■劉 東 郭騰飛 贠 彪 解綬啟 錢雪橋*

（1.廣東海大集團(tuán)股份有限公司水產(chǎn)研究中心，廣東廣州 511400；2.農(nóng)業(yè)農(nóng)村部微生態(tài)資源養(yǎng)殖利用重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，廣東廣州 511400）

中華絨螯蟹（Eriocheir sinensis）俗稱河蟹，是我國重要的水產(chǎn)養(yǎng)殖蟹類之一。其養(yǎng)殖區(qū)域主要分布在長江中下游地區(qū)，例如江蘇、安徽等。2020 年我國中華絨螯蟹養(yǎng)殖總產(chǎn)量約80 萬噸[1]。飼料質(zhì)量直接影響中華絨螯蟹的生長性能，是決定中華絨螯蟹養(yǎng)殖效益的重要因素之一[2]。近年來，我國中華絨螯蟹養(yǎng)殖主要投喂冰鮮魚、螺螄、玉米、小麥、黃豆及餅粕等傳統(tǒng)飼料[3]。隨著中華絨螯蟹養(yǎng)殖觀念轉(zhuǎn)變和養(yǎng)殖技術(shù)水平的不斷提高，已逐漸發(fā)展為以配合飼料為主的養(yǎng)殖模式，但中華絨螯蟹生殖蛻殼后，仍有很多養(yǎng)殖戶大量投喂冰鮮魚和螺螄，期望促進(jìn)中華絨螯蟹性腺的快速發(fā)育。大量使用冰鮮魚，不僅不利于我國漁業(yè)資源的可持續(xù)發(fā)展，而且冰鮮魚轉(zhuǎn)化效率較低，對水域污染嚴(yán)重，使水質(zhì)富營養(yǎng)化，且冰鮮魚自身帶有一定量的病原體；同時，冰鮮魚營養(yǎng)不平衡，不易貯存，在高溫季節(jié)極易導(dǎo)致脂肪酸敗變質(zhì)。中華絨螯蟹攝食后易引發(fā)疾病、養(yǎng)殖成活率降低等[3-4]。開發(fā)優(yōu)質(zhì)配合飼料來替代冰鮮魚進(jìn)行中華絨螯蟹后期育肥尤為重要。

肝胰腺、肌肉和性腺是中華絨螯蟹重要的食用部位，性腺發(fā)育的質(zhì)量是評價中華絨螯蟹經(jīng)濟(jì)價值和營養(yǎng)價值的重要參考指標(biāo)[5]。中華絨螯蟹生殖蛻殼之后，肝胰腺和肌肉中的營養(yǎng)物質(zhì)迅速向性腺轉(zhuǎn)移，性腺快速發(fā)育，在這一階段飼料的營養(yǎng)均衡是中華絨螯蟹快速育肥的關(guān)鍵因素之一[6-7]。近年來，有關(guān)中華絨螯蟹育肥階段的營養(yǎng)需求參數(shù)已有報道。研究表明投喂40%粗蛋白的飼料，中華絨螯蟹性腺發(fā)育明顯優(yōu)于分別投喂25%和35%粗蛋白的飼料[8]，投喂15%脂肪的飼料，中華絨螯蟹性腺發(fā)育明顯好于投喂6%脂肪的飼料[9]。此外，也有研究表明，配合飼料能夠替代冰鮮魚促進(jìn)中華絨螯蟹性腺發(fā)育[10-11]。然而上述試驗(yàn)的養(yǎng)殖周期較長（60～65 d），遠(yuǎn)遠(yuǎn)滿足不了中秋節(jié)、國慶節(jié)前后上市的需求（育肥時間35～40 d），走訪江蘇興化中華絨螯蟹養(yǎng)殖市場發(fā)現(xiàn)，配合飼料育肥的速度和質(zhì)量明顯不如冰鮮魚，為此開展配合飼料替代冰鮮魚進(jìn)行中華絨螯蟹育肥研究意義重大。

本研究設(shè)計不同蛋脂比飼料對生殖蛻殼后的中華絨螯蟹進(jìn)行育肥試驗(yàn)，比較其對中華絨螯蟹生長、肝胰腺指數(shù)和性腺發(fā)育等的影響，以期為開發(fā)中華絨螯蟹育肥階段冰鮮魚替代配合飼料提供參考數(shù)據(jù)。

