薛占成，韓海燕，周 秀

武警特色醫(yī)學(xué)中心檢驗(yàn)科，天津 300162

血清HBsAg 和HBV DNA 均以肝內(nèi)閉合環(huán)狀DNA（cccDNA）為模板合成［1-2］，二者具有相關(guān)性，但這種相關(guān)性因慢性乙型肝炎（CHB）感染自然史所處階段不同而不同。本研究對(duì)2015 年4 月—2020 年8 月在武警特色醫(yī)學(xué)中心就診的144 例CHB 感染自然史中免疫耐受期（IT）、免疫清除期（IC）、低復(fù)制期（LR）、和再活動(dòng)期（RA）患者血清樣本HBsAg 水平進(jìn)行了評(píng)估，并分析其與HBV DNA 的相關(guān)性，探討血清HBsAg 濃度對(duì)RA 期和LR 期CHB的預(yù)測(cè)價(jià)值。

1 資料與方法

1.1 研究對(duì)象

144 例樣本均為2015 年4 月—2020 年8 月在武警特色醫(yī)學(xué)中心就診的慢性乙型肝炎患者，所有患者均未進(jìn)行抗病毒治療，診斷符合2019年《慢性乙型肝炎防治指南》診斷標(biāo)準(zhǔn)。

1.2 分組標(biāo)準(zhǔn)

IT46 例，IC28 例，LR24 例，RA46 例。分組標(biāo)準(zhǔn)依據(jù)2019年《慢性乙型肝炎防治指南》。

1.3 標(biāo)本采集及檢測(cè)

采集患者空腹靜脈血2 管，分別做HBV DNA 和HBV血清標(biāo)志物定量檢測(cè)。HBV DNA 定量檢測(cè)采用上海宏石SLAN-96P 型熒光定量PCR 儀，試劑盒為湖南圣湘乙型肝炎病毒核酸檢測(cè)試劑盒（PCR-熒光探針法）；HBV 血清標(biāo)志物定量檢測(cè)采用羅氏電化學(xué)發(fā)光分析儀，試劑盒采用羅氏配套試劑盒。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用Graph Pad prism 5 統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。計(jì)量資料符合正態(tài)分布的數(shù)據(jù)用均數(shù)標(biāo)準(zhǔn)差表示，不符合正態(tài)分布的數(shù)據(jù)以中位數(shù)和四分位數(shù)間距表示，多組間比較采用Kruskal-WallisH秩和檢驗(yàn)，進(jìn)一步兩組間比較采用Mann-WhitneyU檢驗(yàn)，相關(guān)性分析采用Spearman 秩相關(guān)檢驗(yàn)。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 HBsAg定量在自然史中的變化

CHB 各時(shí)期HBsAg水平由高到低，見表1和圖1A。IT組［4.863 （4.607～5.097）log10IU/mL］、IC 組［4.115（3.487～4.410）log10IU/mL］、RA 組［3.750（3.188～5.097）log10IU/mL］、LR組［3.413（2.606～3.672）log10IU/mL］。

圖1 HBsAg和HBV DNA在CHB自然史不同時(shí)期的變化及相關(guān)性

表1 HBsAg和HBV DNA在CHB自然史不同時(shí)期的變化[M(P25～P75)，log10 IU/mL]

2.2 HBsAg和HBV DNA在CHB自然史不同時(shí)期的變化

CHB 各期HBV DNA 水平由高到低。IT 組［7.987（7.576～8.248）log10IU/mL］、IC 組，［6.698（6.447～6.912）log10IU/mL］、RA 組［4.519 （4.076～5.187）log10IU/mL］、LR組［2.854（2.805～2.950）log10IU/mL］，見表1和圖1B。

2.3 CHB自然史各時(shí)期HBsAg與HBV DNA的相關(guān)性

HBsAg和HBV DNA在CHB自然史各個(gè)時(shí)期的相關(guān)性不同，HBsAg和HBV DNA僅在IC期和RA期具有相關(guān)性（r=0.387 3、0.740 1，P=0.041 7、0.039 2）；整個(gè)CHB 時(shí)期HBsAg 和HBV DNA 具有相關(guān)性（r=0.546 9，P＜0.000 1），見表2和圖1C～G。

