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        不同炮制方法對蘭州百合化學成分的影響*

        2022-11-18 03:11:22趙海鷹戴浩恩史巧霞
        甘肅科技 2022年20期
        關(guān)鍵詞:總皂苷浸出物水溶性

        金 月,張 巖,趙海鷹,戴浩恩,史巧霞

        (甘肅中醫(yī)藥大學附屬醫(yī)院制劑中心,甘肅 蘭州 730000)

        百合來源于多年生植物卷丹(Lilium lancifolium Thunb),百合(L.brouni FE.Broun Var Viridulum Baker)和細葉百合(li Pumilum DC)的干燥肉質(zhì)鱗葉,其性味甘、寒,歸心、肺經(jīng)[1],具有養(yǎng)陰清肺,清心安神之功效。臨床主要用于治療咳嗽吐血,虛煩不安,心慌驚悸等病癥[2]。據(jù)報道,百合鱗莖主要含黃酮、總皂苷、多酚、多糖等成分[3],其中酚類具有抗菌、消炎、降壓、清熱解毒、利尿等作用,在抗氧化、抗癌方面有顯著效果,皂苷具有抗菌、抗炎、抗抑郁、抗氧化等作用,多糖具有抗腫瘤、提高免疫力、抗疲勞、降血糖等多種作用[4]。查閱文獻發(fā)現(xiàn)不同炮制方法會引起百合炮制前后化學成分如百合多糖、總磷脂等有效成分的變化,這會改變百合的藥理作用和臨床療效。文獻記載其主要炮制方法為蒸制、蒸焙、蜜制等方法[5],以期改變百合的藥性及臨床療效。

        百合品種較多,其中蘭州百合為百合科植物蘭州百合(Lilim dar)的干燥肉質(zhì)鱗葉,主產(chǎn)甘肅蘭州、臨洮、臨夏等地[6]。蘭州百合作為中藥材百合的甘肅省地方習用品,收載于2009版《甘肅省中藥材標準》。蘭州百合是全國唯一食用甜百合,也是蘭州市乃至甘肅省的特色產(chǎn)業(yè),蘭州百合已有400年的種植歷史,其味道甘甜鮮美,有“蘭州百合甲天下”的美譽[7]。目前對蘭州百合的研究主要集中在栽培、管理、采挖及加工等技術(shù)的研究,藥用方面的研究也集中在化學成分、藥理作用方面,缺乏炮制工藝方面的研究[8]。因此本文以不同方法炮制百合,并采用不同分析方法探討蘭州百合炮制后總黃酮、總皂苷、多酚、多糖等成分的含量變化,以期為蘭州百合的臨床應用提供理論依據(jù)。

        1 實驗材料

        1.1 實驗儀器與試劑

        UV-3300型紫外可見分光光度計(上海美普達儀器有限公司);電子天平(CPA225D,Sartorius公司);數(shù)控超聲波清洗器(KQ-500VDE型,昆山市超聲儀器有限公司);數(shù)顯恒溫水浴鍋(上海博迅實業(yè)有限公司醫(yī)療設備廠);離心機(長沙湘儀離心機儀器有限公司);旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(SHB-3A,鄭州杜甫儀器廠)。

        蘆丁對照品(批號B20771;上海源葉生物科技有限公司),沒食子酸對照品(批號111539- 200001;中國食品藥品檢定研究院),薯蕷皂苷元對照品(批號110831- 201906;中國食品藥品檢定研究院),無水葡萄糖對照品(批號BW4009;上海源葉生物科技有限公司)

        1.2 實驗藥材

        蘭州百合,購自七里河區(qū)西果園,經(jīng)醫(yī)院主任中藥師鑒定為百合科植物蘭州百合(Lilim dar)的干燥肉質(zhì)鱗葉。藥用百合購自甘肅中醫(yī)藥大學附屬醫(yī)院中藥房,為百合(Lilium brownii F.E.Brown Var.viridulum Baker)的干燥肉質(zhì)鱗葉。

        2 實驗方法與結(jié)果

        2.1 蘭州百合的不同炮制品制備

        取蘭州凈百合適量,按不同炮制方法炮制后測定水分,具體見表1。

        表1 蘭州百合不同炮制方法及水分測定結(jié)果

        2.2 不同標準曲線的制備

        黃酮類化合物標準曲線的制備:精密稱取蘆丁對照品5.86 mg于25 mL容量瓶中,得濃度為0.234 4 mg/mL的對照品溶液,精密移取0.5 mL、1.0 mL、1.5 mL、2.0 mL、2.5 mL、3.0 mL于10 mL容量瓶中,依次加入0.3 mL 5%NaNO2,5 min后再加入0.3 mLAl(NO3),3~5 min后再加入2.0 mL NaOH,50%乙醇定容至刻度。于510 nm下測定A值,得到標準曲線。類似的,按不同方法制備總皂苷、多酚、多糖的標準曲線,具體見表2。

        表2 蘭州百合中不同化合物標準曲線的制備

        2.3 方法學考察

        2.3.1 精密度考察

        取不同對照品溶液重復測定6次,記錄A值,不同對照品的相對標準偏差(RSD),蘆丁、薯蕷皂苷元、沒食子酸、無水葡萄糖測得值RSD%分別為2.67%、2.99%、0.89%、0.83%,表明精密度良好。

        2.3.2 穩(wěn)定性考察

        將樣品分別按各有效部位溶液制備方法制備供試品溶液,各樣品分別于0 h、4 h、8 h、12 h、24 h測定A值,總黃酮、總皂苷、多酚、多糖含量RSD 值分別為1.08%、0.90%、2.42%、1.32%。結(jié)果表明各樣品溶液在24 h內(nèi)基本穩(wěn)定。

