呂 園,劉春燕

南京市第一醫(yī)院/南京醫(yī)科大學(xué)附屬南京醫(yī)院核醫(yī)學(xué)科實(shí)驗(yàn)診斷部，江蘇南京 210006

畢業(yè)課題設(shè)計(jì)是醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)專業(yè)本科教學(xué)培養(yǎng)過程中的重要組成部分，是醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)專業(yè)學(xué)習(xí)成果的展示[1]，它能夠引導(dǎo)學(xué)生將前期理論學(xué)習(xí)、臨床實(shí)習(xí)過程中學(xué)到的知識(shí)融會(huì)貫通，并讓學(xué)生熟悉科研設(shè)計(jì)整個(gè)流程[2]。南京醫(yī)科大學(xué)附屬南京醫(yī)院為每位醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)專業(yè)本科畢業(yè)生指定一名指導(dǎo)教師。指導(dǎo)教師可以從論文選題、文獻(xiàn)查閱、課題設(shè)計(jì)、實(shí)驗(yàn)操作、結(jié)果統(tǒng)計(jì)、論文撰寫等多個(gè)環(huán)節(jié)給學(xué)生提出引導(dǎo)性建議[3]，并啟發(fā)學(xué)生將創(chuàng)新性科研思維應(yīng)用到今后的研究生學(xué)習(xí)階段或臨床研究工作中[4]。通過指導(dǎo)教師的專業(yè)輔導(dǎo)，學(xué)生在畢業(yè)課題設(shè)計(jì)的濃厚科研氛圍中，能夠激發(fā)自身的科研熱情，培養(yǎng)合理有序的科研習(xí)慣，科研思維得到針對(duì)性鍛煉，為今后的學(xué)習(xí)和工作奠定科學(xué)、專業(yè)的理論和實(shí)踐基礎(chǔ)[5]。

1 畢業(yè)課題前期準(zhǔn)備

1.1論文選題 恰當(dāng)選題是畢業(yè)生保質(zhì)保量順利完成課題設(shè)計(jì)的先決條件，也是提高畢業(yè)課題設(shè)計(jì)質(zhì)量的關(guān)鍵環(huán)節(jié)[6]。醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)專業(yè)本科生畢業(yè)課題一般選擇專業(yè)前沿科學(xué)問題，既可激發(fā)學(xué)生的科研興趣，培養(yǎng)學(xué)生的科研思維，同時(shí)也鍛煉了學(xué)生的實(shí)踐操作能力，讓學(xué)生接觸到最新的科學(xué)前沿動(dòng)態(tài)[7]。

指導(dǎo)教師在幫助學(xué)生確定畢業(yè)設(shè)計(jì)題目時(shí)，需要充分結(jié)合自己的科研課題和學(xué)生的專業(yè)背景，提供專業(yè)有效的建議和指導(dǎo)。在指導(dǎo)江蘇大學(xué)醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)專業(yè)本科生畢業(yè)論文設(shè)計(jì)過程中，選定科研項(xiàng)目“人CYP2C19基因分型檢測試劑盒性能驗(yàn)證”。研究內(nèi)容主要包括：參照產(chǎn)品行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)指南及專家共識(shí)設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)方案，對(duì)“CYP2C19基因分型檢測試劑盒”性能進(jìn)行多方面評(píng)估，包括準(zhǔn)確性、特異性、最低檢出限及抗干擾能力，該項(xiàng)目在臨床中具有一定的應(yīng)用前景和價(jià)值，既與學(xué)生所學(xué)專業(yè)密切相關(guān)，也為將來學(xué)生獨(dú)立從事科學(xué)研究工作打下堅(jiān)實(shí)基礎(chǔ)。

1.2文獻(xiàn)查閱 在本科生完成畢業(yè)課題過程中，文獻(xiàn)查閱是非常重要的環(huán)節(jié)，在此過程中，指導(dǎo)教師教授學(xué)生使用PubMed、中國知網(wǎng)和萬方醫(yī)學(xué)網(wǎng)等中英文網(wǎng)站進(jìn)行文獻(xiàn)查閱。在給學(xué)生確定好畢業(yè)設(shè)計(jì)題目后，首先要求學(xué)生使用上述中英文網(wǎng)站查找?guī)灼胺肿釉\斷檢驗(yàn)程序性能驗(yàn)證”相關(guān)的技術(shù)指南和專家共識(shí)等，如《CNAS-CL02-A009-2018醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量和能力認(rèn)可準(zhǔn)則在分子診斷領(lǐng)域的應(yīng)用說明》[8]、《藥物代謝酶和藥物作用靶點(diǎn)基因檢測技術(shù)指南(試行)》[9]等，讓學(xué)生從“性能驗(yàn)證”的時(shí)機(jī)、參數(shù)和判斷標(biāo)準(zhǔn)等方面學(xué)習(xí)性能驗(yàn)證的行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)。學(xué)生在掌握行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)的前提下，通過進(jìn)一步查閱相關(guān)同行論著，學(xué)習(xí)文獻(xiàn)作者的研究思路、實(shí)驗(yàn)方法、結(jié)果統(tǒng)計(jì)和研究結(jié)論等，為下一步的實(shí)驗(yàn)工作做好鋪墊。

