王雅娟,劉琦,牟光慶,吳曉萌
(大連工業(yè)大學(xué)食品學(xué)院,遼寧 大連 116034)
近年來(lái),隨著全球經(jīng)濟(jì)的快速發(fā)展,人們的環(huán)保意識(shí)也越來(lái)越強(qiáng)烈,可食用包裝膜已成為代替不可降解包裝的重要材料。食品包裝膜是用來(lái)保護(hù)食品在運(yùn)輸?shù)倪^(guò)程免受外力的損壞,這些包裝膜大多是由蛋白質(zhì)、脂類或是多糖制成[1],其中酪蛋白制成的薄膜具有良好的理化特性,這是由于酪蛋白中含有較多的鈣離子和其他鹽離子[2]。但是大多數(shù)的蛋白質(zhì)膜的水蒸氣透過(guò)率較差,這阻礙了其在食品包裝中的應(yīng)用[3]。因此,學(xué)者采用了各種方法來(lái)提升蛋白膜的包裝特性,如:熱處理和紫外線誘導(dǎo)等[4]。
等離子體是除氣體、液體和固體以外,物質(zhì)存在的第四種狀態(tài)。等離子體加工是對(duì)材料表面進(jìn)行改性,以達(dá)到對(duì)表面進(jìn)行處理的目的[5-6]。低溫等離子技術(shù)(cold plasma,CP)是一種非熱加工技術(shù),無(wú)害且適用于處理膜來(lái)改變材料的物理性能,現(xiàn)已多被應(yīng)用于食品工業(yè)中[7]。低溫等離子技術(shù)是電子從電場(chǎng)中獲得能量,通過(guò)碰撞將能量轉(zhuǎn)化為分子的內(nèi)能和動(dòng)能,獲得能量的分子被激發(fā),與此同時(shí),部分分子被電離,這些活化后的粒子相互碰撞從而引起一系列復(fù)雜的物理化學(xué)反應(yīng)[8]。正如許多論文所報(bào)道的,低溫等離子技術(shù)被認(rèn)為是一種潛在的技術(shù),用以改變材料性能,如親水性、柔韌性、拉伸強(qiáng)度(tensile strength,TS)和水蒸氣滲透性(water vapor permeability,WVP)[9]。低溫等離子技術(shù)可以改變明膠基薄膜的表面粗糙度、極性基團(tuán)濃度和親水性,但處理后薄膜的水蒸氣和氧氣滲透性等阻隔性能沒(méi)有顯著變化[10]。在乳清和麩質(zhì)薄膜中,機(jī)械性能包括拉伸強(qiáng)度(TS)和斷裂伸長(zhǎng)率(elongation at break,EAB)都得到了提高,但介質(zhì)阻擋放電低溫等離子體(dielectric barrier discharge-cold plasma,DBD-CP)處理并沒(méi)有顯著改變這兩種蛋白質(zhì)薄膜的屏障性能和溶解度[11]。
DBD-CP技術(shù)可以改變材料的基本性能[12]。前期研究表明DBD-CP可以通過(guò)改變酪蛋白膜的結(jié)構(gòu)特性進(jìn)而影響膜的包裝性能,這可能與酪蛋白膜被DBD-CP處理后影響膜中水分子遷移進(jìn)而導(dǎo)致膜的晶體物質(zhì)遷移,從而改變了酪蛋白的排列結(jié)構(gòu)有關(guān)[3]。此外,研究表明DBD-CP可以改變牛奶蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu),導(dǎo)致牛奶蛋白質(zhì)膠束的粒徑減小,結(jié)構(gòu)更加穩(wěn)定[13]。因此,本文以DBD-CP處理酪蛋白粉末的電壓和時(shí)間為變量,采用DBD-CP技術(shù)對(duì)酪蛋白粉末進(jìn)行改性,并對(duì)處理后的成膜性的變化進(jìn)行研究。
酪蛋白(>80%)、甘油(>99.0%):Sigma-Aldrich(上海)貿(mào)易有限公司。
