摘 要：【目的】為初步篩選授粉性狀優(yōu)良的軟棗獼猴桃雄株提供依據(jù)，進(jìn)而促進(jìn)授粉雄株的合理配置及育種效率的提高。【方法】對(duì)15 份雄株的花粉離體培養(yǎng)條件、萌發(fā)特性和花粉量進(jìn)行了測(cè)定與比較?！窘Y(jié)果】1）軟棗獼猴桃花粉萌發(fā)和花粉管生長(zhǎng)所需的適宜離體培養(yǎng)條件略有不同，總體來(lái)看，適宜花粉培養(yǎng)的蔗糖濃度為5.0% ～ 10.0%，硼酸濃度為25 ～ 50 mg/L，培養(yǎng)溫度為30 ℃，最佳觀察時(shí)間為4.5 ～ 6.0 h。2）不同雄株的花粉量及花粉萌發(fā)特性存在明顯的株間差異。單花花藥數(shù)的變幅為32.67 ～ 47.88 枚，單藥花粉量為3 267 ～26 000 粒。單花花粉量，S3 和S13 的均較多，均超過(guò)1 000 000 粒；S4、S6 的均較少，均低于150 000 粒。15 份雄株的花粉萌發(fā)率均較高，其中，Z1 與S8 的萌發(fā)率達(dá)到90% 以上，Z2、S4、S9 的萌發(fā)率雖均較低，但也都在65% 以上；花粉管長(zhǎng)度，Z1、S2 與S8 的均相對(duì)較高，均極顯著高于其余雄株的。3）依據(jù)單花花粉量、萌發(fā)率與花粉管長(zhǎng)度進(jìn)行聚類分析，15 份雄株可分為4 個(gè)類群：類群1 的萌發(fā)率、花粉管長(zhǎng)度最高，單花花粉量也較高但其變幅大，篩選結(jié)果表明，Z1 的綜合表現(xiàn)較好；類群2 的單花花粉量最高且其變幅小，其萌發(fā)率和花粉管長(zhǎng)度也都相對(duì)較高；類群3 和類群4 的8 個(gè)雄株則存在單花花粉量少、萌發(fā)率偏低或花粉管生長(zhǎng)速度慢等缺點(diǎn)。

【結(jié)論】以單花花粉量、花粉萌發(fā)率及花粉管長(zhǎng)度為參考依據(jù)，Z1 和類群2 的授粉性狀均較優(yōu)，均可考慮用作進(jìn)一步優(yōu)選的候選授粉樹。

關(guān)鍵詞：軟棗獼猴桃；花粉量；花粉培養(yǎng)；萌發(fā)率；花粉管長(zhǎng)度

中圖分類號(hào)：S663.4 文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A 文章編號(hào)：1003—8981（2023）01—0255—10

軟棗獼猴桃Actinidia arguta（Sieb. amp; Zucc）Planch. ex Miq. 為獼猴桃屬的多年生藤本果樹，因其果實(shí)風(fēng)味獨(dú)特、營(yíng)養(yǎng)豐富，且具有藥食同源的功效[1]，已成為一種極具發(fā)展?jié)摿Φ奶厣珴{果類果樹。目前，獼猴桃屬的栽培品種大多選自中華獼猴桃A. chinensis var. chinensis 及其變種美味獼猴桃A. chinensis var. deliciosa [2-3]，而軟棗獼猴桃的栽培規(guī)模相對(duì)較小，尚屬于一種新興的果樹。

軟棗獼猴桃大多為雌雄異株類型，栽培中要求配置授粉樹才能保證其正常結(jié)果[4]。而授粉的質(zhì)量直接影響其產(chǎn)量與品質(zhì)，授粉不足則易導(dǎo)致果實(shí)早落、小果或果實(shí)畸形等現(xiàn)象的發(fā)生[3]。

此外，也有研究結(jié)果[5-7] 表明，不同雄株授粉對(duì)獼猴桃特別是軟棗獼猴桃的坐果率、品質(zhì)及果實(shí)形狀等都有一定的影響，存在花粉直感效應(yīng)。因此，適配授粉雄株的選擇對(duì)其豐產(chǎn)提質(zhì)具有極為重要的意義，而其花粉量及萌發(fā)力均為雄株篩選的重要指標(biāo)。

