段曉旭

（河南宏力醫(yī)院輸血科，河南 新鄉(xiāng) 453400）

在對危急重癥患者進(jìn)行救治時，輸血已經(jīng)成為不可替代的操作[1]。但是，隨著輸血在臨床上的應(yīng)用越來越普遍，也發(fā)現(xiàn)其存在巨大的潛在風(fēng)險，例如輸血后出現(xiàn)輸血感染、輸血不良反應(yīng)等不良情況，嚴(yán)重威脅患者的生命安全[2]。相關(guān)研究指出[3]，輸血相容性檢查可有效降低患者輸血后出現(xiàn)相關(guān)不良反應(yīng)的風(fēng)險，可明顯提高患者輸血的安全性。因此，輸血前進(jìn)行輸血相容性檢測至關(guān)重要，已成為確保輸血安全的關(guān)鍵環(huán)節(jié)之一。但丁琴麗[4]等人在研究中指出，輸血相容性檢測在對ⅠgG 及ⅠgM 性質(zhì)抗體進(jìn)行檢測時，誤檢及漏檢率相對較多。

微柱凝膠法是臨床中較為常見的輸血相容性檢測方式之一，在檢測ⅠgG 及ⅠgM 性質(zhì)抗體時存在明顯優(yōu)越性，并且具有血標(biāo)本用量少、可長時間保存、敏感性較高、操作簡單方便以及結(jié)果觀察容易等特點，其在臨床應(yīng)用中已經(jīng)取得廣泛認(rèn)可[5]。近年來，臨床中發(fā)現(xiàn)運用微柱凝膠法對患者的血標(biāo)本進(jìn)行血型鑒定、交叉配血以及抗體篩查等檢測時，偶有弱凝集現(xiàn)象出現(xiàn)而對檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性產(chǎn)生影響，從而給輸血操作帶來一定安全隱患[6]。

基于此，作者將46 例采用微柱凝膠法進(jìn)行ABO 血型鑒定、交叉配血以及抗體篩查試驗后表現(xiàn)為弱凝集的患者血標(biāo)本納入研究，并進(jìn)行相關(guān)處理后觀察血標(biāo)本變化，以期為提高輸血相容性檢測的準(zhǔn)確率提高理論依據(jù)和參考。

1 資料與方法

1.1 一般資料

經(jīng)過我院倫理委員會審批，選取2020 年9 月-2022 年12 月經(jīng)微柱凝膠法應(yīng)用于ABO 血型鑒定、交叉配血以及抗體篩查試驗后表現(xiàn)為弱凝集的46 例患者血標(biāo)本作為研究對象。46 例患者中，男性25 例，女性21 例；年齡范圍為2～75 歲。其中ABO 血型檢測卡、抗人球蛋白檢測卡由長春博迅生物技術(shù)有現(xiàn)公司提供，ABO 反定型紅細(xì)胞、抗體篩檢細(xì)胞由長春博德生物技術(shù)有限責(zé)任公司提供，聚凝胺試劑、RhD 試劑均從珠海貝索生物技術(shù)有限公司購買；抗A1 抗體、抗A 與抗B 單克隆的抗體血型、抗體鑒定譜細(xì)胞及抗H 抗體等試劑均從上海血液醫(yī)藥公司購買。

1.2 方法

制備血標(biāo)本 操作者抽取患者3～4mLEDTA鉀鹽抗凝全血，隨后將其緩慢注入試管并充分混合；將其放置于37℃水中20～30 min，可離心分離出血漿和紅細(xì)胞；取出紅細(xì)胞并將其配制成不同濃度（10 mL·L-1～40 mL·L-1）的懸液。

鑒定Rh、ABO 血型 將10μL 的紅細(xì)胞懸液（濃度為10 mL·L-1）分別加在A、B、D 及Ctrl 的凝膠卡上，離心處理10min 后，觀察結(jié)果。ABO 反定型檢測：將50 μL 血漿分別加入A1、B的凝膠卡上，隨后再將50 μL 的A1 細(xì)胞（濃度為10 mL·L-1）、B 細(xì)胞（濃度為10 mL·L-1）分別加在A1、B 的凝膠卡上，離心處理10 min 后，觀察結(jié)果。

抗體篩選 在凝膠卡上加入25 μL 的患者血漿，隨后再加入25 μL 的抗體篩選細(xì)胞，將其放置于37℃的環(huán)境中孵育15 min，進(jìn)行離心處理10 min 后觀察結(jié)果。結(jié)果顯示為抗體篩選陽性的血標(biāo)本，需選取譜細(xì)胞進(jìn)一步鑒定抗體特異性。

交叉配血試驗 將受血者的血漿加至供血者的紅細(xì)胞懸液中進(jìn)行主側(cè)配血；將受血者的紅細(xì)胞懸液加至供血者的血漿中進(jìn)行次側(cè)配血，并將其置于37℃的環(huán)境中孵育15 min，并進(jìn)行10 min的離心處理后，觀察結(jié)果。

