楊紅,張亞磊,丁怡馨,王子儀

(平煤神馬醫(yī)療集團(tuán)總醫(yī)院 病理科,河南 平頂山 467099)

乳腺癌是女性發(fā)病率最高的惡性腫瘤,且其發(fā)病率呈逐年上升趨勢(shì),但早期乳腺癌癥狀多不明顯,極易被忽視而未及時(shí)就醫(yī),導(dǎo)致多數(shù)患者確診時(shí)已出現(xiàn)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移,增加治療難度,影響患者預(yù)后[1-2]。因此,尋找有效指標(biāo)輔助評(píng)估乳腺癌病情程度、預(yù)后情況并為治療提供新靶點(diǎn)有重要意義。雙皮質(zhì)素樣激酶1(doublecortin like kinase 1,DCLK1)是一種絲氨酸/蘇氨酸激酶,且有研究指出,抑制DCLK1活性便可抑制腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng),且DCLK1在多種癌癥組織中陽(yáng)性表達(dá)[3-4]。叉頭框蛋白C1(forkhead box protein C1,FOXC1)是forkhead box轉(zhuǎn)錄因子超家族的重要成員,可參與腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)、分化和遷移,且可調(diào)控細(xì)胞活性,從而調(diào)控腫瘤細(xì)胞的侵襲與轉(zhuǎn)移[5]。由此,推測(cè)DCLK1、FOXC1的表達(dá)可能與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移存在一定關(guān)系?；诖?本研究觀察乳腺癌組織中DCLK1、FOXC1的表達(dá)情況,并分析其與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的關(guān)系,旨在為乳腺癌早期診療提供思路。

1 對(duì)象與方法

1.1 研究對(duì)象

選取平煤神馬醫(yī)療集團(tuán)總醫(yī)院病理科2020年1月至2022年12月乳腺癌患者手術(shù)標(biāo)本,對(duì)其進(jìn)行常規(guī)病理檢查及病理分析,采用免疫組化染色的方法對(duì)其進(jìn)行DCLK1、FOXC1檢測(cè),同時(shí)選取距離癌組織5 cm的癌旁組織做對(duì)照。本研究方案經(jīng)醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。(1)納入標(biāo)準(zhǔn):①符合《中國(guó)抗癌協(xié)會(huì)乳腺癌診治指南與規(guī)范(2017年版)》[6]中相關(guān)診斷標(biāo)準(zhǔn),經(jīng)病理學(xué)檢查確診為非浸潤(rùn)性癌或浸潤(rùn)性癌;②根據(jù)《實(shí)用腫瘤內(nèi)科治療》[7]中乳腺癌T臨床分期診斷為T1、T2;③初診初治;④單側(cè)腫瘤;⑤認(rèn)知功能正常;⑥患者知情并簽署同意書。(2)排除標(biāo)準(zhǔn):① 2個(gè)月內(nèi)接受過化療、放療等抗腫瘤治療;②合并其他惡性腫瘤;③合并免疫系統(tǒng)疾病;④合并嚴(yán)重精神疾病;⑤合并血液系統(tǒng)疾病;⑥合并嚴(yán)重感染;⑦合并重要器官功能衰竭。根據(jù)上述納入、排除標(biāo)準(zhǔn)共納入86例乳腺癌患者,年齡45～68(57.48±4.61)歲;轉(zhuǎn)移情況淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移45例,無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移41例;T臨床分期T131例,T255例;病理類型非浸潤(rùn)性癌21例,浸潤(rùn)性癌65例。

1.2 一般資料收集方法

設(shè)計(jì)一般資料調(diào)查表,詳細(xì)調(diào)查并統(tǒng)計(jì)86例乳腺癌患者的臨床資料。包括:年齡(<45歲、≥45歲)、體重指數(shù)(<24 kg·m-2,≥24 kg·m-2)、腫瘤家族病史(有、無)、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況(未轉(zhuǎn)移、轉(zhuǎn)移)、T臨床分期(T1、T2)、病理類型(非浸潤(rùn)性癌、浸潤(rùn)性癌)、病理組織分級(jí)(Ⅰ級(jí)+Ⅱ級(jí)、Ⅲ級(jí))、腫瘤部位(右側(cè)、左側(cè))。

