田珺瑩，唐嘉利，黃 蘭，沈月桐，潘立軍

(貴州中醫(yī)藥大學，貴州 貴陽 550000)

酒精性肝纖維化，是由各類致病因子所引起的肝細胞內結締組織非正常增生，造成了肝細胞內彌漫性細胞外基質(extracellular matrix，ECM)過度沉積，為酒精性肝硬化早期發(fā)展階段[1]。目前的相關臨床觀察和實驗研究已經證明，肝纖維化在早期尚可逆轉，但如果在此期加以合理干擾，有望遏制或改變肝纖維化演變?yōu)楦巫冇驳陌l(fā)展趨勢[2]。作為肝纖維化重要的始動因子，轉生長因子β1(transforming growth factor beta，TGF-β1)可促活HSC，并促進ECM表達，而其促肝纖維化是主要利用TGF-β1/Smad的信號傳導通道進行的。其中Smad蛋白家族為TGF-β1最下游的信號分子，而smad7對酒精性肝纖維化具有正向調控的功能，所以它在酒精性肝纖維化的發(fā)展在形成中也起到了很大的影響[3]。因此，通過調控TGF-β1/Smad信號通道，是診斷肝纖維化的重要途徑。

酒精性肝纖維化的病變復雜且無確切治法。目前西醫(yī)療法大多集中于減少肝臟內星狀細胞的活性以及提高肝組織再生水平，進而控制ECM的形成與積累，起到了促進與推遲肝纖維化的出現以及健康發(fā)展的作用[4]，但其治療整體效果與預后大多不理想。雖然相關醫(yī)學研究早已證明，肝纖維化是一種雙向的、動態(tài)的過程，但是在西醫(yī)研究領域中，關于肝纖維化的更安全性、高效的診治方法尚有待進一步完善[5]。經過大量的實驗研究，許多學者發(fā)現中藥能多靶點調控TGF-β1/Smad信號通路的異常傳導，并在治療ALF方面取得了一些成效。因此，文章概括了近五年內基于TGF-β1/Smad信號通路中藥提取物以及中藥復方抗肝纖維化的研究進展情況，為中藥在防治該病癥作用機制的深入研究和進一步發(fā)展提供參考。

1 TGF-β1/Smads信號通路的概述

1.1 TGF-β1概述 TGF-β超家族在控制細胞增殖和創(chuàng)面炎癥產生及免疫系統(tǒng)中的作用是多種多樣的，如骨骼疾病，纖維化疾病、癌癥等[6]。而TGF-β1是TGF-β家族三種最主要亞型中數量較為豐富、生理學化學效應最為突出的一種。它在生物學上的功能比其他亞型更為廣泛，在提高機體的膠原分泌、纖維化和細胞的生長，以及改善蛋白質酶抑制劑的水平、ECM沉積能力等方面都更為突出[7]。相關研究結果表明TGF-β1在纖維化的發(fā)展過程中有著至關重要的作用[8]。TGF-β1由靶細胞膜的特異性受體所介導，至少有5種不同類型受體(Ⅰ-Ⅴ型)，而Smad蛋白則是目前所知惟一的Ⅰ型受體特異性底物，介導了TGF-β1的細胞內信號傳導[9]。TGF-β信號的轉導，主要通過啟動TGF-β家族的成員，使之在Ⅰ型與II型受體的異源性復合體中同時發(fā)出信號，通過啟動由配體所誘導的具有固有絲氨酸/蘇氨酸激酶活力的受體，從而引發(fā)R-Smads細胞磷酸化過程，并通過激動素Ⅰ型受體Smad1/5/8或Smad2/3被TGF-β磷酸化后，使活性的由R-Smads和CO-Smads共同構成的一個異源性復合體高效地從蛋白質中傳遞到人體的細胞核中，進而和其他轉錄因子、共激活因子和共加壓因子進行協(xié)同地調控靶基因的轉錄，再次作用于BMPⅠ型受體下游[10-11]。

