◎ 李賢賓，付 巖，王全勝，吳銀良

（1.農(nóng)業(yè)農(nóng)村部農(nóng)藥檢定所，北京 100025；2.寧波市農(nóng)業(yè)科學(xué)研究院，浙江 寧波 315043）

枇杷是我國(guó)南方特色水果之一，果實(shí)滋味鮮美，營(yíng)養(yǎng)豐富[1-2]。枇杷采后易衰老變質(zhì)，且容易感染病害，限制了枇杷果實(shí)的貯藏期，從而造成經(jīng)濟(jì)損失[3-4]。為延長(zhǎng)果實(shí)的貯藏期，常用的保鮮方法有低溫冷藏法、氣調(diào)包裝法和化學(xué)試劑保鮮法等[5]。其中常使用多菌靈、苯菌靈等化學(xué)殺菌劑處理果實(shí)來防治采后炭疽病、灰霉病等，抑制腐爛病害發(fā)生，但使用化學(xué)殺菌劑容易帶來殘留問題，特別是不規(guī)范使用，使采后產(chǎn)品質(zhì)量安全存在潛在風(fēng)險(xiǎn)[6-7]。目前，在梨[8]、柑橘[9-10]等貯藏過程中常用的多菌靈殘留情況有較多研究，但在枇杷上報(bào)道較少，本文針對(duì)枇杷貯藏過程中多菌靈和嘧霉胺的使用安全性及保鮮效果進(jìn)行了比較研究。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

嘧霉胺（1 000 μg·mL-1）、多菌靈（純度99%）（德國(guó)Dr. Ehrenstorfer GmbH 公司）；氯化鈉（分析純，國(guó)藥集團(tuán)）；乙腈（色譜純，德國(guó)默克）；有機(jī)濾膜（0.22 μm，北京迪馬）。

1.2 儀器與設(shè)備

超高效液相色譜- 串聯(lián)質(zhì)譜儀（Waters Xevo TQ-S，美國(guó)Waters 公司）；Waters ACQUITY UPLC BEH C18柱（100 mm×2.1 mm，1.7 μm，美國(guó)Waters公司）；Vortex Genius 3 漩渦儀（德國(guó)IKA 公司）；3K15 離心機(jī)（德國(guó)Sigma 公司）；電子天平（瑞士Mettler Toledo 公司）。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法

1.3.1 實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)

依據(jù)農(nóng)藥產(chǎn)品施藥說明及相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道，400 g·L-1嘧霉胺懸浮劑防治灰霉病推薦使用濃度為1 000 ～1 500 倍液，50%多菌靈可濕性粉劑用于枇杷采后病害防治推薦制劑用藥量為1 000 倍液。因此多菌靈和嘧霉胺2 種殺菌劑均設(shè)1 000 倍液處理，嘧霉胺另設(shè)1 500 倍液處理，每個(gè)處理重復(fù)3 次。將無腐爛的枇杷果實(shí)分成3 組，按照不同處理浸果1 min，晾干后裝入塑料筐，底部墊上無塵紙；實(shí)驗(yàn)設(shè)2 個(gè)溫度組，低溫組（6±2）℃和常溫組（25±2）℃，濕度均設(shè)置為90%～95%，按照0 d、3 d、7 d、14 d、21 d 和28 d 取樣，測(cè)定枇杷全果和果肉中2 種殺菌劑的殘留量及保鮮效果。

1.3.2 樣品前處理

稱取全果/果肉樣品5 g（精確至0.01 g）置于塑料離心管中，加入15.0 mL 乙腈，350 r·min-1振蕩提取0.5 h 后，加入氯化鈉（5 g）振蕩1 min，再離心（9 500 r·min-1）3 min。吸取上清液0.3 mL 至另一試管中并加入0.7 mL 純水混合均勻，使用濾膜過濾后供超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀測(cè)定。

1.3.3 儀器條件

（1）色譜條件。色譜柱Waters ACQUITY UPLC BEH C18柱（100 mm×2.1 mm，1.7 μm）， 流 動(dòng) 相A 相為純水，B 相為乙腈。洗脫條件見表1，流速為0.30 mL·min-1，柱溫為35 ℃，進(jìn)樣體積為10.0 μL。

表1 流動(dòng)相梯度洗脫條件表

（2）質(zhì)譜條件。離子源為電噴霧離子源；掃描方式：正離子掃描；檢測(cè)方式：多重反應(yīng)監(jiān)測(cè)模式，具體參數(shù)見表2。毛細(xì)管電壓為2.5 kV，離子源溫度為150 ℃，霧化氣溫度為500 ℃。