1.3開題報(bào)告 指導(dǎo)學(xué)生進(jìn)行充分的開題準(zhǔn)備并完成開題報(bào)告是畢業(yè)課題設(shè)計(jì)的關(guān)鍵。開題報(bào)告是畢業(yè)設(shè)計(jì)前期最重要的工作，報(bào)告決定了學(xué)生的實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)和文章撰寫的方向和內(nèi)容，是畢業(yè)論文的重要基礎(chǔ)。學(xué)生應(yīng)該根據(jù)各自的選題，通過查閱相關(guān)文獻(xiàn)，自主設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)方案，確定實(shí)驗(yàn)進(jìn)度，完成開題報(bào)告 PPT的制作。

邀請(qǐng)指導(dǎo)教師、其他同學(xué)及帶教教師共同參加開題報(bào)告會(huì)。報(bào)告會(huì)上，學(xué)生需要重點(diǎn)匯報(bào)課題實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)方案的可行性和創(chuàng)新性，講解課題實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)的思路，并詳細(xì)闡述研究背景、研究內(nèi)容、研究方法、技術(shù)路線及下一步工作計(jì)劃等。指導(dǎo)教師及帶教教師作為評(píng)審人員，針對(duì)學(xué)生匯報(bào)的開題報(bào)告進(jìn)行評(píng)估，提出意見和建議，并鼓勵(lì)其他同學(xué)共同參與討論。通過這種互動(dòng)交流方式，進(jìn)一步梳理學(xué)生思路，提供操作性更強(qiáng)的實(shí)驗(yàn)方案，使實(shí)驗(yàn)更加合理和可行，同時(shí)在交流中碰撞出更多的思維火花，在教師和同學(xué)的討論中拓寬思路，充分借鑒他人的想法和觀點(diǎn)，為畢業(yè)論文設(shè)計(jì)融入新內(nèi)容，從而讓畢業(yè)課題更加多元、豐富。

2 畢業(yè)課題中期實(shí)驗(yàn)

2.1實(shí)驗(yàn)研究 經(jīng)過文獻(xiàn)查閱和開題準(zhǔn)備后，學(xué)生開始進(jìn)入實(shí)驗(yàn)研究階段，完成“人CYP2C19基因分型檢測試劑盒性能驗(yàn)證”，本課題參照產(chǎn)品行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)指南設(shè)計(jì)驗(yàn)證方案，對(duì)“人CYP2C19基因分型檢測試劑盒”的準(zhǔn)確性、特異度、最低檢出限及抗干擾能力4個(gè)方面進(jìn)行性能驗(yàn)證。

指導(dǎo)學(xué)生在實(shí)驗(yàn)開始前獨(dú)立設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)方案。(1)準(zhǔn)確性：隨機(jī)選取20例臨床標(biāo)本，計(jì)算“人CYP2C19基因分型檢測試劑盒”熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)檢測結(jié)果與“金標(biāo)準(zhǔn)”Sanger測序檢測結(jié)果的符合率。(2)特異度：每個(gè)位點(diǎn)選取10例野生型臨床標(biāo)本，計(jì)算“人CYP2C19基因分型檢測試劑盒”熒光定量PCR檢測結(jié)果與“金標(biāo)準(zhǔn)”Sanger測序檢測結(jié)果的符合率。(3)最低檢出限：選取1例常見基因型的臨床標(biāo)本基因組DNA。在純度符合要求的情況下(A260/280為1.8～2.0)，將上述基因組DNA按相應(yīng)濃度稀釋至廠商聲明的最低檢出限(10 ng/μL)。計(jì)算稀釋后基因組DNA重復(fù)熒光定量PCR 20次檢測結(jié)果與未稀釋前檢測結(jié)果的符合率。(4)抗干擾能力：選取2例已知基因型的血液標(biāo)本，分別加入3種干擾物質(zhì)，終濃度為廠商聲明的最高抗干擾濃度：血紅蛋白為20 g/L，膽紅素為60 μmol/L，三酰甘油為11 mmol/L。分別計(jì)算干擾物質(zhì)組與對(duì)照組檢測結(jié)果的符合率。

