江莉平，劉伍星，馬夢(mèng)云，司 琳，夏 飛 (.洪湖市人民醫(yī)院腫瘤血液內(nèi)科，湖北 洪湖 400；.洪湖市人民醫(yī)院康復(fù)科，湖北 洪湖 400；.江漢大學(xué)附屬湖北省第三人民醫(yī)院藥學(xué)部，湖北 武漢 400)

胃癌是全球范圍內(nèi)較常見的消化道惡性腫瘤之一，由于其早期無(wú)典型癥狀，多數(shù)患者就診時(shí)已處于中晚期，錯(cuò)過(guò)了最佳的治療時(shí)機(jī)，導(dǎo)致生存率較低[1-2]。流行病學(xué)報(bào)告顯示，隨著胃癌相關(guān)基礎(chǔ)及臨床研究的不斷深入，我國(guó)胃癌的發(fā)生率及病死率均有所下降，但仍處于較高的水平，且胃癌的轉(zhuǎn)移率和復(fù)發(fā)率較高，患者預(yù)后較差[3-4]。近年來(lái)有學(xué)者發(fā)現(xiàn)，α-嵌合蛋白(α-chimaerin 1，CHN1)基因可能在腫瘤的形成等過(guò)程中發(fā)揮重要作用，但研究仍處于起步階段[5]。微小RNA(microRNA，miRNA)是一種參與基因轉(zhuǎn)錄后調(diào)控的非編碼單鏈RNA分子，通常在真核生物中檢測(cè)到，可通過(guò)調(diào)控多種靶基因的表達(dá)水平參與腫瘤形成等過(guò)程，已被證實(shí)與腫瘤的發(fā)生發(fā)展過(guò)程密切相關(guān)[6]。有研究表明，miR-298可調(diào)控肝癌[7]、肺癌[8]、卵巢癌[9]等多種腫瘤細(xì)胞的增殖和侵襲，然而目前關(guān)于miR-298對(duì)胃腺癌細(xì)胞的影響尚不明確，且尚無(wú)miR-298與CHN1在胃腺癌中相互作用的研究?；诖?，本研究初步探討了miR-298靶向CHN1對(duì)胃腺癌細(xì)胞增殖、凋亡的影響及潛在作用機(jī)制，以期為闡明胃腺癌發(fā)展及轉(zhuǎn)移的相關(guān)機(jī)制及尋找新藥靶點(diǎn)提供理論基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 主要材料與試劑

人胃腺癌細(xì)胞系SGC-7901、BGC-823購(gòu)自中國(guó)科學(xué)院(上海)生物化學(xué)與細(xì)胞生物學(xué)研究所。DMEM培養(yǎng)液、10%FBS、PBS等購(gòu)自美國(guó)Gibco公司；TRIzol試劑、LipofectamineTM2000試劑盒購(gòu)自美國(guó)Invitrogen公司；乳酸脫氫酶(lactate dehydrogenase，LDH)釋放檢測(cè)試劑盒購(gòu)自上海碧云天生物技術(shù)有限公司；β-actin、CHN1、Ki67、CDK2、CCNB1、BCL2、BAX一抗購(gòu)自英國(guó)Abcam公司；PVDF膜、ECL化學(xué)發(fā)光顯色液購(gòu)自美國(guó)Millipore公司。

1.2 細(xì)胞培養(yǎng)

將人胃腺癌細(xì)胞系SGC-7901、BGC-823復(fù)蘇后置于37 ℃、5% CO2的恒溫培養(yǎng)箱中進(jìn)行常規(guī)培養(yǎng)，取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期細(xì)胞用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

1.3 生物信息學(xué)分析

從TCGA數(shù)據(jù)庫(kù)(http://www.cancergenome.nih.gov/)中下載胃腺癌的TCGA_STAD表達(dá)矩陣和臨床信息，以中位數(shù)進(jìn)行分組，將胃癌患者分為CHN1高表達(dá)組和CHN1低表達(dá)組，利用TCGA數(shù)據(jù)庫(kù)分析CHN1在胃腺癌中的表達(dá)及其與臨床表型的關(guān)系。從GEO數(shù)據(jù)庫(kù)(http://www.ncbi.nlm.nih.gov/geo)中下載基因表達(dá)譜公共數(shù)據(jù)集GSE54397，分析miR-298在胃腺癌中的表達(dá)水平。運(yùn)用RNAhybrid數(shù)據(jù)庫(kù)(https://bibiserv.cebitec.uni-bielefeld.de/rnahybrid)預(yù)測(cè)miR-298與CHN1的靶向關(guān)系，評(píng)估m(xù)iR-298與CHN1 3’-UTR的互補(bǔ)性。

