崔希羽 陳 偉 郭 浩 鄭春田,*

(1.天津農(nóng)學(xué)院動(dòng)物科學(xué)與動(dòng)物醫(yī)學(xué)學(xué)院，天津市農(nóng)業(yè)動(dòng)物繁殖與健康養(yǎng)殖重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，天津300392；2.廣東省農(nóng)業(yè)科學(xué)院動(dòng)物科學(xué)研究所，畜禽育種國家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，農(nóng)業(yè)農(nóng)村部華南動(dòng)物營養(yǎng)與飼料重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,廣東省動(dòng)物育種與營養(yǎng)公共實(shí)驗(yàn)室,廣東省畜禽育種與營養(yǎng)研究重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,廣州510640；3.內(nèi)蒙古通遼市動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，通遼028000)

蛋禽達(dá)到產(chǎn)蛋高峰期后隨日齡增長產(chǎn)蛋率快速下降。以集約化養(yǎng)殖的蛋雞為例，在74～94周齡產(chǎn)蛋率驟降，進(jìn)入產(chǎn)蛋末期[1]。卵巢衰老所誘導(dǎo)的卵泡成熟過程減緩和卵泡閉鎖增加是造成蛋禽后期產(chǎn)蛋率下降的主要原因，也是影響蛋禽使用年限的關(guān)鍵因素。卵泡中顆粒細(xì)胞凋亡是造成卵泡閉鎖的重要細(xì)胞學(xué)機(jī)制。本文圍繞家禽衰老進(jìn)程中卵泡閉鎖加快現(xiàn)象，重點(diǎn)闡述了家禽衰老進(jìn)程中顆粒細(xì)胞微環(huán)境變化及卵泡閉鎖信號(hào)，為家禽產(chǎn)蛋后期卵泡發(fā)育調(diào)控提供參考。

1 衰老家禽卵泡閉鎖

卵泡閉鎖是指卵泡在發(fā)育過程中停止生長，出現(xiàn)松散萎縮，逐漸退化并與基底脫離的現(xiàn)象。正常生理?xiàng)l件下，卵泡閉鎖是一種由激素調(diào)控卵泡數(shù)量的生理機(jī)制，并在卵泡發(fā)育整個(gè)階段都會(huì)發(fā)生，這種機(jī)制使得卵巢內(nèi)各個(gè)階段的卵泡數(shù)量維持在一個(gè)相對(duì)穩(wěn)定范圍內(nèi)。然而，早在哺乳動(dòng)物中發(fā)現(xiàn)，隨年齡增長，在各種外界因素的影響下，卵泡閉鎖與卵泡丟失加快[2]。有關(guān)家禽的研究發(fā)現(xiàn)，580日齡母雞等級(jí)前卵泡數(shù)量相比280日齡母雞顯著下降，且更多的等級(jí)前卵泡發(fā)生了閉鎖[3]，相關(guān)試驗(yàn)也證明，衰老會(huì)導(dǎo)致蛋雞卵泡生存條件惡化，卵泡結(jié)構(gòu)受損[4]。以上種種證據(jù)表明卵巢中卵泡閉鎖加速是產(chǎn)蛋后期家禽產(chǎn)蛋性能下降的主要原因。

