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        lncRNA 前列腺癌相關(guān)轉(zhuǎn)錄物6及miR-16在人腦膠質(zhì)瘤組織中的表達(dá)及其與預(yù)后的關(guān)系

        2022-11-15 02:23:26王鋼雷超溫大平
        臨床外科雜志 2022年10期
        關(guān)鍵詞:意義研究

        王鋼 雷超 溫大平

        膠質(zhì)瘤在原發(fā)性中樞神經(jīng)系統(tǒng)惡性腫瘤中占40%左右[1]。有證據(jù)表明,lncRNA在許多生物學(xué)過程中起著至關(guān)重要的作用,并導(dǎo)致腫瘤的發(fā)生發(fā)展,其異常表達(dá)已在多種人類癌癥中得到證實。前列腺癌相關(guān)轉(zhuǎn)錄物6(PCAT6)是一種與癌癥相關(guān)的lncRNA,在結(jié)直腸癌、肺癌和膀胱癌等多種腫瘤中存在失調(diào)[2-4]。PCAT6可通過多種機制發(fā)揮致癌功能,如作為競爭性內(nèi)源性RNA(ceRNA)與海綿狀miRNA結(jié)合并與蛋白質(zhì)結(jié)合以保持其穩(wěn)定。miR-16位于人類13號染色體上,已被發(fā)現(xiàn)在乳腺癌、前列腺癌、慢性粒細(xì)胞白血病病人中表達(dá)下調(diào)。Yang等[5]研究發(fā)現(xiàn),miR-16可通過抑制BCL2和NF-kB1/MMP9信號通路抑制膠質(zhì)瘤細(xì)胞生長和侵襲。本課題組在前期預(yù)實驗發(fā)現(xiàn)lncRNA PCAT6與miR-16之間存在結(jié)合位點,本研究旨在探討lncRNA PCAT6和miR-16在人腦膠質(zhì)瘤中的表達(dá)及意義。

        對象與方法

        一、對象

        2016年6月~2018年6月我院病理科凍存的94例膠質(zhì)瘤組織作為研究組,其中男性60例,女性34例;年齡28~74歲,平均年齡(56.49±11.37)歲;根據(jù)WHO分級,將其分為低級別膠質(zhì)瘤35例(I級15例,Ⅱ級20例),高級別膠質(zhì)瘤59例(Ⅲ級41例,Ⅳ級18例)。均為首次手術(shù),且在術(shù)前均未經(jīng)過放化療。同期顱腦損傷減壓術(shù)中切除的腦組織100例作為對照組,其中男性58例,女性42例;年齡26~75歲,平均年齡(57.38±10.92)歲。兩組受試者性別、年齡等比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義。

        二、方法

        1.實時熒光定量PCR(qRT-PCR):通過Trizol法提取各組受試者組織標(biāo)本的總RNA,并測定RNA的濃度和純度。通過PrimeScriptTM RT Master Mix反轉(zhuǎn)錄試劑盒(Takara,日本)進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄,反應(yīng)體系為:cDNA產(chǎn)物2 μl,2×SYBR? Premix Ex Taq TM II 8 μl,上下游引物各1 μl,50×ROX Reference Dye 0.4 μl,RNase-Free H2O 7.6 μl。反應(yīng)條件為: 95 ℃ 10 min;95 ℃ 10 s、62 ℃ 20 s、72 ℃ 10 s,共40個循環(huán)。lncRNA-PCAT6正向引物:5'-CCCCTC CTTACTCTT GGACAAC-3',lncRNA-PCAT6反向引物:5'-GACCGAATGAGGATGGAGACAC-3',miR-16正向引物:5'-TAGCAGCACGTAAATATTGGCG-3',miR-16反向引物:5'-GGCAAGATGCTGGCATAGCTG-3',U6正向引物:5'-CTTCAGCCGGCACAGCT-3',U6反向引物:5'-CGCTAATTTGCGTTCAAACG-3'。 lncRNA-PCAT6和miR-16的表達(dá)水平以2-△△CT表示。

