趙萌 朱明儒

【摘要】目的：建立注射用伏立康唑制劑中倍他環(huán)糊精含量測定方法，考察該制劑中倍他環(huán)糊精的影響因素。方法：參考《中華人民共和國藥典（2020年版）》四部羥丙基倍他環(huán)糊精中有關(guān)物質(zhì)測定方法，采用HPLC，示差折光檢測器測定倍他環(huán)糊精，參考《中華人民共和國藥典（2020年版）》四部原料藥物與制劑穩(wěn)定性試驗指導原則建立影響因素試驗。結(jié)果：建立測定方法并對該方法進行方法學驗證，結(jié)果該方法專屬性好、檢測限和定量限滿足測定要求、線性關(guān)系良好、準確度高，方法可行，影響因素試驗中高溫條件下倍他環(huán)糊精含量明顯增加。結(jié)論：本方法為注射用伏立康唑中倍他環(huán)糊精的含量測定提供參考，影響因素試驗提示企業(yè)在生產(chǎn)及貯存過程中應(yīng)關(guān)注溫度變化。

【關(guān)鍵詞】倍他環(huán)糊精；示差檢測器；注射用伏立康唑；影響因素

【DOI編碼】10.3969/j.issn.1674-4977.2023.05.031

Determination of Beta-cyclodextrin in Voriconazole for Injection by HPLC

ZHAO Meng， ZHU Mingru

（Jilin Institute for Drug Control， Changchun 130000， China）

Abstract：Objective： To establish a method for the determination of beta-cyclodextrin in voriconazole for injection， and investigate the influencing factors of beta-cyclodextrin in the preparation. Methods：Referring to the determination method of related substances in hydroxypropyl beta-cyclodextrin in the fourth part of the "Chinese Pharmacopoeia 2020 edition"， the beta-cyclodextrin was determined by HPLC and differential refractive detector， and the influence factor test was established by referring to the guiding principles of the stability test of raw materials and preparations in the fourth part of the "Chinese Pharmacopoeia 2020 edition". Results： The determination method was established and its methodology was verified. The results showed that the method was specific， the detection limit and the limit of quantification met the determination requirements， the linear relationship was good， the accuracy was high， and the method was feasible. The content of beta-cyclodextrin was significantly increased under high temperature in the influence factor test. Conclusion：This method provides a reference for the determination of beta-cyclodextrin in voriconazole for injection， and the test of influencing factors suggests that enterprises should pay attention to temperature changes during production and storage.

Key words：beta-cyclodextrin； differential detector； voriconazole for injection； influence factor

伏立康唑為難溶性藥用原料，其在水中的溶解度僅為0.2 mg/mL（pH=3）[1]。目前，市售注射用伏立康唑多添加輔料羥丙基倍他環(huán)糊精或磺丁倍他環(huán)糊精，輔料與伏立康唑形成包合物，增加伏利康唑的水溶性及穩(wěn)定性[2-4]，以滿足注射用制劑要求。經(jīng)了解，環(huán)糊精類輔料添加量均在伏立康唑量的15倍左右，由此研究輔料帶來的雜質(zhì)具有重要意義。倍他環(huán)糊精為該類輔料的主要降解雜質(zhì)，其用于注射劑，安全性需進一步考察。因此，參照《中華人民共和國藥典》2020年版四部[5]羥丙基環(huán)糊精檢驗標準中倍他環(huán)糊精檢驗方法對注射用伏立康唑中倍他環(huán)糊精的含量進行測定，并對該方法進行方法學驗證。對樣品進行影響因素試驗，考察不同條件對注射用伏立康唑制劑中倍他環(huán)糊精的影響。

1建立測定方法

1.1實驗儀器

Waters e2695高效液相色譜儀；Mettler MS105電子天平（0.00001 g）。

1.2實驗試劑

甲醇，來源：Fisher Scientific，批號：185860；純化水，實驗室自制；倍他環(huán)糊精對照品，來源：中國食品藥品檢定研究院，批號：100317-202005，含量89.0%。

1.3色譜條件

色譜柱：苯基鍵合硅膠柱（Venusil XBP Polar-Phenyl 4.6×250 mm，5μm）；柱溫：40℃；流速：1.5 mL/min；進樣量：20μL；流動相：甲醇-水（90∶10）；示差折光檢測器：檢測器溫度40℃。

1.4分析方法

對照品溶液的制備：取倍他環(huán)糊精對照品適量，精密稱定，加流動相溶解并定量稀釋制成每1 mL中約含倍他環(huán)糊精0.5 mg的溶液，作為對照品溶液。

供試品溶液制備：取注射用伏立康唑制劑適量，精密稱定，加流動相溶解并定量稀釋制成每1 mL中約含0.1 g的溶液，作為供試品溶液。

1.5測定法

分別精密量取對照品溶液和供試品溶液各20μL，注入液相色譜儀，記錄色譜圖，按外標法以峰面積計算，即得。

1.6方法學驗證

1.6.1專屬性

取溶劑作為陰性樣品溶液。精密量取陰性樣品溶液、供試品溶液、對照品溶液各20μL，分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖。詳見圖1至圖3。