2 顆粒細(xì)胞與卵泡閉鎖

卵泡閉鎖的發(fā)生與顆粒細(xì)胞的凋亡密切相關(guān)。顆粒細(xì)胞是卵泡內(nèi)數(shù)量最多的細(xì)胞，同時(shí)也是卵泡內(nèi)功能最多的細(xì)胞，參與雌激素與孕激素的合成與分泌[5]，在卵泡的發(fā)育成熟和閉鎖過程中起主要調(diào)控作用[6]。家禽卵泡中，顆粒細(xì)胞緊密分布在卵母細(xì)胞外側(cè)，呈單層排列，并隨卵泡生長而增殖。當(dāng)卵母細(xì)胞開始成熟并逐漸積累卵黃時(shí)，單層顆粒細(xì)胞發(fā)生增殖，此時(shí)卵泡體積增大，卵泡膜形成，初級(jí)卵泡轉(zhuǎn)變?yōu)榇渭?jí)卵泡，進(jìn)一步發(fā)育成等級(jí)卵泡后，顆粒細(xì)胞層隨卵泡體積繼續(xù)增加而變薄[7]。早期研究在閉鎖卵泡中觀察到顆粒細(xì)胞是卵泡中最早發(fā)生凋亡的細(xì)胞群，當(dāng)卵泡閉鎖發(fā)生時(shí)，顆粒層逐漸脫落，最后消失，而卵母細(xì)胞、膜細(xì)胞等其他細(xì)胞仍存在。這表明卵泡閉鎖極有可能由顆粒細(xì)胞的凋亡而誘導(dǎo)。卵泡閉鎖是一個(gè)復(fù)雜的生物學(xué)過程，受細(xì)胞凋亡、激素和旁分泌等因素調(diào)控，但都涉及顆粒細(xì)胞凋亡事件的發(fā)生[8]。因此，凋亡顆粒細(xì)胞數(shù)量增加是誘導(dǎo)衰老進(jìn)程中閉鎖卵泡增加的重要原因。

3 顆粒細(xì)胞的凋亡

3.1 旁分泌、自分泌激素與顆粒細(xì)胞凋亡

卵泡發(fā)育是由卵巢局部旁分泌、自分泌等機(jī)制共同調(diào)控的復(fù)雜生物學(xué)過程，多種激素和卵巢分泌因子參與卵泡發(fā)育調(diào)控，其中部分因子可通過抑制顆粒細(xì)胞凋亡和卵泡閉鎖影響家禽卵泡早期發(fā)育、優(yōu)勢卵泡選擇與排卵。

(4)選煤廠入洗能力整體下降。由于煤泥水系統(tǒng)處理能力不足，致使選煤廠不得不降低入洗量，以保證系統(tǒng)正常工作。

激素與分泌因子變化是衰老進(jìn)程中影響卵泡閉鎖和顆粒細(xì)胞凋亡的重要外環(huán)境因素。產(chǎn)蛋后期蛋禽性激素分泌能力衰退，卵泡閉鎖加快。Ciccone等[35]通過比較30周齡(產(chǎn)蛋高峰期)蛋雞、60周齡停產(chǎn)與60周齡在產(chǎn)蛋雞發(fā)現(xiàn)，相比30周齡蛋雞，60周齡停產(chǎn)與60周齡在產(chǎn)蛋雞的血漿中LH含量均顯著降低，而停產(chǎn)60周齡的蛋雞中FSH含量反而更高，由此認(rèn)為蛋禽衰老后產(chǎn)蛋率下降現(xiàn)象主要與LH有關(guān)而非FSH。除了LH外，其他有利于顆粒細(xì)胞生長的信號(hào)因子也會(huì)隨著家禽年齡增長而降低。在紹興鴨中發(fā)現(xiàn)，血漿IGF-1含量在200日齡時(shí)達(dá)到最高值，在470日齡時(shí)下降，顯著低于200日齡時(shí)[36]。而在海蘭褐雞中的研究發(fā)現(xiàn)，隨母雞開始產(chǎn)蛋，血清E2含量從90日齡開始逐步上升，在280日齡即產(chǎn)蛋高峰期達(dá)到最高值，但在580日齡產(chǎn)蛋后期顯著下降[37]。除激素分泌水平變化外，卵泡對(duì)激素的敏感性以及卵泡受體表達(dá)量也會(huì)隨年齡增長而改變，例如，卵泡對(duì)LH的敏感性隨母雞年齡增長而下降[38]。卵巢FSHR蛋白表達(dá)量隨年齡增長而顯著降低[39]，導(dǎo)致老齡雌性動(dòng)物中出現(xiàn)FSH應(yīng)答敏感性降低的現(xiàn)象。因此，在一些老齡雌性動(dòng)物中FSH含量不變而成熟卵泡數(shù)量卻不增加的現(xiàn)象很可能與FSHR減少有關(guān)。