V-100D型可見(jiàn)分光光度計(jì):上海美譜達(dá)儀器有限公司;TA-XTplus型質(zhì)構(gòu)儀:英國(guó)Stable Micro System公司;DK-S22型電熱恒溫水浴鍋:上海精密實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司;Binder KBF720型恒溫恒濕箱:德國(guó)賓得有限公司;DHG-9070A電熱恒溫鼓風(fēng)干燥器:上海森信實(shí)驗(yàn)儀器有限公司;PL303型電子分析天平:梅特勒-托利多儀器(上海)有限公司;HJ-4A型數(shù)顯恒溫磁力攪拌器:常州智博瑞儀器制造有限公司;Dura12F型超純水系統(tǒng):澤布拉儀器科技(上海)有限公司;DF-101s型加熱磁力攪拌器:鞏義市予華儀器有限公司;VORTEX-GENIE2型旋渦混合器:美國(guó)Scientific Industries公司;IKA RT5型數(shù)顯恒溫磁力攪拌器:德國(guó)IKA有限公司;Spectrum 10型傅里葉變換紅外光譜儀:美國(guó)PE公司;DBD-50等離子體反應(yīng)器:南京蘇曼有限公司。
1.3.1 DBD-CP處理
稱取一定量的酪蛋白粉末樣品于石英反應(yīng)皿中(d=90 mm),使用DBD-50等離子體反應(yīng)器處理樣品,不同的條件(處理電壓和處理時(shí)間)設(shè)置如下:處理電壓變化組在處理時(shí)間為60 s的條件下,電壓設(shè)定為0、30、40、50、60 V 和 70 V;處理時(shí)間變化組在 50 V 的處理電壓下,處理時(shí)間為 0、15、30、45、60、90 s和 120 s。各處理均在石英反應(yīng)器上進(jìn)行,所有樣品均以(2.0±0.2)A電流處理,試驗(yàn)進(jìn)行3次重復(fù)。
1.3.2 制膜方法
用0.5 mol/L的氫氧化鈉溶液溶解DBD-CP處理后的酪蛋白粉末,并添加甘油作為增塑劑,成膜液為酪蛋白∶甘油∶氫氧化鈉溶液=5∶1∶30(體積比)的乳狀液。為了使其快速混合,將混合物置于50℃恒溫磁力攪拌器中攪拌,隨后對(duì)成膜液進(jìn)行除氣。攪拌均勻后,小心地將成膜液傾注到聚丙烯酸板上(15 cm×15 cm)。然后將所有的膜樣保存在恒溫恒濕箱中,調(diào)節(jié)相對(duì)濕度為50%,溫度為25℃,放置48 h。隨后,將所有薄膜樣品剝離,并將其置于50%相對(duì)濕度的恒溫恒濕箱中,室溫保存7 d,以評(píng)估薄膜性能。所有膜樣品均做3個(gè)平行。
1.3.3 掃描電子顯微鏡
利用掃描電子顯微鏡(scanning electron microscope,SEM)對(duì)酪蛋白膜的微觀結(jié)構(gòu)進(jìn)行了研究,粉末樣品和薄膜樣品分別用導(dǎo)電雙面膠固定在樣品臺(tái)上,隨后噴金。在加速電壓為5 kV時(shí)進(jìn)行SEM掃描。對(duì)DBD-CP處理后的酪蛋白粉末制備成的膜進(jìn)行形態(tài)學(xué)觀察[14]。
1.3.4 X射線衍射
用X射線衍射(X-ray diffraction,XRD)儀測(cè)量處理后樣品的結(jié)晶度。將粉末樣品平鋪在樣品臺(tái)上,并刮去多余的樣品,并且薄膜樣品剪裁成4 cm×3.3 cm的規(guī)格固定在儀器的樣品臺(tái)。設(shè)定電流30 mA,電壓40 kV,以 5 °/min 的速度掃描 10°~80°[15]。
1.3.5 傅里葉變換紅外光譜(Fourier transform infrared,F(xiàn)TIR)
將制備的薄膜樣品使用傅里葉變換紅外光譜的衰減全反射模式對(duì)樣品進(jìn)行功能基團(tuán)和二級(jí)結(jié)構(gòu)的變化分析。對(duì)于每個(gè)薄膜樣品,在4 000 cm-1~1 000 cm-1的波數(shù)范圍內(nèi)進(jìn)行4 cm-1分辨率的掃描。然后用Omnic 8.2軟件對(duì)樣品的光譜進(jìn)行分析[16]。