1 材料與方法

1.1 配方設(shè)計與試驗(yàn)料制作

試驗(yàn)共設(shè)3個粗蛋白質(zhì)水平，分別為40%、45%和50%，兩個脂肪水平分別為7%和10%，蛋脂比分別為5.71、6.23、7.14、4.00、4.50、5.00。以魚粉和蝦粉用作飼料蛋白源，魚油和大豆卵磷脂用作飼料脂肪源，6種飼料配方和近似組成列于表1 中（飼料組成及營養(yǎng)水平見表1），分別命名為：diet 1、diet 2、diet 3、diet 4、diet 5 組和diet 6 組。飼料原料經(jīng)超微粉碎機(jī)粉碎后過80目篩，之后按照飼料組成稱取各種飼料原料，采取逐級擴(kuò)大法混合均勻，再加入油脂揉搓混合均勻，最后將以上原料充分調(diào)質(zhì)后用雙螺桿擠條機(jī)制成膨化沉性飼料并烘干保存。

表1 試驗(yàn)飼料組成及營養(yǎng)水平

1.2 飼養(yǎng)管理

養(yǎng)殖試驗(yàn)在廣東海大集團(tuán)試驗(yàn)基地進(jìn)行，試驗(yàn)用蟹為2019 年8 月初購自江蘇樂水農(nóng)業(yè)（蘇州）科技有限公司池塘養(yǎng)殖中華絨螯蟹（4 殼），經(jīng)過暫養(yǎng)后均為生殖蛻殼后雌蟹。從中選取規(guī)格整齊、體無外傷、肢體健全的雌蟹800只運(yùn)輸?shù)交?，并從中選600只為試驗(yàn)蟹。試驗(yàn)分為6組，每組設(shè)計5個重復(fù)，每個重復(fù)均20只蟹[平均初始體質(zhì)量（112.01±9.23）g]。試驗(yàn)用蟹均養(yǎng)殖于池塘網(wǎng)箱（長×寬×高=5 m×4 m×1.8 m）中。試驗(yàn)期間水深為1.6 m，24 h增氧。正式養(yǎng)殖試驗(yàn)時間為2019年8月25日，養(yǎng)殖周期為6 周。養(yǎng)殖試驗(yàn)期間每日18：00左右投喂，投喂量為蟹體重的5%～8%，試驗(yàn)期間水體pH 為7.0～8.5，溶解氧＞5.0 mg/L，氨氮＜0.5 mg/L，亞硝酸鹽＜0.15 mg/L。

1.3 樣品采集

采樣前停止投餌1 d，每個重復(fù)組隨機(jī)采樣6 只中華絨螯蟹。吸水紙擦干蟹體表水分后用電子天平稱體重、性腺和肝胰腺重量（精確度0.01 g），用游標(biāo)卡尺（精確度0.02 mm）測量殼長、殼寬。準(zhǔn)確稱重后分別計算肝胰腺指數(shù)（hepatosomatic index, HSI）和性腺指數(shù)（gonadosomatic index, GSI）。稱其體質(zhì)量并取出肝胰腺和性腺，放于-80 °C冰箱保存，用于后續(xù)試驗(yàn)。

1.4 常規(guī)營養(yǎng)、氨基酸和脂肪酸組成

將膨化飼料樣品粉碎后分別稱取1～2 g，105 ℃烘干，測定水分含量。采用凍干機(jī)將中華絨螯蟹的性腺和肝胰腺冷凍后去除水分，進(jìn)行其他生化指標(biāo)的測定：按AOAC（1995）的標(biāo)準(zhǔn)方法測定蛋白質(zhì)（凱氏定氮法）；用氯仿-甲醇（體積比為2∶1）提取總脂并測定其含量。每種樣品均重復(fù)測定3 次。氨基酸和脂肪酸含量的檢測參考姬慧等[12]。