新的研究揭示，顆粒細(xì)胞中線粒體損傷及內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激是衰老過程中誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的重要事件[17]。線粒體作為細(xì)胞代謝的調(diào)節(jié)中樞，是顆粒細(xì)胞中最多的細(xì)胞器，研究表明，線粒體功能障礙是卵巢衰老過程中導(dǎo)致卵泡數(shù)量和質(zhì)量下降的重要原因[18-19]。在超高齡小鼠卵巢顆粒細(xì)胞中觀測到線粒體形態(tài)改變，線粒體膜電位下降，且線粒體自噬分子磷酸酶及張力蛋白同源物誘導(dǎo)的蛋白激酶(PTEN induced putative kinase，PINK)和Parkin的mRNA表達(dá)水平增加[20]。付志紅等[21]研究發(fā)現(xiàn)，在女性機(jī)體衰老進(jìn)程中，卵泡液中活性氧(reactive oxygen species，ROS)含量顯著增多，顆粒細(xì)胞線粒體活力降低。此外，隨著女性年齡的增加，細(xì)胞呼吸鏈電子傳遞能力降低，電子泄漏增加，氧化產(chǎn)物堆積，顆粒細(xì)胞線粒體損傷，并最終引發(fā)顆粒細(xì)胞凋亡[22]。由此可見，當(dāng)顆粒細(xì)胞線粒體結(jié)構(gòu)損傷后造成ROS積累，最終引發(fā)細(xì)胞凋亡和卵泡閉鎖。

研究表明，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激(endoplasmic reticulum stress，ERS)亦是誘導(dǎo)顆粒細(xì)胞凋亡和卵泡閉鎖的重要因素，且在卵巢纖維化等卵巢病理過程中發(fā)揮著重要作用。內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激是細(xì)胞為應(yīng)對(duì)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)腔內(nèi)錯(cuò)誤折疊與未折疊蛋白堆積及鈣離子紊亂做出的一種保護(hù)性應(yīng)激反應(yīng)，持久或者強(qiáng)烈的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞凋亡和自噬[23-24]。內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激反應(yīng)可被ROS或者鈣離子紊亂進(jìn)一步加劇[25-26]，嚴(yán)重的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激可誘導(dǎo)顆粒細(xì)胞凋亡，促進(jìn)卵泡閉鎖發(fā)生[27]。內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激發(fā)生早期，葡萄糖調(diào)節(jié)蛋白78(glucose regulated protein 78，GRP78)和葡萄糖調(diào)節(jié)蛋白94(glucose regulated protein 94，GRP94)等內(nèi)質(zhì)網(wǎng)伴侶蛋白的基因轉(zhuǎn)錄增加，幫助內(nèi)質(zhì)網(wǎng)中蛋白折疊，減少非折疊蛋白在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)堆積，GRP78和GRP94表達(dá)的上調(diào)常作為內(nèi)質(zhì)網(wǎng)早期應(yīng)激發(fā)生的標(biāo)志；當(dāng)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激嚴(yán)重時(shí)，位于內(nèi)質(zhì)網(wǎng)上的凋亡響應(yīng)蛋白半胱天冬氨酸蛋白酶12(cysteme aspartate specific protease 12，Caspase12)和凋亡信號(hào)調(diào)節(jié)激酶1(apoptosis signal-regulating kinase 1，ASK1)及c-Jun氨基末端激酶(c-Jun N-terminal kinase，JNK)被激活，誘導(dǎo)下游凋亡信號(hào)級(jí)聯(lián)反應(yīng)[28]。研究發(fā)現(xiàn)，山羊早期閉鎖卵泡顆粒細(xì)胞中內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激標(biāo)志物GRP78、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)凋亡響應(yīng)蛋白轉(zhuǎn)錄因子C/EBP的同源蛋白(CCAAT/enhancer-binding protein homologous protein，CHOP)的表達(dá)相比正常卵泡顯著上調(diào)，而在晚期閉鎖卵泡的顆粒細(xì)胞中，GRP78的mRNA和蛋白表達(dá)量下調(diào)，CHOP的mRNA表達(dá)量卻有進(jìn)一步升高的趨勢[29]，這暗示當(dāng)細(xì)胞的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激加劇時(shí)，可通過促凋亡蛋白誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。研究發(fā)現(xiàn)，雞卵泡顆粒細(xì)胞中發(fā)生的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激與小白卵泡的閉鎖有關(guān)[30]。內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激隨動(dòng)物衰老進(jìn)程的推進(jìn)而更加嚴(yán)重。Kim等[31]研究發(fā)現(xiàn)，小鼠衰老模型中卵母細(xì)胞GRP78蛋白及細(xì)胞凋亡因子表達(dá)增加。Yao等[32]在580日齡產(chǎn)蛋后期的老齡母雞等級(jí)前顆粒細(xì)胞中也發(fā)現(xiàn)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)結(jié)構(gòu)受損現(xiàn)象，相比280日齡蛋雞的正常卵泡，580日齡蛋雞正常和閉鎖卵泡中內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激標(biāo)志基因半胱天冬氨酸蛋白酶9(cysteme aspartate specific protease 9，Caspase9)、GRP78和CHOP的表達(dá)均顯著上調(diào)，且細(xì)胞凋亡基因Bcl-2相關(guān)X蛋白(Bcl-2 associated X protein，BAX)的表達(dá)也上調(diào)。而改善內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激可一定程度減緩在體外培養(yǎng)的牛卵母細(xì)胞衰老，并提高卵母細(xì)胞質(zhì)量[33]。這表明，持續(xù)性的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激可能是家禽衰老進(jìn)程中誘導(dǎo)卵泡閉鎖的重要因素。此外，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激與線粒體功能障礙聯(lián)系緊密[34]，該生物學(xué)機(jī)制很有可能在卵巢退化、生殖力下降以及卵巢疾病方面作為一個(gè)新的治療靶點(diǎn)。