1.3.6 差示掃描量熱法
采用差示掃描量熱法(differential scanning calorimeter,DSC)表征酪蛋白膜的熱穩(wěn)定性。將8 mg~10 mg的膜樣以5℃/min的升溫速率加熱,溫度從25℃提高到500℃。氮?dú)饬髁繛?0 cm3/min[17]。
1.3.7 機(jī)械性能
薄膜的拉伸強(qiáng)度(TS)和斷裂伸長(zhǎng)率(EAB)用質(zhì)構(gòu)儀測(cè)定。將膜切成10 mm×40 mm的條狀,樣品放入膜延長(zhǎng)夾具中。初始夾距設(shè)定為20 mm,拉伸速度為10 mm/s,有效拉伸距離為20 mm。記錄薄膜樣品的TS和EAB值,測(cè)量3次[18]。按照以下計(jì)算公式進(jìn)行計(jì)算。
式中:Ft為膜破裂時(shí)記錄的最大載荷,N;T為膜厚,mm;W為膜寬,20 mm;ΔL是膜的伸長(zhǎng)長(zhǎng)度,mm;L0為膜的初始長(zhǎng)度,70 mm。
1.3.8 水蒸氣透過(guò)率測(cè)定
采用擬杯狀法測(cè)定膜的阻隔性。稱取干燥氯化鈣3.0 g(120℃干燥12 h)加入恒重玻璃杯中,將薄膜密封在玻璃杯上,稱量被薄膜覆蓋的玻璃杯的質(zhì)量。然后將玻璃杯置于恒溫恒濕箱中,溫度為25℃,相對(duì)濕度為50%。每隔1 h測(cè)量薄膜覆蓋玻璃杯的質(zhì)量,并記錄數(shù)據(jù)。連續(xù)測(cè)量7 h[19]。通過(guò)以下公式進(jìn)行計(jì)算。
式中:WVP為水蒸氣透過(guò)率,g·m/(Pa·s·m2);ΔW為杯重增加量,g;L 為膜厚,m;t為測(cè)量時(shí)間,s;A 為測(cè)量面積,m2;ΔP 為杯內(nèi)外壓力差,Pa。
每組試驗(yàn)至少3組平行并重復(fù)2次~3次。試驗(yàn)結(jié)果主要采用軟件SPSS Statistics 20中的Duncan檢驗(yàn),在置信區(qū)間95%的水平用ANOVA分析方法進(jìn)行數(shù)據(jù)顯著性分析,p<0.05時(shí)認(rèn)為差異顯著。用不同字母表示差異顯著(p<0.05),用軟件 Origin8.5繪圖。
2.1.1 酪蛋白形態(tài)結(jié)構(gòu)
DBD-CP處理酪蛋白的SEM圖像如圖1所示。
DBD-CP處理改變了酪蛋白粉末的表面粗糙度,酪蛋白粉末表面由光滑變?yōu)榇植冢煌瑫r(shí),隨著處理時(shí)間延長(zhǎng)和電壓的增加,酪蛋白膠束的粒徑減小。這與DBD-CP放電過(guò)程中產(chǎn)生的蝕刻作用有關(guān),DBD-CP處理產(chǎn)生的高能粒子撞擊酪蛋白粉末表面,顯著改變其表觀形貌[20]。此外,DBD-CP放電過(guò)程中產(chǎn)生大量電子、離子等活性物質(zhì)攻擊酪蛋白,也會(huì)導(dǎo)致化學(xué)鍵斷裂、鏈斷裂、化學(xué)降解、低分子量碎片去除等化學(xué)和物理變化,進(jìn)而會(huì)影響膜的結(jié)構(gòu)和理化性質(zhì)[21]。
2.1.2 成膜的形態(tài)結(jié)構(gòu)
對(duì)處理后的酪蛋白制成的膜的形態(tài)學(xué)進(jìn)行分析,結(jié)果如圖2所示。
膜表面有大量的晶體,晶體數(shù)量隨著處理電壓和處理時(shí)間的增加而變化。同時(shí),圖2中的截面呈現(xiàn)出相反的趨勢(shì),處理時(shí)間變化組中,表面隨著處理時(shí)間延長(zhǎng),晶體量呈增多趨勢(shì);而在截面中,隨著處理時(shí)間的增加,晶體量逐漸減少。
電子掃描顯微鏡的能譜如圖3所示。