1.4 細(xì)胞轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)

1.4.1 CHN1低表達(dá)和干擾細(xì)胞的構(gòu)建 取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期細(xì)胞接種于6孔板，細(xì)胞密度達(dá)70%～80%時(shí)，根據(jù)LipofectamineTM2000試劑盒說(shuō)明書以shCHN1 1#(shCHN1 1#組)、shCHN1 2#(shCHN1 2#組)及陰性對(duì)照慢病毒載體shNC(shNC組)轉(zhuǎn)染細(xì)胞，空白對(duì)照組細(xì)胞不轉(zhuǎn)染質(zhì)粒。轉(zhuǎn)染完成后采用嘌呤霉素篩選出穩(wěn)定敲低CHN1的SGC-7901和BGC-823細(xì)胞系。

1.4.2 miR-298轉(zhuǎn)染及CHN1共轉(zhuǎn)染 根據(jù)LipofectamineTM2000試劑盒說(shuō)明書分別轉(zhuǎn)染miR-298模擬物(miR-298組)、陰性對(duì)照慢病毒載體miR-NC(miR-NC組)及miR-298模擬物+CHN1高表達(dá)質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染體系(miR-298+CHN1組)。

1.5 CCK-8實(shí)驗(yàn)

調(diào)整各組細(xì)胞濃度為2×104/L，并接種于96孔板，無(wú)菌PBS填充邊緣孔，在37 ℃、5% CO2培養(yǎng)箱中常規(guī)靜置培養(yǎng)。于接種0 d、1 d、2 d、3 d、4 d、5 d向每孔滴加10 μL CCK-8工作液，繼續(xù)培養(yǎng)4 h后采用DNM-9606型酶標(biāo)分析儀(北京朗普新技術(shù)有限公司)檢測(cè)450 nm波長(zhǎng)處的吸光度(OD)值，繪制生長(zhǎng)曲線。

1.6 克隆形成實(shí)驗(yàn)檢測(cè)

將各組細(xì)胞制成單細(xì)胞懸液，以500個(gè)/皿的密度接種至含10 mL 37 ℃預(yù)溫培養(yǎng)液的培養(yǎng)皿中，均勻分散細(xì)胞后常規(guī)靜置培養(yǎng)。觀察到肉眼可見的克隆時(shí)停止培養(yǎng)。棄去培養(yǎng)皿中的上清培養(yǎng)液后，用PBS清洗2次，以1∶3的比例加入醋酸/甲醇溶液固定15 min后，棄固定液，用Gimsa染色20 min，于流水下緩慢清洗染色液，計(jì)數(shù)克隆細(xì)胞?？寺⌒纬陕?%)=克隆數(shù)/接種細(xì)胞數(shù)×100%。

1.7 流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞周期

將各組細(xì)胞濃度調(diào)整為1×106/mL，并接種至6孔板，常規(guī)靜置培養(yǎng)48 h，再置入離心管中，以1 000 r/min于4 ℃離心5 min后收集細(xì)胞，PBS洗滌，加入Annexin V-FITC細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒(美國(guó)AAT Bioquest公司)中的緩沖液混勻，再加入PI、RNase A混合，4 ℃避光孵育30 min，采用FACSCalibur流式細(xì)胞儀(美國(guó)BD公司)進(jìn)行檢測(cè)分析。

1.8 LDH釋放檢測(cè)試劑盒檢測(cè)細(xì)胞毒性

調(diào)整各組細(xì)胞濃度為2×104/L，并接種至96孔板中，無(wú)菌PBS填充邊緣孔，在37 ℃、5%CO2培養(yǎng)箱中常規(guī)靜置培養(yǎng)23 h后加入LDH釋放試劑，反復(fù)吹打混勻，繼續(xù)孵育1 h后常溫下以1 000 r/min離心5 min，收集各組上清液，參照試劑盒說(shuō)明書檢測(cè)LDH釋放量。

1.9 體內(nèi)移植瘤實(shí)驗(yàn)

