培養(yǎng)基及試劑質量控制對于保證食品檢測效果尤為重要，食品藥品監(jiān)督管理局等機構均構建了較為完善的培養(yǎng)基質控體系。依據(jù)《食品安全國家標準 食品微生物學檢驗培養(yǎng)基和試劑的質量要求》（GB 4789.28-2013）中的相關要求，在培養(yǎng)基微生物性能指標檢測中運用菌株進行測試，可以從水中或者食品中分離菌株完成測試工作。大腸埃希氏菌是食源性疾病的主要病原菌之一，為了提升培養(yǎng)基的質量，本文設計了實驗進行分析，研究來源于地表水、果仁菠菜的大腸埃希氏菌ATCC 25922，以更好地提升食品檢驗培養(yǎng)基的質量。

一、材料與方法

1.試驗菌株。試驗菌株選擇菌種保藏中心的E.coli ATCC 25922、微生物菌種保藏管理中心的CICC 24652、E.coli CICC 24176。

2.培養(yǎng)基。本實驗過程中選擇的培養(yǎng)基有麥康凱瓊脂（macconkey agar，MAC）、結晶紫中性紅膽鹽瓊脂（violet red bile agar，VRBA）、營養(yǎng)瓊脂（nutrient agar，NA）、HE瓊脂（hektoen enteric agar，HE）、胰蛋白胨大豆瓊脂（tryptic soy agar，TSA）、木糖賴氨酸脫氧膽鹽瓊脂（xylose lysine desoxycholate agar，XLD）、平板計數(shù)瓊脂（plate count agar，PCA）、亞硒酸鹽胱氨酸增菌液（selenite cystine broth，SC）、李氏增菌肉湯（Listeria enrichment broth base，LB1，LB2），以及Bolton肉湯、7.5%氯化鈉胰酪胨大豆肉湯、3%氯化鈉堿性蛋白胨水、10%氯化鈉胰酪胨大豆肉湯、胰酪胨大豆多粘菌素肉湯。

本試驗使用的試管為緩沖動力硝酸鹽發(fā)酵管（青島海博生物技術有限公司）和黏液酸發(fā)酵管（廣東環(huán)凱微生物科技有限公司）。

3.實驗方法。（1）懸浮培養(yǎng)基的定量測試。針對測試菌株制備100CFU/mL-1000CFU/mL的工作菌懸液，制備10mL的磷酸緩沖鹽溶液（phosphate buffer saline，PBS），在20℃-25℃的環(huán)境下放置45min，然后對菌落計數(shù)，PBS培養(yǎng)基穩(wěn)定能力的評判標準為±50%的變化幅度。

（2）生長率的定量測試。結合食品安全培養(yǎng)基GB 4789.28-2013中的相關規(guī)定，菌株選擇性分離培養(yǎng)基的生長率為1.0-0.1，EMB、VRBA、MAC、VRB-MUG瓊脂于36℃±1℃環(huán)境下培養(yǎng)24h，液體培養(yǎng)基生長率≥0.7，菌株生長能力判斷指標為菌落特征、生長率情況。

（3）鑒定培養(yǎng)基測試。針對對照菌株、測試菌株分別接種TSA培養(yǎng)基、BHI肉湯，在36℃環(huán)境下培養(yǎng)18h。

二、結果與分析

1.培養(yǎng)基生長率定量測試結果。結合GB 4789.28-2013的相關規(guī)定，大腸埃希氏菌培養(yǎng)基類別有TSA、NA、PCA，培養(yǎng)基質量合格的判斷標準為菌株生長率≥0.7，菌株生長率與培養(yǎng)基促生長能力之間為正比關系。研究測試菌株的實際生長情況發(fā)現(xiàn)，TSA培養(yǎng)基上生長率為1.0、0.9、1.1，NA培養(yǎng)基上生長率為1.1、1.1、0.9，PCA培養(yǎng)基上生長率為1.0、0.9、0.9；測試菌生長能力良好，在培養(yǎng)基定量質控方面具有良好的運用價值。測試結果詳見表1。