近年來(lái)，圍繞軟棗獼猴桃雌株種質(zhì)資源[1]、采后貯藏[8] 及生理生化[9] 等方面的研究逐步深入，關(guān)于授粉雄株及其花粉特性的研究也已有一些報(bào)道：劉猜等[3] 比較分析了來(lái)源于青島、丹東的軟棗獼猴桃雄株及授粉品種‘維基’的花器特征與花粉萌發(fā)率等，其中，青島的軟棗獼猴桃雄株花粉的萌發(fā)率最高；齊秀娟等[2] 研究了來(lái)源于中華、美味及軟棗獼猴桃的不同雄株的花粉特性，其中，美味獼猴桃的花藥數(shù)整體上高于中華獼猴桃和軟棗獼猴桃的。但是，由于參試的軟棗獼猴桃雄株數(shù)量較少，其花粉特性仍需進(jìn)一步探討。

近年來(lái)，我國(guó)軟棗獼猴桃產(chǎn)業(yè)快速發(fā)展，其雌性品種、品系不斷增加，但其雄性品種、品系相對(duì)匱乏，僅有‘綠王’等少數(shù)授粉品種及野生軟棗獼猴桃的實(shí)生雄株[3-4]。野生雄株資源雖然較為豐富，但其花粉性狀大多數(shù)未經(jīng)測(cè)定，其花粉質(zhì)量參差不齊，故生產(chǎn)中存在一些問(wèn)題。隨著軟棗獼猴桃栽培面積的擴(kuò)大及品種的多樣化發(fā)展，其雌、雄花的花期不完全一致、惡劣的氣象條件等問(wèn)題對(duì)其授粉勢(shì)必會(huì)造成不良影響。而授粉雄株的優(yōu)選與人工輔助授粉均為解決這一問(wèn)題的有效措施[10]，這對(duì)授粉品種的花粉量與花粉生活力也提出了更高的要求。為給優(yōu)良授粉品種的篩選提供理論依據(jù)，本研究對(duì)15 個(gè)不同軟棗獼猴桃及實(shí)生后代雄株的花粉離體培養(yǎng)條件、萌發(fā)特性和花粉量進(jìn)行了初步觀測(cè)與比較分析，現(xiàn)將研究結(jié)果分析報(bào)道如下。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

15 份供試材料均來(lái)源于遼寧農(nóng)業(yè)職業(yè)技術(shù)學(xué)院西農(nóng)場(chǎng)軟棗獼猴桃資源圃。Z1、Z2 雄株均由中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院鄭州果樹研究所提供。S1、S2、S3……S13 均為野生軟棗獼猴桃實(shí)生后代雄株，選取其中長(zhǎng)勢(shì)健壯、花量較多且花器特征有一定差異的雄性單株作為研究對(duì)象。15 份供試材料花器官的部分特征見表1。

2021 年5 月24 日10：00—12：00 時(shí)采集帶鈴鐺花的枝條，將其存放于密封袋中并及時(shí)帶回實(shí)驗(yàn)室處理以備用。每株各選取約30 朵含苞待放的花蕾，剝離花藥置于避光處陰干后，保存于-20 ℃的冰箱中以用于花粉萌發(fā)特性的測(cè)定。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 花粉培養(yǎng)條件的篩選及其萌發(fā)特性的測(cè)定

采用固體培養(yǎng)基培養(yǎng)， 在1.0% 的瓊脂、100 mg/L 的硼酸的培養(yǎng)條件下，設(shè)定濃度分別為2.5%、5.0%、10.0%、15.0% 的4 個(gè)蔗糖處理，用毛筆蘸取適量花粉均勻撣落于培養(yǎng)基中，于25 ℃的溫度條件下培養(yǎng)4.5 h 后觀察不同濃度的蔗糖處理對(duì)花粉萌發(fā)的影響情況，以篩選出最適蔗糖濃度。

在1.0% 的瓊脂、已篩選出的適宜濃度的蔗糖和25 ℃的培養(yǎng)溫度下，設(shè)置濃度分別為0、25、50、100、200 mg/L 的硼酸處理進(jìn)行比較試驗(yàn)，以篩選出最適硼酸濃度。