取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期低表達(dá)CHN1穩(wěn)定轉(zhuǎn)染SGC-7901細(xì)胞株(shCHN1 1#組)及陰性對(duì)照SGC-7901細(xì)胞株(shNC組)，制成單細(xì)胞懸液，于裸小鼠右腋下注射，每次注射1×106個(gè)活細(xì)胞，建立荷瘤小鼠模型，每組接種5只裸鼠。保持溫度、光照節(jié)律不變，自由飲食、飲水。觀察0 d、2 d、4 d、6 d、8 d、10 d、12 d、14 d固定時(shí)間下裸鼠移植瘤生長(zhǎng)情況，在肉眼觀察到瘤體形成后，每2 d用游標(biāo)卡尺測(cè)量皮下移植瘤體積并繪制腫瘤生長(zhǎng)曲線。14 d后處死小鼠，取出腫瘤，稱重固定，然后用于免疫組化實(shí)驗(yàn)。

1.10 免疫組化實(shí)驗(yàn)

取各組小鼠瘤體組織，常規(guī)制成切片，脫蠟、水化后以枸櫞酸鈉抗原修復(fù)，3%H2O2去除內(nèi)源性過(guò)氧化物酶，血清封閉，加入CHN1一抗(1∶250)，4 ℃冰箱過(guò)夜，PBS清洗3次，滴加HRP標(biāo)記的二抗(1∶250)，室溫孵育20 min，PBS清洗3次，滴加DAB顯色，顯微鏡下控制顯色，蘇木素復(fù)染，1%鹽酸酒精分化，自來(lái)水沖洗返藍(lán)，梯度乙醇脫水后吹干，中性樹膠封片。顯微鏡下隨機(jī)選擇5個(gè)高倍(×400)視野，統(tǒng)計(jì)陽(yáng)性著色細(xì)胞占比，以細(xì)胞核呈棕黃色為CHN1陽(yáng)性表達(dá)。

1.11 雙熒光素酶報(bào)告實(shí)驗(yàn)

運(yùn)用雙熒光素酶報(bào)告分析CHN1與miR-298的靶向關(guān)系。根據(jù)靶基因預(yù)測(cè)軟件預(yù)測(cè)的可能結(jié)合位點(diǎn)，設(shè)計(jì)合成該位點(diǎn)的DNA片段(CHN1 WT)及該位點(diǎn)突變體的DNA片段(CHN1 MUT)，退火后克隆至雙熒光素酶啟動(dòng)子載體中。將合成的包含有CHN1 WT及CHN1 MUT的質(zhì)粒與miR-298共轉(zhuǎn)染至SGC-7901細(xì)胞，孵育48 h后棄去培養(yǎng)基，采用熒光素酶檢測(cè)試劑盒檢測(cè)細(xì)胞熒光素酶活性。

1.12 qRT-PCR實(shí)驗(yàn)

采用qRT-PCR法檢測(cè)人胃腺癌細(xì)胞SGC-7901、BGC-823中CHN1 mRNA的表達(dá)水平。TRIzol法提取總RNA，按照反轉(zhuǎn)錄試劑盒說(shuō)明書反轉(zhuǎn)錄得到cDNA，采用ABI7500型熒光定量PCR儀(美國(guó)Thermofisher)完成PCR擴(kuò)增， PCR反應(yīng)條件:95 ℃、5 min，95 ℃、30 s，65 ℃、30 s，72 ℃、30 s，共35個(gè)循環(huán)，最后72 ℃延伸1 min。以GAPDH作為標(biāo)準(zhǔn)內(nèi)參，采用2-ΔΔCt法對(duì)CHN1的相對(duì)表達(dá)進(jìn)行定量。引物序列如下：CHN1-F，5’-GGAGCTACCTCATCCGGGAG-3’；CHN1-R，5’-TGTGTC-TCTTTCAGGACTGGCA-3’；GAPDH-F，5’-CAGCCAGGAGA-AATCAAACAG-3’；GAPDH-R，5’-GACTGAGTACCTGAAC-CGGC-3’。

1.13 Western blot實(shí)驗(yàn)

將各組細(xì)胞培養(yǎng)48 h后，提取總蛋白，Bradford調(diào)節(jié)蛋白濃度。經(jīng)SDS-PAGE凝膠電泳、電轉(zhuǎn)膜至PVDF膜，密封2 h，添加β-actin、CHN1、Ki67、CDK2、CCNB1、BCL2、BAX一抗4 ℃孵育過(guò)夜，用TBST漂洗40 min，加入HRP標(biāo)記的二抗孵育1 h，TBST漂洗40 min，ECL發(fā)光液顯色，暗室曝光。各組蛋白條帶灰度值采用Imaging System軟件分析，標(biāo)準(zhǔn)內(nèi)參為β-actin，計(jì)算各蛋白的相對(duì)灰度值。

