王聯(lián)廣，周樹婭*，范 斌，伍湘竹，馬 鵬，石安憲

（1.昭通市綠色食品發(fā)展中心，云南昭通 657000；2.昭通市昭陽區(qū)農(nóng)業(yè)環(huán)境保護(hù)監(jiān)測(cè)站，云南昭通 657000）

能力驗(yàn)證是通過實(shí)驗(yàn)室間的比對(duì)，按照制定評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)評(píng)價(jià)實(shí)驗(yàn)室參加者的檢測(cè)能力[1-3]。定期開展檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室能力驗(yàn)證是計(jì)量認(rèn)證的特定要求[4]。每年國家農(nóng)業(yè)農(nóng)村部或云南省農(nóng)業(yè)廳都會(huì)對(duì)農(nóng)產(chǎn)品實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行能力驗(yàn)證，通過參加能力驗(yàn)證可了解自己的實(shí)驗(yàn)室所處的水平，有利于發(fā)現(xiàn)和解決問題，進(jìn)一步提高自身技術(shù)能力和管理水平。本文介紹了能力驗(yàn)證過程的一些經(jīng)驗(yàn)，如能力驗(yàn)證前期準(zhǔn)備、樣品領(lǐng)取、樣品前處理、多儀器相互驗(yàn)證、結(jié)果判定和數(shù)據(jù)報(bào)送等諸多方面的工作技巧。只有平時(shí)就具有過硬的檢測(cè)技術(shù)，才能更好地完成能力驗(yàn)證工作。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

花椰菜（含農(nóng)藥）能力驗(yàn)證樣品；4 μg·mL-1標(biāo)準(zhǔn)混合物質(zhì)（云南省農(nóng)業(yè)科學(xué)院質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)與檢測(cè)技術(shù)研究所）；甲胺磷等40種標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)[1 000 mg·L-1，農(nóng)業(yè)農(nóng)村部環(huán)境保護(hù)科研監(jiān)測(cè)所（天津）]；正己烷、丙酮[色譜純，賽默飛世爾科技（中國）科技有限公司]；氨基、弗羅里矽柱（1 g/6 mL，天津博納艾杰爾科技有限公司）；乙腈（分析純，國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司）；其他試劑均為分析純。

1.2 儀器與設(shè)備

安捷倫7890B氣相色譜儀配uECD/FPD檢測(cè)器（美國安捷倫公司）；旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)RE-2000B（上海亞榮生化儀器廠）；電子天平DT-500B（感量0.01 g，常熟市金羊砝碼儀器有限公司）；SK-1型快速混勻器（江蘇金壇環(huán)宇科學(xué)儀器廠）；勻漿機(jī)IKA T18（艾卡有限公司）；固相萃取裝QSE-240011、智能氮吹儀MFV-36（得泰儀器科技有限公司）。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法

1.3.1 樣品前處理

（1）提取。同時(shí)用100.0 mL乙腈多次沖洗驗(yàn)證樣品和自制質(zhì)控樣品的方式轉(zhuǎn)移塑料離心管的樣品于250 mL樣品瓶中，可使用玻璃棒或塑料小勺輔助轉(zhuǎn)移，高速勻漿2 min后用濾紙過濾，收集到裝有10～14 g氯化鈉的200 mL具塞量筒中，濾液約100 mL，蓋上蓋子劇烈振蕩1 min，在室溫條件下靜置30 min。待分層后，吸取10.0 mL提取試液于150 mL雞心瓶中，在40 ℃旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至近干；有機(jī)磷加入5 mL丙酮過膜入進(jìn)樣小瓶；有機(jī)氯加入2 mL正己烷，蓋上鋁箔待凈化。

