張迪，岳青陽，李尚穎，隋曉璠*（1.遼寧省檢驗(yàn)檢測認(rèn)證中心，沈陽 110036；2.遼寧省藥品檢驗(yàn)檢測院/國家藥品監(jiān)督管理局化學(xué)藥品質(zhì)量研究與評價重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，沈陽 110036）

鄰苯二甲酸酯類（PAEs）塑化劑是世界上應(yīng)用最廣泛的塑化劑。毒理學(xué)研究發(fā)現(xiàn)，PAEs 的急性毒性較小，但可以干擾人類和其他動物的內(nèi)分泌，具有雌激素活性，對人類具有生殖毒性、胚胎毒性和發(fā)育毒性等危害，長期低劑量接觸，其危害不容忽視[1-2]，歐盟、美國、中國已經(jīng)先后將PAEs 列入優(yōu)先控制污染物的黑名單[3-4]。

密封件一方面應(yīng)滿足包裝系統(tǒng)對密封性的要求，另一方面還應(yīng)與藥品具有良好的相容性，即不可引入存在安全性風(fēng)險的浸出物。生膠、橡膠顆粒、膠塞、聚丙烯塑料瓶和軟袋的生產(chǎn)過程中常添加塑化劑，從而帶來了塑化劑遷移入藥物的風(fēng)險，注射劑作為高風(fēng)險制劑，有必要控制塑化劑的遷入。對產(chǎn)品塑化劑的遷移量考察是注射劑與其包材相容的要求，也為選擇優(yōu)良的膠塞和包裝材料提供了參考。塑化劑現(xiàn)有的檢測方法主要有HPLC 法[5-6]、HPLC-MS 法[7]和GC-MS 法[8-9]。本試驗(yàn)采用GC-MS 法同時測定吡拉西坦氯化鈉注射液中21 種PAEs 的含量，為吡拉西坦氯化鈉注射液的包材相容性研究提供參考，也為其他注射劑的塑化劑遷移測定提供了一種通用的檢測方法。

1 材料

1.1 儀器

氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀（氣相色譜儀：日本島津公司GC2030，質(zhì)譜檢測器：日本島津公司TQ8050）。電子天平（XP205 美國METTLER TOLEDO 公司，精度：0.000 01 g）。

1.2 試藥

鄰苯二甲酸二甲酯（DMP，批號：G163559，純度：99.9%）、鄰苯二甲酸二乙酯（DEP，批號：G1006212，純度：100%）、鄰苯二甲酸二異丙酯（DIPRP，批號：G1020025，純度：100%）、鄰苯二甲酸二烯丙酯（DAP，批號：G165742，純度：98.3%）、鄰苯二甲酸二丙酯（DPRP，批號：G145205，純度：99.5%）、鄰苯二甲酸二異丁酯（DIBP，批號：G141696，純度：99.5%）、鄰苯二甲酸二丁酯（DBP，批號：G167183，純度：99.4%）、鄰苯二甲酸二（2-甲氧基）乙酯（DMEP，批號：G165429，純度：98%）、鄰苯二甲酸二異戊酯（DIPP，批號：G141698，純度：99.4%）、鄰苯二甲酸二（4-甲基-2-戊基）酯（BMPP， 批號：G146996， 純度：99.7%）、鄰苯二甲酸二（2-乙氧基）乙酯（DEEP，批號：G168054，純度：91.7%）、鄰苯二甲酸二戊酯（DPP， 批號：G159523， 純度：98.9%）、 鄰苯二甲酸二己酯（DHXP，批號：G141694，純度：97.9%）、鄰苯二甲酸丁基芐基酯（BBP，批號：G132280，純度：98.5%）、鄰苯二甲酸二（2-丁氧基）乙酯（DBEP，批號：G168879，純度：99.3%）、鄰苯二甲酸二環(huán)己酯（DCHP，批號：G141690，純度：98.7%）、鄰苯二甲酸二庚酯（DHP，批號：G166356，純度：99.2%）、鄰苯二甲酸二（2-乙基）乙酯（DEHP，批號：G142368，純度：99.3%）、鄰苯二甲酸二苯酯（DPHP，批號：G795655，純度：99.4%）、鄰苯二甲酸二正辛酯（DNOP，批號：G124932，純度：99.3%）、鄰苯二甲酸二壬酯（DNP，批號：G132274，純度：97.9%）（德國Dr.Ehrenstorfer 公司）。正己烷（色譜純，美國Fisher 公司）。氦氣（純度＞99.99%）

31 批吡拉西坦氯化鈉注射液，來自9 個生產(chǎn)企業(yè)，均為2021年國家藥品抽驗(yàn)計(jì)劃抽取的樣品。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件[8-9]