1.2 Smads蛋白 Smads蛋白是TGF-β家族成員的下游細胞因子，直接參與了TGF-β超家族的信號轉導，并影響著肝纖維化進展。它通過將多種Smad分子緊密調配，共同實現了TGF-β的生物學效應。通過蛋白質分子結構和功能特性的不同，Smad家族大致可分成受體調節(jié)類 Smad(R-Smad)、通用類 Smad(Co-Smad)、抑制類 Smad(Ⅰ-Smad)3個類型，共8位 smad 成員[12]。其中，R-Smad型在TGF-β1/smads的信號通道中起正向調節(jié)作用，其成員包括Smad2、3；而在肝纖維化的研究發(fā)展中，Co-Smad型成員smad4是信號通路傳導的關鍵，它能夠與磷酸化的受體調節(jié)型Smad形成異聚體，輔助TGF-β1/smads信號通路來實現胞內的轉導；而Ⅰ-Smad型成員Smad6、Smad7，在TGF-β1/Smads信號通路中產生負調控的功能從而作用于TGF-β1，抑制其信號傳導[13]。

1.3 TGF-β1/smads信號通路的激活對ALF的影響 TGF-β1/smads信號通道主要由位于細胞膜外部的TGF-β1、膜上的TβR載體受體、以及內膜中的smads傳導蛋白等所組成。當TGF-β1與其受體結合后，激發(fā)了Smad蛋白，從而啟動了TGF-β/Smad的信號通道。

現代醫(yī)學研究表明：TGF-β1/smads 信號通路通過使用異源復合物將信號發(fā)出，進而誘導 TGF-β家族受體被成功地激活，最后與其他轉錄因子、共加壓影響因子和共激活影響因子一起來調控靶基因。廖寶斌等[14]用外源性神經生長因子(NGF)干預大鼠T6肝星狀細胞株，比較HSC的細胞凋亡速率，表明TGF-β1-Smads的信號通道可以有效控制肝星狀細胞(HSC)的凋亡。余曉紅等[15]在大鼠的ALF模式中發(fā)現，肝纖維化形成后Smad7的表達明顯降低，而TGF-β1、Smad3蛋白則出現了高表達，說明了在肝纖維化發(fā)病時TGF-β1/Smads通路的信號分子出現了過度活化。有關科學研究證明[16]，在HF模式中，控制TβRⅠ型受體激酶，進而控制TβRⅠ型受體，是肝細胞再生的一種促進因素。而Wang等[17]經過深入研究，證實了TGF-β1/smad信號通道，可以很好地降低HCS的生物活性及提高肝組織再生水平，進而可以有效控制ECM的產生與積累，可以達到改善或延緩肝纖維化的發(fā)生，甚至治愈的效果?？傊?，以TGF-β1/Smads信號通路為介入點治療肝臟疾病已成為現代科學研究的熱點之一。

2 中藥及其提取物對TGF-β1/smads信號通路的干預作用

2.1 中藥提取物靶向調節(jié)TGF-β1/smads信號通路

2.1.1 白首烏C-21甾體總苷 白首烏C-21甾體總苷(TCSG)為中藥白首烏中主要活性成分，具有明顯的保肝功效[18]。張婷等[19]用TCSG對TGF-β1聯合LPS共同誘導的體外肝纖維化模型進行干預，發(fā)現在TCSG的作用下，LX-2細胞上TGF-β1、NF-κB、α-SMA、p-Smad2/Smad2和p-Smad3/Smad3蛋白相對表達明顯降低，而IκB-α蛋白相對表達量升高(P<0.05)，說明TCSG可能是通過調節(jié)TGF-β1/Smad信號通路抑制LX-2細胞活化發(fā)揮抗肝纖維化作用。

2.1.2 莪術醇 莪術醇為中藥莪術的重要活性成分，有耐病毒、抗炎、抑制癌細胞等藥理作用[20]。而據相關研究證實，莪術醇還具有確切的抗肝纖維化的作用效果[21]。在40%CCl4花生油混合液誘導的肝纖維化小鼠模型中，莪術醇能夠顯著下調TGF-β1/Smad信號通路上TGF-β1和Smad2/3蛋白和基因的表達，從而阻止其信號轉導[22]，進而抑制肝纖維化的進展。