1.5 指標(biāo)計算和數(shù)據(jù)處理

增重率（WGR，%）=（W初-W末）/W初×100

存活率（SR，%）=N末/N初×100

肝胰腺指數(shù)（HSI，%）=Wh/W×100

性腺指數(shù)（GSI，%）=Wg/W×100

肥滿度（CF，g/cm3）=W/L3×100

式中：W初——中華絨螯蟹初始體質(zhì)量（g）；

W末——中華絨螯蟹終末體質(zhì)量（g）；

N末——中華絨螯蟹終末個數(shù)；

N初——中華絨螯蟹初始個數(shù)；

Wh——中華絨螯蟹肝胰腺質(zhì)量（g）；

Wg——中華絨螯蟹性腺質(zhì)量（g）；

W——中華絨螯蟹體質(zhì)量（g）；

L——體長（cm）。

應(yīng)用SPSS 24.0軟件對試驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行方差齊性檢驗(yàn)，采用單因素方差（one-way ANOVA）分析冰鮮魚組和各飼料組的差異性，數(shù)據(jù)以“平均值±標(biāo)準(zhǔn)差(mean±SD)”的形式表示，P＜0.05為差異顯著。

2 結(jié)果與分析

2.1 配合飼料和冰鮮魚投喂對中華絨螯蟹生長性能和體組成的影響（見表2）

由表2可知，養(yǎng)殖試驗(yàn)6周后，各配合飼料組的中華絨螯蟹成活率約為90%，均顯著高于冰鮮魚組（P＜0.05），各配合飼料組之間的中華絨螯蟹成活率無顯著性差異（P＞0.05）。Diet 5組的中華絨螯蟹增重率顯著高于其他組（P＜0.05）。中華絨螯蟹的肝胰腺和性腺中水分和粗蛋白在各配合飼料組與冰鮮魚組之間差異不顯著（P＞0.05），diet 5 組的中華絨螯蟹肝胰腺中總脂肪含量顯著低于各配合飼料組和冰鮮魚組（P＜0.05），而性腺中的總脂肪含量則顯著高于各配合飼料組和冰鮮魚組（P＜0.05）。

表2 配合飼料和冰鮮魚投喂對中華絨螯蟹生長性能和體組成的影響（%）

2.2 配合飼料和冰鮮魚投喂對中華絨螯蟹肥滿度、肝胰腺指數(shù)和性腺指數(shù)的影響（見表3）

表3 配合飼料和冰鮮魚投喂對中華絨螯蟹肥滿度、肝胰腺指數(shù)和性腺指數(shù)的影響

由表3可知，配合飼料組和冰鮮魚組的中華絨螯蟹的肥滿度無顯著性差異（P＞0.05），各配合飼料組之間也無顯著性差異（P＞0.05）。冰鮮魚組的中華絨螯蟹肝胰腺指數(shù)與diet 1組、diet 2組、diet 3組、diet 4組、diet 6組差異不顯著（P＞0.05），其中diet 5組肝腺腺指數(shù)最低，顯著低于冰鮮魚組和diet 6組（P＜0.05）。各配合飼料組的中華絨螯蟹性腺指數(shù)均高于冰鮮魚組，其中diet 5組的顯著高于冰鮮魚組、diet 1組、diet 4組、diet 6組（P＜0.05）。

2.3 配合飼料和冰鮮魚投喂對中華絨螯蟹肝胰腺氨基酸含量的影響（見表4）

表4 配合飼料和冰鮮魚投喂對中華絨螯蟹肝胰腺氨基酸含量的影響（%）

由表4可知，冰鮮魚組的中華絨螯蟹肝胰腺總必需氨基酸、呈味氨基酸總量與各配合飼料組差異不顯著（P＞0.05），且各配合飼料組之間差異也不顯著。diet 5組的中華絨螯蟹肝胰腺氨基酸總和顯著高于其他組。從單個氨基酸來看，絕大多數(shù)氨基酸含量均是冰魚組與配合飼料組無顯著性差異（P＞0.05），diet 5組的中華絨螯蟹肝胰腺中賴氨酸、精氨酸和蛋氨酸均顯著高于其他組（P＜0.05）。