動(dòng)物衰老進(jìn)程中氧化應(yīng)激誘導(dǎo)的顆粒細(xì)胞氧化損傷是造成卵巢功能衰退的重要原因，氧化應(yīng)激指機(jī)體內(nèi)自由基生成與清除系統(tǒng)失衡而引起的一系列生物學(xué)反應(yīng)。老齡動(dòng)物機(jī)體自由基清除能力減弱，卵巢組織中自由基堆積過多，造成顆粒細(xì)胞和卵母細(xì)胞氧化損傷，從而誘導(dǎo)卵泡閉鎖，卵巢功能衰退[40]。目前研究已充分證明發(fā)生在家禽卵巢的氧化應(yīng)激是卵泡閉鎖和卵巢衰老的重要誘因[41]。

3.2 細(xì)胞器功能障礙誘導(dǎo)的顆粒細(xì)胞凋亡

顆粒細(xì)胞的生存同時(shí)受其自分泌功能的影響，雌激素和孕激素都是由顆粒細(xì)胞分泌的激素，并對(duì)顆粒細(xì)胞自身生長起到積極作用。雌激素對(duì)抑制顆粒細(xì)胞的凋亡以及卵巢功能的正常尤為關(guān)鍵，它能通過抑制早期腔前卵泡和腔體泡中的顆粒細(xì)胞凋亡，從而防止卵泡早期閉鎖[11]。雌激素合成與分泌受FSH與LH的共同調(diào)控[12]，F(xiàn)SH可通過細(xì)胞外調(diào)節(jié)蛋白激酶1/2(extracellular signal-regulated kinase 1/2，ERK1/2)激活的方式作用于雌激素的合成[13]。在哺乳動(dòng)物中發(fā)現(xiàn)，在早期和晚期卵泡閉鎖階段的卵泡液中雌二醇(estradiol，E2)含量顯著低于正常卵泡[14]。

圖3展示了L=100個(gè)地面移動(dòng)IoT設(shè)備的初始分布以及應(yīng)用本文方法所確定的最優(yōu)UAV布署效果.此次實(shí)驗(yàn)采用8個(gè)UAV，如圖3(a)所示，100個(gè)IoT設(shè)備初始分布位置隨機(jī)，基于通信節(jié)能策略，首先形成了8個(gè)最優(yōu)分簇，其次在各簇聚類中心的影響下，UAV的布署位置實(shí)現(xiàn)最優(yōu)，如圖3(b)所示.