由圖3可以看出,表面的晶體與Na+的結(jié)構(gòu)最為相似,因此,可推測(cè)其為Na+組成的晶體。晶體隨DBDCP處理發(fā)生變化的原因可能是晶體隨著酪蛋白粉末中的水產(chǎn)生了遷移,但這一解釋需要進(jìn)一步的試驗(yàn)研究來(lái)證實(shí)。
DBD-CP處理酪蛋白粉末的XRD圖譜如圖4所示。
由圖4可見(jiàn),寬的衍射峰發(fā)生在未經(jīng)處理的酪蛋白樣品中,2 θ=20°。經(jīng)比較,DBD-CP處理后的蛋白峰值降低,說(shuō)明蛋白內(nèi)螺旋側(cè)鏈結(jié)構(gòu)含量與之相關(guān),性質(zhì)不穩(wěn)定,易受環(huán)境等因素影響[22]。隨著處理電壓和處理時(shí)間的增加,沒(méi)有新的衍射峰出現(xiàn),這意味著DBD-CP處理不能使得酪蛋白中產(chǎn)生新的晶體結(jié)構(gòu)。從圖4A可以看出,衍射強(qiáng)度隨著處理時(shí)間的延長(zhǎng)逐漸增大,直到60 s達(dá)到峰值,然后減小。如圖4B所示,衍射峰強(qiáng)度隨著處理電壓的增加而逐漸減小,尤其表現(xiàn)在2 θ=20 °~25 °處。
DBD-CP處理酪蛋白粉末后制成的膜的XRD圖譜如圖5所示。
從圖像的趨勢(shì)可以看出,各峰值隨處理時(shí)間延長(zhǎng)而增高,在50 V 60 s達(dá)到最高。處理電壓變化組中,隨著處理電壓強(qiáng)度的增加峰的強(qiáng)度增強(qiáng),直到50 V,然后下降。據(jù)悉,晶體的尺寸和晶體的折疊都會(huì)引起X射線衍射峰的變化[23]。因此,晶體衍射峰發(fā)生的變化可能是由于DBD-CP放電破壞了酪蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu),致使成膜后的晶體結(jié)構(gòu)發(fā)生了變化。
DBD-CP處理后酪蛋白粉末制成的膜的紅外光譜如圖6所示。
FTIR光譜是根據(jù)結(jié)構(gòu)振動(dòng)來(lái)分析分子水平上的結(jié)構(gòu)變化來(lái)探討官能團(tuán)的轉(zhuǎn)移。等離子體處理對(duì)3 600 cm-1~3 300 cm-1的振動(dòng)產(chǎn)生了影響,這個(gè)波數(shù)范圍為O—H和N—H的特征振動(dòng),這是由于當(dāng)分子間或分子內(nèi)氫鍵形成時(shí),羥基的吸收峰向較低的波數(shù)移動(dòng)[24]。在處理時(shí)間變化組中,可以看出隨著處理時(shí)間的延長(zhǎng),樣品的吸收峰逐漸變寬,波數(shù)在3 400 cm-1處略有變化,這表明DBD-CP對(duì)蛋白質(zhì)中O—H產(chǎn)生了一定的影響。
酰胺Ⅰ區(qū)的波數(shù)范圍為1700 cm-1~1600 cm-(1CO拉伸振動(dòng)),這與蛋白質(zhì)的二級(jí)結(jié)構(gòu)密切相關(guān)。蛋白質(zhì)的二級(jí)結(jié)構(gòu)包括α-螺旋、β-折疊、β-轉(zhuǎn)角和無(wú)規(guī)卷曲結(jié)構(gòu)。不同的二級(jí)結(jié)構(gòu)信息疊加在酰胺Ⅰ帶上,而酰胺Ⅰ帶的二階導(dǎo)數(shù)光譜保留了吸收峰的積分面積。波數(shù)與二級(jí)結(jié)構(gòu)的關(guān)系:1 610 cm-1~1 640 cm-1為 β-折疊特征峰;1 660 cm-1~1 670 cm-1和 1 680 cm-1~1 700 cm-1為 β-轉(zhuǎn)角特征峰;1 650 cm-1~1 660 cm-1為 α-螺旋特征峰;1 640 cm-1~1 650 cm-1為無(wú)規(guī)卷曲特征峰[25]。
