)微生物將大分子物質(zhì)分解為小分子，更有利于營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的吸收，提高生產(chǎn)性能，提高飼料的利用率和營(yíng)養(yǎng)價(jià)值。高靖等[11]研究表明，葛根中的葛根異黃酮有雌激素樣作用，能促進(jìn)子宮增重。本試驗(yàn)中，在水線(xiàn)中添加0.2%的改良葛根芩連湯，能顯著降低沙皮蛋數(shù)量，對(duì)平均日采食量和產(chǎn)蛋率有一定影響，但不顯著。這說(shuō)明中藥和益生菌具有協(xié)同作用，能夠提高雞的產(chǎn)蛋率和降低沙皮蛋數(shù)，可在一定程度上提高產(chǎn)蛋性能。

4.2 改良葛根芩連湯對(duì)海蘭褐蛋雞蛋品質(zhì)的影響

雞蛋的外殼品質(zhì)和蛋黃顏色是顯示蛋品質(zhì)的重要指標(biāo)之一，也是消費(fèi)者較為關(guān)注的指標(biāo)，蛋雞產(chǎn)蛋期的生產(chǎn)性能和蛋品質(zhì)會(huì)受很多因素的影響，例如環(huán)境、營(yíng)養(yǎng)等。有研究表明，中草藥中除含有多種氨基酸、維生素、蛋白質(zhì)等有效成分及營(yíng)養(yǎng)成分外，還富有鈣、磷等礦物質(zhì)、植物色素及多種微量元素[12-13]。營(yíng)養(yǎng)成分有助于蛋白質(zhì)沉淀；礦物質(zhì)可以轉(zhuǎn)化為蛋殼成分，可以提升蛋殼質(zhì)量；植物色素可以通過(guò)機(jī)體吸收后轉(zhuǎn)移到卵巢中，改善蛋黃顏色。李鵬升[14]研究表明，日糧中添加0.2%的中草藥飼料添加劑，對(duì)蛋品質(zhì)有顯著提高。在水線(xiàn)中添加0.2%的改良葛根芩連湯對(duì)哈氏單位有明顯提高，對(duì)雞蛋品質(zhì)有一定改善作用。

4.3 改良葛根芩連湯對(duì)海蘭褐蛋雞腸道菌群的影響

機(jī)體對(duì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的吸收和消化主要在胃腸道中進(jìn)行，腸道中的微生物能夠較好地消化一些營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，促進(jìn)生長(zhǎng)和發(fā)育，并且能夠?qū)τ泻M(jìn)行抵御，從而提高免疫水平[15]；宋瓊莉等[16]研究表明，丁酸鈉、黃芪素和復(fù)合益生菌聯(lián)合添加替代抗生素，結(jié)果表明，在飼糧中添加500 mg·kg-1丁酸鈉、500 mg·kg-1黃芪素和20 mg·kg-1復(fù)合益生菌，改善了寧都黃雞小腸的結(jié)構(gòu)，維持腸道的平衡，促進(jìn)了腸道中的菌群平衡分布和生長(zhǎng)。顧艷麗等[17]研究發(fā)現(xiàn)，發(fā)酵中藥對(duì)禽腸道菌群結(jié)構(gòu)有調(diào)節(jié)作用，可促進(jìn)有益菌的生長(zhǎng)，降低有害菌的滋生。葛根素對(duì)大腸桿菌、金黃色葡萄球菌等有害菌有很好的抑制作用，對(duì)在禽上引起腹瀉的大腸桿菌有較好的抑制作用和抑菌效果[18]；有研究發(fā)現(xiàn)，200 μg·mL-1葛根素和1 μg·mL-1黃芩苷對(duì)大腸桿菌有很強(qiáng)的抑制作用，能降低大腸桿菌的數(shù)量，可抑制大腸桿菌外毒素的分泌，降低黏附性，保護(hù)腸道結(jié)構(gòu)[19]。

4.4 改良葛根芩連湯對(duì)海蘭褐蛋雞氮磷排泄的影響

氨氣是對(duì)蛋雞危害較嚴(yán)重的一種有害氣體，由于雞的消化道較短，飼糧的消化吸收有限，大部分營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)未被機(jī)體消化吸收而直接排出體外，其中含有糖類(lèi)物質(zhì)、脂肪、蛋白質(zhì)、礦物質(zhì)、維生素及其代謝產(chǎn)物等，組成的復(fù)雜化合物，尤其以蛋白質(zhì)含量最高。馬曉婷等[20]研究表明，部分未吸收的蛋白質(zhì)會(huì)以氨氣和硫化氫等氣體為主的代謝產(chǎn)物排泄體外，從而污染雞舍空氣，日糧中添加乳酸菌可以降低有害氣體的排放，提高日糧轉(zhuǎn)化率；元娜等[21]研究了復(fù)合微生態(tài)制劑對(duì)蛋種雞舍內(nèi)氨氣濃度、養(yǎng)分吸收率及腸道菌群的影響，結(jié)果表明試驗(yàn)期末試驗(yàn)組雞舍內(nèi)氨氣濃度比對(duì)照組顯著下降。謝謙等[22]研究表明，肉雞飼糧中添加蛋白酶和益生菌復(fù)合制劑能夠顯著提高粗蛋白利用率，提高腸道菌群中有益菌的數(shù)量，有降低糞便中氨氣含量的趨勢(shì)。趙玉娥[23]研究表明，微生物發(fā)酵飼料可以改善雞腸道菌群平衡，提高飼料的轉(zhuǎn)化率，減少氮磷的排泄率。本試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，改良葛根芩連湯可以顯著降低蛋雞糞中氮磷排泄率，與上述結(jié)果基本一致。有可能是飼料中大分子物質(zhì)被酶解為易被吸收的小肽、氨基酸等，降低了腸道中未消化的蛋白質(zhì)含量，減少了氨氣和有毒物質(zhì)在大腸內(nèi)的產(chǎn)生。申慧敏等[24]研究發(fā)現(xiàn)，益生菌通過(guò)降低腸道pH，豐富腸道菌群，促進(jìn)氮沉積以及降低糞尿中的蛋白質(zhì)含量，從而減少氨氣排量。同時(shí)，結(jié)合本試驗(yàn)中氮的排泄率檢測(cè)結(jié)果分析，明顯表明益生菌和中藥制劑有協(xié)同作用，改良葛根芩連湯中添加益生菌促進(jìn)蛋白質(zhì)的吸收，降低氮磷的排泄，從而降低氨氣的排放，減少對(duì)環(huán)境的污染。

5 結(jié) 論

綜上所述，推薦在海蘭褐水線(xiàn)中添加0.2%的改良葛根芩連湯，能夠顯著提高海蘭褐蛋雞的消化吸收，降低氮磷排泄率，改善腸道益生菌群、產(chǎn)蛋率、蛋品質(zhì)，益生菌通過(guò)競(jìng)爭(zhēng)占位、免疫調(diào)節(jié)、抗菌蛋白抑制或殺滅腸道內(nèi)的病原菌、黏膜修復(fù)因子修復(fù)受損腸道黏膜，促進(jìn)對(duì)飼料的消化與利用。