1.3 DCLK1、FOXC1檢測(cè)方法

采用免疫組織化學(xué)SP法對(duì)所有組織標(biāo)本進(jìn)行檢測(cè),免疫組織化學(xué)染色均使用全自動(dòng)免疫組化儀(上海華雅思創(chuàng)生物科技有限公司,型號(hào)Autosttainer360),所有操作過程嚴(yán)格按照說明書步驟進(jìn)行。使用體積分?jǐn)?shù)10%的中性緩沖福爾馬林液對(duì)所有組織標(biāo)本進(jìn)行固定,上脫水機(jī)前不少于6 h,采用石蠟包埋,石蠟組織切成3 μm,連續(xù)切片3張,一張做HE染色,其余2張分別做DCLK1、FOXC1檢測(cè)。石蠟切片在60 ℃烤箱內(nèi)烘烤60 min,脫蠟液脫蠟,乙醇化,蒸餾水沖洗干凈,浸入磷酸鹽緩沖液中備用;使用過氧化氫溶液在37 ℃下孵育10 min;加熱修復(fù)60 min,滴加一抗原在37 ℃下孵育60 min;DCLK1采用兔抗人單克隆抗體,FOXC1采用兔抗人多克隆抗體(抗體購(gòu)于abcam公司,均為濃縮型試劑,DCLK1 1∶100稀釋,FOXC1 1∶500稀釋),二抗為免疫顯色試劑,每張切片檢測(cè)都用已知的陽(yáng)性組織做陽(yáng)性對(duì)照,以磷酸鹽緩沖溶液代替一抗做陰性對(duì)照,機(jī)器完成染色后,自來水沖洗,梯度酒精脫水,二甲苯透明,中性樹膠封固,光鏡下觀察。

1.4 結(jié)果判定

所有病理切片均由2名高年資病理科醫(yī)生采用雙盲法閱片,在顯微鏡下觀察組織染色情況。DCLK1染色陽(yáng)性定位于細(xì)胞質(zhì),FOXC1染色陽(yáng)性定位于細(xì)胞核,呈棕褐色,呈顆粒狀。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

2 結(jié)果

2.1 DCLK1、FOXC1在乳腺癌組織中的表達(dá)情況

癌組織中DCLK1、FOXC1陽(yáng)性表達(dá)率高于癌旁組織,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表1。

表1 DCLK1、FOXC1在乳腺癌組織中的表達(dá)情況[n(%)]

2.2 不同臨床資料患者癌組織中DCLK1表達(dá)情況

有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、T臨床分期為T2患者癌組織中DCLK1陽(yáng)性表達(dá)率高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、T臨床分期為T1患者,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);不同年齡、體重指數(shù)、腫瘤家族病史、疾病類型、病理組織分級(jí)、腫瘤部位的患者癌組織中DCLK1陽(yáng)性表達(dá)率比較,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見表2。

表2 不同臨床資料患者癌組織中DCLK1表達(dá)情況[n(%)]

2.3 不同臨床資料患者癌組織中FOXC1表達(dá)情況

有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、T臨床分期為T2患者癌組織中FOXC1陽(yáng)性表達(dá)率高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、T臨床分期為T1患者,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);不同年齡、體重指數(shù)、腫瘤家族病史、疾病類型、病理組織分級(jí)、腫瘤部位的患者癌組織中FOXC1陽(yáng)性表達(dá)率比較,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見表3。

表3 不同臨床資料患者癌組織中FOXC1表達(dá)情況[n(%)]

2.4 DCLK1表達(dá)與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、T臨床分期的關(guān)系

Phi相關(guān)分析結(jié)果顯示,DCLK1表達(dá)與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、T臨床分期呈正相關(guān)(Phi>0,P<0.05)。見表4。

表4 DCLK1表達(dá)與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、T臨床分期的關(guān)系

2.5 FOXC1表達(dá)與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、T臨床分期的關(guān)系

Phi相關(guān)分析結(jié)果顯示,FOXC1表達(dá)與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、T臨床分期呈正相關(guān)(Phi>0,P<0.05)。見表5。

表5 FOXC1表達(dá)與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、T臨床分期的關(guān)系

