何學學，謝梅

延安市人民醫(yī)院感染科，陜西 延安 716000

非酒精性脂肪肝(nonalcoholic fatty liver disease，NAFLD)是一種與胰島素抵抗和遺傳易感密切相關(guān)的代謝應激性肝臟損傷，疾病譜包括單純性脂肪肝、非酒精性脂肪性肝炎、肝硬化等[1-2]。流行病學調(diào)查結(jié)果顯示，NAFLD 已經(jīng)成為全球最為常見的慢性肝臟疾病，其發(fā)病率呈逐年上升趨勢[3]。白脂素(asprosin)是一種新發(fā)現(xiàn)的脂肪因子，在機體能量平衡、炎癥和免疫應答等代謝過程中發(fā)揮作用[4]。磷脂酰肌醇蛋白聚糖4 (glypican 4，GPC-4)是一種由白色脂肪組織分泌的脂肪因子，與胰島素敏感性密切相關(guān)，能夠通過與胰島素受體之間的相互作用，調(diào)節(jié)胰島素信號的轉(zhuǎn)導，促進脂肪細胞分化[5]。近年來相關(guān)研究發(fā)現(xiàn)，脂肪組織分泌的脂肪因子可能參與胰島素抵抗以及NAFLD 的發(fā)生與發(fā)展[6-7]。但是目前關(guān)于血清Asprosin、Glypican 4與NAFLD的相關(guān)研究尚少。因此，本研究主要探討NAFLD 患者的血清Asprosin、Glypican 4表達水平及其臨床意義。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2018年10月至2020年10月延安市人民醫(yī)院收治并確診的98例NAFLD患者為研究對象。納入標準：(1)符合NAFLD的診斷標準[8]；(2)均為初次進行治療；(3)臨床資料完整；(4)家屬和患者知情同意。排除標準：(1)合并病毒性肝炎，藥物性肝炎等其他肝臟疾?。?2)合并嚴重肝腎功能不全者；(3)合并惡性腫瘤者；(4)既往有精神病史或認知功能障礙者；(5)妊娠期或哺乳期女性。根據(jù)疾病嚴重程度[7]不同將NAFLD患者分為輕度組42例(肝實質(zhì)回聲彌漫性改變，稍細密、增強；后方回聲無衰減，包膜清晰；肝臟內(nèi)管狀結(jié)構(gòu)清晰可見)、中度組31例(肝實質(zhì)回聲彌漫性改變，細密、增強；后方回聲有衰減，包膜欠清晰；肝臟內(nèi)管狀結(jié)構(gòu)欠清晰)和重度組25 例(肝實質(zhì)回聲彌漫性改變，顯著細密、增強；后方回聲衰減明顯，包膜不清或者不可見；肝臟內(nèi)管狀結(jié)構(gòu)不清或者不可見)。另選取同時期來我院體檢的30例健康人作為對照組。各組受檢者的年齡、性別、病程(僅患者)比較差異均無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)，而三組患者的體質(zhì)量指數(shù)(BMI)明顯高于對照組，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)，見表1。本研究經(jīng)我院醫(yī)學倫理委員會審核批準(批號：180209)。

表1 各組受檢者的一般資料比較[，例(%)]

表1 各組受檢者的一般資料比較[，例(%)]

組別輕度組中度組重度組對照組F/χ2值P值例數(shù)42 31 25 30年齡(歲)45.68±8.14 45.96±8.17 45.84±8.16 46.79±8.21 0.120 0.948男/女25(59.52)/17(40.48)19(61.29)/12(38.71)14(56.00)/11(44.00)17(56.67)/13(43.33)0.223 0.974病程(月)18.26±5.37 18.57±5.36 19.68±5.41-0.560 0.571 BMI(kg/m2)23.39±2.31 24.82±2.34 26.91±2.46 20.74±2.25 34.410 0.001

1.2 檢測方法 所有受檢者均需要采集清晨空腹外周靜脈血10 mL，3 500 r/min 離心10 min，取上清液，放置于-80℃冰箱內(nèi)保存待檢。采用酶聯(lián)免疫吸附法檢測血清Asprosin、Glypican 4 水平；采用全自動生化儀(北京普朗新技術(shù)有限公司)檢測血清天冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶(AST)、丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶(ALT)、空腹血糖(FBG)、空腹胰島素(FINS)；根據(jù)FBG和FINS計算胰島素抵抗指數(shù)(HOMA-IR)(HOMA-IR=FBG×FINS/22.5)。所有試劑盒均購于上海酶聯(lián)生物科技有限公司，具體操作均按照使用說明書進行。