4 衰老過程中影響顆粒細(xì)胞微環(huán)境的因素

采用正交試驗(yàn)L9(34)[15-16]設(shè)計(jì)，采用種實(shí)采后處理(A)、播種時(shí)間(B)、播種方式(C)3個(gè)因素，每個(gè)因素設(shè)置3個(gè)水平(表1)，試驗(yàn)共設(shè)置9個(gè)處理，以各處理播種小區(qū)(2 m2)為1次重復(fù)，重復(fù)10次，不考慮互作。

4.1 激素紊亂

旁分泌機(jī)制通過促黃體素(luteinizing hormone，LH)和促卵泡激素(follicle stimulating hormone，F(xiàn)SH)參與顆粒細(xì)胞生存調(diào)節(jié)。LH具有雙重作用，在一定范圍內(nèi)其含量升高能抑制顆粒細(xì)胞的凋亡，超過該范圍則引起卵泡閉鎖和退化。在牦牛顆粒細(xì)胞中發(fā)現(xiàn)，較低含量(0.05～0.50 IU/mL)的LH可抑制顆粒細(xì)胞凋亡，促進(jìn)雌激素和孕激素分泌；而高含量(5.0 IU/mL)的LH則誘導(dǎo)顆粒細(xì)胞凋亡[9]。研究發(fā)現(xiàn)，大卵泡相比小卵泡能接受更高的LH含量，當(dāng)提高LH含量且超過小卵泡承受上限時(shí)，大卵泡能繼續(xù)發(fā)育，而小卵泡的生長則受到抑制或發(fā)生閉鎖[10]。與LH相似，F(xiàn)SH通過促卵泡生成素受體(follicle-stimulating hormone receptor，F(xiàn)SHR)調(diào)節(jié)顆粒細(xì)胞，并激活下游信號(hào)，進(jìn)而促進(jìn)顆粒細(xì)胞快速增殖。

衰老造成激素分泌發(fā)生變化，并進(jìn)而影響卵巢微環(huán)境和卵泡生長。機(jī)體衰老進(jìn)程中，細(xì)胞微環(huán)境發(fā)生改變，如自由基含量升高和鈣離子紊亂，這些環(huán)境因子的改變可直接導(dǎo)致細(xì)胞器如內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和線粒體損傷，最終引起顆粒細(xì)胞凋亡和卵泡閉鎖。

在三維豎井模型中，使用MIDAS/GTS NX提供的實(shí)體單元來模擬地質(zhì)圍巖，使用板單元來模擬混凝土襯砌，使用植入式桁架來模擬錨桿。巖體本構(gòu)模型為彈塑性模型，采用莫爾-庫侖理論[2-4]。巖體及材料的物理力學(xué)參數(shù)如表1所示。

4.2 抗氧化能力下降及ROS生成增加

除卵巢自分泌與旁分泌激素外，顆粒細(xì)胞還受到卵巢局部調(diào)節(jié)因子調(diào)控。胰島素樣生長因子(insulin like growth factor，IGF)是卵泡發(fā)育必需的促生長因子，IGF-1可通過促進(jìn)FSHR表達(dá)來增強(qiáng)顆粒細(xì)胞的FSH反應(yīng)[15]。成纖維生長因子(basic fibroblast growth factor，bFGF)是成纖維細(xì)胞生長因子家族的一員，它可通過激活蛋白激酶C(protein kinase C，PKC)信號(hào),上調(diào)細(xì)胞周期蛋白依賴性激酶6(cyclin-dependent kinase 6，CDK6)和細(xì)胞周期蛋白依賴性激酶2(cyclin-dependent kinase 2，CDK2)的基因表達(dá)，進(jìn)而促進(jìn)小黃卵泡中顆粒細(xì)胞增殖[7]。表皮生長因子(epidermal growth factor，EGF)的作用與IGF相似，可通過增強(qiáng)FSHR蛋白表達(dá)，提高顆粒細(xì)胞FSH反應(yīng)來促進(jìn)細(xì)胞增殖；此外，骨形態(tài)發(fā)生蛋白(bone morphogenetic proteins，BMPs)也參與顆粒細(xì)胞的生存調(diào)節(jié)[16]。

