鞏 凡，郝莉花*，潘鵬云，黃君婷

（1.河南省產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)督檢驗院，河南鄭州 450047；2.仲愷農(nóng)業(yè)工程學(xué)院輕工食品學(xué)院，廣東廣州 510000）

我國作為農(nóng)業(yè)大國，農(nóng)藥使用量位居世界首位，有機磷類農(nóng)藥使用量占農(nóng)藥總使用量的60%以上[1]。其中，毒氟磷是我國創(chuàng)制的植物免疫誘導(dǎo)抗病毒劑，對煙草、黃瓜、番茄病毒病具有良好的防治效果，市場前景良好[2]。因具有高效、低毒等優(yōu)勢，被廣泛應(yīng)用于農(nóng)業(yè)生產(chǎn)[3]。目前，GB 2763—2021對蔬菜中毒氟磷規(guī)定了限量值但未指定檢測方法，因此有必要建立毒氟磷的檢測方法并開展監(jiān)測。

目前，關(guān)于毒氟磷的檢測方法主要包括氣相色譜-質(zhì)譜法（Gas Chromatography Tandem Mass Spectrometry， GC-MS）[4]、液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法（Liquid Chroma- tography-Triple Quadrupole Tandem Mass Spectrometry， LC-MS/MS）[5-6]。LC-MS/MS檢測毒氟磷前處理過程雖然簡單，但檢測要求前處理方法復(fù)雜，儀器維護成本高。氣相色譜-質(zhì)譜法使用單四極桿質(zhì)譜，定性能力弱，容易出現(xiàn)假陽性。而氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜（Gas Chromatography-Triple Quadrupole Tandem Mass Spectrometry，GC-MS/MS）法不僅分離度好，抗基質(zhì)抗干擾能力很強，具有高靈敏性和專屬性及精確性更高的優(yōu)點，因此建立有效的GC-MS/MS法測定果蔬中毒氟磷的殘留量很有必要。

本研究采用氣相色譜三重四極桿質(zhì)譜建立蔬菜中毒氟磷檢測方法，以芹菜為基質(zhì)，通過優(yōu)化氣相色譜和串聯(lián)質(zhì)譜等測試條件建立了靈敏度高、重現(xiàn)性好的果蔬中毒氟磷檢測方法。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

芹菜：市售。毒氟磷標(biāo)準(zhǔn)品（100 μg/mL，安譜）；石墨化碳黑氨基復(fù)合柱（1200 mg，納普）；乙腈（色譜純，美國Honeywell）；氯化鈉（分析純，恒興試劑）；實驗用水：GB/T 6682—2008中規(guī)定的三 級水。

1.2 儀器與設(shè)備

電子天平（0.1 mg，ME104E）、臺式冷凍離心機（VElocity 18R，德國Dynamica）、氣相色譜儀-串接三重四極桿質(zhì)譜儀（7890-7000，美國Agilent）。

1.3 實驗方法

1.3.1 樣品前處理

稱取10 g芹菜于50 mL離心管中，加入10 mL乙腈，渦旋混勻30 s，用濾紙過濾，收集濾液，加入3.0 g 氯化鈉，振蕩提取1 min，靜置，待乙腈相與水相分層，分離出的乙腈相經(jīng)無水硫酸鈉干燥后待 凈化。

凈化：石墨化碳黑氨基復(fù)合柱經(jīng)活化后，上樣 1 mL，乙腈沖洗，收集流出液約10 mL，氮氣吹干后乙腈定容至1 mL，過0.45 μm濾膜，待測。

1.3.2 檢測條件

（1）氣相色譜條件。色譜柱：DB-1701毛細管柱（30 m×320 μm，0.25 μm）。進樣口溫度：250 ℃；進樣體積：1 μL，不分流進樣。升溫程序：初始溫度60 ℃，保持1 min，以40 ℃/min升至170 ℃，然后以10 ℃/min升至310 ℃保持3 min。