抗人球蛋白試驗 對患者的紅細(xì)胞進(jìn)行3 次洗滌處理后，配制成濃度為20 mL·L-1的懸液，隨后將其加至凝膠卡中，進(jìn)行離心處理10 min 后判斷結(jié)果。

處理弱凝集血標(biāo)本 對經(jīng)相關(guān)處理后顯示為弱凝集的患者血標(biāo)本進(jìn)行增加血清量或紅細(xì)胞、37℃洗滌紅細(xì)胞、兩次離心血清標(biāo)本以及吸收放散試驗，隨后再使用間接抗人球蛋白法（Ⅰndirect antiglobulin test，ⅠAT) 及鹽水法作對照檢測。

2 結(jié)果

2.1 80 例患者血標(biāo)本弱凝集現(xiàn)象的影響因素

在對80 例患者的血標(biāo)本進(jìn)行微柱凝膠法檢測其輸血相容性后，凝集強(qiáng)度顯示為1+w～2+w中，有19 例（23.75%）ABO 血型的抗原性較弱，有7 例（8.75%）為ABO 亞血型，有9 例（11.25%）ABO 血型的抗體效價較低，有15 例（18.75%）纖維蛋白有所增高，有11 例（13.75%）高效價冷凝激素，有19 例（23.75%）自身免疫性抗體。見表1。

表1 46 例患者的血標(biāo)本經(jīng)微柱凝膠法結(jié)果及影響原因

2.2 正反定型和交叉配血結(jié)果

在對80 例患者的血標(biāo)本進(jìn)行微柱凝膠法檢測其輸血相容性中，出現(xiàn)55 例（68.75%）ABO 血型正反定型不相符，出現(xiàn)25 例（31.25%）抗體篩選陽性。在交叉配血中出現(xiàn)不合的有 49 例（61.25%），其中包含28 例（57.14%）抗體篩選為陽性，包含21 例（42.86%）正反定型為不符合。見表1。

2.3 直接抗人球蛋白法（ Direct antiglobulin test，DAT）檢測結(jié)果

11 例（13.75%）高效價冷凝激素的血標(biāo)本經(jīng)DAT 檢測后均顯示為抗C3d 陽性，19 例（23.75%）自身免疫性抗體的血標(biāo)本經(jīng)DAT 檢測后均顯示為抗ⅠgG 陽性。詳見表1。

3 討論

輸血是臨床中較為常見的醫(yī)療技術(shù)之一，其在救治患者時起著關(guān)鍵作用；隨著輸血操作在臨床上的運用越來越廣泛，輸血安全問題也逐漸暴露出來并受到業(yè)界關(guān)注[7]。WHO 早在2013 年指出，血液無比寶貴，是人類最為稀缺的資源[8]。因此，在輸血前進(jìn)行輸血相容性檢測尤為重要。目前，關(guān)于輸血相容性的檢測方式主要包括凝聚胺法、微柱凝膠法以及食管抗球蛋白法等，其中微柱凝膠法是通過改變凝膠濃度以控制其間隙大小，確保期間的空間位阻，利用紅細(xì)胞及相關(guān)抗體的反應(yīng)，采用低速離心處理后，觀察凝膠卡的情況判斷結(jié)果。相關(guān)研究證實[9]，微柱凝膠法具有便于標(biāo)準(zhǔn)化、結(jié)果穩(wěn)定、重復(fù)性好、結(jié)果便于保存以及特異性高等特點，是臨床中應(yīng)用較為普遍且有效的檢測方法。但朱潔好等人[10]在研究中指出，微柱凝膠法在進(jìn)行相容性檢測時容易出現(xiàn)弱凝集現(xiàn)象，對檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性產(chǎn)生影響。為了進(jìn)一步驗證，作者將存在弱凝集現(xiàn)象的46 例患者血標(biāo)本納入研究，并對血標(biāo)本進(jìn)行相關(guān)處理，以期為臨床輸血前檢測工作提供參考。

血標(biāo)本經(jīng)微柱凝膠法處理后，采用以下方式觀察結(jié)果：若凝膠卡的上面或者中段出現(xiàn)凝集紅細(xì)胞，提示為陽性；在進(jìn)行離心處理時，紅細(xì)胞（未與抗體發(fā)生結(jié)合）穿過凝膠間隙，出現(xiàn)在凝膠卡底部，提示為陰性；同時根據(jù)凝塊在凝膠卡上分布程度以多少來判定凝集強(qiáng)弱，其中在凝膠卡上出現(xiàn)上面的凝集帶，同時從中至下面由游離紅細(xì)胞形成條狀，提示為假凝集或者弱凝集，用1+～2+w表示。本研究結(jié)果顯示：80 例患者的血標(biāo)本凝集強(qiáng)度顯示為1+w～2+w中，有19 例（23.75%）ABO 血型的抗原性較弱，有7 例（8.75%）為ABO亞血型，有9 例（11.25%）ABO 血型的抗體效價較低，有15 例（18.75%）纖維蛋白有所增高，有11 例（13.75%）高效價冷凝激素，有19 例（23.75%）自身免疫性抗體。隨后，對血標(biāo)本進(jìn)行增加血清量或紅細(xì)胞、37℃洗滌紅細(xì)胞、兩次離心血清標(biāo)本以及吸收放散試驗后，可排除相關(guān)影響因素對弱凝集現(xiàn)象的干擾。