高產(chǎn)蛋禽中，頻繁的排卵過程加劇了卵巢組織ROS的積累。與其他階段相比，老年蛋雞卵巢組織中抗氧化蛋白核因子E2相關(guān)因子2(nuclear factor-erythroid 2-related factor 2，Nrf2)、血紅素氧合酶-1(heme oxygenase-1，HO-1)、醌氧化還原酶1[NAD(P)H: quinone oxidoreductase 1，NQO1]蛋白的表達(dá)量顯著下調(diào)，且卵巢組織谷胱甘肽(glutathione，GSH)含量、總抗氧化能力和總超氧化物歧化酶活性下降[42-43]。其中Nrf2是調(diào)控細(xì)胞氧化應(yīng)激反應(yīng)的重要蛋白因子，其介導(dǎo)的Nrf2-抗氧化反應(yīng)原件(antioxidant response element，ARE)信號(hào)通路被認(rèn)為是家禽體內(nèi)最重要的抗氧化通路之一。在氧化應(yīng)激狀態(tài)下，Nrf2被激活并進(jìn)入細(xì)胞核內(nèi)，與Maf蛋白結(jié)合形成異二聚體，進(jìn)而與ARE結(jié)合，激活下游基因如HO-1、γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶(γ-glutamyl cysteine synthetase，γ-GCS)、NQO1等的表達(dá)，發(fā)揮抗氧化作用，降低ROS含量；Nrf2還能介導(dǎo)線粒體自噬來降解受損老化的線粒體，將ROS維持在低水平，保護(hù)細(xì)胞避免凋亡[44]。研究發(fā)現(xiàn)卵巢內(nèi)Nrf2的表達(dá)與年齡有關(guān)，小鼠性成熟前到老年期的生理過程中，隨著成熟卵泡數(shù)量先上升后下降，卵巢組織中Nrf2含量也表現(xiàn)出先增多后降低的趨勢[45]，這表明老齡雌性動(dòng)物生殖能力下降很有可能與Nrf2表達(dá)降低有關(guān)。在小鼠模型上的研究發(fā)現(xiàn)，Nrf2蛋白的表達(dá)隨年齡增長而下調(diào)了5.3倍，Nrf2與ARE4的結(jié)合率降低40%，且Nrf2蛋白表達(dá)的減少主要源于其蛋白質(zhì)翻譯能力的下降，而非Nrf2的降解[46]。對(duì)卵巢組織中Nrf2蛋白及Nrf2-ARE信號(hào)通路的干預(yù)可能成為延長家禽生殖年限的重要手段。

4.3 鈣穩(wěn)態(tài)失調(diào)

鈣離子(Ca2+)在禽類卵泡發(fā)育過程中發(fā)揮著重要生理作用[47]，是細(xì)胞內(nèi)重要的第二信使，參與顆粒細(xì)胞代謝調(diào)控、增殖、分化與凋亡等重要生理過程[48]，并在激素合成等方面發(fā)揮著重要作用[49]。近年來諸多研究發(fā)現(xiàn)由Ca2+介導(dǎo)的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和線粒體交流信號(hào)改變是誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的一條重要途徑，而這種伴隨內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激和線粒體損傷出現(xiàn)的異常鈣交流現(xiàn)象導(dǎo)致的細(xì)胞凋亡在年齡相關(guān)的諸多疾病中出現(xiàn)，主要表現(xiàn)為從內(nèi)質(zhì)網(wǎng)流向線粒體和胞漿的Ca2+增多[50]。早期研究已發(fā)現(xiàn)ROS會(huì)對(duì)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)Ca2+釋放關(guān)鍵通道蛋白肌醇1，4，5三磷酸受體(inositol 1，4，5-trisphosphate receptors，IP3R)和蘭尼堿受體(ryanodine，RYR)造成氧化修飾，如谷胱甘肽化以及亞磺酸化等多種氧化修飾[51-52]，從而導(dǎo)致其對(duì)Ca2+敏感性降低,內(nèi)質(zhì)網(wǎng)中鈣泄漏，過量的Ca2+在線粒體附近堆積導(dǎo)致線粒體通透性轉(zhuǎn)換孔道不可逆開放，引起ROS含量增加和線粒體受損，最終誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡發(fā)生，且這種現(xiàn)象隨著年齡增長而加劇[53]。Ziegler等[54]通過對(duì)小鼠進(jìn)行IP3R2基因敲除改善線粒體損傷研究，認(rèn)為IP3R2型鈣釋放通道表達(dá)增加以及從內(nèi)質(zhì)網(wǎng)到線粒體的Ca2+通量增加是人體細(xì)胞衰老的誘導(dǎo)因素。與衰老哺乳動(dòng)物上的發(fā)現(xiàn)相似，Yao等[3]發(fā)現(xiàn)已進(jìn)入產(chǎn)蛋末期的蛋雞卵巢組織中IP3R蛋白表達(dá)量顯著高于產(chǎn)蛋高峰期蛋雞，這極有可能是顆粒細(xì)胞中鈣過載導(dǎo)致線粒體損傷的原因。因此，伴隨衰老發(fā)生在顆粒細(xì)胞中的Ca2+紊亂很可能是卵泡閉鎖的誘因。對(duì)顆粒細(xì)胞Ca2+轉(zhuǎn)運(yùn)進(jìn)行調(diào)控能改善卵泡閉鎖[3,55]和延緩卵巢早衰[56]，盡管其機(jī)制仍有待被進(jìn)一步深入揭示，但該途徑有望成為調(diào)控內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激和細(xì)胞衰老的重要手段。

