顧曉風(fēng)，顧倩，于杰

（1.蘇州市藥品檢驗(yàn)檢測(cè)研究中心，江蘇蘇州 215104； 2.青島海洋科學(xué)與技術(shù)試點(diǎn)國家實(shí)驗(yàn)室，山東青島 266200）

乙基纖維素作為藥用輔料從2000 年版開始載入《中國藥典》，具有良好的成膜性和水不溶性，是制備藥物緩控釋制劑最重要的輔料之一[1-2]。藥用輔料是制劑的重要組成部分，同藥物活性成分一同全程參與體內(nèi)的吸收、分布、代謝、排泄過程，所以藥用輔料的安全性直接影藥物制劑的安全性[3-4]。由輔料引起的臨床不良反應(yīng)時(shí)有報(bào)道[5]，輔料對(duì)藥品安全性的影響越來越引起藥品監(jiān)管部門的重視。從2010 年版開始，《中國藥典》更是從定義上就特別強(qiáng)調(diào)了對(duì)輔料的安全性評(píng)估。

氯離子作為乙基纖維素的安全性指標(biāo)之一，《中國藥典》2020 年版[6]采用比濁法來評(píng)價(jià)其殘留控制水平，無法得到氯離子含量的具體數(shù)值。為得到準(zhǔn)確可靠的量化數(shù)據(jù)，以提高對(duì)乙基纖維素及藥物制劑的安全性控制，筆者參考文獻(xiàn)[7-9]，用離子色譜法測(cè)定藥用輔料乙基纖維素中氯離子含量，并根據(jù)JJF 1059.1—2012 《測(cè)量不確定度評(píng)定與表示》[10]和CNAS GL006—2019 《化學(xué)分析中不確定度的評(píng)估指南》[11]，結(jié)合文獻(xiàn)[12-15]對(duì)測(cè)定方法進(jìn)行測(cè)量不確定度評(píng)定，分析不確定度的來源及影響因素，并計(jì)算各分量的值，為實(shí)驗(yàn)過程的控制和檢測(cè)報(bào)告的評(píng)估提供科學(xué)的依據(jù)，有利于提高藥品的質(zhì)控水平和測(cè)定結(jié)果的準(zhǔn)確性。

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 主要儀器與試劑

離 子 色 譜 儀：DIONEX ICS-5000+ 型，包 括SP-DP 雙泵、DC 柱溫箱模塊、EG-5 淋洗液自動(dòng)發(fā)生器、AERS 500（4 mm）陰離子抑制器、DC-5 電導(dǎo)檢測(cè)器和AS-AP 自動(dòng)進(jìn)樣器，附帶Chromeleon 7色譜工作站，美國賽默飛世爾科技公司。

電子天平：XS205DU 型，感量為0.1 mg，瑞士梅特勒-托利多公司。

超純水儀：Milli-Q 型，密理博（中國）有限公司。

水中氯標(biāo)準(zhǔn)溶液：質(zhì)量濃度1 000 μg/mL，U=0.7%，編號(hào)為GBW(E) 080268，中國計(jì)量科學(xué)研究院。

乙基纖維素：批號(hào)為20140409，分析純，中國醫(yī)藥集團(tuán)有限公司。

實(shí)驗(yàn)用水為去離子水，由Milli-Q 型超純水儀制得。

1.2 色譜條件

色 譜 柱： Dionex IonPac AS19 柱（250 mm×4 mm，5 μm，美國賽默飛世爾科技公司）；保護(hù)柱：IonPac AG19 Guard 柱（50 mm×4 mm，5 μm，美國賽默飛世爾科技公司）；流動(dòng)相：10 mmol/L 氫氧化鉀溶液，等度洗脫，流量為1.0 mL/min；柱溫：30 ℃；進(jìn)樣體積：25 μL[16]。

1.3 氯離子對(duì)照品溶液制備

精密量取水中氯標(biāo)準(zhǔn)溶液1 mL，置于10 mL 容量瓶中，加水稀釋至標(biāo)線，搖勻；精密量取1 mL，置于100 mL 容量瓶中，加水稀釋至標(biāo)線，搖勻，即得質(zhì)量濃度為1.0 μg/mL 的氯離子對(duì)照品溶液。

1.4 樣品溶液的制備

取樣品約0.25 g，精密稱定，置于燒杯中，加水50 mL，加熱煮沸，放冷，轉(zhuǎn)移至250 mL 容量瓶中，燒杯用水洗滌3 次，洗滌液合并至同一容量瓶中，加水稀釋至標(biāo)線，搖勻，濾過，取續(xù)濾液作為樣品溶液。