測定結(jié)果顯示供試品溶液色譜圖中有與對照品溶液保留時間一致的色譜峰，且與相鄰色譜峰分離良好，陰性樣品溶液在倍他環(huán)糊精出峰處無干擾，本方法專屬性良好。

1.6.2定量限

取倍他環(huán)糊精對照品（0.0058 mg/mL），作為定量限溶液。精密量取20μL，注入液相色譜儀，記錄色譜圖，倍他環(huán)糊精的峰高約為基線噪音的10倍，計算定量限為133.27 ng。

1.6.3檢測限

取倍他環(huán)糊精對照品（0.0019 mg/mL），作為檢測限溶液。精密量取20μL，注入液相色譜儀，記錄色譜圖，倍他環(huán)糊精的峰高約為基線噪音的3倍，計算檢測限為42.65 ng。

1.6.4線性

分別取對照品適量，置適量量瓶中，用流動相稀釋至刻度，搖勻，制成每1 mL約含倍他環(huán)糊精0.1、0.25、0.4、0.5、0.6、0.75 mg的溶液，作為線性系列溶液。精密量取定量限溶液與線性系列標準溶液各20μL，分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖，以對照品濃度為橫坐標，以峰面積為縱坐標繪制標準曲線，詳見圖4。

結(jié)果表明，倍他環(huán)糊精的濃度在0.0066～0.7689 mg/mL范圍內(nèi)與峰面積呈良好的線性關(guān)系，y=88595x-281.28，R2=1。

1.6.5精密度試驗

取倍他環(huán)糊精對照品溶液（0.5 mg/mL），分別于0、3、6、9、12和15小時，精密量取20μL，注入液相色譜儀，記錄色譜圖，計算精密度為0.1%。

1.6.6重復(fù)性試驗

取供試品（批號：201001），按擬訂方法獨立測定6份。結(jié)果RSD為1.6%。表明該方法重復(fù)性良好。

1.6.7準確度試驗

分別精密稱取注射用伏立康唑（批號：201001）約1.0 g，每個生產(chǎn)企業(yè)9份，至10 mL量瓶中，其中3份精密加入倍他環(huán)糊精對照品使制成0.25 mg/mL，另3份精密加入對照品使制成0.5 mg/mL，最后3份精密加入對照品使制成0.6 mg/mL，作為準確度試驗溶液。精密量取上述溶液各20μL，分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖，計算回收率，結(jié)果平均回收率100.47%，RSD：0.5%，準確度良好。

2樣品測定

取4批樣品，按照擬定的倍他環(huán)糊精測定方法，測定樣品中倍他環(huán)糊精的含量，結(jié)果見表1。

3影響因素試驗

3.1試驗方法

1）高溫考察：取選定樣品，分別置CZ-A-80C恒溫恒濕試驗儀中，考察制劑在60℃條件下放置5天、10天、30天時主要考察指標同0天的變化情況。

2）高濕考察：取選定樣品，分別置下部放置KNO3飽和溶液的干燥器中，考察制劑在92.5%RH條件下放置5天、10天、30天時主要考察指標同0天的變化情況。

3）強光照射考察：取選定樣品，分別置BXZ-250型綜合藥品穩(wěn)定性試驗箱中，考察制劑在4500 lx條件下放置5天、10天、30天時主要考察指標同0天的變化情況。

3.2試驗結(jié)果

樣品在高溫、高濕及光照條件下，倍他環(huán)糊精測定結(jié)果見表2。倍他環(huán)糊精的量在高溫條件下變化顯著，見圖5，高濕及光照條件下變化較小，幾乎不變。

4結(jié)論

經(jīng)方法學驗證，結(jié)果上述注射用伏立康唑中倍他環(huán)糊精測定方法專屬性好、檢測限和定量限滿足測定要求、線性關(guān)系良好、準確度高，方法可行。該方法為注射用伏立康唑中倍他環(huán)糊精的含量測定提供參考。影響因素試驗中倍他環(huán)糊精的量在高溫條件下變化顯著，提示企業(yè)在生產(chǎn)及貯存過程中應(yīng)關(guān)注溫度變化。

【參考文獻】

[1]馮彩霞，修憲，田偉，等.注射用伏立康唑磺丁基醚倍他環(huán)糊精包合物工藝開發(fā)和質(zhì)量研究[Z].2018.

[2]修憲，田偉，陳東健，等.磺丁基醚-β-環(huán)糊精對伏立康唑增溶作用的考察[J].中國藥師，2014，17（9）：1457-1460.

[3]谷福根，高永良，崔福德.磺丁基醚-β-環(huán)糊精及其在藥劑學中的應(yīng)用[J].中國新藥雜志，2004（1）：15-19.

[4] O. DAS，V. M. GHATEAND S. LEWIS. Utility of Sulfobutyl Etherβ-Cyclodextrin Inclusion Complexes in Drug Delivery[J].Indian J Pharm Sci，2019，81（4）：589-600.

[5]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典（2020版）[M].北京：中國科技出版社，2020：742.

【作者簡介】

趙萌，女，1990年出生，主管藥師，研究方向為藥品檢驗與研究。朱明儒，女，1992年出生，初級工程師，研究方向為藥品檢驗與研究。

（編輯：侯睿琪）