（2）質(zhì)譜條件。離子源：EI源；離子源溫度： 230 ℃；傳輸線溫度：270 ℃；采集模式：多反應(yīng)監(jiān)測（Multiple Reaction Monitoring，MRM）模式。

（3）定性定量方法。以待測組分的保留時間和定性離子對作為定性依據(jù)，定量離子峰面積外標(biāo)法定量。

1.3.3 標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制

取毒氟磷標(biāo)準(zhǔn)品1 mL定容至10 mL，獲得10 μg/mL 毒氟磷中間液。將中間液用空白樣品基質(zhì)梯級稀釋為0.005 μg/mL、0.010 μg/mL、0.020 μg/mL、0.100 μg/mL和0.500 μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)工作溶液。

2 結(jié)果與分析

2.1 儀器分析參數(shù)的確定

用1.3.2的檢測條件，采用前級質(zhì)譜SCAN掃描，扣除背景后得到毒氟磷質(zhì)譜圖，見圖1。

圖1 毒氟磷質(zhì)譜圖

從圖1毒氟磷質(zhì)譜圖可以看出，m/z=408.0是毒氟磷的分子離子峰，其中響應(yīng)最高的碎片m/z為270.9，因此選擇響應(yīng)較好的270.9為母離子，進行產(chǎn)物離子研究。

通過對270.9采用5 V、15 V、25 V、35 V和 45 V電壓碰撞，結(jié)果發(fā)現(xiàn)子離子251.1、244.1、175、 148和123.1具有較高響應(yīng)。子離子的響應(yīng)見表1。

由表1可知，251.1、244.1、175在15 V條件下響應(yīng)達到最高，148、123.1在35 V條件下響應(yīng)達到最高，考慮到大多數(shù)化合物在高碰撞能條件下較難獲得穩(wěn)定產(chǎn)物，因此子離子148、123.1在35 V條件下更具有應(yīng)用價值，因此選擇270.9→251.1（15 V）定量，270.9→148（35 V）和270.9→123.1（35 V）定性。

表1 母離子為270.9條件下不同碰撞能時子離子的響應(yīng)

2.2 檢出限、線性范圍、精密度和回收率

（1）在芹菜中添加毒氟磷標(biāo)準(zhǔn)品，按照1.3實驗方法進行測定，根據(jù)3倍信噪比計算方法檢出限，10倍信噪比計算定量限。最終得到毒氟磷檢出限為0.003 mg/kg，定量限為0.01 mg/kg。

（2）將1.3.3配制的標(biāo)準(zhǔn)工作液按照1.3.2分析條件進樣，以定量離子豐度響應(yīng)為縱坐標(biāo)、質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)制作標(biāo)準(zhǔn)曲線并進行線性回歸，毒氟磷在0.005～0.500 μg/mL線性關(guān)系良好，線性相關(guān)系數(shù)R2=0.9999。

（3）稱取10 g陰性樣品，分別在標(biāo)準(zhǔn)曲線低、中、高3種濃度進行加標(biāo)實驗，添加含量分別為 0.005 mg/kg、0.020 mg/kg、0.500 mg/kg，每個添加 水平平行測定6次，計算回收率和相對標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）。毒氟磷農(nóng)藥的回收率在92.4%～121.0%，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差（n=6）為2.29%～9.12%，回收率和精密度 良好。

3 結(jié)論

研究建立了氣相色譜串接三重四極桿質(zhì)譜法測定芹菜中毒氟磷殘留。毒氟磷在0.005～0.500 μg/mL 線性關(guān)系良好，相關(guān)系數(shù)R2=0.9999；方法的檢出限為0.003 mg/kg，定量限為0.01 mg/kg，回收率為92.4%～121.0%，RSD為2.29%～9.12%，方法準(zhǔn)確性和精密度良好。該方法簡便、快速、準(zhǔn)確，可應(yīng)用于市售蔬菜中毒氟磷農(nóng)藥殘留的檢測。