在培養(yǎng)溫度分別設(shè)為20、25、30 ℃的條件下進(jìn)行篩選試驗(yàn)；分別培養(yǎng)1.5、3.0、4.5、6.0 h 后觀察花粉萌發(fā)情況，以確定最適培養(yǎng)時(shí)間。

在最終確定的培養(yǎng)條件下培養(yǎng)，觀測(cè)花粉萌發(fā)率和花粉管長(zhǎng)度，比較分析不同雄株的花粉萌發(fā)狀況。每個(gè)試驗(yàn)各設(shè)3 次重復(fù)，每次重復(fù)各統(tǒng)計(jì)5 個(gè)視野的試驗(yàn)數(shù)據(jù)，每個(gè)視野各統(tǒng)計(jì)30 ～ 50 粒花粉，以花粉管長(zhǎng)度大于花粉極軸長(zhǎng)度作為花粉萌發(fā)的判斷標(biāo)準(zhǔn)[11]。

1.2.2 花粉量的測(cè)定

參照朱江華等[12] 利用的纖維素酶法（略有改動(dòng)）測(cè)定花粉量。隨機(jī)取15 枚飽滿、未散粉的花藥置于5 mL 的離心管中，再將其放入25 ℃的恒溫箱中。待花藥干燥、花粉完全散開之后，加入1.0%的纖維素酶溶液1 mL，在振蕩器上處理約20 h 后進(jìn)行預(yù)觀察，根據(jù)花粉密度對(duì)提取液酌情稀釋、搖勻。然后，取2 μL 的溶液置于凹面載玻片上，立即用光學(xué)顯微鏡觀察、拍照后計(jì)數(shù)，每個(gè)處理各重復(fù)3 次?；ǚ哿康挠?jì)算公式如下：每枚花藥的花粉量（ 粒/ 花藥）=（2 μL 溶液的花粉粒數(shù)× 稀釋倍數(shù)× 溶液總體積×1 000）/（2×15）。

1.3 數(shù)據(jù)分析

采用Excel 軟件處理數(shù)據(jù)，使用Origin 2021軟件制圖；利用SPSS 22 軟件分別進(jìn)行Duncan 多重比較、相關(guān)性分析和聚類分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 軟棗獼猴桃花粉離體培養(yǎng)條件的篩選

隨機(jī)選取編號(hào)分別為Z1、Z2、S1、S5、S7、S9 這6 個(gè)軟棗獼猴桃雄株的花粉進(jìn)行培養(yǎng)條件的篩選試驗(yàn)。

2.1.1 培養(yǎng)基中不同濃度的蔗糖對(duì)軟棗獼猴桃花粉萌發(fā)率與花粉管生長(zhǎng)的影響

在培養(yǎng)基中添加濃度分別為2.5%、5.0%、10.0%、15.0% 的蔗糖后，參試雄株花粉萌發(fā)率的變化趨勢(shì)存在一定的差異（圖1A）。隨著培養(yǎng)基中蔗糖濃度的升高，Z1、S1、S5、S9 的花粉萌發(fā)率均先升高后降低，當(dāng)培養(yǎng)基中蔗糖的濃度為10.0% 或?yàn)?.0% ～ 10.0% 時(shí)，其花粉萌發(fā)率均達(dá)到最大值；而Z2 和S7 的花粉萌發(fā)率，雖然也表現(xiàn)出與Z1、S1、S5、S9 的花粉萌發(fā)率相同的變化趨勢(shì)，但不同濃度的蔗糖處理之間花粉萌發(fā)率的差異并不顯著，表明花粉對(duì)不同濃度的蔗糖的響應(yīng)可能不敏感。

與花粉萌發(fā)率相比，花粉管生長(zhǎng)所需的最適蔗糖濃度相對(duì)較低（圖1B）。在較低濃度（2.5% ～5.0%）的蔗糖處理下，Z1 和Z2 的花粉管生長(zhǎng)均較快；但是，隨著培養(yǎng)基中蔗糖濃度的增加，其花粉管長(zhǎng)度均逐漸下降。隨著培養(yǎng)基中蔗糖濃度的遞增，其余雄株的花粉管長(zhǎng)度均表現(xiàn)出先升后降的變化趨勢(shì)，S1、S5、S7 的花粉管長(zhǎng)度峰值均出現(xiàn)于蔗糖濃度為5.0% 的處理中，S9 的花粉管生長(zhǎng)所需蔗糖的最適濃度為5.0% ～ 10.0%。