讓學(xué)生獨(dú)立設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)方案，啟發(fā)學(xué)生科研思維，培養(yǎng)學(xué)生獨(dú)立思考的習(xí)慣。引導(dǎo)學(xué)生首先提出科學(xué)假設(shè)(如最低檢出限為廠商聲明的10 ng/μL)，并在實(shí)驗(yàn)過程中逐步分析論證所提出的科學(xué)假設(shè)(如將基因組DNA稀釋至10 ng/μL并重復(fù)檢測20次，計(jì)算與未稀釋前檢測結(jié)果的符合率)，從而完成整個(gè)性能驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)。整個(gè)實(shí)驗(yàn)過程中，學(xué)生應(yīng)準(zhǔn)備記錄本，記錄必要的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)，包括實(shí)驗(yàn)方法、實(shí)驗(yàn)步驟、所用材料及實(shí)驗(yàn)原始結(jié)果等，保證實(shí)驗(yàn)的可重復(fù)性，以及實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的真實(shí)性和可溯源性。實(shí)驗(yàn)記錄是科學(xué)研究必備的一種良好習(xí)慣，可以幫助學(xué)生在實(shí)驗(yàn)過程中及時(shí)發(fā)現(xiàn)問題，有利于追根溯源，做到查漏補(bǔ)缺，舉一反三，不斷完善實(shí)驗(yàn)方案。

指導(dǎo)教師在科研實(shí)踐過程中，需要定期檢查學(xué)生的實(shí)驗(yàn)記錄本，針對(duì)記錄內(nèi)容，引導(dǎo)學(xué)生對(duì)照實(shí)驗(yàn)記錄本核驗(yàn)，在整理實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)、梳理實(shí)驗(yàn)方法、總結(jié)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的反復(fù)檢查過程中，逐步建立和完善實(shí)驗(yàn)思路，并在后續(xù)的實(shí)驗(yàn)中提出自己對(duì)在研課題的新想法。與此同時(shí)，在實(shí)驗(yàn)出現(xiàn)問題時(shí)，學(xué)生應(yīng)立即向指導(dǎo)教師反饋，并同步對(duì)照實(shí)驗(yàn)記錄本核查問題，初步排查問題原因，再結(jié)合教師反饋的建議，在先前工作的基礎(chǔ)上，修正原有實(shí)驗(yàn)方案中的問題和不足，提出改進(jìn)措施，不斷優(yōu)化實(shí)驗(yàn)方案，鍛煉和提高自己解決問題、分析原因和創(chuàng)新的能力。

2.2中期考核 通過中期考核檢查學(xué)生畢業(yè)課題的進(jìn)展情況，指導(dǎo)教師應(yīng)及時(shí)發(fā)現(xiàn)學(xué)生在畢業(yè)設(shè)計(jì)中存在的問題。在實(shí)驗(yàn)開展一段時(shí)間后，指導(dǎo)教師、學(xué)生、其他同學(xué)及帶教教師可以共同參加中期考核報(bào)告會(huì)，學(xué)生通過PPT的形式匯報(bào)課題進(jìn)展情況，并將實(shí)驗(yàn)過程遇到的問題及處理方法和思路與教師和同學(xué)進(jìn)行交流和討論。在解決現(xiàn)有問題的基礎(chǔ)上，教師和學(xué)生應(yīng)一起確定下一階段的工作目標(biāo)，優(yōu)化實(shí)驗(yàn)方案，進(jìn)一步完善技術(shù)路線，保證畢業(yè)課題設(shè)計(jì)任務(wù)能夠按時(shí)圓滿完成。

3 畢業(yè)課題后期總結(jié)

