張立秋， 黎西雅， 韓美子， 陳煜， 樸敏艷， 施溯筠

( 延邊大學(xué) 藥學(xué)院， 吉林 延吉 133002 )

氧化損傷是皮膚損害及衰老的主要原因之一，因此具有抗氧化和延緩皮膚衰老的護(hù)膚品受到人們的青睞[1-2].西洋參(Panaxquiquefolium)為五加科人參屬多年生草本植物，中醫(yī)常用于治療失眠煩躁、干咳無痰、肢體乏力等癥狀[3].枸杞子(Lyciumbarbarum)為茄科枸杞的成熟果實(shí)，中醫(yī)常用于治療虛勞精虧、腰漆酸軟、眩暈、耳鳴、血虛、目昏不明等癥狀[4].研究顯示，西洋參和枸杞子復(fù)配具有增強(qiáng)免疫、降血脂和抗疲勞等功效[5-6].目前，市場(chǎng)大多是將這2種中藥制成口服用藥或保健品[7]，而將二者復(fù)配制成抗氧化乳液的文獻(xiàn)鮮有報(bào)道.為此，本文將西洋參、枸杞子提取液復(fù)配作為活性成分制備了一種護(hù)膚乳液，并對(duì)該護(hù)膚乳液的感官指標(biāo)、理化性質(zhì)、抗氧化性能以及保濕效果進(jìn)行了評(píng)價(jià).

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 儀器

752N紫外分光光度計(jì)(日立科學(xué)儀器有限公司)； 80 - 2電動(dòng)離心機(jī)(河南三順教學(xué)儀器有限公司)； FA - 2004電子天平(上海精天電子儀器有限公司)； KQ5200E超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司)； R20ID旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器(上海豫康科教儀器設(shè)備有限公司)； HH - 6恒溫水浴鍋(金壇市科析儀器有限公司)； SHB - IIIA循環(huán)水式多用真空泵(上海豫康科教儀器設(shè)備有限公司)； ST210 pH計(jì)(上海奧豪斯儀器有限公司)； DHG - 9023A型電熱恒溫鼓風(fēng)干箱(常州諾基儀器有限公司)； ZF - SK01A本草精華萃取儀(潁上卓越電子商務(wù)有限公司)； SKIING數(shù)字皮膚水分測(cè)試儀(深圳凱爾電子有限公司)；高壓蒸汽滅菌鍋(山東博科有限公司)；冰箱(合肥美菱股份有限公司)；電熱恒溫培養(yǎng)箱(江蘇新春蘭科學(xué)儀器有限公司).

1.2 材料

椰子油(丹東安康有限公司)；十八醇(天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司)；卡波姆、棕櫚酸異辛酯、丙三醇、三乙醇胺、1,2-丙二醇(山東優(yōu)索化工科技有限公司)；苯氧乙醇(浙江圣效有限公司)；聚氧乙烯山梨醇酐單油酸酯(沈陽市新化試劑廠)；乙基己基甘油(北京化學(xué)試劑公司)(上述試劑均為日化級(jí))； 1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(DPPH，北京華越洋生物科技有限公司，生化試劑)；卵磷脂吐溫80營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基(招遠(yuǎn)拓普生物工程有限公司，工業(yè)級(jí))；無水乙醇(北京北化精細(xì)化學(xué)品有限責(zé)任公司，分析純)；枸杞子、西洋參(經(jīng)延邊大學(xué)李鎬教授鑒定).

1.3 藥材的提取

1.3.1西洋參粗提液的提取

采用超聲提取法[8]提取西洋參粗提液.稱取5 g干燥西洋參粉末，以超純水為提取溶劑，物料溶液質(zhì)量比為1∶10提取3次(每次超聲提取1 h)，合并提取液后過濾即得西洋參粗提液.

1.3.2枸杞子粗提液的提取

采用文獻(xiàn)[9]中的方法提取枸杞子粗提液.稱取5 g干燥枸杞子粉末，以超純水為提取溶劑，物料溶液質(zhì)量比為1∶40提取2次(每次提取40 min)，合并提取液后過濾即得枸杞子粗提液.

1.4 體外自由基清除活性的測(cè)定

采用DPPH自由基清除法[10]篩選西洋參與枸杞子提取液的使用濃度和復(fù)配比例.