綜合而言，適宜于大部分軟棗獼猴桃花粉培養(yǎng)的蔗糖濃度為5.0% ～ 10.0%。在不同濃度的蔗糖處理下，Z1 的花粉管長(zhǎng)度始終高于其他雄株的，其花粉萌發(fā)率也相對(duì)較高，故其綜合表現(xiàn)較好；而S9 的花粉萌發(fā)率與花粉管長(zhǎng)度均較低。

2.1.2 培養(yǎng)基中不同濃度的硼酸對(duì)軟棗獼猴桃花粉萌發(fā)率與花粉管生長(zhǎng)的影響

培養(yǎng)基中添加不同濃度的硼酸對(duì)軟棗獼猴桃花粉萌發(fā)和花粉管生長(zhǎng)的影響情況如圖2 所示。培養(yǎng)基中加入的不同濃度硼酸對(duì)軟棗獼猴桃花粉萌發(fā)及花粉管的生長(zhǎng)均有明顯的促進(jìn)作用。當(dāng)硼酸濃度為0 mg/L 時(shí)，不同雄株的花粉萌發(fā)率均極低，僅為0.48% ～ 19.75%。隨著培養(yǎng)基中硼酸的加入，花粉的萌發(fā)率迅速提高。當(dāng)培養(yǎng)基中硼酸的濃度為25 mg/L 時(shí)，Z2、S1 與S9 的花粉萌發(fā)率均達(dá)到最高值；而促使其余雄株花粉萌發(fā)的最適硼酸濃度則為50 mg/L；當(dāng)培養(yǎng)基中硼酸的濃度進(jìn)一步加大時(shí)，花粉萌發(fā)率則呈緩慢或曲線型下降趨勢(shì)。

隨著培養(yǎng)基中硼酸濃度的遞增，參試雄株的花粉管長(zhǎng)度也均呈現(xiàn)出先升后降的變化趨勢(shì)，但其下降幅度均相對(duì)較大。當(dāng)培養(yǎng)基中硼酸的濃度為25 mg/L 時(shí)，S5 和S9 的花粉管長(zhǎng)度均達(dá)到最高值；添加了濃度為50 mg/L 的硼酸的培養(yǎng)基最有利于其余雄株花粉管的生長(zhǎng)。

總體而言，添加了硼酸的培養(yǎng)基可有效促進(jìn)其花粉的萌發(fā)，其中，添加了濃度為25 ～ 50 mg/L的硼酸的培養(yǎng)基對(duì)花粉萌發(fā)的促進(jìn)效果則相對(duì)較好。在添加了不同濃度的硼酸處理下，Z1、S1 和S7 的花粉萌發(fā)率均相對(duì)較高；且當(dāng)培養(yǎng)基中硼酸的濃度為25 ～ 50 mg/L 時(shí)，Z1 的花粉管長(zhǎng)度最大。

2.1.3 培養(yǎng)溫度對(duì)軟棗獼猴桃花粉萌發(fā)率與花粉管生長(zhǎng)的影響

培養(yǎng)溫度對(duì)軟棗獼猴桃花粉萌發(fā)率與花粉管生長(zhǎng)的影響情況如圖3 所示。除S1 的花粉萌發(fā)率對(duì)培養(yǎng)溫度的響應(yīng)不明顯外，其余雄株的花粉萌發(fā)率均不同程度地受到培養(yǎng)溫度的影響。其中，Z1 在25 ℃的溫度條件下其萌發(fā)率較高，其余4 個(gè)雄株則在培養(yǎng)溫度為30 ℃時(shí)的萌發(fā)較好，但所有雄株在培養(yǎng)溫度分別為25 與30 ℃時(shí)的萌發(fā)率的差異均不顯著。與花粉萌發(fā)率相比，6 個(gè)雄株的花粉管長(zhǎng)度對(duì)溫度條件的響應(yīng)則保持一致，均在30 ℃的培養(yǎng)溫度下達(dá)到最大值，且極顯著高于其余溫度處理的。