        2.3.3 重復性考察

        將樣品分別按各有效部位溶液制備方法制備供試品溶液,各平行制備6份,測定A值,總黃酮、總皂苷、多酚、多糖含量RSD值分別為1.61%、1.57%、2.22%、0.57%。結(jié)果表明各供試品溶液重復性良好。

        2.3.4 加樣回收率

        精密稱取已知含量的樣品各6份,分別精密加入樣品中蘆丁、沒食子酸、薯蕷皂苷元、無水葡萄糖對照品含量的100%對照品溶液,制備各供試品溶液,測定A,計算平均回收率及RSD??傸S酮、總皂苷、多酚、多糖平均回收率分別為98.3%、97.7%、98.8%、97.1%,RSD值分別為1.98%、2.71%、2.14%、1.42%。

        2.3.5 水溶性浸出物

        參照2020版《中國藥典》,取各供試品約2 g,精密稱定,置錐形瓶中加水50 mL,密塞,稱定重量,靜置1 h,連接冷凝管,加熱至沸騰,并保持微沸1 h,放冷,取下錐形瓶,密塞,再次稱重,用水補足減失重量,搖勻抽濾,量取續(xù)濾液20 mL,置于干燥至恒重的蒸發(fā)皿上,水浴蒸干,105 ℃干燥3 h,置干燥器中冷卻30 min,迅速精密稱定重量。以干燥品計算供試品中水溶性浸出物的含量(%)。

        2.4 各成分的實驗測定結(jié)果

        連續(xù)測定3批,測定結(jié)果采用均數(shù)±標準差,不同炮制品蘭州百合中的各類化合物的結(jié)果見表3。

        表3 不同炮制品蘭州百合中的各類化合物的結(jié)果

        2.5 方差分析及相關(guān)性分析

        為清晰比較蘭州百合5種不同炮制方法、藥用百合之間化學成分的差異性,本實驗采用方差分析(ANOVA)進行兩兩比較,并繪制柱狀圖,見圖1,相關(guān)性分析見表4。

        表4 樣品中化學成分含量的相關(guān)性分析

        圖1 不同炮制品蘭州百合中化學成分的含量比較

        由上述結(jié)果可知,總黃酮含量排序為:酒蒸>藥用百合>蜜炙>烘干>蒸焙>曬干;總皂苷含量排序為:蜜炙>蒸焙>烘干>曬干>酒蒸>藥用百合;多酚含量排序為:蜜炙>藥用百合>酒蒸>曬干>蒸焙>烘干;多糖含量排序為:曬干>烘干>蜜炙>酒蒸>蒸焙>藥用百合;水溶性浸出物含量排序為:蜜炙>酒蒸>蒸焙>烘干>曬干>藥用百合。由兩兩比較結(jié)果可知,黃酮含量,蜜炙與烘干、藥用品間無統(tǒng)計學差異(P>0.05);多酚含量,曬干與蒸焙、酒蒸、烘干間無統(tǒng)計學差異(P>0.05),酒蒸與曬干、蒸焙、藥用品間無統(tǒng)計學差異(P>0.05),烘干與曬干、蒸焙間無統(tǒng)計學差異(P>0.05),藥用品與蜜炙、酒蒸無統(tǒng)計學差異(P>0.05);其余皂苷、多糖、水溶性浸出物含量各組之間均有統(tǒng)計學差異(P<0.05)。

        利用相關(guān)分析去研究黃酮、皂苷、多酚、多糖、水溶性浸出物之間的相關(guān)關(guān)系,使用Pearson相關(guān)系數(shù)去表示相關(guān)關(guān)系的強弱情況。具體分析可知:黃酮與多糖之間呈現(xiàn)出顯著性(P=0.003<0.01),相關(guān)系數(shù)值是-0.657,意味著黃酮與多糖之間有著負相關(guān)關(guān)系。皂苷與水溶性浸出物之間全部均呈現(xiàn)出顯著性(P=0<0.01),相關(guān)系數(shù)值分別是0.831,意味著皂苷與水溶性浸出物之間有著正相關(guān)關(guān)系。其他項之間并無相關(guān)關(guān)系。

        3 實驗結(jié)果與討論

        百合在我國資源豐富,作為藥食兩用的中藥已在人們的日常餐桌和中醫(yī)臨床上廣泛應用,用不同的炮制方法炮制百合,不僅可以擴大百合的臨床使用,還可以更深入了解其有效成分的變化。本文采用曬干、烘干、蜜炙、蒸焙、酒蒸等傳統(tǒng)炮制工藝對蘭州百合進行炮制,并與藥用百合對比,研究其不同炮制品百合中的總黃酮、總皂苷、多酚、多糖等有效成分變化以及水溶性浸出物的差異,發(fā)現(xiàn)不同炮制品中的各類有效成分含量均有所變化,結(jié)果顯示總黃酮含量以酒蒸百合最高,總皂苷、多酚、水溶性浸出物含量均以蜜炙百合最高,而曬干百合中的多糖含量最高。

        另一方面采用相關(guān)性分析方法發(fā)現(xiàn)黃酮與多糖之間呈現(xiàn)出統(tǒng)計學意義,黃酮與多糖之間有負相關(guān)關(guān)系,即黃酮含量越高,多糖含量越低。皂苷與水溶性浸出物之間呈現(xiàn)出統(tǒng)計學意義,皂苷與水溶性浸出物之間有正相關(guān)關(guān)系,即水溶性浸出物越高,皂苷含量越高。其他項之間并無相關(guān)關(guān)系。以上研究為蘭州百合的炮制提供理論依據(jù),也為百合在中醫(yī)臨床的應用提供參考。

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