1.14 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

2 結(jié)果

2.1 CHN1在胃腺癌中的表達(dá)情況及其與臨床表型的關(guān)系

采用TCGA數(shù)據(jù)庫(kù)分析CHN1在胃腺癌中的表達(dá)情況及其與臨床表型的關(guān)系，結(jié)果顯示，CHN1在胃腺癌組織中高表達(dá)(P<0.05)，其表達(dá)水平與美國(guó)癌癥聯(lián)合會(huì)(American Joint Committee on Cancer，AJCC)臨床分期、AJCC T分期、分化程度、AJCC N分期、AJCC M分期、預(yù)后有關(guān)(P<0.05)，且CHN1高表達(dá)者的總生存率、無(wú)病生存率均低于CHN1低表達(dá)者(P<0.05)，見圖1。

a：CHN1在胃腺癌及癌旁組織中的表達(dá)；b：CHN1在不同臨床分期患者中的表達(dá)c：CHN1在不同AJCC T分期患者中的表達(dá)；d：CHN1在不同分化程度患者中的表達(dá)；e：CHN1在不同預(yù)后患者中的表達(dá)；f：CHN1在不同AJCC N分期患者中的表達(dá)；g：CHN1在不同AJCC M分期患者中的表達(dá)；h：CHN1高、低表達(dá)患者的總生存率；i：CHN1高、低表達(dá)患者的無(wú)病生存率 *：P<0.05圖1 CHN1在胃腺癌中的表達(dá)及其與臨床表型的關(guān)系

2.2 CHN1低表達(dá)對(duì)胃腺癌細(xì)胞增殖及細(xì)胞周期的影響

與shNC組相比，shCHN1 1#組和shCHN1 2#組SGC-7901和BGC-823細(xì)胞CHN1蛋白表達(dá)、OD值、克隆形成率、處于G0/G1期的細(xì)胞比例均明顯下降(P<0.05)，處于S期的細(xì)胞比例明顯上升(P<0.05)，處于G2/M期的細(xì)胞比例無(wú)顯著變化(P>0.05)，Ki67、CDK2、CCNB1蛋白表達(dá)水平明顯下降(P<0.05)，見圖2。以上結(jié)果提示CHN1低表達(dá)能抑制胃腺癌細(xì)胞增殖，并影響細(xì)胞周期。

a：Western blot檢測(cè)CHN1蛋白表達(dá)；b、c：CCK-8檢測(cè)細(xì)胞活力；d：克隆形成實(shí)驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞增殖能力；e、f：流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞周期；g：Western blot檢測(cè)細(xì)胞周期相關(guān)蛋白的表達(dá)水平 *：與shNC組相比，P<0.05圖2 CHN1低表達(dá)對(duì)胃腺癌細(xì)胞增殖及細(xì)胞周期的影響

2.3 CHN1低表達(dá)對(duì)胃腺癌細(xì)胞凋亡的影響

與shNC組相比，shCHN1 1#組和shCHN1 2#組SGC-7901和BGC-823細(xì)胞的LDH釋放、細(xì)胞凋亡率均明顯升高(P<0.05)，BCL2蛋白表達(dá)水平明顯下降(P<0.05)，BAX蛋白表達(dá)水平明顯上升(P<0.05)，見圖3。以上結(jié)果提示CHN1低表達(dá)能促進(jìn)胃腺癌細(xì)胞凋亡。

a：細(xì)胞毒性檢測(cè)；b：細(xì)胞凋亡檢測(cè)；c：凋亡相關(guān)蛋白表達(dá)水平檢測(cè) *：與shNC組相比，P<0.05

2.4 CHN1低表達(dá)對(duì)裸鼠成瘤能力的影響

與shNC組相比，shCHN1 1#組小鼠的瘤體體積、質(zhì)量明顯下降(P<0.05)，小鼠瘤體組織中的CHN1蛋白表達(dá)水平明顯下降(P<0.05)，見圖4。提示CHN1低表達(dá)在體內(nèi)抑制胃腺癌細(xì)胞增殖。

a～b：CHN1低表達(dá)對(duì)裸鼠瘤體體積、質(zhì)量的影響；c：免疫組化法檢測(cè)瘤體中CHN1蛋白表達(dá)(×400) *：與shNC組相比，P<0.05

2.5 miR-298靶向負(fù)調(diào)控CHN1的表達(dá)