因此，花粉培養(yǎng)的最適溫度為30 ℃。在不同培養(yǎng)溫度處理下，S1 的花粉萌發(fā)率均最高，Z1 的花粉萌發(fā)率也相對(duì)較高且其花粉管長(zhǎng)度最大，而S9 的花粉管長(zhǎng)度較低。

2.1.4 培養(yǎng)時(shí)間對(duì)軟棗獼猴桃花粉萌發(fā)率與花粉管生長(zhǎng)的影響

不同培養(yǎng)時(shí)間對(duì)軟棗獼猴桃花粉萌發(fā)率與花粉管長(zhǎng)度的影響情況如圖4 所示。培養(yǎng)1.5 h后，不同雄株間花粉萌發(fā)率的差異明顯，其中，Z1、S1 的花粉萌發(fā)均最快，其花粉萌發(fā)率分別為80.48%、79.94%。培養(yǎng)3.0 h，花粉萌發(fā)率與花粉管長(zhǎng)度均迅速增加；此后，不同雄株的花粉萌發(fā)率及花粉管長(zhǎng)度均呈曲線形上升趨勢(shì)，增長(zhǎng)趨緩。

參試雄株在培養(yǎng)4.5 與6.0 h 的萌發(fā)率均無(wú)明顯差異，且其中的3 個(gè)雄株在萌發(fā)管長(zhǎng)度上也無(wú)顯著區(qū)別。當(dāng)培養(yǎng)時(shí)間過(guò)長(zhǎng)時(shí)，由于花粉管過(guò)長(zhǎng)，相互間經(jīng)常扭曲、纏繞或重疊，且部分花粉管易破裂，會(huì)導(dǎo)致觀測(cè)難度增加。

因此認(rèn)為，培養(yǎng)4.5 或6.0 h 后即可觀測(cè)。不同培養(yǎng)時(shí)間下，Z1 的花粉管長(zhǎng)度始終最高；而Z2和S9 的花粉萌發(fā)率均較低。

2.2 不同軟棗獼猴桃雄株花粉量與花粉萌發(fā)狀況的比較分析

不同軟棗獼猴桃雄株的花粉量見表2。單花的花藥數(shù)量是影響雄株花粉量的重要指標(biāo)，不同雄株間花粉量存在顯著差異。15 份材料的花藥數(shù)量為32.67 ～ 47.88 枚/ 朵，其中，S2 和S13 的花藥數(shù)量均相對(duì)較多，而S8 的花藥數(shù)量最少。

不同雄株的單藥花粉量為3 267 ～ 26 000 粒，株間差異明顯。據(jù)此，可將15 個(gè)雄株分為3 類：7 份材料的花粉量均大于18 000 粒/ 花藥，其編號(hào)依次為S7、S3、Z2、Z1、S1、S12、S13、S5；花粉量小于5 000 粒/ 花藥的雄株有2 個(gè)，分別為S4和S6；其余的雄株歸為一類。依據(jù)花藥數(shù)與單藥花粉量2 項(xiàng)指標(biāo)進(jìn)行比較，S3 和S13 的單花花粉量均較大，S4 和S6 的單花花粉量均為供試15 份材料中最低的。

在篩選出的培養(yǎng)條件（即培養(yǎng)基中添加1.0%的瓊脂、濃度為25 mg/L 的硼酸、濃度為10.0%的蔗糖，培養(yǎng)溫度為30 ℃）下培養(yǎng)4.5 h 后，對(duì)15 個(gè)雄株的花粉生活力進(jìn)行測(cè)定。結(jié)果顯示，供試雄株的花粉萌發(fā)率均較高，其中，Z1 與S8 的花粉萌發(fā)率均在90% 以上；Z2、S4、S9 的花粉萌發(fā)率雖均較低，但也都在65%以上?；ǚ酃艿拈L(zhǎng)度，Z1、S2 與S8 的均相對(duì)較高，均極顯著高于其余雄株的。需要注意的是，雖然S1 與S12 的花粉管長(zhǎng)度均較低，但其花粉萌發(fā)率卻均相對(duì)較高。