        2.隨訪:本研究通過電話或門診對研究組病人進(jìn)行為期3年的術(shù)后隨訪,記錄病人的總生存率,隨訪截止時間為2021年6月,隨訪終點為病人死亡。術(shù)后第1年,每3個月1次隨訪,之后每6個月1次隨訪。

        三、統(tǒng)計學(xué)方法

        結(jié)果

        1.膠質(zhì)瘤組織中l(wèi)ncRNA-PCAT6和miR-16的相對表達(dá)量:研究組腫瘤組織中l(wèi)ncRNA-PCAT6的表達(dá)量為3.82±0.36,對照組為1.06±0.09,兩組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05,圖1A),研究組miR-16的表達(dá)量為0.45±0.03,對照組為1.12±0.09,兩組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05,圖1B);lncRNA-PCAT6在低級別和高級別腫瘤組織中的表達(dá)量分別為2.45±0.31、5.08±0.46,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)見圖1C。miR-16在低級別和高級別腫瘤組織中的表達(dá)量分別為0.68±0.08、0.31±0.04,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。見圖1D。

        A:膠質(zhì)瘤組織中l(wèi)ncRNA-PCAT6的表達(dá);B:膠質(zhì)瘤組織中miR-16的表達(dá);C:lncRNA-PCAT6在不同級別膠質(zhì)瘤組織中的表達(dá);D:miR-16在不同級別膠質(zhì)瘤組織中的表達(dá);aP<0.05

        2.膠質(zhì)瘤組織中l(wèi)ncRNA-PCAT6、miR-16表達(dá)水平與臨床病理特征的關(guān)系:本研究根據(jù)lncRNA-PCAT6(3.82±0.36)、miR-16(0.45±0.03)表達(dá)水平的平均均數(shù),將膠質(zhì)瘤病人分為高表達(dá)組和低表達(dá)組。結(jié)果發(fā)現(xiàn),不同lncRNA-PCAT6、miR-16表達(dá)水平病人性別、年齡、腫瘤直徑及位置等比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05);lncRNA-PCAT6高表達(dá)組高WHO分級的病人比例顯著高于lncRNA-PCAT6低表達(dá)組,而miR-16高表達(dá)組高WHO分級的病人比例顯著低于miR-16低表達(dá)組,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。見表1。

        表1 lncRNA-PCAT6、miR-16表達(dá)與病人臨床病理特征的關(guān)系(例,%)

        3.lncRNA-PCAT6、miR-16表達(dá)水平與膠質(zhì)瘤病人的生存分析:lncRNA-PCAT6高表達(dá)組生存20例,3年總生存率為39.22%;lncRNA-PCAT6低表達(dá)組生存30例,3年總生存率為69.77%(圖2A)。miR-16高表達(dá)組生存25例,3年總生存率為60.98%;miR-16低表達(dá)組生存16例,3年總生存率為30.19%(圖2B)。

        注:A:lncRNA-PCAT6;B:miR-16圖2 lncRNA-PCAT6、miR-16表達(dá)水平與膠質(zhì)瘤病人的生存分析

        4.影響病人預(yù)后的Cox回歸分析:對表1中具有統(tǒng)計學(xué)意義的指標(biāo)進(jìn)行Cox多因素回歸分析后發(fā)現(xiàn),高WHO分級、lncRNA-PCAT6高表達(dá)及miR-16低表達(dá)是影響病人預(yù)后的獨立危險因素(P<0.05)。見表2。