2.選擇性增菌培養(yǎng)基測試結果。選擇性增菌培養(yǎng)基只允許特定微生物繁殖，對其他微生物生長幾乎都有抑制作用。大腸埃希氏菌對CIN-1培養(yǎng)基的測試結果為淺粉、粉紅色，邊緣不整齊，出現(xiàn)沉淀環(huán)；沙門氏菌顯色培養(yǎng)基為黃色；O157顯色培養(yǎng)基未生長，阪崎克羅諾桿菌培養(yǎng)基為白色；志賀氏菌顯色培養(yǎng)基為黃色。CICC 24176生長未被抑制，菌株不同，導致出現(xiàn)特異性酶反應并出現(xiàn)一定的差異性，出現(xiàn)了菌株顯色差異。2株測試菌株的生長特性有所不同，由此進行培基定性質控。詳見表2。

3.選擇性液體計數(shù)培養(yǎng)基測試結果。結合GB 4789.28-2013的相關要求，增菌培養(yǎng)基能夠在特定微生物中繁殖，同時對部分微生物的生長培養(yǎng)具有一定的抑制作用。研究顯示，菌株CICC 24652、ATCC 25922的生長情況均在一定程度上被抑制，CICC 24176的生長活動未被抑制，顯示亞硒酸鹽毒性對菌株CICC 24176不發(fā)生作用，原因是菌株CICC 24176中含有一定成分的特異性酶。菌株培養(yǎng)后菌落數(shù)＜110CFU，詳見表3。

4.懸浮培養(yǎng)基測試結果。結合GB 4789.28-2013的相關規(guī)定，培養(yǎng)基合格的判斷標準為菌落數(shù)變化±50%，測試方式為大腸埃希氏菌在大腸菌群、菌落總數(shù)、金黃色葡萄球菌PBS樣品中放置45min，得出菌株在PBS中的穩(wěn)定情況。測試結果顯示，PBS菌落中E.coli CICC 24176的變動數(shù)值為9%、E.coli ATCC 25922的變動數(shù)值20%、E.coli CICC 24652的變動數(shù)值為2.2%，說明測試菌株具有較強的穩(wěn)定性。詳見表4。

5.鑒定培養(yǎng)基及試劑測試結果。研究大腸埃希氏菌對8種鑒定培養(yǎng)基的測試結果發(fā)現(xiàn)，在三糖鐵瓊脂中生長良好，A/A，產(chǎn)氣，不產(chǎn)硫化氫；酪蛋白瓊脂的菌落周圍無透明圈，培養(yǎng)基由綠變藍；醋酸鹽陽性，培養(yǎng)基變藍，在培養(yǎng)基鑒定上呈現(xiàn)出典型性特征，培養(yǎng)基實驗結果表現(xiàn)為陰性。詳見表5。

三、結論與討論

本實驗研究了食品培養(yǎng)基的生長特性，重點研究了菌株CICC 24652、CICC 24176的生長情況，由此來評判菌株測試在食品測控中的運用價值。實驗結果顯示，測試菌在培養(yǎng)基鑒定方面呈現(xiàn)出了不同的特征，CICC 24176的生長特性較為明顯，兩者在培養(yǎng)基的微生物指標評價上具有較強的相似性。

通過本文研究可知，大腸埃希氏菌質控菌株在食品質量安全檢測方面具有較大的運用價值，大腸埃希氏菌中不同類別間的差異也比較明顯。菌株CICC 24176在SC培養(yǎng)基的驗證過程中不受限制，對SC培養(yǎng)液進行深度分析，顯示亞硒酸鹽難以抑制全部的大腸埃希氏菌，部分菌株超氧化物歧化酶的活性較強，能夠提高食品的安全性，減少亞硒酸鹽對食品的不良侵害。菌株CICC 24652的動力特性不顯著，約一半大腸埃希氏菌中含有鞭毛，菌株鞭毛本身長短、個數(shù)等特性在一定程度上影響著大腸埃希氏菌的動力特性。

食物培養(yǎng)基質控菌株在選擇層面，應當保證菌株生長特性的典型性，使其能夠符合相關的測試需求，并且注重不同菌株間的差異性。本次實驗選擇的菌株符合實驗要求，實驗具有較強的代表性，對食品安全檢測具有較強的參考意義。

作者簡介：王緒龍（1978-），男，漢族，山東莒南人，工程師，大學本科，研究方向為食品檢測。