進(jìn)一步對(duì)5 個(gè)主要花粉性狀指標(biāo)進(jìn)行相關(guān)性分析，結(jié)果見表3。除單藥花粉量與單花花粉量呈極顯著正相關(guān)之外，其余各個(gè)花粉性狀指標(biāo)間均無(wú)明顯的相關(guān)性?；ǚ哿客ǔＲ詥位ɑǚ哿炕騿嗡幓ǚ哿縼?lái)表示，而單花花粉量由單藥花粉量和花藥數(shù)這2 個(gè)因素共同決定，能更準(zhǔn)確、全面地反映雄株的花粉量水平[2]。雄株間花藥數(shù)的差異相對(duì)較小，因此參試雄株的單花花粉量主要受單藥花粉量的影響，這也導(dǎo)致了兩者間較強(qiáng)相關(guān)性的存在。而花粉萌發(fā)率與花粉管長(zhǎng)度雖然在一定程度上表現(xiàn)為正相關(guān)（r=0.392），但其相關(guān)性仍未達(dá)到顯著水平。

2.3 基于不同軟棗獼猴桃雄株花粉量及花粉萌發(fā)狀況的聚類分析結(jié)果

為了更加直觀、清晰地比較不同雄株授粉性狀的優(yōu)劣，利用SPSS 22 軟件進(jìn)行聚類分析。因花粉特征的多樣性并非探討的重點(diǎn)，故將相關(guān)指標(biāo)合并、簡(jiǎn)化為單花花粉量、花粉萌發(fā)率與花粉管長(zhǎng)度這3 個(gè)變量，參照李芳芳等[13] 所用的聚類方法，采用Ward 法和平方歐式距離，將數(shù)據(jù)標(biāo)準(zhǔn)化處理后進(jìn)行系統(tǒng)聚類分析，結(jié)果如圖5 所示。

由圖5 可知，在閾值為11.5 處，可將供試雄株劃分為4 個(gè)類群。其中，類群1、2 分別包含3、4 份雄株，這2 個(gè)類群特別是類群2 的組內(nèi)距離均相對(duì)較小；類群3、4 則分別包括5、3 份材料，此2 個(gè)類群的組內(nèi)距離均較大，表明組內(nèi)不同雄株在3 個(gè)指標(biāo)上的相似度均較低，部分指標(biāo)存在一定差別。

進(jìn)一步對(duì)4 個(gè)類群的單花花粉量、花粉萌發(fā)率與花粉管長(zhǎng)度進(jìn)行多重比較，結(jié)果見表4。類群1 的花粉萌發(fā)率最高且花粉管生長(zhǎng)最快，其極大值分別為96.59% 與471.34 μm；單花花粉量相對(duì)較高，但其變幅跨度較大。類群2 的平均單花花粉量最高且其變幅較小，為1 013 823 粒，顯著高于類群3、4 的，但與類群1 的差異不明顯；同時(shí)，該類群的花粉萌發(fā)率和花粉管長(zhǎng)度也均相對(duì)較高。類群3、4 的共同特點(diǎn)為單花花粉量均較低，而其變化幅度均極大，此2 個(gè)類群的區(qū)別在于，類群3 的花粉萌發(fā)率中等且其花粉管最短，而類群4 的花粉萌發(fā)率卻最低。

3 討論與結(jié)論

3.1 討 論

3.1.1 軟棗獼猴桃的花粉離體培養(yǎng)條件

研究花粉活力的方法主要有染色法、離體培養(yǎng)法等[14-15]。染色法包括醋酸洋紅、TTC 和MTT染色法[16-17] 等，其中以TTC 染色法較為常用。在預(yù)試驗(yàn)中，也嘗試過(guò)以TTC 染色法測(cè)定花粉活力，但可能由于試劑濃度、處理時(shí)間等原因[18] 導(dǎo)致花粉不易染色。而離體萌發(fā)法則具有操作簡(jiǎn)便、數(shù)據(jù)穩(wěn)定[19] 等優(yōu)點(diǎn)。但在花粉的離體培養(yǎng)過(guò)程中，測(cè)定結(jié)果除了受自身萌發(fā)特性的制約之外，在很大程度上也明顯地受到培養(yǎng)基組分、培養(yǎng)溫度等培養(yǎng)條件的影響[20]。