1.5 實(shí)驗(yàn)方法與數(shù)學(xué)模型

取對(duì)照品溶液和樣品溶液，按照1.2 色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，以色譜峰面積按外標(biāo)法定量，乙基纖維素中氯離子的含量按照式(1)計(jì)算：

mx——樣品的質(zhì)量，g；

Ax——樣品中氯離子的色譜峰面積；

Vx——樣品溶液的稀釋倍數(shù)；

As——氯離子對(duì)照品溶液中氯離子的色譜峰面積；

Vs——氯離子對(duì)照品溶液的稀釋倍數(shù)；

1 000——單位轉(zhuǎn)換系數(shù)。

2 不確定度來源

根據(jù)實(shí)驗(yàn)過程和數(shù)學(xué)模型，乙基纖維素中氯離子含量測(cè)定的不確定度來源包括：

（1）水中氯離子標(biāo)準(zhǔn)溶液引入的不確定度；

（2）氯離子對(duì)照品溶液的配制過程引入的不確定度；

（3）樣品的稱量及樣品溶液的配制過程引入的不確定度；

（4）離子色譜儀引入的不確定度；

（5）重復(fù)測(cè)定引入的不確定度。

3 不確定度評(píng)定

3.1 水中氯標(biāo)準(zhǔn)溶液引入的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度

水中氯標(biāo)準(zhǔn)溶液引入的不確定度為B 類測(cè)量不確定度。經(jīng)查閱證書，水中氯標(biāo)準(zhǔn)溶液的質(zhì)量濃度ρ為1 000 μg/mL，相對(duì)擴(kuò)展不確定度為U=0.7%，k=2。則由標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)引入的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度：

3.2 氯離子對(duì)照品溶液稀釋引入的不確定度

其相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度：

以此類推，10 mL 容量瓶允差為±0.020 mL，產(chǎn)生的標(biāo)準(zhǔn)不確定度為u(V10) = 0.013 04 mL，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度為urel(V10) = 0.001 304；1 mL 移液管的允差為±0.007 mL，標(biāo)準(zhǔn)不確定度為u(V1) = 0.004 087 mL，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度為urel(V1) = 0.004 087。

綜上所述，由對(duì)照品溶液稀釋引入的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度：

3.3 樣品稱量引入的不確定度

移取樣品質(zhì)量為250 mg，采用差減法稱量，需稱量2 次，因此由樣品的稱量引入的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度：

3.4 樣品提取引入的不確定度

3.5 樣品稀釋引入的不確定度

樣品稀釋步驟操作簡(jiǎn)單，僅使用250 mL 容量瓶1 次，其允差為±0.15 mL，參照3.2 項(xiàng)下對(duì)照品溶液稀釋的不確定度計(jì)算，由樣品稀釋引入的標(biāo)準(zhǔn)不確定度為u(V250) = 0.174 6 mL，則樣品溶液稀釋引入的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度：

3.6 離子色譜儀引入的不確定度

校正因子的測(cè)定主要受離子色譜儀穩(wěn)定性影響，包括離子色譜儀自動(dòng)進(jìn)樣器取樣的體積、抑制器的穩(wěn)定性、泵的穩(wěn)定性、待測(cè)組分的保留程度等。由于對(duì)照品溶液與樣品溶液在相同條件下測(cè)定，對(duì)于以上因素的影響，可以采用進(jìn)樣精密度來評(píng)定?？疾靸x器的進(jìn)樣精密度，取對(duì)照品溶液連續(xù)進(jìn)樣6 次，得到氯離子峰面積分別為0.300 0、0.299 5、0.300 0、0.301 4、0.299 5、0.299 7，計(jì)算平均值為0.300 0，標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.000 714，則由離子色譜儀引入的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度：

3.7 樣品重復(fù)測(cè)定引入的不確定度

3.8 合成相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度及擴(kuò)展不確定度

各分量的不確定度來源彼此獨(dú)立不相關(guān)，其來源及量值匯總見表1。

表1 各不確定度分量的來源及量值

根據(jù)表1 數(shù)據(jù)進(jìn)行計(jì)算，采用離子色譜法測(cè)定乙基纖維素中氯離子含量的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度為urel=0.017 4，因此合成標(biāo)準(zhǔn)不確定度：

u= 0.017 4×0.026 8% = 0.000 466%

測(cè)量結(jié)果符合正態(tài)分布，包含概率為95%時(shí)，取擴(kuò)展因子k=2，則擴(kuò)展不確定度：

3.9 測(cè)定結(jié)果表示

參照J(rèn)JF 1059.1—2012 《測(cè)量不確定度評(píng)定與表示》[10]相關(guān)規(guī)定，離子色譜法測(cè)定乙基纖維素中氯離子含量：

4 結(jié)語

離子色譜法測(cè)定乙基纖維素中氯離子含量的不確定度主要來源于氯離子的提取、對(duì)照品稀釋和樣品重復(fù)測(cè)定。其中，提取和稀釋均源于實(shí)驗(yàn)方法設(shè)計(jì)，故選擇更優(yōu)化的方法，可以提高測(cè)定結(jié)果的準(zhǔn)確度，而不確定度的大小，也反過來說明方法設(shè)計(jì)的合理性。其次，針對(duì)重復(fù)測(cè)定引起不確定度，應(yīng)在實(shí)驗(yàn)中規(guī)范操作，嚴(yán)格控制，盡量減小人員帶來的隨機(jī)誤差。