表2 CHB自然史各時(shí)期HBsAg與HBV DNA的相關(guān)性

2.4 ROC曲線分析

HBsAg＞4.208 log10IU/mL 的截?cái)嘀担?6 129 IU/mL）用于預(yù)測(cè)IT 期敏感度為90.38%，特異度為92.47%；HBsAg＞3.455 log10IU/mL 的截?cái)嘀担? 852 IU/mL），用于預(yù)測(cè)IC 期敏感度為78.60%，特異度為79.10%；HBsAg＞3.444 log10IU/mL 的截?cái)嘀担? 530 IU/mL），用于預(yù)測(cè)LR期敏感度為68.18%，特異度為78.07%；HBsAg＞3.505 log10IU/mL 的截?cái)嘀担? 200 IU/mL），用于預(yù)測(cè)RA 期敏感度為74.31%，特異度為80.21%；當(dāng)機(jī)會(huì)曲線下面積等于0.5時(shí)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），見表3和圖1H。

表3 CHB自然史各時(shí)期HBsAgCut-off值

3 討論

我國《慢性乙型肝炎防治指南（2019 年版）》［3］明確指出，根據(jù)HBV DNA 載量、HBeAg、HBeAb 及ALT 等，CHB 通常分為IT、IC、LR、RA4 個(gè)時(shí)期。本研究結(jié)果表明，HBsAg 在CHB 自然史中是不斷變化的，在IT 組最高，其次為IC和RA，LR組最低。此結(jié)果與Nguyen等［4］、Jaroszewicz 等［5］和周洪波等［6］研究結(jié)果一致。IT 期CHB 患者處于HBV 感染早期，體內(nèi)并未激發(fā)出針對(duì)HBsAg 的免疫反應(yīng)，因此患者血液中HBsAg處于高水平。隨著機(jī)體針對(duì)HBsAg 的體液免疫和細(xì)胞免疫的發(fā)生和增強(qiáng)，患者機(jī)體進(jìn)入IC期，機(jī)體免疫清除能力遠(yuǎn)超病毒抗原產(chǎn)生能力，既患者進(jìn)入HBV感染的晚期。

本研究結(jié)果表明，HBV DNA 在CHB 自然史中是不斷變化的：在IT 組最高，其次為IC 和RA，LR 組最低。HBV DNA 是病毒復(fù)制的指標(biāo)，與患者的免疫狀態(tài)相關(guān)。在IT 期最活躍，IC 期次之。此結(jié)果與張學(xué)平等［7］和戴小波等［8］研究結(jié)果一致。研究提示，HBsAg 定量水平和HBV DNA 的變化都與患者免疫狀態(tài)相關(guān)，我們的研究結(jié)果顯示HBsAg 與HBV DNA 總體相關(guān)，而在HBV 持續(xù)感染的不同時(shí)期的相關(guān)性不同：IC 期和RA 期CHB 患者HBsAg與HBV DNA 具有相關(guān)性。IT期和LR 期無相關(guān)性，此結(jié)果與王慰等［9］的研究報(bào)告一致。血清HBsAg 和HBV DNA 都以cccDNA 為模板合成［10］，而HBsAg 既是HBV 組成成分，又以非傳染性的球形顆粒和管型顆粒存在于血清中，但HBV DNA 只存在于HBV 中，是檢測(cè)HBV 復(fù)制的指標(biāo), 在HBV 感染患者血清中HBsAg 顆粒含量遠(yuǎn)超具有感染性的HBV，導(dǎo)致在CHB 患者不同自然史階段，HBV DNA 與HBsAg比值不相同。

綜上所述，HBV DNA 載量下降是評(píng)價(jià)抗病毒治療有效的指標(biāo)之一，HBsAg 水平下降則是機(jī)體通過免疫調(diào)節(jié)清除HBV 及非傳染性顆粒的表現(xiàn)。動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)兩者的變化,特別是使用HBsAg 預(yù)測(cè)HBV 再激活對(duì)臨床診斷有較大的參考價(jià)值。