與癌旁組織相比，miR-298在胃腺癌中低表達(dá)(P<0.05)。運(yùn)用RNAhybrid數(shù)據(jù)庫(kù)分析發(fā)現(xiàn)，miR-298與CHN1存在靶向結(jié)合位點(diǎn)；熒光素酶報(bào)告結(jié)果顯示，CHN1-MUT組的熒光素酶活性無(wú)顯著變化，而CHN1-WT組的熒光素酶活性顯著降低，表明結(jié)合位點(diǎn)的突變使得miR-298與CHN1的靶向調(diào)控作用消失。與miR-NC組相比，miR-298組SGC-7901和BGC-823細(xì)胞CHN1 mRNA及蛋白表達(dá)水平明顯下降(P<0.05)，見圖5。提示miR-298在胃腺癌中低表達(dá)，且其能靶向負(fù)調(diào)控CHN1的表達(dá)。

a、b：生物信息學(xué)分析miR-298在胃腺癌中的表達(dá)水平及miR-298與CHN1的靶向關(guān)系；c：雙熒光素酶報(bào)告實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證miR-298與CHN1的靶向關(guān)系；d：qRT-PCR檢測(cè)CHN1 mRNA相對(duì)表達(dá)水平；e：Western blot檢測(cè)CHN1蛋白表達(dá)水平 *：P<0.05圖5 miR-298靶向負(fù)調(diào)控CHN1的表達(dá)

2.6 miR-298靶向負(fù)調(diào)控CHN1的表達(dá)抑制胃腺癌細(xì)胞增殖

與miR-NC組相比，miR-298組SGC-7901和BGC-823細(xì)胞CHN1蛋白表達(dá)、OD值、克隆形成率均明顯下降(P<0.05)，處于G0/G1期的細(xì)胞比例明顯下降(P<0.05)，處于S期的細(xì)胞比例明顯上升(P<0.05)，處于G2/M期的細(xì)胞比例無(wú)顯著變化(P>0.05)，Ki67蛋白表達(dá)水平明顯下降(P<0.05)；而與miR-NC組相比，miR-298+CHN1組上述指標(biāo)無(wú)明顯變化(P<0.05)，見圖6。提示miR-298可通過(guò)靶向負(fù)調(diào)控CHN1的表達(dá)抑制胃腺癌細(xì)胞增殖。

a：Western blot檢測(cè)CHN1蛋白表達(dá)水平；b、c：CCK-8檢測(cè)細(xì)胞活力；d：克隆形成實(shí)驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞增殖能力；e、f：流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)SGC-7901和BGC-823細(xì)胞周期；g：Western blot檢測(cè)細(xì)胞周期相關(guān)蛋白表達(dá)水平 *：與miR-NC組相比，P<0.05圖6 miR-298靶向負(fù)調(diào)控CHN1的表達(dá)抑制胃腺癌細(xì)胞增殖

3 討論

CHN1位于人類2號(hào)染色體的q31-32.1區(qū)域，其可編碼一種GTP酶激活蛋白，該蛋白能夠與GDP或GTP結(jié)合[10]。目前，已有學(xué)者對(duì)CHN1開展系列研究，但多集中在神經(jīng)生物學(xué)領(lǐng)域，如對(duì)腦部發(fā)育、神經(jīng)信號(hào)傳導(dǎo)、突觸的發(fā)生機(jī)制等的影響，而CHN1對(duì)腫瘤發(fā)生發(fā)展過(guò)程的影響鮮有報(bào)道[11]。Zhao等[12]研究顯示，CHN1在宮頸癌組織中高表達(dá)，且與宮頸癌患者的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移狀態(tài)及不良預(yù)后密切相關(guān)。Li等[13]運(yùn)用生物信息學(xué)技術(shù)分析發(fā)現(xiàn)，在胃癌患者中CHN1表達(dá)明顯上調(diào)，且其高表達(dá)與患者的不良預(yù)后顯著相關(guān)。本研究利用TCGA數(shù)據(jù)庫(kù)分析CHN1在胃腺癌中的表達(dá)情況及其與臨床表型的關(guān)系，結(jié)果顯示，CHN1在胃腺癌中高表達(dá)，其表達(dá)水平與AJCC臨床分期、AJCC T分期、分化程度、AJCC N分期、AJCC M分期、預(yù)后有關(guān)，且CHN1高表達(dá)者的總生存率、無(wú)病生存率均低于CHN1低表達(dá)者，同時(shí)，本研究在胃腺癌細(xì)胞系SGC-7901、BGC-823中證實(shí)，CHN1低表達(dá)可導(dǎo)致細(xì)胞的增殖活力及克隆形成率明顯下降，LDH釋放更加明顯，且細(xì)胞周期阻滯于S期，提示CHN1在胃腺癌的發(fā)生發(fā)展過(guò)程具有重要作用。