3.1實(shí)驗(yàn)結(jié)果統(tǒng)計(jì) 所有實(shí)驗(yàn)全部完成后，要求學(xué)生將實(shí)驗(yàn)室結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)。發(fā)現(xiàn)20例臨床標(biāo)本的熒光定量PCR檢測結(jié)果與“金標(biāo)準(zhǔn)”Sanger測序結(jié)果比對(duì)，符合率為100%，滿足試劑盒準(zhǔn)確性驗(yàn)證要求；野生型位點(diǎn)臨床標(biāo)本熒光定量PCR檢測結(jié)果與“金標(biāo)準(zhǔn)”Sanger測序結(jié)果比對(duì)，符合率為100%，滿足試劑盒特異度驗(yàn)證要求；基因檢測試劑盒的最低檢出限為10 ng/μL；血紅蛋白、膽紅素和三酰甘油3種干擾物質(zhì)加入已知基因型結(jié)果的臨床標(biāo)本后，熒光定量PCR檢測結(jié)果與對(duì)照組100% 符合，滿足試劑抗干擾能力驗(yàn)證要求。

3.2畢業(yè)論文撰寫 畢業(yè)論文撰寫是整個(gè)畢業(yè)課題設(shè)計(jì)過程中最重要的環(huán)節(jié)，是對(duì)畢業(yè)設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)成果的全面整理和總結(jié)，能夠體現(xiàn)指導(dǎo)教師的教學(xué)水平和學(xué)生的綜合素質(zhì)。

指導(dǎo)教師要求學(xué)生第1步了解畢業(yè)論文的基本框架；第2步查閱相關(guān)同行文獻(xiàn)，了解“分子診斷檢驗(yàn)程序性能驗(yàn)證”內(nèi)容在國內(nèi)外同行中的研究水平；第3步根據(jù)實(shí)驗(yàn)統(tǒng)計(jì)結(jié)果進(jìn)行總結(jié)歸納，并撰寫論文。

整個(gè)過程對(duì)于初次撰寫論文的本科生來說有一定的困難。因此，指導(dǎo)教師需循序漸進(jìn)地指導(dǎo)學(xué)生。論文一般包括中英文標(biāo)題、中英文摘要、中英文關(guān)鍵字、正文、參考文獻(xiàn)等。標(biāo)題要求簡潔明了，概括性強(qiáng)。摘要需要概括整個(gè)實(shí)驗(yàn)研究的目的、方法、結(jié)果和結(jié)論，要求語句精練。正文是論文的核心，需要詳細(xì)描述整個(gè)實(shí)驗(yàn)的研究內(nèi)容，包括研究背景、材料與方法、研究結(jié)果和討論。在闡述研究結(jié)果的過程中，實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的處理方法和圖表的正確表示方法是重點(diǎn)教學(xué)內(nèi)容。對(duì)各類統(tǒng)計(jì)軟件和作圖軟件的學(xué)習(xí)，是引導(dǎo)學(xué)生開啟科研道路的必備技能。討論部分是論文的重點(diǎn)和難點(diǎn)，指導(dǎo)教師需要指導(dǎo)學(xué)生大量檢索國內(nèi)外文獻(xiàn)，在閱讀文獻(xiàn)的基礎(chǔ)上進(jìn)行總結(jié)撰寫。首先，闡述國內(nèi)外“分子診斷檢驗(yàn)程序性能驗(yàn)證”的研究進(jìn)展，力求全面；其次，廣泛、全面總結(jié)前人的發(fā)現(xiàn)、技術(shù)方法、優(yōu)缺點(diǎn)等；再次，總結(jié)本研究在實(shí)驗(yàn)進(jìn)行中遇到的問題及采取的解決措施；最后，可以對(duì)整個(gè)實(shí)驗(yàn)研究的創(chuàng)新性和實(shí)用性等多個(gè)方面進(jìn)行討論。參考文獻(xiàn)要求格式規(guī)范，指導(dǎo)學(xué)生學(xué)習(xí)EndNote等軟件的應(yīng)用。

學(xué)術(shù)規(guī)范性對(duì)于本科畢業(yè)論文來說至關(guān)重要，包括2個(gè)方面：一是形式規(guī)范，比如規(guī)范的文字格式、圖表格式、圖表注釋、參考文獻(xiàn)格式等；二是內(nèi)容規(guī)范，尊重他人的研究成果，在引用和借鑒他人文章內(nèi)容時(shí)要標(biāo)明文獻(xiàn)出處，避免出現(xiàn)語句的抄襲和剽竊。

