吳亞玲 凌霞 俞廣舒 石潔 董杰 祝宏

紅細胞相合或者相容性輸注是保障臨床用血安全的基礎，其中關(guān)鍵環(huán)節(jié)之一是準確鑒定獻血者血液的血型和意外抗體，這有助于提升血液安全[1,2]。研究顯示部分獻血者血液中存在意外抗體，它們可引起血型鑒定困難和交叉配血不合等情形，從而延誤患者治療；此外，輸注存在意外抗體的血漿，可引起潛在輸血不良反應的風險[2,3]。因此，降低獻血者意外抗體引起的潛在風險具有重要的臨床意義，其中的方法之一是在血站對獻血者血液進行意外抗體篩選[3～5]，并根據(jù)篩選情況對血液進行相應的處理。本次研究回顧性分析了我中心獻血者意外抗體檢出率及分布情況?，F(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 回顧性分析2018 年1 月至2020 年12 月來浙江省血液中心參與無償獻血的獻血者標本，所有標本經(jīng)過知情同意后留取EDTA 抗凝全血待用。本次研究經(jīng)過本中心倫理委員會審批。

1.2 ABO 血型檢測 采用血型血清學技術(shù)進行ABO 血型的正定型、反定型[6]?？笰、抗B 試劑來自上海血液生物醫(yī)藥有限責任公司；反定型A、B 細胞為實驗室自配，采用已知A、B 血型的3 人以上同型血液混合配制。正定型、反定型操作在Beckman Coulter PK7300 全自動血型儀上進行，嚴格按照儀器說明書進行操作，并根據(jù)V 型板中凝集或不凝集情況，由儀器判讀軟件直接指定獻血者ABO血型。

1.3 RhD血型檢測 采用血型血清學檢測技術(shù)[7]，抗D（IgM 型）試劑來自英國Alba 生物技術(shù)有限公司。在Beckman Coulter PK7300 全自動血型儀上進行檢測，嚴格按照儀器說明書進行操作和結(jié)果判定。

1.4 意外抗體的篩選 所有標本采用Beckman Coulter PK7300 微孔板法（鹽水介質(zhì)法原理）進行意外抗體篩選，篩選細胞為3 人以上的O 型混合紅細胞（自制）；RhD陰性標本同時采用微柱凝膠卡法（抗人球蛋白法原理）進行意外抗體篩選，篩選細胞來自上海血液生物醫(yī)藥有限責任公司。

1.5 意外抗體的確認 對ABO 血型正反定型不一致或者意外抗體篩選陽性的標本進行意外抗體確認。方法包括鹽水試管法和微柱凝膠卡法[2,7]，譜細胞來自上海血液生物醫(yī)藥有限責任公司和荷蘭Sanquin 公司。依據(jù)獻血者血漿與譜細胞反應的格局，判定抗體的特異性。

1.6 統(tǒng)計學方法 采用SPSS 24.0 統(tǒng)計學軟件進行數(shù)據(jù)分析。計數(shù)資料組間比較采用χ2檢驗。設P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2.1 獻血者意外抗體分布情況 2018～2020 年共篩選獻血者354 286 例，意外抗體陽性獻血者133 例，陽性率為0.04%。常見的意外抗體為抗M、抗D、冷凝集素，分別為33 例（24.81%）、30 例（22.56%）、28 例（21.05%）。其他檢出抗體包括抗D+抗C 為6 例（4.51%）、抗E 為5 例（3.76%）、抗Lea+抗Leb、抗P1 各為3 例（分別占2.26%）、抗N 為2 例（1.50%）、抗c、抗Lea、抗Leb各為1 例（分別占0.75%）。此外有20 例（15.04%）獻血者標本發(fā)現(xiàn)存在同種抗體，因樣本量不足未能分析出抗體特異性。

2.2 無意外抗體和有意外抗體兩組獻血者血型和性別分布情況見表1

由表1 可見，在ABO 血型中，無意外抗體獻血者的A 型血比例低于有意外抗體獻血者（χ2=10.13，P＜0.05），而O 型比例則高于有意外抗體獻血者（χ2=10.60，P＜0.05）。在Rh 血型中，無意外抗體獻血者RhD-型比例低于有意外抗體獻血者（χ2=66.49，P＜0.05）。男性、女性獻血者中意外抗體陽性率分別為0.02%（46/206702）、0.06%（87/147584），女性獻血者的意外抗體陽性率高于男性獻血者（χ2=30.90，P＜0.05）。