（2）凈化。有機(jī)氯農(nóng)藥，將弗羅里矽柱依次用5.0 mL丙酮+正己烷（10+90）、5.0 mL正己烷預(yù)淋條件化，當(dāng)溶劑液面達(dá)到柱吸附層表面時(shí)，立即倒入樣品溶液，用15 mL刻度離心管接收洗脫液，用5 mL丙酮+正己烷（10+90）涮洗雞心瓶后淋洗弗羅里矽柱，并重復(fù)一次。在水浴溫度40 ℃條件下，氮吹蒸發(fā)至小于5 mL，用正己烷定容至5.0 mL，在旋渦混合器上混勻，分別移入2 mL自動(dòng)進(jìn)樣器樣瓶中，待測(cè)[5]。

1.3.2 色譜條件

色譜條件：FPD/ECDDB-5/17石英毛細(xì)管柱（30 m×0.32 mm×0.25 μm），載氣為氮?dú)猓?9.999%），恒流；流量3.0 mL·min-1。進(jìn)樣口溫度為220/300 ℃；FPD/ECD檢測(cè)器溫度為250/300 ℃；尾吹為氮?dú)?0 mL·min-1； 柱 溫： 初 溫 150 ℃ 保 持 2 min， 以8 ℃ ·min-1升至 260 ℃，保持 7.25 min；不分流進(jìn)樣 1.0 μL。

1.3.3 校準(zhǔn)溶液配制

使用相同的基質(zhì)空白溶劑，配制成和盲樣考核濃度相近的標(biāo)準(zhǔn)溶液，進(jìn)行單點(diǎn)校準(zhǔn)。

2 結(jié)果與分析

2.1 能力驗(yàn)證結(jié)果

本次能力驗(yàn)證結(jié)果如表1所示，RSD在1.1%～3.2%，符合云南省能力驗(yàn)證要求，可報(bào)送結(jié)果。

表1 能力驗(yàn)證樣品測(cè)定結(jié)果

2.2 質(zhì)控結(jié)果

本次能力驗(yàn)證質(zhì)控結(jié)果如表2所示，回收率72.0%～101.2%，RSD在1.1%～7.9%，符合云南省能力驗(yàn)證要求，可報(bào)送結(jié)果。

表2 能力驗(yàn)證質(zhì)量控制結(jié)果

3 討論與結(jié)論

3.1 能力驗(yàn)證關(guān)鍵點(diǎn)控制

3.1.1 準(zhǔn)備工作

標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)、試劑耗材、儀器調(diào)試、更換色譜柱并老化、換寸管等提前15 d完成；儀器調(diào)試完成后測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，記錄標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)出峰時(shí)間；加標(biāo)檢測(cè)平時(shí)回收率不理想的農(nóng)藥，記錄測(cè)定值的穩(wěn)定性；提前7 d配制新標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)、鉻酸清洗一批玻璃器皿，自校一批0.1 mL、0.2 mL、0.5 mL、1.0 mL、2.0 mL、5.0 mL和10.0 mL的刻度移液管，以及10 mL離心管和篩1～2個(gè)基質(zhì)干擾峰少的樣品；領(lǐng)取樣品時(shí)，模擬準(zhǔn)備一批50 g質(zhì)控樣品，添加0.2 μg·mL-1混合標(biāo)液農(nóng)藥，在和能力驗(yàn)證樣品相同的條件下儲(chǔ)存。

3.1.2 領(lǐng)樣

由于領(lǐng)樣路途遙遠(yuǎn)，農(nóng)藥殘留能力驗(yàn)證樣品領(lǐng)樣時(shí)，準(zhǔn)備的冰袋已完全融化，領(lǐng)完樣后可買冰棍使其降溫，以免能力驗(yàn)證樣品中的農(nóng)藥分解，樣品為1個(gè)空白，3個(gè)平行樣品各50 g；同時(shí)購買發(fā)放樣品單位的分組的混合標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)農(nóng)藥，濃度為4 μg·mL-1；在樣品領(lǐng)出，回實(shí)驗(yàn)室途中，同時(shí)把實(shí)驗(yàn)室制備的加標(biāo)和空白樣從冰柜拿出來解凍，等樣品到達(dá)實(shí)驗(yàn)室時(shí)，驗(yàn)證樣品和自制質(zhì)控樣品一起進(jìn)行前處理。

3.1.3 前處理注意事項(xiàng)