        表2 影響病人預(yù)后的Cox回歸分析

        討論

        膠質(zhì)瘤病人預(yù)后較差。電離輻射、手術(shù)和化療治療膠質(zhì)瘤取得了一些進(jìn)展,但膠質(zhì)瘤病人的5年生存率仍然較低。有研究表明,lncRNAs的異常表達(dá)與膠質(zhì)瘤的發(fā)生有關(guān)。據(jù)報道,lncRNA HOTAIR作為ceRNA通過吸附miR-126-5p促進(jìn)膠質(zhì)瘤進(jìn)展[6]。此外,lncRNA MALAT1可以通過miR-129/SOX2軸增強膠質(zhì)瘤干細(xì)胞的活力并促進(jìn)膠質(zhì)瘤的發(fā)生[7]。PCAT6是一種從人類染色體1q32轉(zhuǎn)錄而來的lncRNA,在許多癌癥中作為癌基因發(fā)揮作用。Wu等[2]研究表明,lncRNA-PCAT6調(diào)節(jié)結(jié)直腸癌細(xì)胞對5-氟尿嘧啶治療的耐藥性。Lv等[8]研究表明,lncRNA-PCAT6在人類宮頸癌中的表達(dá)顯著上調(diào),促進(jìn)宮頸癌細(xì)胞增殖、遷移和侵襲,并抑制凋亡。Shi等[9]研究證實,lncRNA-PCAT6在非小細(xì)胞肺癌中表達(dá)上調(diào)。本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn),lncRNA-PCAT6在膠質(zhì)瘤組織中的表達(dá)顯著上調(diào),且WHO分級越高,lncRNA-PCAT6表達(dá)水平越高;lncRNA-PCAT6高表達(dá)組中高WHO分級的病人比例顯著高于lncRNA-PCAT6低表達(dá)組。本研究還發(fā)現(xiàn),lncRNA-PCAT6高表達(dá)病人術(shù)后3年的生存率低于低表達(dá)病人。上述結(jié)果說明,lncRNA-PCAT6的表達(dá)水平可能與膠質(zhì)瘤的惡化相關(guān),其可能是膠質(zhì)瘤的潛在預(yù)后預(yù)測因子。

        有研究證明,LncRNAs可以通過靶向miRNAs來調(diào)節(jié)腫瘤的發(fā)生[10-11]。Xu等[12]研究發(fā)現(xiàn),lncRNA-PCAT6可通過與miR-30的內(nèi)源性競爭來加速胃癌的發(fā)生。Yan等[13]研究證明,lncRNA-PCAT6通過競爭性結(jié)合miR-330-5p促進(jìn)非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞的增殖、遷移和侵襲。我們在前期通過使用在線數(shù)據(jù)庫TargetScan(http:www.TargetScan.org/)進(jìn)行預(yù)測,發(fā)現(xiàn)lncRNA-PCAT6和miR-16之間存在可能的調(diào)控靶點(尚未發(fā)表)。miR-16已被發(fā)現(xiàn)在人腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞中表達(dá)下調(diào),且其可通過靶向Zyxin調(diào)控細(xì)胞的增殖、遷移和侵襲[14]。在本研究中,我們同樣發(fā)現(xiàn)miR-16在膠質(zhì)瘤組織中的表達(dá)下調(diào),且WHO分級越高的病人,miR-16表達(dá)水平越低;miR-16高表達(dá)組中高WHO分級的病人比例顯著低于miR-16低表達(dá)組;miR-16高表達(dá)病人術(shù)后3年的生存率高于低表達(dá)組。上述結(jié)果同樣說明,miR-16可能是膠質(zhì)瘤的潛在預(yù)后預(yù)測因子。

        我們通過多因素Cox回歸分析發(fā)現(xiàn),lncRNA PCAT6和miR-16是影響膠質(zhì)瘤病人預(yù)后的獨立危險因素,這一結(jié)果提示我們在臨床中需要加強對lncRNA PCAT6高表達(dá)和miR-16低表達(dá)病人的術(shù)后監(jiān)測,以提前預(yù)防疾病復(fù)發(fā)。但本研究樣本量較小,結(jié)果具有一定的局限性,后續(xù)還應(yīng)開展大樣本量的研究。

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