2.1.3 夏枯草硫酸多糖 夏枯草硫酸多糖(PSSP)為夏枯草多糖類的重要生物學活性成分，有抗炎、抗氧化物、抗惡性腫瘤等功效[23]。血清ALT和AST是反映肝臟損害程度的主要指標，而夏枯草的硫酸多糖對四氯化碳(CCl4)誘導的大鼠急性HF新鮮血清中的HA，LN，PC-Ⅲ和C-Ⅳ含量具有顯著降低作用，不僅如此，PSSP還能調控TGF-β1/Smads信號通路，進而抑制膠原的合成，減少ECM生成及促進其降解[24，25]，改善ALF。

2.1.4 藤茶雙氫楊梅素 藤茶是一款富有保健功效而廣受歡迎的民間食用茶葉。二氫楊梅素是藤茶的主要有效成分之一，是一種黃酮類物質，又被稱雙氫楊梅樹皮素、白蘞素。經現代的科學研究證實，它有抑腫瘤、抗氧化、對心血管的防護、保肝、對腎臟的防護、降血脂、清咽抗炎以及止痛等諸多藥理作用[26-28]。梁冰潔等[29]通過給予肝纖維化小鼠模型二氫楊梅素，發(fā)現該制劑可明顯減少肝纖維化小鼠AST、ALT活性水平和肝臟組織中COL Ⅰ、COL Ⅲ的濃度，并降低了模型組TGF-β一/Smad信號通道中TGF-β1、Smad2、Smad4、α-SMA mRNA及蛋白質的表達，顯著上調了Smad7 mRNA蛋白質表現，明顯改善了肝纖維化小鼠肝臟組織的病理變化。

2.1.5 大蒜素 大蒜素(Allicin)由是從蔥科植物大蒜中提煉出的有生物學活性的高含硫化合物的總稱，具有特殊氣味，具有優(yōu)良的抗菌、降血脂、調血糖、抗腫瘤等功效。相關研究表明，該化合物對酒精性肝臟損害有防護功能[30]。通過研究發(fā)現，給予大蒜素灌胃后，酒精性肝纖維化小鼠ALT和AST的活力均明顯下降，而在肝臟組織學病理切片中還可見肝細胞腫大程度減輕，細胞核正?；Ｓ纱丝梢姶笏馑貙π∈蟾闻K具有保護作用[31]。

2.1.6 趕黃草總黃酮 趕黃草為虎耳草科扯根菜屬草本植物扯根菜(penthorum chinense Pursh)的干燥地上部分，又稱水澤蘭、水楊柳等。趕黃草總黃酮是趕黃草中的主要活性成分之一，含量較高，可抑制大鼠酒精性肝纖維化的形成。余蕾等[32]利用TGF-β1促進LX-2活性構建了肝纖維化細胞模式，進一步觀察，當開啟TGF-β一/Smads信號通道之后，若再給予趕黃草的類黃酮處理，Smad3、p-Smad2、p-Smad3表現均呈現顯著的下降現象，而Smad7的表現則為明顯增加趨勢，表明趕黃草可能是通過抑制了TGF-β一/Smads信號通道，發(fā)揮抗纖維化作用。

2.2 中藥復方靶向調節(jié)TGF-β1/smads信號通路

2.2.1 柔木丹 柔木丹(RMD)是由黃芪、皂刺、鱉甲、枳殼、柴胡、赤芍、丹參、川芎、漢防己等藥材組成的復方，具有活血柔肝，軟堅散結的功效。李倩等[33]利用CCl4誘導BALB/c雄鼠肝纖維化，在RMD干預后，實驗小鼠肝臟組織的TGF-β1表達水平明顯下降，而肝臟Smad4mRNA的表達陽性范圍明顯減小。由此表明，RMD極有可能是由于控制TGF-β1/Smads通道信號轉導，進而控制HSC過度活性和增生，從而降低膠原的形成，減少肝臟中ECM沉淀，有效地降低由四氯化碳所誘導的肝損傷和肝臟纖維進程，改善肝臟功能[34]。