遲恒的謀畫十分周密，魏昌龍眼光不住地閃爍，他還是有些顧慮：“嚇不住怎么辦？吳縣長老實(shí)人，詐他有點(diǎn)于心不忍?！?/p>

5 小 結(jié)

家禽卵泡閉鎖是細(xì)胞信號(hào)和激素等內(nèi)外環(huán)境因素共同作用的結(jié)果，并最終影響繁殖功能和產(chǎn)蛋性能。顆粒細(xì)胞的凋亡是卵泡閉鎖的啟動(dòng)機(jī)制。隨動(dòng)物年齡的增長，激素分泌紊亂，有利于顆粒細(xì)胞生存的激素如E2、LH等含量降低，顆粒細(xì)胞可能更易發(fā)生凋亡；此外，顆粒細(xì)胞內(nèi)的ROS含量升高，同時(shí)抗氧化能力下降，引起的氧化應(yīng)激導(dǎo)致內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激和線粒體受損，由內(nèi)質(zhì)網(wǎng)途徑和線粒體途徑引起細(xì)胞凋亡；同時(shí)，還伴隨內(nèi)質(zhì)網(wǎng)中的Ca2+外排增加，這會(huì)加劇線粒體功能障礙，誘導(dǎo)ROS含量升高，最后導(dǎo)致線粒體損傷，顆粒細(xì)胞凋亡，卵巢閉鎖(圖1)。

針對(duì)以上影響因素，目前生產(chǎn)中采用多種手段來提高蛋雞產(chǎn)蛋后期的產(chǎn)蛋性能，如添加雌激素類似物異黃酮或植物源抗氧化劑如白藜蘆醇、槲皮素、番茄紅素等[57-58]。最新一項(xiàng)研究發(fā)現(xiàn)柚皮苷既能作為一種植物性雌激素，又能起到抗氧化作用，可預(yù)防產(chǎn)蛋后期卵泡閉鎖，提高蛋禽產(chǎn)蛋后期產(chǎn)蛋性能[41]。

FSH：促卵泡激素 follicle stimulating hormone；FSHR：促卵泡生成素受體 follicle-stimulating hormone receptor；E2：雌二醇 estradiol；LH：促黃體素 luteinizing hormone；LHR：促黃體素受體 luteinizing hormone receptor；ERK1/2：細(xì)胞外調(diào)節(jié)蛋白激酶1/2 extracellular signal-regulated kinase 1/2；ROS：活性氧 reactive oxygen species；CHOP：轉(zhuǎn)錄因子C/EBP的同源蛋白 CCAAT/enhancer-binding protein homologous protein；JNK：c-Jun氨基末端激酶 c-Jun N-terminal kinase；Caspase12：半胱天冬氨酸蛋白酶12 cysteme aspartate specific protease 12。