2.3 有意外抗體的獻血者年齡分布 133 例有意外抗體的獻血者年齡范圍為18～57 歲，其中18～20 歲為19 例（14.29%）、21～25 歲為14 例（10.53%）、26～30 歲 為10 例（7.52%）、31～35 歲 為30 例（22.56%）、36～40 歲為22 例（16.54%）、41～45 歲為9 例（6.77%）、46～50 歲為17 例（12.78%）、51～55 歲為10 例（7.52%）、56～57 歲為2 例（1.50%）。

2.4 有意外抗體的獻血者獻血次數(shù)情況 獻血次數(shù)范圍為1～40 次，1 次獻血比例占比45.86%，最多的獻血者獻血次數(shù)為40 次。具體獻血次數(shù)分布如下：1 次獻血為61 例（45.86%），2 次獻血為18 例（13.53%），3 次獻血為12 例（9.02%），4 次獻血為9 例（6.77%），5 次獻血為7 例（5.26%），6 次和7 次獻血均為5 例（3.76%），9 次、10 次、12 次、13 次獻血均為2 例（1.50%），11 次、14 次、15 次、17 次、18 次、19 次、36 次、40 次均為1 例（0.75%）。

3 討論

意外抗體曾被稱為不規(guī)則抗體，是指正常ABO血型中抗A、抗B 之外的血型抗體。篩選獻血者血液中的意外抗體，可避免這種抗體引起的輸血不良反應，有助于提升血液安全[3～5]。目前，國外部分國家強制性要求對獻血者血液進行意外抗體篩選，但國內(nèi)法規(guī)并不要求開展篩選，在實際工作中部分血站從血液安全角度出發(fā)，已開始對獻血者血液進行意外抗體篩選[2，5，8～10]。本次研究報道的意外抗體檢出率明顯低于朱紅芹等[11]報道的江蘇南京獻血人群意外抗體檢出率（0.15%）和Solanki 等[4]報道的印度人群檢出率（0.17%），這可能與獻血人群組成和特性以及篩選方法等有關(guān)。

本次研究發(fā)現(xiàn)獻血者中常見的意外抗體為抗M、抗D、冷凝集素?？筂 屬于MNS 血型系統(tǒng)的抗體[12]，大多屬于IgM 性質(zhì)[13]；部分抗M、抗N 在37 ℃有生物活性，可能引起直接和延遲輸血反應?？笵屬于Rh血型系統(tǒng)的抗體，可引起新生兒溶血病和輸血反應[14]。本次研究中所有抗D 獻血者均為女性，這可能與其胎母免疫刺激有關(guān)[7]。冷凝集素是冷反應型的紅細胞抗體，屬于IgM 型性質(zhì)，通常情況下低效價冷凝集素沒有臨床意義。當冷凝集素效價過高[15]，可以導致交叉配血不合。此外應注意到本次研究中有20 例標本同種抗體特異性不明，這主要是由于標本量不足而引起。目前，血站針對存在意外抗體的獻血者捐獻的血液采取不同的處理策略，全血捐獻者通常紅細胞制備成洗滌紅細胞供臨床使用，含有抗體的血漿進行報廢處理；而單采血小板獻血者根據(jù)其意外抗體的特性，選擇保留或者屏蔽獻血者的方式。

個體受到紅細胞抗原免疫刺激后可產(chǎn)生意外抗體，主要途徑包括輸血、移植和妊娠等，部分個體存在天然的意外抗體。本次研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)女性獻血者的意外抗體陽性率高于男性獻血者，這可能與女性存在妊娠的免疫刺激有關(guān)；從ABO 血型分布角度，A 型血比例略高，其原因有待于進一步分析。本次研究中絕大多數(shù)獻血者是第一次獻血時發(fā)現(xiàn)存在意外抗體，但是有超過1/2 的獻血者存在2 次或多次獻血，提示獻血者意外抗體產(chǎn)生存在動態(tài)過程，因此宜每次獻血時均篩選意外抗體。

綜上所述，本次研究回顧性分析了杭州地區(qū)獻血者意外抗體情況，發(fā)現(xiàn)意外抗體主要為抗M、抗D、冷凝集素；女性獻血者的意外抗體陽性率高于男性獻血者，而無意外抗體獻血者和有意外抗體獻血者的ABO 血型分布、RhD-型比例存在差異。但本次研究由于采用鹽水介質(zhì)法原理進行意外抗體篩選，存在漏檢IgG 型意外抗體的風險。此外有15.04%標本未能分析出抗體特異性，可能影響抗體種類的分布數(shù)據(jù)。今后將改進篩選的方法，不斷完善意外抗體篩選策略。