2.2.2 參仁活血顆粒 參仁活血顆粒是由西南醫(yī)科大學附屬中醫(yī)醫(yī)院制劑室研發(fā)而成。其主要組成藥物有丹參、桃仁、赤芍、紫河車、黃芪等13味藥物組成[35]。相關實驗研究表明[36]，參仁活血顆粒通過抑制TGF-β1/Smad信號通路激活，減少HSCs的生成，并抑制TGF-β1、Smad3的表達，上調Smad7的表達，從而發(fā)揮使collagenⅠ及collagen Ⅲ等細胞外基質合成減少的作用，具有顯著的抗肝纖維化的療效。

2.2.3 扶肝化纖湯 扶肝化纖湯具有扶正祛毒，理氣化瘀等功效，被證實有利于改善ALF。方中柴胡、枳實、白芍、甘草能疏肝理氣；黃芪、白芍發(fā)揮補中益氣健脾之效；黃精、當歸、鱉甲等可補益腎精血；絞股藍可益氣解毒；其中的丹參、三七可活血化瘀消積；甘草調和諸藥；鱉甲軟堅散結，諸藥合用，起到疏肝理脾、扶正解毒、化瘀消癥等效果[37]。肖政華等[38]經過相關實驗證實，扶肝化纖湯能顯著上調肝纖維化(HF)大鼠Smad7及其mRNA表達水平，并通過調控TGF-β1、Smad3、Smad7的表達來抑制HF，以此達到治療的效果。

2.2.4 小柴胡湯 小柴胡湯有明顯的抗肝纖維化、防治肝癌的功效，目前已確定小柴胡湯有防治肝纖維化的功效。胡睿等[39]研究發(fā)現，小柴胡湯能降低HSC-T6細胞存活率，顯著降低了TGF-β的表達，通過介導肝臟星狀細胞活性，通過控制Smad2、Smad3的磷酸化，降低HSC活性，進而改變了ECM的過度產生，并通過調控TGF-β的一/Smad信號通道，改善肝纖維化。

2.2.5 柴竭抑肝纖 柴竭抑肝纖是純天然的傳統(tǒng)中醫(yī)復方藥物，由北柴胡、血竭、白芍、赤芍、當歸等十三味中草藥構成，有疏肝理氣、活血化瘀的作用[40]。HF大鼠模型灌服柴竭抑肝纖藥劑后，能顯著降低HSC活化的主要標志物——α-SMA的表達、血清HF 4項(LN，HA，Ⅳ-C，PCⅢ)的指標等，并且病理組織觀察到肝細胞變性、纖維組織增生、纖維間隔程度等均有明顯減輕，同時纖維化的總面積比率也明顯降低[41]。

3 小結

本文概括總結了單味中藥以及中藥復方對轉化生長因子-β1、Smad蛋白家族的表達以及TGF-β1/Smad信號通路信號轉導的作用，闡述了中藥在治療肝臟疾病中能從多方位、多靶點、多途徑的改善肝纖維化患者的生存質量。并且近年來，隨著眾多科研人員的不斷深入探索，關于中藥干預該信號通路的研究成果也因此與日俱增。

截至目前，絕大多數TGF-β1/Smad信號通路在中藥干預下的作用機制的研究方向還主要瞄向于抑制TGF-β1、Smad2、Smad3、Smad4蛋白表達，使Smad2/3磷酸化成減少，進而減少Smad2/3/4的形成，同時增加Smad7表達，但對于通路上是否還存在其他不明因子參與抗纖維化機制，仍不清楚。因此，可將研發(fā)方向瞄準到對TGF-β/Smad等信號通道上下游機制的調控上，更有利于TGF-β靶向抗肝纖維化新藥的研究[42]。另一方面，雖然中醫(yī)藥具有安全性高、作用靶點廣等優(yōu)勢，但利用中醫(yī)藥干預肝纖維化的研究，在國內外仍多局限于動物研究上，反而在臨床方面的研究很少。因此在今后的研究中，應多注重把動物研究與臨床試驗相結合，并在不斷的試驗中總結出調節(jié)TGF—β1/Smads信號通路的絕佳方案，進一步找尋肝臟疾病發(fā)生發(fā)展治療的有效方法。