◎ 王 欣，紀(jì)衛(wèi)紅，郭文麗

（天津市食品安全檢測(cè)技術(shù)研究院，天津 300308）

甲基汞（Methyl Mercury）是一種有毒化學(xué)物質(zhì)，根據(jù)2017 年10 月27 日世界衛(wèi)生組織國(guó)際癌癥研究機(jī)構(gòu)公布的致癌物清單初步整理參考，其被列為2B類致癌物，可對(duì)人體健康造成嚴(yán)重危害。研究表明，除了職業(yè)暴露外，水產(chǎn)品是人們主要攝入甲基汞的來源[1-3]。在我國(guó)的飲食結(jié)構(gòu)中，魚類占有重要地位。然而，由于甲基汞的生物積累和生物放大效應(yīng)，魚類體內(nèi)的甲基汞含量比其他汞化合物更高。根據(jù)研究，魚類體內(nèi)甲基汞的含量占總汞含量的95%左右，是人體內(nèi)甲基汞的主要來源之一[4-5]。為了保障人們的身體健康，有效地檢測(cè)水產(chǎn)品中的甲基汞含量至關(guān)重要。本研究針對(duì)這一問題開發(fā)了一種操作簡(jiǎn)單且靈敏度高的甲基汞檢測(cè)方法，以魚肉和蝦肉為檢測(cè)基質(zhì)，采用控制變量和單點(diǎn)矯正的方法對(duì)提取工藝和檢測(cè)條件進(jìn)行了優(yōu)化。優(yōu)化后的方法操作簡(jiǎn)單，能夠準(zhǔn)確測(cè)定水產(chǎn)品中甲基汞的含量。本研究可為相關(guān)監(jiān)管部門提供科學(xué)依據(jù)，進(jìn)一步加強(qiáng)對(duì)水產(chǎn)品中甲基汞的監(jiān)測(cè)與控制，有助于保障人們的身體健康。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

草魚、鯉魚、鯽魚、鰱魚和蝦，購(gòu)自本地市場(chǎng)，采集樣品可食用部分，用組織粉碎機(jī)攪碎，-20 ℃冷凍；氯化甲基汞（分析純，Dr.Ehrenstorfer GmbH 公司）；氯化鈉、鹽酸、苯（分析純，上海國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司）；實(shí)驗(yàn)用水均為GB/T 6682 2008 規(guī)定的一級(jí)水。

1.2 儀器與設(shè)備

天平（精確度：0.01 mg，沈陽(yáng)龍騰電子有限公司）；渦旋振蕩儀（2-16KL，上海納茲儀器有限公司）；離心機(jī)（2-16KL，上海巴玖實(shí)業(yè)有限公司）；氣相色譜儀（GC-7890A、安捷倫公司）。

1.3 試驗(yàn)方法

1.3.1 甲基汞標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制

稱量氯化甲基汞粉末于25 mL 容量瓶中，以苯定容，混勻后得到濃度為1 mg·mL-1的甲基汞標(biāo)準(zhǔn)苯溶液。用1 mL 移液管取1 mL 甲基汞標(biāo)準(zhǔn)苯溶液置于100 mL容量瓶中以苯定容，混勻后得10 μg·mL-1的甲基汞標(biāo)準(zhǔn)工作液，冷藏、待用。

1.3.2 樣品前處理

稱取1 g 左右的魚肉樣品置于研缽中，加1 g 氯化鈉粉末研磨，之后加入2 mL 一定濃度的鹽酸繼續(xù)研磨至糊狀。將研磨后的樣品轉(zhuǎn)移到25 mL 具塞試管中，并以鹽酸清洗研缽2 ～3 次，同樣轉(zhuǎn)移到試管中（試管內(nèi)液體總量不得超過10 mL），用鹽酸定容至10 mL；塞上試管塞，置于渦旋振蕩儀上，渦旋10 min，靜置浸泡1 h，過濾到10 mL 離心管中，加苯提取，振蕩2 min，4 000 r·min-1離心10 min，取上清液，過膜，待測(cè)。取未加標(biāo)的樣品按上述操作方法操作，得空白對(duì)照，待用。

1.3.3 色譜條件

色譜柱：Agilent DB-1701 柱(30 m 0.25 mm，0.25 μm)；檢測(cè)器：電子捕獲檢測(cè)器（ECD）；載氣（N2）流量：1 mL·min-1；進(jìn)樣量：1.0 μL，不分流進(jìn)樣。

2 結(jié)果與分析

2.1 色譜條件優(yōu)化

取甲基汞標(biāo)準(zhǔn)工作液，以苯稀釋得濃度為0.20 μg·mL-1、0.05 μg·mL-1、0.10 μg·mL-1的甲基汞標(biāo)準(zhǔn)溶液，進(jìn)樣分析，改變色譜條件（柱箱溫度、檢測(cè)器溫度及氣化室溫度），根據(jù)峰形及出峰時(shí)間進(jìn)行色譜條件優(yōu)化，優(yōu)化結(jié)果見表1。因此確定氣化室溫度為210 ℃，檢測(cè)器溫度為180 ℃，柱箱溫度為210 ℃。