1.3 統(tǒng)計學方法 應用SPSS24.0 軟件進行數(shù)據(jù)分析。計量資料符合正態(tài)分布，以均數(shù)±標準差()表示，采用單因素方差分析比較，多重比較采用SNK-q檢驗；計數(shù)資料比較采用χ2檢驗；相關(guān)性分析采用Pearson 相關(guān)分析法，采用受試者工作特征曲線(ROC)評估血清 Asprosin、Glypican 4 對 NAFLD 的診斷價值。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2.1 各組受檢者血清中Asprosin、Glypican 4 表達水平比較 輕度組、中度組、重度組患者血清中Asprosin、Glypican 4 表達水平明顯高于對照組，且隨著疾病嚴重程度的加重而升高，差異均有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)，見表2。

表2 各組受檢者血清中Asprosin、Glypican 4表達水平比較()

表2 各組受檢者血清中Asprosin、Glypican 4表達水平比較()

注：與對照組比較，aP＜0.05；與輕度組比較，bP＜0.05；與中度組比較，cP＜0.05。

組別 例數(shù)Asprosin(ng/mL)Glypican 4(μg/L)對照組輕度組中度組重度組F值P值30 42 31 25 1.07±0.23 1.56±0.54a 1.94±0.65ab 2.68±0.34abc 40.090 0.001 2.21±0.41 2.62±0.43a 2.97±0.46ab 3.86±0.85abc 46.270 0.001

2.2 各組受檢者血清生化指標表達水平比較 輕度組、中度組、重度組患者血清中AST、ALT、FBG、FINS、HOMA-IR表達水平明顯高于對照組，且隨著疾病嚴重程度的加重而升高，差異均有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)，見表3。

表3 各組受檢者的血清生化指標表達水平比較()

表3 各組受檢者的血清生化指標表達水平比較()

注：與對照組比較，aP＜0.05；與重度組比較，bP＜0.05；與中度組比較，cP＜0.05。

組別輕度組中度組重度組對照組F值P值HOMA-IR 2.73±0.45abc 3.94±0.56ab 5.78±1.26a 1.54±0.42 185.080 0.001例數(shù)42 31 25 30 AST(U/L)34.67±8.45abc 40.79±9.31ab 56.42±10.47a 16.69±4.64 84.581 0.001 ALT(U/L)32.79±8.46abc 39.13±9.28ab 51.35±10.28a 15.34±4.51 63.035 0.001 FBG(mmol/L)4.67±0.31abc 5.42±0.32ab 7.10±0.54a 4.31±0.24 334.990 0.001 FINS(mU/L)12.29±3.67abc 14.35±3.74ab 17.13±4.16a 8.17±1.48 30.137 0.001

2.3 血清Asprosin、Glypican 4水平與各項指標的相關(guān)性 經(jīng)Pearson相關(guān)分析結(jié)果顯示，血清Asprosin、Glypican 4均與AST、ALT無關(guān)(P＞0.05)，與BMI、FBG、FINS、HOMA-IR呈正相關(guān)(P＜0.05)，見表4。

表4 血清Asprosin、Glypican 4水平與各項指標的相關(guān)性

2.4 血清Asprosin、Glypican 4 及兩者聯(lián)合對NAFLD的診斷價值 繪制ROC曲線(圖1)，與單項指標診斷NAFLD相比，Asprosin、Glypican 4兩者聯(lián)合診斷NAFLD的臨床價值更高，見表5。

表5 血清Asprosin、Glypican 4及兩者聯(lián)合對NAFLD的診斷價值

圖1 血清Asprosin、Glypican 4及兩者聯(lián)合對NAFLD的診斷ROC曲線

3 討論

NAFLD 是指排除酒精和其他明確的損肝因素，以肝細胞內(nèi)脂肪過度沉積為特征的臨床病理綜合征，其發(fā)病機制尚不明確，可能與肥胖、糖尿病、胰島素抵抗等有關(guān)[9]。近年來，隨著人們生活水平的提高和飲食結(jié)構(gòu)的改變，NAFLD的發(fā)病率逐年升高，且發(fā)患者群逐漸年輕化，嚴重影響人們的身心健康[10]。大部分NAFLD 患者早期臨床癥狀不明顯，少數(shù)患者會出現(xiàn)消化不良、肝區(qū)疼痛、肝脾腫大等非特異性癥狀和體征[11]。肝活檢是臨床上診斷NAFLD的“金標準”，但由于其創(chuàng)傷性大，術(shù)后容易引起感染、出血、血腫等并發(fā)癥，而且容易造成采樣誤差，存在一定的局限性[12]。因此，尋找一種創(chuàng)傷性小、敏感性高的生物學指標來早期診斷NAFLD，為臨床治療提供參考依據(jù)，是現(xiàn)階段研究的熱點。