色譜柱為DB-5MS 毛細(xì)管柱（30 m×0.25 mm，0.25 μm）。柱溫為程序升溫：初始溫度為60 ℃，維持1 min 后，以20℃·min－1的速率升至220 ℃，維持1 min，再以5℃·min－1的速率升至250℃，維持1 min，再以20℃·min－1的速率升至290 ℃，維持20 min；進(jìn)樣口溫度為260℃；進(jìn)樣量為1 μL；載氣為氦氣，流速為1 mL·min－1；電離方式：電子轟擊源（EI）；離子源溫度：230 ℃；采集模式：MRM；離子源電壓0.99 kV；溶劑延遲：3 min。21 種PAEs 定性定量離子見表1。

表1 21 種PAEs 定性定量離子表Tab 1 Qualitative and quantitative ions in the 21 phthalic acid ester plasticizer

2.2 對照品儲備液的制備

取21種塑化劑對照品各約10 mg，精密稱定，置100 mL 量瓶中，用正己烷溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為混合對照品儲備液。

2.3 供試品溶液的制備

取本品100 mL，置分液漏斗中，精密加正己烷50 mL，振搖20 min 后，取正己烷層，40℃以下蒸干后，精密加正己烷2 mL 使溶解，搖勻，0.22 μm 濾膜濾過，即得。

2.4 系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

精密量取混合對照品儲備液適量，用正己烷稀釋至質(zhì)量濃度為200 ng·mL－1的溶液作為系統(tǒng)適用性溶液，以正己烷作為空白溶液，取系統(tǒng)適用性溶液、空白溶液供試品溶液，進(jìn)樣測定，記錄色譜圖，見圖1。結(jié)果表明，溶劑不干擾21種PAEs 的測定。

圖1 系統(tǒng)適用性溶液（A）、空白溶液（B）和供試品溶液（C）的混合離子色譜圖Fig 1 Mixed ion chromatogram of the reference substance（A），blank solution（B），and sample solution（C）

2.5 線性關(guān)系考察

精密量取混合對照品儲備液適量，用正己烷逐步稀釋至5、10、20、10、200、500、1000、2000 ng·mL－1，進(jìn)樣測定，各組分的線性方程、相關(guān)系數(shù)與線性范圍結(jié)果見表2。由表2 可知，各組分在相應(yīng)質(zhì)量濃度與峰面積線性關(guān)系良好。

2.6 檢測限和定量限

精密量取混合對照品儲備液，用正己烷逐步稀釋，進(jìn)樣測定，記錄色譜圖，當(dāng)信噪比（S/N）≈3 時，為其檢測限，當(dāng)S/N≈10 時，為其定量限，結(jié)果見表2。由表2 可知，各成分的檢測限均在1 ～20 ng·mL－1，定量限均在3 ～60 ng·mL－1。

表2 21 種PAEs 線性關(guān)系、檢測限和定量限Tab 2 Linear relationship，detection limit and quantitation limit of the 21 phthalic acid ester plasticizer

2.7 加樣回收試驗(yàn)

分別取21 種PAEs 對照品約10 mg，置100 mL 量瓶中，用甲醇溶解并稀釋至刻度，作為對照品儲備液，分別取對照品儲備液適量，精密加入吡拉西坦氯化鈉注射液100 mL，按“2.3”項(xiàng)下方法進(jìn)行處理，分別制得低、中、高質(zhì)量濃度（分別為200、500、800 ng·mL－1）的加樣回收率供試品溶液，進(jìn)樣測定，計(jì)算各濃度的回收率。結(jié)果表明，低、中、高質(zhì)量濃度的加樣回收率在90.4%～103.0%，RSD在1.5%～5.3%。

2.8 重復(fù)性

取本品，按“2.7”項(xiàng)下方法配制重復(fù)性試驗(yàn)樣品溶液（50 ng·mL－1），共6 份，進(jìn)樣測定，將測定結(jié)果代入標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算21 種PAEs 含量。結(jié)果表明，各成分重復(fù)性良好，RSD為2.9%～4.6%。

2.9 穩(wěn)定性

取重復(fù)性樣品溶液，分別在0、2、4、8、12 h 時進(jìn)樣測定。結(jié)果表明，以正己烷為溶劑，21種PAEs 在12 h 內(nèi)穩(wěn)定，各成分峰面積的RSD為3.6%～5.3%。

2.10 測定結(jié)果

取本品，按“2.3”項(xiàng)下方法進(jìn)行處理，進(jìn)樣測定。同時考察在40 ℃條件下倒置放置1 個月后樣品中21 種PAEs 的含量。結(jié)果表明，31 批吡拉西坦氯化鈉注射液中21 種PAEs 均小于檢測限，40 ℃條件下倒置放置1 個月后，21 種PAEs 均未檢出。

3 討論

根據(jù)化學(xué)藥品注射劑與塑料包裝材料相容性研究技術(shù)指導(dǎo)原則，21 種PAEs 均按每日注射最大日暴露量（PDE）1.5 μg·d－1計(jì)，對應(yīng)的分析評價閾值（AET）為1.5 μg·d－1。31 批樣品在40 ℃條件下倒置放置1 個月后，21 種PAEs 均未檢出。說明吡拉西坦氯化鈉注射液中的塑化劑無安全風(fēng)險。