2.4 配合飼料和冰鮮魚投喂對中華絨螯蟹性腺脂肪酸含量的影響（見表5）

表5 配合飼料和冰鮮魚投喂對中華絨螯蟹性腺脂肪酸含量的影響（%）

如表5所示，冰鮮魚組與配合飼料組的中華絨螯蟹性腺飽和脂肪酸總量之間無顯著性差異（P＞0.05）。diet 5 組的中華絨螯蟹性腺中多不飽和脂肪酸總量顯著高于其他組（P＜0.05），單不飽和脂肪酸總量數(shù)值最高。在單不飽和脂肪酸中油酸、多不飽和脂肪酸中花生四烯酸（ARA）、二十碳五烯酸（DHA）和二十二碳六烯酸（EPA）等脂肪酸含量在各組中存在差異，其中diet 5組的顯著高于其他組（P＜0.05）。

3 討論

3.1 配合飼料和冰鮮魚投喂對中華絨螯蟹生長性能及體組成的影響

飼料是水產(chǎn)養(yǎng)殖動物生長、發(fā)育所需的物質(zhì)和能量的重要來源，飼料的質(zhì)量和營養(yǎng)直接影響著中華絨螯蟹的生長、發(fā)育及存活[13]。本研究表明，配合飼料和冰鮮魚投喂對中華絨螯蟹育肥階段的增重率有明顯差異，這與他人研究的配合飼料和冰鮮魚對中華絨螯蟹育肥階段的增重率影響不顯著的結(jié)果不同[13]，這可能與基礎(chǔ)配方中營養(yǎng)物質(zhì)含量的差異有關(guān)。本研究發(fā)現(xiàn)在配合飼料組的中華絨螯蟹成活率顯著高于冰鮮魚組，這與中華絨螯蟹[4]、三疣梭子蟹（Portunus trituberculatus）[14]的研究結(jié)果一致，可能是配合飼料預(yù)混料中添加了復(fù)合維生素和少量微量元素，提升了中華絨螯蟹免疫抗應(yīng)激的能力，且配合飼料經(jīng)過高溫不含有病菌。海捕的冰鮮魚腐敗后通常含有生物胺或攜帶病菌和有毒重金屬[15]，以及相比冰鮮魚的營養(yǎng)，配合飼料的營養(yǎng)更加平衡[10-11]。

近年來，越來越多的研究表明甲殼類動物不同生長階段的營養(yǎng)需求有所不同，通常成體階段的蛋白質(zhì)需求低于幼體和稚體階段，而脂肪需求卻高于這兩個階段[5]。研究表明，在幼體生長階段，與粗蛋白含量35%的飼料組比較，粗蛋白含量為38%的配合飼料對中華絨螯蟹的殼長、體重及肥滿度等生長性能指標(biāo)的促進(jìn)作用效果最佳[16]，6～10 g的中華絨螯蟹最適宜蛋白質(zhì)水平為36%～50%[17]，脂肪水平為6%～9%，中華絨螯蟹表現(xiàn)出最適宜的生長性能[18]。本研究發(fā)現(xiàn)，各處理組的中華絨螯蟹，其生長性能在粗蛋白45%、脂肪10%，蛋脂比4.50的配合飼料投喂下表現(xiàn)最好。已有研究表明，后期適當(dāng)提高飼料中蛋白質(zhì)含量，可以促進(jìn)卵黃物質(zhì)的合成和積累[8]。而本研究中中華絨螯蟹體組成總脂肪含量提升可能與增重率的提升有關(guān)系。在中華絨螯蟹1～4殼階段，營養(yǎng)的需求是為了滿足快速生長的需求，而5殼（生殖蛻殼）之后的營養(yǎng)需求是為了滿足生殖發(fā)育的需求，因此本研究在生長性能方面的蛋白質(zhì)和脂肪需求要高于前期，除此之外，中華絨螯蟹在不同生長期對飼料中總脂肪的要求不同[18]，由于基礎(chǔ)配方總能的差異，導(dǎo)致試驗(yàn)結(jié)果的差異。

研究表明，中華絨螯蟹肝胰腺和性腺中水分、粗蛋白、總脂等生化組成會受到餌料變化的影響[19]。本試驗(yàn)中diet 5 組的中華絨螯蟹肝胰腺、性腺總脂肪含量冰鮮魚組和其他配合飼料組差異顯著，分析原因是diet 5 組脂肪酸含量均衡，更有利于中華絨螯蟹體脂的吸收和沉積。這與對顆粒新厚蟹（Chasmagnathusgranulata）[20]及布朗蟹（Cancer pagurus）[21]的研究結(jié)論類似。水分和粗蛋白含量與闕有清等[19]的研究結(jié)果的相反，可能與基礎(chǔ)配方和養(yǎng)殖周期有關(guān)。