不同處理時(shí)間和不同處理電壓的樣品的二級(jí)結(jié)構(gòu)的含量見(jiàn)表1。
表1 DBD-CP處理的酪蛋白粉末制備成膜的二級(jí)結(jié)構(gòu)Table 1 Secondary structure of films made from casein power samples treated by DBD-CP
隨著DBD-CP處理時(shí)間的延長(zhǎng),β-折疊在50 V 90 s達(dá)到最高值(37.57%)。在處理電壓變化組中,β-折疊在40 V 60 s的處理?xiàng)l件下含量為74.15%,而在70 V 60 s時(shí)則含量為17.48%。α-螺旋含量均比對(duì)照組含量低,其中在40 V 60 s時(shí)含量最少。由此可以得出結(jié)論:DBD-CP處理后酪蛋白的α-螺旋結(jié)構(gòu)以及二
級(jí)結(jié)構(gòu)中的無(wú)規(guī)卷曲均受到影響。然而,無(wú)規(guī)卷曲可以改變肽鏈的方向,這有利于α-螺旋和β-折疊持有相對(duì)剛性的連接結(jié)構(gòu)[26]。因此,DBD-CP處理酪蛋白粉末后可影響酪蛋白膜的結(jié)構(gòu)穩(wěn)定性。
差示掃描量熱法是研究蛋白質(zhì)穩(wěn)定性熱力學(xué)的主要工具。熱性能對(duì)食品包裝材料的生產(chǎn)和滅菌過(guò)程具有重要影響,不同處理?xiàng)l件的DSC結(jié)果如圖7所示。
圖7結(jié)果表明,所有薄膜均表現(xiàn)出2種~3種典型的吸熱過(guò)程。第1個(gè)峰是結(jié)晶峰,與樣品物質(zhì)的結(jié)晶度有關(guān)[27]。從第1個(gè)峰可以看出,與對(duì)照組相比,除30 V 60 s外所有組的峰值均有不同程度的降低,同時(shí)各處理組的結(jié)晶峰均有不同程度的加強(qiáng)。結(jié)合傅里葉紅外光譜的分析結(jié)果,可以推測(cè)出DBD-CP改變了酪蛋白的分子結(jié)構(gòu),破壞了分子間和分子內(nèi)氫鍵,改變了聚合物的連接狀態(tài),從而影響了膜的熱穩(wěn)定性。除處理?xiàng)l件在50 V 45 s的樣品外,其余處理時(shí)間變化組的第二個(gè)峰值(Tp值)高于對(duì)照組,在50 V 60 s的處理?xiàng)l件下達(dá)到最大值245.2℃。電壓變化組在40V60s和70V 60 s條件下的Tp值低于對(duì)照組,并且在等離子處理后酪蛋白分子結(jié)構(gòu)發(fā)生變化,破壞了相應(yīng)的變化結(jié)構(gòu)。這些相關(guān)現(xiàn)象的變化與掃描電鏡及紅外光譜結(jié)構(gòu)分析結(jié)果一致。DBD-CP處理可以通過(guò)改變酪蛋白分子間結(jié)構(gòu)以及分子在膜液體中的聚集和晶體結(jié)構(gòu)來(lái)改善酪蛋白膜的熱穩(wěn)定性。
商品在生產(chǎn)過(guò)程中,會(huì)受到壓力、沖擊、振動(dòng)等靜態(tài)和動(dòng)態(tài)因素的影響。因此包裝材料應(yīng)具有有效保護(hù)產(chǎn)品的特性,并具有一定的強(qiáng)度、韌性和彈性。DBDCP酪蛋白粉末制備成膜樣品的力學(xué)性能如圖8所示。