花粉的萌發(fā)與花粉管生長(zhǎng)均需要適量的外源蔗糖和硼酸，若其濃度過(guò)高或過(guò)低萌發(fā)效果則會(huì)降低[21]。作為離體培養(yǎng)的能量來(lái)源，適宜的蔗糖濃度可有效改善花粉的萌發(fā)狀況，但蔗糖濃度過(guò)高時(shí)也會(huì)因滲透壓失衡導(dǎo)致花粉管破裂[20]，從而影響萌發(fā)效果。試驗(yàn)結(jié)果表明，軟棗獼猴桃花粉萌發(fā)所需的最適蔗糖濃度（5.0% ～ 10.0%）在不同雄株間略有差異，而適于大部分雄株花粉管生長(zhǎng)的最適蔗糖濃度則為2.5% ～ 5.0%?？傮w來(lái)看，花粉管生長(zhǎng)比花粉萌發(fā)對(duì)蔗糖的需求略低，這一結(jié)果與有關(guān)研究者對(duì)梨[21]、草坪草[22] 等植物的研究結(jié)果類似，具體原因有待深入探討。

硼在花粉細(xì)胞壁的構(gòu)建等方面發(fā)揮著重要作用[20]，進(jìn)而影響花粉的萌發(fā)及花粉管的生長(zhǎng)。不同雄株的花粉在未添加外源性硼的培養(yǎng)基上其萌發(fā)率極低，硼酸的加入可明顯促進(jìn)其花粉的萌發(fā)及花粉管的生長(zhǎng)，其最適硼酸濃度為25 ～ 50 mg/L；但是，隨著硼酸濃度的進(jìn)一步增加，花粉萌發(fā)率特別是萌發(fā)管的生長(zhǎng)卻受到抑制。

在培養(yǎng)溫度為25 ～ 30 ℃時(shí)其花粉萌發(fā)率均相對(duì)較高，但是，30 ℃的培養(yǎng)溫度最有利于花粉管的伸長(zhǎng)，因此，最適培養(yǎng)溫度約為30 ℃。鑒于供試雄株在培養(yǎng)4.5 與6.0 h 后的萌發(fā)率均無(wú)明顯區(qū)別，僅部分雄株的萌發(fā)管長(zhǎng)度存在差異，因此認(rèn)為，最適觀察時(shí)間為培養(yǎng)4.5 ～ 6.0 h?？傮w而言，不同軟棗獼猴桃雄株的最適培養(yǎng)溫度、觀察時(shí)間與齊秀娟等[23] 對(duì)美味獼猴桃的研究結(jié)論基本一致。

3.1.2 不同軟棗獼猴桃雄株間花粉量與花粉萌發(fā)狀況的差異分析

對(duì)15 份軟棗獼猴桃雄株的研究結(jié)果表明，其花粉量及萌發(fā)特性均存在明顯的株間差異?；ǚ哿颗c花粉活力直接影響著授粉質(zhì)量及雜交育種效率的提高[24-25]。不同雄株間單花花粉量的差異較大，其中S4 和S6 的單花花粉量均較少，僅分別為145 380、132 300 粒；而S3、S13 的單花花粉量均超過(guò)1 000 000 粒，均在S6 的7 倍以上。