均質(zhì)器勻漿速度調(diào)到中等速度固定的值；旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀需要慢旋，經(jīng)常放空，千萬盯住不能旋干，保證雞心瓶濕潤；加足NaCl，振蕩搖勻時(shí)間要長，靜置時(shí)間盡量達(dá)到1 h，使其充分萃取，以免旋蒸時(shí)間長，農(nóng)藥殘留揮發(fā)過多，結(jié)果偏??；一定要使用移取量準(zhǔn)確的離心管、移液管、容量瓶配制液體，以減少系統(tǒng)誤差。

3.1.4 結(jié)果判斷

（1）定性。首先上機(jī)分析發(fā)樣單位的標(biāo)準(zhǔn)品，然后進(jìn)能力驗(yàn)證樣品空白對(duì)比出的峰有沒有干擾目標(biāo)峰，再進(jìn)能力驗(yàn)證（添加農(nóng)藥）樣品進(jìn)行定性，本次氣相色譜定性出目標(biāo)物質(zhì)為氧樂果、水胺硫磷、三唑磷、氯氰菊酯和腐霉利，如果有質(zhì)譜儀器，可與色譜儀器相互驗(yàn)證定性。

（2）定量。先半定量檢出農(nóng)藥的濃度范圍，再用空白基質(zhì)液配制相近的標(biāo)液濃度準(zhǔn)確定量，以減少基質(zhì)效應(yīng)、減少誤差；觀察3個(gè)能力驗(yàn)證結(jié)果的平行性，如果平行性好，證明前處理沒問題，如果質(zhì)控樣品回收率實(shí)驗(yàn)結(jié)果也好，證明結(jié)果在可控范圍內(nèi)，此時(shí)結(jié)果便可報(bào)送，否則要重新做樣。

3.1.5 數(shù)據(jù)報(bào)送技巧

結(jié)果分析首先看質(zhì)控回收率的情況，如果回收率偏低，就往高處微調(diào)結(jié)果，如果回收率偏高，就往低處微調(diào)結(jié)果。比如測(cè)定的結(jié)果為0.182 mg·kg-1，如果質(zhì)控回收率比較高的情況下，且實(shí)際值為0.15 mg·kg-1，此時(shí)的回收率為121.3%，結(jié)果為不合格，此時(shí)可往下微調(diào)測(cè)定值為0.180 mg·kg-1，回收率就達(dá)到120%；如果質(zhì)控回收率較低，且實(shí)際值為0.26 mg·kg-1，此時(shí)的回收率為69.2%，結(jié)果為不合格，此時(shí)可往上微調(diào)測(cè)定值為0.182 mg·kg-1，回收率就達(dá)到70%，總的原則在數(shù)據(jù)偏差不大的情況下，考慮到試驗(yàn)過程中會(huì)有各種影響因素，可對(duì)結(jié)果進(jìn)行微調(diào)。但若數(shù)值偏差較大，結(jié)果應(yīng)判定為不合格，不可上報(bào)虛假數(shù)據(jù)。

3.2 結(jié)論

能力驗(yàn)證是一項(xiàng)系統(tǒng)工作，需前期準(zhǔn)備、樣品領(lǐng)取、樣品前處理、多儀器相互驗(yàn)證、結(jié)果判定和數(shù)據(jù)報(bào)送技巧等諸多工作細(xì)節(jié)，本次能力驗(yàn)證有機(jī)磷、有機(jī)氯項(xiàng)目檢測(cè)出氧樂果0.119 mg·kg-1、水胺硫磷 0.072 0 mg·kg-1、三唑磷 0.120 mg·kg-1、腐霉利0.143 mg·kg-1和氯氰菊酯 0.142 mg·kg-1，質(zhì)控回收率在72.0%～101.2%，RSD在1.1～7.9，符合云南省能力驗(yàn)證結(jié)果要求，組織單位反饋結(jié)果全部為合格，通過總結(jié)關(guān)鍵技術(shù)點(diǎn)，更進(jìn)一步增強(qiáng)了能力驗(yàn)證檢測(cè)的信心。