3.2 配合飼料和冰鮮魚投喂對中華絨螯蟹肥滿度及性腺發(fā)育的影響

中華絨螯蟹的卵巢發(fā)育過程非常復(fù)雜，其受到多種環(huán)境因子（例如溫度、鹽度、光照周期和飼料等多種因素）的綜合調(diào)控[22-23]。生殖蛻殼后的中華絨螯蟹卵巢快速發(fā)育，一般認(rèn)為此時是中華絨螯蟹卵巢發(fā)育的起點(diǎn)[5]。卵巢發(fā)育進(jìn)入快速階段，卵母細(xì)胞由內(nèi)源性卵黃合成期卵母細(xì)胞發(fā)育為近成熟期卵母細(xì)胞，且卵巢指數(shù)急劇增加。肌肉和肝胰腺需要積累大量的營養(yǎng)物質(zhì)，為剛剛脫殼后的中華絨螯蟹提供卵巢發(fā)育所必需的營養(yǎng)物質(zhì)[24]。因此飼料營養(yǎng)和質(zhì)量決定著中華絨螯蟹的品質(zhì)，成蟹的品質(zhì)不僅影響其市場需求和市場的價格，而且還影響其可食部分產(chǎn)量和營養(yǎng)價值，而成蟹品質(zhì)的好壞則由成蟹的發(fā)育度和肥滿度決定，而其肝胰腺和性腺的發(fā)育度則決定著整體的肥滿度[25]。

本研究表明，在該養(yǎng)殖條件下，在diet 5 組（蛋白45%、脂肪10%，蛋脂比為4.50）中母蟹的性腺指數(shù)最高，肝胰腺指數(shù)較低，這表明，diet 5組飼料的投喂對中華絨螯蟹HSI向GSI轉(zhuǎn)化要優(yōu)于冰鮮魚，這可能與飼料中蛋白質(zhì)含量和脂肪源及含量有關(guān)，適宜的蛋白質(zhì)（蛋白45%）水平能夠促進(jìn)營養(yǎng)物質(zhì)的積累，促進(jìn)中華絨螯蟹性腺發(fā)育。diet 5組（脂肪10%）含有魚油，相關(guān)的研究表明魚油能夠促進(jìn)中華絨螯蟹性腺發(fā)育[26]，而性腺發(fā)育的營養(yǎng)物質(zhì)主要來源于肝胰腺和肌肉組織[24]。冰鮮魚蛋白質(zhì)、脂肪含量較高，而從生長性能以及性腺指數(shù)來看，diet 5組的蛋白質(zhì)和脂肪含量最適宜中華絨螯蟹育肥期。江洪波[8]的研究表明，適當(dāng)提高蛋白質(zhì)和脂肪含量能夠提高卵黃物質(zhì)的積累，促進(jìn)中華絨螯蟹育肥。冰鮮魚與飼料組肥滿度差異不大，這與其他研究結(jié)果一致，可能與中華絨螯蟹的生長階段和水體養(yǎng)殖環(huán)境有關(guān)系。

3.3 配合飼料和冰鮮魚投喂對中華絨螯蟹性腺游離氨基酸的影響

水產(chǎn)動物的體成分和生化組成與飼料的營養(yǎng)成分息息相關(guān)。其中，氨基酸組成一定程度上反映了水產(chǎn)動物對飼料中蛋白質(zhì)的利用程度[27]。研究表明，在中華絨螯蟹中攝食冰鮮魚，機(jī)體肌肉組織中總氨基酸氨、必需氨基酸總量和總呈味氨基酸總量配合飼料組顯著小于冰鮮魚組[10]。本試驗(yàn)結(jié)果表明，攝食diet 5組，在中華絨螯蟹肝胰腺組織中總氨基酸含量顯著高于冰鮮魚組，與在中華絨螯蟹肌肉組中的研究結(jié)果[28]不同，這可能是配合飼料中氨基酸的組成更符合中華絨螯蟹的需要，比冰鮮魚更為平衡，從而增加了中華絨螯蟹對氨基酸的利用率和沉積率，從而為中華絨螯蟹的肝胰腺營養(yǎng)物質(zhì)的向性腺方向轉(zhuǎn)移奠定物質(zhì)基礎(chǔ)，進(jìn)而更好地維持中華絨螯蟹的營養(yǎng)品質(zhì)。