Ki67是一種與有絲分裂密切相關(guān)的核抗原，在細(xì)胞增殖中不可或缺，可作為檢測(cè)細(xì)胞增殖能力的重要指標(biāo)[14]。CDK2、CCNB1則是機(jī)體內(nèi)研究發(fā)現(xiàn)調(diào)控細(xì)胞周期的兩類蛋白，CDK2主要參與細(xì)胞G1期向S期轉(zhuǎn)變的過(guò)程；CCNB1主要通過(guò)和CDKs結(jié)合后，促進(jìn)細(xì)胞的G2/M期轉(zhuǎn)變[15-16]。BCL2在細(xì)胞凋亡過(guò)程中起關(guān)鍵作用，能抑制細(xì)胞凋亡；BAX則主要發(fā)揮促凋亡作用，兩者在細(xì)胞內(nèi)表達(dá)比例的失衡與細(xì)胞凋亡密切相關(guān)[17]。本研究結(jié)果顯示，CHN1表達(dá)下調(diào)后，Ki67、CDK2、CCNB1、BCL2蛋白表達(dá)水平明顯下降，BAX蛋白表達(dá)水平明顯上升，進(jìn)一步證實(shí)了CHN1低表達(dá)對(duì)胃腺癌細(xì)胞系SGC-7901、BGC-823的增殖活性具有抑制作用。本研究裸鼠體內(nèi)成瘤實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，抑制CHN1表達(dá)后，移植瘤的生長(zhǎng)受到抑制，且CHN1蛋白表達(dá)明顯下降，提示CHN1在胃腺癌的發(fā)生發(fā)展過(guò)程中具有重要作用，CHN1低表達(dá)在體內(nèi)也能抑制胃腺癌細(xì)胞生長(zhǎng)。

miR-298位于人類20號(hào)染色體的q13-32區(qū)域，近年來(lái)國(guó)內(nèi)外相關(guān)研究均發(fā)現(xiàn)其與惡性腫瘤的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)[18-19]。Arabsorkhi等[20]研究顯示，結(jié)腸癌患者腫瘤組織及血漿中的miR-298表達(dá)水平異常，且與患者的TNM分期、腫瘤分化程度及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)，miR-298的異常表達(dá)是導(dǎo)致患者預(yù)后不良的重要因素之一，故認(rèn)為miR-298可能是結(jié)腸癌的治療靶點(diǎn)。Li等[21]研究顯示，miR-298在甲狀腺癌組織中表達(dá)下調(diào)，且miR-298過(guò)表達(dá)可顯著增加BAX和caspase-3蛋白表達(dá)水平，降低BCL2蛋白表達(dá)水平，還能抑制細(xì)胞增殖，促進(jìn)細(xì)胞凋亡。本研究也發(fā)現(xiàn)，miR-298在胃腺癌中呈低表達(dá)。miR-298靶基因的鑒定具有重要意義，能幫助理解miR-298在胃腺癌發(fā)生發(fā)展過(guò)程中的作用，確定新的治療靶點(diǎn)。本研究利用生物信息學(xué)技術(shù)分析發(fā)現(xiàn)，CHN1是miR-298的下游靶基因，雙熒光素酶實(shí)驗(yàn)結(jié)果亦證實(shí)了miR-298可直接靶向作用于CHN1，二者存在負(fù)調(diào)控關(guān)系。為進(jìn)一步分析miR-298靶向調(diào)控CHN1表達(dá)對(duì)胃腺癌細(xì)胞增殖的影響，本研究進(jìn)行相關(guān)實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，與miR-NC組相比，miR-298組細(xì)胞增殖能力明顯受到抑制，而miR-298+CHN1組則無(wú)明顯變化，證實(shí)了miR-298可通過(guò)靶向負(fù)調(diào)控CHN1的表達(dá)抑制胃腺癌細(xì)胞增殖。

綜上所述，miR-298在胃腺癌中低表達(dá)，其可能通過(guò)靶向結(jié)合CHN1影響胃腺癌細(xì)胞周期，抑制細(xì)胞增殖，并促進(jìn)其凋亡。