3 討論

多數(shù)乳腺癌患者確診時(shí)已伴有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移,不利于治療的順利推進(jìn),影響患者預(yù)后。因此,尋找與乳腺癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的相關(guān)標(biāo)志物對(duì)于臨床及時(shí)制定治療方案、改善患者預(yù)后具有重要意義。DCLK1是在神經(jīng)元有絲分裂后期發(fā)現(xiàn)的一種微管相關(guān)激酶,且研究表明其可調(diào)節(jié)癌基因的表達(dá),與腫瘤細(xì)胞的侵襲能力有關(guān)[8-9]。FOXC1廣泛存在于人體多種組織和器官中,吳東雅等[10]研究指出,FOXC1的表達(dá)與腫瘤組織增殖及轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。因此,本研究分析DCLK1、FOXC1在乳腺癌組織中的表達(dá)及其與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的關(guān)系。

本研究結(jié)果顯示,乳腺癌患者癌組織中DCLK1、FOXC1陽(yáng)性表達(dá)率均高于癌旁組織,提示乳腺癌的發(fā)生和發(fā)展可能與DCLK1、FOXC1的陽(yáng)性表達(dá)升高有關(guān)。分析原因在于,DCLK1屬于微管蛋白超家族成員,其通過與Doublecortin的微管蛋白結(jié)合,激活腫瘤相關(guān)信號(hào)通路,共同參與細(xì)胞的生成、增殖、分化和遷移,從而對(duì)腫瘤細(xì)胞及癌基因的表達(dá)起到調(diào)節(jié)作用[11]。FOXC1是一個(gè)具有高度保守DNA結(jié)合結(jié)構(gòu)域的一類轉(zhuǎn)錄因子,且FOXC1的作用較為復(fù)雜,既有生長(zhǎng)刺激的功能,又能起到生長(zhǎng)抑制的作用。FOXC1可通過誘導(dǎo)及抑制侵襲表型,增強(qiáng)雌激素受體與靶基因的結(jié)合,從而調(diào)控胚胎發(fā)育、細(xì)胞分化等生物學(xué)過程,進(jìn)而起到對(duì)腫瘤靶基因表達(dá)的調(diào)控作用[12-13]。因此,當(dāng)DCLK1、 FOXC1陽(yáng)性表達(dá)升高時(shí),預(yù)示著可能存在大量癌細(xì)胞。另外本研究結(jié)果顯示,DCLK1、FOXC1陽(yáng)性表達(dá)與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及T臨床分期具有相關(guān)性,提示DCLK1、FOXC1或可作為評(píng)估乳腺癌病理特征的潛在指標(biāo),其表達(dá)的升高可加劇乳腺癌的浸潤(rùn)和轉(zhuǎn)移,可用于評(píng)估淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況。分析原因,有研究指出,DCLK1參與上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化的過程,而上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化參與腫瘤的惡性進(jìn)展,可賦予腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移和入侵的能力[14-15]。早期腫瘤細(xì)胞可呈上皮樣狀態(tài),通過上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化,上皮細(xì)胞失去細(xì)胞極性,獲得較高的遷移與侵襲能力的間質(zhì)表型,從而使細(xì)胞運(yùn)動(dòng)性和遷移能力增強(qiáng)[16-17]。當(dāng)乳腺癌患者DCLK1的陽(yáng)性表達(dá)升高時(shí),則表明上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化被激活,從而促進(jìn)癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移和入侵。因此,存在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和臨床分期為T2的乳腺癌患者DCLK1陽(yáng)性表達(dá)率較高。FOXC1可調(diào)控MMP10的表達(dá),MMP10是由癌癥干細(xì)胞樣細(xì)胞分泌的一種生長(zhǎng)因子,可導(dǎo)致干細(xì)胞生成形成腫瘤的能力,刺激癌癥干細(xì)胞的生長(zhǎng),還可刺激轉(zhuǎn)移潛能。因此,FOXC1的陽(yáng)性表達(dá)使MMP10激活,從而在乳腺癌的轉(zhuǎn)移中發(fā)揮促進(jìn)作用[18]。且FOXC1通過轉(zhuǎn)錄激活MMP10、SOX4、SOX13等下游靶基因,可誘導(dǎo)癌細(xì)胞發(fā)生上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化,發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移。

4 結(jié)論

乳腺癌組織中DCLK1和FOXC1陽(yáng)性表達(dá)率較高,且淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、臨床分期與DCLK1和FOXC1的陽(yáng)性表達(dá)密切相關(guān)。