在各配合飼料組中，diet 5 組的中華絨螯蟹肝胰腺中蛋氨酸、賴氨酸和精氨酸含量顯著高于各配合飼料組和冰鮮魚組，育肥階段提高中華絨螯蟹配合飼料中精氨酸的含量能夠顯著提高性腺發(fā)育[29]。精氨酸的含量越高，水產(chǎn)動物的生長速度越快[30]，這與本研究的增重率結(jié)果相吻合，分析可能是配合飼料中精氨酸含量豐富，促進(jìn)了試驗(yàn)組中華絨螯蟹的生長性能。研究表明，適當(dāng)提高蛋氨酸和賴氨酸對于中華絨螯蟹性腺發(fā)育和增重具有促進(jìn)作用[31]。

中華絨螯蟹的營養(yǎng)價值和商業(yè)價值主要取決于其可食部位的營養(yǎng)成分、品質(zhì)和含量，而其風(fēng)味主要與氨基酸和脂肪酸的含量有關(guān)，而影響其風(fēng)味和營養(yǎng)最直接的則是飼料的質(zhì)量[27，32]。本研究中華絨螯蟹肝胰腺中總必需氨基酸、總呈味氨基酸在冰鮮魚與各飼料組中無顯著性差異。這與其他研究結(jié)果[10-11]不一致，可能與配合飼料基礎(chǔ)配方中蛋白源相關(guān)。在各處理組中以diet 5組的中華絨螯蟹肝胰腺總氨基酸含量最高，這進(jìn)一步說明在中華絨螯蟹育肥階段，適宜的蛋白質(zhì)水平和較高的脂肪水平能夠加快氨基酸的積累。

3.4 配合飼料和冰鮮魚投喂對中華絨螯蟹性腺脂肪酸含量的影響

蟹類機(jī)體脂肪酸組成含量與飼料脂肪酸含量具有直接的相關(guān)性[33-34]。配合飼料和冰鮮魚對中華絨螯蟹肝胰腺和性腺的發(fā)育影響較大[18]，這與本研究配合飼料和冰鮮魚投喂對總飽和脂肪酸、總單不飽和脂肪酸、總多不飽和脂肪酸和總高度不飽和脂肪酸含量在飼料組和冰鮮魚組的研究結(jié)果一致，這可能是由于中華絨螯蟹性腺和肝胰腺中的脂肪酸周轉(zhuǎn)代謝較快[35]，在性腺發(fā)育階段能夠快速從肝胰腺組織向性腺組織轉(zhuǎn)移。

研究發(fā)現(xiàn)，油酸含量與口味之間存在著較高的正相關(guān)性[36]，本研究表明各飼料組中diet 5 組中油酸（C18∶1n-9）含量要顯著高于其他配合飼料組和冰鮮魚組，這可能是該處理組相對其他處理組具有更好的脂肪源，促進(jìn)了兩種脂肪酸的積累。而冰鮮魚由于來源和儲存不穩(wěn)定，在育肥階段高溫情況下油脂極易變質(zhì)。配合飼料diet 5組在ARA、DHA以及EPA上顯著高于其他組，這可能是由于配合飼料具有更加均衡的營養(yǎng)配方，利于這兩種脂肪酸的吸收與積累。研究證實(shí)，適宜的多不飽和脂肪酸能夠顯著促進(jìn)中華絨螯蟹性腺的發(fā)育[37]。

4 結(jié)論

初始體質(zhì)量為（112.01±9.23）g 的中華絨螯蟹在養(yǎng)殖6周的試驗(yàn)條件下，相比冰鮮魚組，diet 5組的中華絨螯蟹具有較高的成活率、增重率及性腺指數(shù)，且性腺指數(shù)的提高可能與性腺總脂肪含量的提高有關(guān)。