學(xué)生完成畢業(yè)論文初稿后，指導(dǎo)教師需要反復(fù)對(duì)初稿中的內(nèi)容進(jìn)行審核查閱，再與學(xué)生交流溝通論文撰寫中存在的問題和困難，提出針對(duì)性的建議和意見，讓學(xué)生領(lǐng)會(huì)到問題的解決思路和方法。學(xué)生也可以在論文的反復(fù)修改中不斷思考和探索，在挖掘問題本質(zhì)的過程中不斷積累實(shí)驗(yàn)和寫作經(jīng)驗(yàn)。既可以提高畢業(yè)論文的質(zhì)量，也可以培養(yǎng)學(xué)生的思考能力和實(shí)踐能力，形成獨(dú)立思考的思維習(xí)慣。

3.3論文預(yù)答辯 在完成論文撰寫后，學(xué)生需要著手準(zhǔn)備預(yù)答辯PPT。論文預(yù)答辯是整個(gè)畢業(yè)課題設(shè)計(jì)過程中最后環(huán)節(jié)，是準(zhǔn)確評(píng)價(jià)本科畢業(yè)生學(xué)術(shù)水平、科研思維和實(shí)驗(yàn)操作能力等綜合素質(zhì)的重要內(nèi)容。指導(dǎo)教師需要對(duì)學(xué)生PPT的版面設(shè)計(jì)、框架結(jié)構(gòu)、內(nèi)容層次、文字圖片比例和文獻(xiàn)引用格式等進(jìn)行全面指導(dǎo)。

論文預(yù)答辯的過程能夠充分鍛煉學(xué)生的文字表達(dá)能力和重點(diǎn)概括能力。學(xué)生需要提煉畢業(yè)論文中研究目的、方法、結(jié)果和結(jié)論等各個(gè)環(huán)節(jié)的要點(diǎn)，通過精煉的文字、簡潔的圖形、嚴(yán)密的邏輯及合理的解釋，將畢業(yè)論文的核心要素充分展示在PPT中，學(xué)生的語言表達(dá)能力也可以得到充分鍛煉。通常情況下，學(xué)生在指導(dǎo)教師面前首次講述PPT的時(shí)候，有時(shí)會(huì)由于緊張、熟練度不夠、思路不清及邏輯紊亂等各種原因，出現(xiàn)卡頓、聲音過小、語速過快等問題。指導(dǎo)教師在遇到這些問題的時(shí)候，應(yīng)鼓勵(lì)學(xué)生加強(qiáng)練習(xí)和敢于表達(dá)，幫助學(xué)生理清表達(dá)的觀點(diǎn)和思路，指導(dǎo)文字內(nèi)容的使用規(guī)范，必要時(shí)建議學(xué)生在同學(xué)或家人面前多次模擬答辯。教師應(yīng)與學(xué)生一起，不斷反復(fù)修改和完善PPT的文字和內(nèi)容，調(diào)整和修正講演過程中的問題與不足，從而提高預(yù)答辯內(nèi)容的準(zhǔn)確性和完整性，加強(qiáng)講演的邏輯性和流暢性，為預(yù)答辯做好充分準(zhǔn)備。

在學(xué)生實(shí)習(xí)結(jié)束前，教研室組織指導(dǎo)教師和其他帶教教師成立預(yù)答辯小組，嚴(yán)格按照預(yù)答辯制度，對(duì)學(xué)生畢業(yè)課題論文進(jìn)行預(yù)答辯。學(xué)生應(yīng)從畢業(yè)課題的研究背景、研究思路、材料與方法、研究結(jié)果、討論等方面進(jìn)行綜合匯報(bào)。預(yù)答辯小組針對(duì)完整實(shí)驗(yàn)流程向?qū)W生提出問題，如實(shí)驗(yàn)過程中如何防止污染問題、標(biāo)本容量選擇問題及指南解讀等，給學(xué)生一次參加正式答辯前演練的機(jī)會(huì)，讓學(xué)生有機(jī)會(huì)查漏補(bǔ)缺，進(jìn)一步完善答辯內(nèi)容。

4 結(jié) 語

醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)是一門實(shí)踐性很強(qiáng)的學(xué)科，可以培養(yǎng)學(xué)生的理論知識(shí)、實(shí)驗(yàn)操作和科研思維等各方面的綜合素質(zhì)。一個(gè)完整的畢業(yè)課題設(shè)計(jì)，可以有效促進(jìn)學(xué)生將前期理論學(xué)習(xí)階段從課本上學(xué)到的知識(shí)、實(shí)驗(yàn)中應(yīng)用的操作技能、科學(xué)研究中的科研思維三者有機(jī)結(jié)合起來，融會(huì)貫通，對(duì)培養(yǎng)具有創(chuàng)新精神和科研思維能力的檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)復(fù)合型人才具有重要意義[10]。