在酪蛋白膜的制備過(guò)程中加入甘油,有利于酪蛋白膜的形成,提高酪蛋白膜的力學(xué)性能。以往的許多研究表明,DBD-CP處理蛋白膜后,其拉伸強(qiáng)度和斷裂伸長(zhǎng)率得到了提高[28]。然而,從圖8中可以看出,DBDCP處理酪蛋白粉末制成的膜并沒(méi)有顯示出這種趨勢(shì)。處理時(shí)間變化組與對(duì)照組相比較具有顯著性差異(p<0.05)。隨著處理時(shí)間的延長(zhǎng),TS值逐漸減小,其中在50V 90 s時(shí)TS值最小。處理時(shí)間變化組在30 s和45 s、30 s和60 s之間差異無(wú)顯著性(p>0.05),TS值變化不大。圖8A中可以看出,DBD-CP無(wú)論在處理電壓變化組還是處理時(shí)間變化組中,機(jī)械強(qiáng)度均發(fā)生了顯著的降低(p<0.05);圖8B中可以清晰看出,EAB值也隨著電壓的升高而變化,與對(duì)照組相比,在50 V 60 s時(shí)EAB值最低,在處理?xiàng)l件為60 V 60 s的時(shí)候,EAB顯著高于對(duì)照組,結(jié)合紅外二級(jí)結(jié)構(gòu)分析得出DBD-CP處理后蛋白膜的TS值降低可能是由于經(jīng)過(guò)處理后的酪蛋白粉末的二級(jí)結(jié)構(gòu)發(fā)生了變化。α-螺旋多肽鏈的蛋白質(zhì)可以扭曲在一起以提高其機(jī)械強(qiáng)度和靈活性。無(wú)規(guī)則卷曲和α-螺旋結(jié)構(gòu)的減少也影響膜的力學(xué)性能。因此,可以得出:DBD-CP處理的酪蛋白粉末二級(jí)結(jié)構(gòu)中的α-螺旋和無(wú)規(guī)則卷曲被破壞,從而降低了酪蛋白膜的機(jī)械強(qiáng)度,但是增加了酪蛋白膜的極限拉伸率。
包裝材料的阻水性是決定食品保質(zhì)期的重要因素,水蒸氣透過(guò)率代表了薄膜阻止水分子從外部環(huán)境遷移到產(chǎn)品中的能力,然而有些膜材料卻需要具有一定的水蒸氣透過(guò)率(如:腸衣等),一定的水蒸氣透過(guò)率有助于降低薄膜在熱處理時(shí)因水蒸氣不能透過(guò)而引起的漲破。DBD-CP時(shí)間變化組和電壓變化組對(duì)薄膜水蒸氣透過(guò)率的影響如圖9所示。
水蒸氣透過(guò)率的大小主要受包裝材料的組成物質(zhì)及空間結(jié)構(gòu)的影響[29]。圖9顯示了DBD-CP時(shí)間變化組和電壓變化組對(duì)薄膜水蒸氣透過(guò)率的影響,總體趨勢(shì)是先上升后下降再上升。從圖中可以看出處理?xiàng)l件為40V60s的水蒸氣透過(guò)率顯著高于對(duì)照組(p<0.05),增加了127.4%。而50 V與60 V比較無(wú)顯著性差異(p>0.05)。同時(shí)等離子體處理時(shí)間延長(zhǎng)組也表現(xiàn)出整體上先上升后下降的趨勢(shì)。這可能是由于等離子體放電破壞了酪蛋白的結(jié)構(gòu),使其聚集且表面結(jié)構(gòu)也變疏松,從而減弱了水蒸氣的阻隔性能。
綜上所述,介質(zhì)阻擋放電低溫等離子體(dielectric barrier discharge-cold plasma,DBD-CP)處理改變了酪蛋白的結(jié)構(gòu),使酪蛋白粉末表面由光滑變得粗糙,同時(shí)結(jié)合傅里葉紅外變換光譜的結(jié)果與DSC結(jié)果可以發(fā)現(xiàn),DBD-CP處理還破壞了氫鍵,改變了聚合物的連接狀態(tài),使酪蛋白的穩(wěn)定性發(fā)生變化。通過(guò)與未處理的樣品相比,經(jīng)過(guò)DBD-CP處理的樣品由于結(jié)構(gòu)發(fā)生的改變從而促使酪蛋白膜的熱穩(wěn)定性得到了提高(在50 V 60 s的處理?xiàng)l件下Tp值可達(dá)245.2℃),并且在處理?xiàng)l件為40 V 60 s時(shí),樣品的水蒸氣透過(guò)率顯著高于未處理的樣品,這說(shuō)明DBD-CP處理有效地改變了酪蛋白膜的水蒸氣透過(guò)率。這為低溫等離子體改性膜原料的選擇提供了參考依據(jù)。