2.2 苯用量?jī)?yōu)化

稱取空白魚肉樣品1 g左右于25 mL具塞試管中，向其中加入0.1 mL 濃度為10 μg·mL-1的甲基汞標(biāo)準(zhǔn)溶液，浸泡、冷藏放置一段時(shí)間按1.3.2（鹽酸濃度選用2 mol·L-1）進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，僅改變苯用量，研究苯用量對(duì)水產(chǎn)品中甲基汞提取的影響，實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表2。回收率在苯用量為2.5 mL 時(shí)最高，且未發(fā)現(xiàn)明顯乳化現(xiàn)象。所以在其他條件恒定的條件下，苯用量為2.5 mL，回收率最高，為54.28%。

表2 苯用量的優(yōu)化結(jié)果表

2.3 鹽酸濃度優(yōu)化

稱取空白魚肉樣品1 g左右于25 mL具塞試管中，向其中加入0.1 mL 濃度為10 μg·mL-1的甲基汞標(biāo)準(zhǔn)溶液，浸泡、冷藏放置一段時(shí)間按1.3.2（苯萃取量為2 mL）進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，僅改變鹽酸濃度，研究鹽酸濃度對(duì)水產(chǎn)品中甲基汞提取的影響，實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表3。第5 組、第6 組實(shí)驗(yàn)提取出的溶液為灰黑色及黑色，可能原因?yàn)?0 mol·L-1及以上濃度的濃鹽酸具有較強(qiáng)的氧化性，使魚樣中的其他物質(zhì)（如碳等）氧化、碳化，影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果；第1 組實(shí)驗(yàn)乳化現(xiàn)象明顯。鹽酸濃度的最優(yōu)條件為6 mol·L-1，回收率最高，為71%。

表3 鹽酸濃度的優(yōu)化結(jié)果表

2.4 檢出限

按國(guó)際理論與應(yīng)用化學(xué)聯(lián)合會(huì)（International Union of Pure and Applied Chemistry，IUPAC）給出的檢出限的定義，檢出限換算公式為

式中：D為方法檢出限，μg·g-1；Q為實(shí)驗(yàn)進(jìn)樣量，1 g；S/N為儀器信噪比，300 db。經(jīng)計(jì)算，方法檢出限為0.01 μg·g-1。

2.5 回收率與精密度實(shí)驗(yàn)

按照1.3.2 實(shí)驗(yàn)過程（鹽酸濃度為6 mol·L-1，苯萃取量為2.5 mL）稱取空白樣品，進(jìn)行加標(biāo)回收實(shí)驗(yàn)，加標(biāo)量分別為0.01 μg·g-1、0.02 μg·g-1、0.10 μg·g-1，每個(gè)濃度重復(fù)測(cè)定3 次，實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表4。結(jié)果表明，回收率為71.4%～81.5%，RSD為0.7%～1.8%，符合《實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量控制規(guī)范 食品理化檢測(cè)》（GB/T 274042008）附錄F 要求。

2.6 通用性分析

本次試驗(yàn)的通用性確定是通過對(duì)資料與實(shí)驗(yàn)原理的綜合分析得到。通過查閱文獻(xiàn)可知，各類水產(chǎn)品中甲基汞的來源均為汞的生物及非生物甲基化以及食物鏈的富集作用，并且在生物體內(nèi)的代謝基本一致；從實(shí)驗(yàn)的預(yù)處理過程中可以看出實(shí)驗(yàn)的處理過程并沒有物種差異的變化，從中分析可知此次研究所進(jìn)行的實(shí)驗(yàn)具有通用性；取市售不同品種水產(chǎn)品（草魚、鯉魚、鯽魚、鰱魚、蝦）各5 份樣品，檢測(cè)甲基汞含量，可進(jìn)一步以實(shí)驗(yàn)角度證明實(shí)驗(yàn)的通用性，結(jié)果見表5。結(jié)果分析表明本研究建立的方法在各類水產(chǎn)品中均可實(shí)現(xiàn)甲基汞的快速有效檢測(cè)。

表5 不同品種甲基汞的檢測(cè)結(jié)果表 單位：mg·kg-1

3 結(jié)論

本研究結(jié)果顯示，甲基汞檢測(cè)實(shí)驗(yàn)的最佳條件為氣化室溫度210 ℃、檢測(cè)器溫度180 ℃、柱箱溫度210 ℃、鹽酸濃度6 mol·L-1、苯萃取量2.5 mL。經(jīng)驗(yàn)證，該方法檢出限為0.01 μg·g-1，回收率可達(dá)到71.4%～81.5%，精密度良好，重現(xiàn)性良好；經(jīng)分析，本實(shí)驗(yàn)通用性良好，在各類水產(chǎn)品中均可實(shí)現(xiàn)甲基汞的快速、有效檢測(cè)，為水產(chǎn)品中甲基汞的檢測(cè)提供了操作簡(jiǎn)單、快捷、耗時(shí)短、可進(jìn)行大批量樣品測(cè)定的實(shí)驗(yàn)方法。