表2 多重反應(yīng)監(jiān)測(cè)條件表

2 結(jié)果與分析

2.1 方法學(xué)驗(yàn)證

2.1.1 線性范圍

采用枇杷全果和果肉基質(zhì)加標(biāo)，外標(biāo)法定量。在上述儀器條件下對(duì)標(biāo)準(zhǔn)基質(zhì)工作溶液進(jìn)樣檢測(cè)，當(dāng)進(jìn)樣濃度為0.000 5 ～0.500 0 mg·L-1時(shí)，MS 響應(yīng)值（峰面積）與進(jìn)樣濃度均呈良好線性關(guān)系（相關(guān)系數(shù)＞0.99）。

2.1.2 準(zhǔn)確度與精密度

如表3 所示，嘧霉胺和多菌靈在枇杷全果和果肉中的添加濃度均為0.01 ～2.00 mg·kg-1。在枇杷果肉中，嘧霉胺回收率為92%～99%，多菌靈回收率為89%～101%；在枇杷全果中，嘧霉胺回收率為94% ～103%，多菌靈回收率為93% ～105%。嘧霉胺和多菌靈在枇杷果肉和全果中的添加濃度為0.01 ～2.00 mg·kg-1時(shí)，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差最大為5.9%。在上述條件下，嘧霉胺和多菌靈在枇杷果肉、全果中的最小檢出量均為5.0×10-12g，最低檢出濃度均為0.01 mg·kg-1。

表3 平均回收率和相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差表

2.2 嘧霉胺在枇杷中的殘留降解及保鮮效果

如 表4 和 表5 所 示， 經(jīng)1 000 倍 和1 500 倍稀釋嘧霉胺處理后，在枇杷全果中初始沉積量為0.82 ～1.23 mg·kg-1，之后隨時(shí)間延長(zhǎng)而下降，浸藥后前7 d 嘧霉胺快速降解，之后進(jìn)入緩慢降解過程，28 d時(shí)殘留量為0.22 ～0.48 mg·kg-1。常溫處理組全果中嘧霉胺半衰期為12 ～13 d，低溫處理組全果中嘧霉胺半衰期為18 ～19 d。

表4 400 g·L-1 嘧霉胺懸浮劑稀釋1 000 倍液在貯藏枇杷中的殘留量及保鮮效果表

表5 400 g·L-1 嘧霉胺懸浮劑稀釋1 500 倍液在貯藏枇杷中的殘留量及保鮮效果表

枇杷經(jīng)1 500 倍嘧霉胺浸藥后，果肉中嘧霉胺含量始終低于0.05 mg·kg-1；0 ～14 d 果肉中嘧霉胺殘留量逐漸增加，之后緩慢下降，在用藥28 d 后，果肉中殘留量為0.028 ～0.037 mg·kg-1。嘧霉胺高濃度處理組比低濃度處理組保鮮效果更好。此外，低溫貯藏比常溫貯藏保鮮時(shí)間長(zhǎng)一些，14 d 以內(nèi)低溫貯藏的枇杷果實(shí)，好果率都在90%以上。

2.3 多菌靈在枇杷中的殘留降解及保鮮效果

經(jīng)多菌靈1 000 倍液浸藥后，枇杷全果和果肉中多菌靈殘留如表6 所示。多菌靈在枇杷果肉中含量呈現(xiàn)先增后減的變化趨勢(shì)，浸藥后14 d 果肉中多菌靈達(dá)到峰值，隨后逐漸降低，28 d 時(shí)果肉中多菌靈含量為0.037 ～0.038 mg·kg-1。常溫處理組全果中多菌靈半衰期為34 d，低溫處理組全果中多菌靈半衰期為39 d。浸藥后的枇杷全果多菌靈含量處于較低含量水平，其最高含量小于0.3 mg·kg-1。以1 000 倍液的多菌靈溶液浸果處理的枇杷，全果中多菌靈殘留量較嘧霉胺低，但果肉中多菌靈含量與嘧霉胺含量接近，可能與多菌靈的內(nèi)吸性強(qiáng)有關(guān)。多菌靈處理組好果率比嘧霉胺處理組低，這可能與病菌對(duì)多菌靈的耐藥性高有關(guān)。

表6 多菌靈稀釋1 000 倍液在貯藏枇杷中的殘留量及保鮮效果表

3 結(jié)論

本研究結(jié)果表明，嘧霉胺浸藥處理28 d 內(nèi)的枇杷貯藏保鮮效果優(yōu)于多菌靈，且使用后降解半衰期更短。殘留動(dòng)態(tài)實(shí)驗(yàn)表明，嘧霉胺在枇杷全果中的降解半衰期為12 ～19 d，多菌靈半衰期為34 ～39 d。各處理的枇杷果肉中殘留含量均呈先增后減趨勢(shì)，浸藥后約14 d 達(dá)到峰值后逐漸減少。實(shí)驗(yàn)處理中，整個(gè)貯藏期殘留量均未超過目前我國(guó)GB 2763-2021 中規(guī)定的多菌靈和嘧霉胺在枇杷上的最大殘留限量值。