Asprosin 是由140 個氨基酸組成脂肪因子，是原纖維蛋白C 末端裂解的產(chǎn)物，通過肝細胞的G 蛋白-cAMP-PKA信號通路誘導肝糖原的合成與釋放，從而促進血清胰島素和血糖升高[13]。同時，Asprosin 能夠調(diào)節(jié)機體炎性反應，促進胰島β細胞凋亡，保護機體的心肌細胞，改善心功能[14]。劉師偉等[15]研究發(fā)現(xiàn)，Asprosin能夠參與糖脂代謝，并且增加胰島素抵抗，在糖尿病的發(fā)展進程中起著重要作用。劉文華等[16]研究發(fā)現(xiàn)，Asprosin 在多囊卵巢綜合征合并胰島素抵抗患者體內(nèi)水平升高，并且與疾病的發(fā)生、發(fā)展有關(guān)。本研究結(jié)果顯示，輕度組、中度組、重度組患者血清中Asprosin 表達水平明顯高于對照組(重度組＞中度組＞輕度組)，表明血清Asprosin 可能參與NAFLD 的發(fā)生發(fā)展，并且與疾病嚴重程度有關(guān)。究其原因，Asprosin能夠調(diào)節(jié)下丘腦促食和厭食神經(jīng)元，當其血清水平升高時，促食神經(jīng)元被激活，厭食神經(jīng)元失效，導致機體的脂質(zhì)代謝紊亂，大量的脂肪在肝內(nèi)堆積，形成脂肪肝。同時，Asprosin 能夠通過內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激及炎性途徑增強機體的胰島素抵抗，導致胰島素作用減弱，肝內(nèi)游離的脂肪酸增多，甘油三酯形成增加，過多的甘油三酯在肝內(nèi)堆積，進而誘發(fā)NAFLD。

Glypican 4是硫酸乙酰肝素蛋白多糖(HSPGs)的成員之一，位于Xq26.1染色體，廣泛存在于皮下組織脂肪中，能夠通過磷脂酰肌醇定于細胞膜的表面，可以參與多種生長因子的信號傳導[17]。同時，Glypican 4能夠與肝臟、脂肪組織等胰島素靶器官上的受體相結(jié)合，促進胰島素的信號轉(zhuǎn)導，參與葡萄糖的攝取和脂肪細胞的分化過程[18]。寧冬平[19]研究發(fā)現(xiàn)，血清Glypican 4水平在代謝綜合征患者體內(nèi)升高，并且與胰島素抵抗有關(guān)。ZHANG等[20]研究發(fā)現(xiàn)，血清Glypican 4水平在不同糖代謝狀態(tài)的肥胖患者中升高，并且其水平高低與胰島素抵抗呈正相關(guān)。本研究結(jié)果顯示，輕度組、中度組、重度組患者血清中Glypican 4表達水平明顯高于對照組(重度組＞中度組＞輕度組)，表明血清Glypican 4水平升高與NAFLD患者疾病嚴重程度有關(guān)。究其原因，Glypican 4能夠直接作用于胰島素受體，減弱胰島素的敏感性，增強機體的胰島素抵抗，促使機體的脂解作用降低，大量的脂肪組織和非脂肪組織向肝內(nèi)轉(zhuǎn)移和堆積，進而形成NAFLD。

本研究結(jié)果顯示，輕度組、中度組、重度組患者血清中AST、ALT、FBG、FINS、HOMA-IR 表達水平明顯高于對照組(重度組＞中度組＞輕度組)，差異均有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。此外，經(jīng)Pearson 相關(guān)性分析結(jié)果顯示，血清Asprosin、Glypican 4 均與AST、ALT 無關(guān)(P＞0.05)，與 BMI、FBG、FINS、HOMA-IR 呈正相關(guān)(P＜0.05)。表明血清 Asprosin、Glypican 4 與 NAFLD 患者體內(nèi)糖脂代謝和胰島素抵抗有關(guān)。隨著NAFLD患者體內(nèi)糖脂代謝紊亂和胰島素抵抗加劇，血清Asprosin、Glypican 4 水平呈上升趨勢，可能與其參與胰島素合成以及相關(guān)信號通路的傳導有關(guān)。ROC 曲線分析結(jié)果顯示，血清Asprosin、Glypican 4預測NAFLD的AUC為0.856、0.841，兩者聯(lián)合檢測的AUC 為0.894。表明血清Asprosin、Glypican 4 能夠作為早期診斷NAFLD的生物學標記物，且兩者聯(lián)合診斷的價值更高，可以為臨床早期治療提供參考依據(jù)，對改善患者預后具有重要的臨床意義。

綜上所述，NAFLD 患者血清Asprosin、Glypican 4水平均升高，且與疾病的嚴重程度有關(guān)，兩者對輔助診斷NAFLD具有一定的臨床價值。