花粉的萌發(fā)率及花粉管的生長(zhǎng)速度在不同程度上決定了雄株的花粉育性[2，12]。在花粉管的長(zhǎng)度上，絕大多數(shù)雄株離體培養(yǎng)4.5 h 后均可達(dá)到300 μm以上，但S12 的花粉管長(zhǎng)度僅為187.28 μm，其花粉管的生長(zhǎng)明顯慢于其余雄株。15 個(gè)雄株的花粉萌發(fā)率均在65% 以上，其中S8 的最高，可達(dá)96.59%。而齊秀娟等[2] 報(bào)道的3 個(gè)軟棗獼猴桃雄株的花粉萌發(fā)率均相對(duì)較低，這也進(jìn)一步證實(shí)了軟棗獼猴桃的花粉萌發(fā)率存在明顯的株間差異，且參試雄株的花粉育性均較強(qiáng)。Stasiak 等[26] 對(duì)7 個(gè)軟棗獼猴桃雄性品種的研究結(jié)果表明，不同基因型雄株的單枝花數(shù)、單藥花粉量、單花花粉量等指標(biāo)在品種間存在顯著差異，這一研究結(jié)果能為雄株的評(píng)價(jià)提供參考依據(jù)；但是，不同雄性品種的花粉萌發(fā)率均在85% 以上且其差異不明顯，這與本研究得出的花粉萌發(fā)率存在明顯的株間差異的結(jié)果并不一致，其原因可能與參試品種的數(shù)量及其花粉特性、栽培條件等因素有關(guān)。

許多研究結(jié)果都表明，花粉量與花粉萌發(fā)率或花粉管長(zhǎng)度不存在明顯的相關(guān)性[2，13，24]，對(duì)5 個(gè)主要花粉性狀指標(biāo)的相關(guān)性分析結(jié)果也證明了這一觀點(diǎn)。相關(guān)性分析結(jié)果表明，除單藥花粉量與單花花粉量外，其余各指標(biāo)間均無(wú)明顯的相關(guān)性。

因此，在聚類分析劃分的4 個(gè)類群中，也未出現(xiàn)花粉量最多且花粉萌發(fā)率、花粉管長(zhǎng)度均最大的類群。類群1 的花粉萌發(fā)率、花粉管長(zhǎng)度均最大，但其單花花粉量少于類群2 的且其變幅較大，綜合考慮3 個(gè)性狀指標(biāo)，初步認(rèn)為，僅有Z1 的表現(xiàn)較優(yōu)異。類群2 的單花花粉量最高且其變幅小，其花粉萌發(fā)率、花粉管長(zhǎng)度雖均低于類群1 的，但仍均處于相對(duì)較高的水平上，說(shuō)明其綜合表現(xiàn)較好。類群3、4 的8 個(gè)雄株則因單花花粉量均較少，且因其花粉萌發(fā)率偏低或花粉管生長(zhǎng)速度速度慢等，故其均不適宜用作授粉樹。

另外，雄株的開花量[26]、授粉親和力[27] 及是否與雌性品種花期一致等多種因素也都會(huì)直接影響授粉效果。有關(guān)研究者對(duì)軟棗獼猴桃6 個(gè)雄性品種和美味獼猴桃雄株‘陶木里’的研究結(jié)果表明，不同雄株與軟棗獼猴桃雌性品種的親和力的差異明顯，其中，‘Nostino’與‘Rubi’的授粉親和力均較強(qiáng)，其對(duì)單果種子數(shù)等果實(shí)性狀也存在花粉直感效應(yīng)[27]。因此，下一步的研究應(yīng)在擴(kuò)大雄株篩選范圍的基礎(chǔ)上，結(jié)合上述指標(biāo)，進(jìn)一步優(yōu)選并科學(xué)配置授粉樹。

3.2 結(jié) 論

不同軟棗獼猴桃的花粉離體培養(yǎng)最適條件略有差異，總體而言，在培養(yǎng)基中添加5.0% ～ 10.0%的蔗糖、25 ～ 50 mg/L 的硼酸，在30 ℃的溫度條件下培養(yǎng)4.5 ～ 6.0 h 較為適宜。在此基礎(chǔ)上，對(duì)15 份雄株的花粉量及花粉萌發(fā)特性進(jìn)行了比較分析，其單花花粉量為132 300 ～ 1 106 307 粒，其花粉萌發(fā)率為65.90% ～ 96.59%，其花粉管長(zhǎng)度為187.28 ～ 471.34 μm，說(shuō)明其株間差異顯著。聚類分析結(jié)果表明，供試雄株可分為4 個(gè)類群，其中，類群2 的4 個(gè)雄株及類群1 的Z1 的綜合性狀均較好，可考慮進(jìn)一步篩選利用，其余雄株不建議用作授粉樹。

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[ 本文編校：伍敏濤]