分析原因：其一，患者ABO 血型的抗原性較弱產(chǎn)生的原因包括先天性的與后天獲得性，例如惡性腫瘤及急性白血病等引起的血型抗原性降低，從而引起患者的ABO 血型出現(xiàn)正反型不相符。張勇萍等人在ABO 疑難血型鑒定的應(yīng)用研究中指出，將紅細(xì)胞懸液濃度增加，例如吸收放散試驗，可改善血型抗原減弱情況。其二，ABO 亞血型主要包括B（A）、A 亞型、A（B）及B 亞型等，其產(chǎn)生原因為A、B 基因位點發(fā)生突變，進(jìn)而合成氨基酸相關(guān)序列出現(xiàn)變異。而相關(guān)血標(biāo)本出現(xiàn)的血清學(xué)特點為：在對患者的血標(biāo)本進(jìn)行ABO 血型的正反定型時，A 抗原及抗A 抗體或者B 抗原及抗B 抗體出現(xiàn)凝集或為弱凝集，從而導(dǎo)致輸血相容性檢查的誤診，其中常把B 亞型或A 亞型錯判為O 型。其三，對患者的血標(biāo)本進(jìn)行ABO 血型的正反定型時，抗體效價丟失或者丟失、血型的抗體量出現(xiàn)合成不足，也會導(dǎo)致正反定型不相符的結(jié)果。相關(guān)研究已證實，置換血清或增加血清量，并將其置于4℃環(huán)境中反應(yīng)15min，隨后進(jìn)行離心處理，可改善抗體效價低引起的正反定型不相符。其四，患者的纖維蛋白出現(xiàn)增高會影響血標(biāo)本的抗凝效果，致使多數(shù)紅細(xì)胞穿過凝膠間隙沉降至凝膠卡的下面。其五，7 例（15.22%）高效價冷凝激素的血標(biāo)本經(jīng)DAT 檢測后均顯示為抗C3d 陽性。相關(guān)研究指出，高效價冷的自身抗體在體外條件并不高的時候，補(bǔ)體成分對紅細(xì)胞會出現(xiàn)致敏現(xiàn)象，從而出現(xiàn)DAT 及ⅠAT 陽性結(jié)果，但是相關(guān)陽性結(jié)果對體內(nèi)情況并沒有代表意義。梁路石等人指出，高效抗體-Ⅰ的患者若進(jìn)行多次輸血可出現(xiàn)同種抗體的產(chǎn)生，在一定程度上可增大鑒定抗體特異性的難度，并且當(dāng)室溫效價≥32或者血標(biāo)本的效價≥512 時可能導(dǎo)嚴(yán)重的輸血反應(yīng)。因此，患者的血標(biāo)本若出現(xiàn)增加的冷凝集效價，盡量避免進(jìn)行輸血治療，必需使用時可選取洗滌的同型紅細(xì)胞，并放置于室溫內(nèi)確定復(fù)溫后在進(jìn)行緩慢輸注。其六，F(xiàn)errer G 等人在一項慢性淋巴細(xì)胞白血病發(fā)展為自身免疫性溶血性貧血時MicroRNA 的表達(dá)研究中指出，自身免疫性疾病及惡性腫瘤等可引起ⅠAT 陽性的患者血清中，經(jīng)常會存在自身抗體，引起自身紅細(xì)胞致敏或者被吸附，從而發(fā)生紅細(xì)胞凝集。遇到此類情況時，可利用吸收試驗將血清中的自身抗體去除，對同種抗體進(jìn)行檢測后，對去除患者自體抗體的血清完成主側(cè)配血；同時將放散試驗應(yīng)用于患者的紅細(xì)胞中，隨后完成次側(cè)配血。

綜上所述，ABO 血型的抗原性較弱、ABO 亞血型、ABO 血型的抗體效價較低、纖維蛋白有所增高以及自身免疫性抗體是影響微柱凝膠法發(fā)生弱凝集現(xiàn)象的相關(guān)因素；可在微柱凝膠法檢測前，通過增加血清量或紅細(xì)胞，37℃洗滌紅細(xì)胞，對血清標(biāo)本離心兩次以及吸收放散試驗等處理，能有效排除上述因素對發(fā)生弱凝集現(xiàn)象的干擾。本研究仍存在不足之處：血標(biāo)本選取較少，在進(jìn)行結(jié)果觀察時，可能存在偶然性，有待擴(kuò)大樣本量進(jìn)一步驗證。