1.5 護(hù)膚乳液的制備

參考文獻(xiàn)[11]的方法制備護(hù)膚乳液.將護(hù)膚乳液按性質(zhì)及作用分為油相(棕櫚酸異辛酯、椰子油、十八醇)、水相(丙三醇、三乙醇胺、卡波姆、聚氧乙烯山梨醇酐單油酸酯、1,2-丙二醇)、活性成分(西洋參-枸杞子復(fù)配液)和防腐劑(苯氧乙醇、乙基己基甘油).將油相和水相分別置于70 ℃的水浴中加熱，溶解后將油相加入水相中攪勻，待溫度降至50 ℃時(shí)加入活性成分和防腐劑，混勻后即得護(hù)膚乳液.

1)基質(zhì)添加量的篩選.利用模糊評(píng)價(jià)法[12]對(duì)基質(zhì)的外觀、離心穩(wěn)定性、耐寒性、耐熱性和涂抹效果進(jìn)行綜合評(píng)價(jià).評(píng)價(jià)總分為100分，其中外觀為30分，離心穩(wěn)定性為20分，耐熱、耐寒性為20分，涂抹效果為30分，每個(gè)指標(biāo)分?jǐn)?shù)分為A、B、C 3個(gè)層次，如表1所示.

為觀察在不加入活性成分和防腐劑時(shí)各因素(棕櫚酸異辛酯、椰子油、十八醇、丙三醇、卡波姆、聚氧乙烯山梨醇酐單油酸酯、1,2-丙二醇)的不同添加量對(duì)基質(zhì)的影響大小，分別選擇不同因素的5個(gè)不同水平分別制備基質(zhì)(其他因素不變)，并按照表1的評(píng)價(jià)方法進(jìn)行評(píng)分和分析，以此確定最佳的基質(zhì)配方.

表1 評(píng)價(jià)指標(biāo)及標(biāo)準(zhǔn)

2)活性成分添加量的篩選.選擇對(duì)DPPH自由基清除率最高的西洋參-枸杞子復(fù)配液作為活性成分.采用單因素試驗(yàn)法確定復(fù)配液的添加量，并按照表1的評(píng)價(jià)方法進(jìn)行評(píng)分和分析.

1.6 護(hù)膚乳液的指標(biāo)及效果評(píng)價(jià)

1.6.1護(hù)膚乳液的感官、理化評(píng)價(jià)

參考GB/T 29665—2013中的標(biāo)準(zhǔn)[13]評(píng)價(jià)護(hù)膚乳液的外觀、pH、離心穩(wěn)定性及耐熱、耐寒性.

1.6.2護(hù)膚乳液的衛(wèi)生指標(biāo)評(píng)價(jià)

利用卵磷脂吐溫80營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基評(píng)價(jià)菌落總數(shù).向平皿中分別加入1 mL稀釋度為1∶10和1∶100(樣品∶蒸餾水)的檢液，然后再分別注入15 mL滅菌后的卵磷脂吐溫80營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基，混勻.每個(gè)稀釋度下的檢液均做兩組.以相同的方法制作未加檢液樣品的滅菌平皿作為空白對(duì)照組.將平皿置于(36±1) ℃培養(yǎng)箱內(nèi)分別培養(yǎng)(48±2) h， 48 h后觀察培養(yǎng)基的菌落總數(shù).培養(yǎng)基菌落總數(shù)小于10 cfu·g-1即表明所制備的乳液符合GB/T 29665—2013中的衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn).

1.6.3護(hù)膚乳液的抗氧化效果評(píng)價(jià)

將乳液成品與蒸餾水按質(zhì)量比1∶10稀釋后將其作為待測(cè)液.將待測(cè)液離心后取上清液，并采用2.2中的方法測(cè)量室溫下制備的乳液和市售乳液對(duì)DPPH自由基的清除率.各乳液均測(cè)定3次并取平均值，以此評(píng)價(jià)各乳液的抗氧化性能.

1.6.4護(hù)膚乳液的保濕效果評(píng)價(jià)

通過測(cè)定皮膚角質(zhì)層水分的增長(zhǎng)率對(duì)護(hù)膚乳液的保濕效果進(jìn)行評(píng)價(jià)，測(cè)定方法參考文獻(xiàn)[14]的方法并略作改動(dòng).測(cè)試前首先讓受試者(受試者為5名，身體健康，年齡為20～40歲)在溫度為(20±2) ℃和相對(duì)濕度為(32±2)%的環(huán)境中靜坐30 min，然后讓受試者將前臂屈側(cè)暴露20 min，并同時(shí)在前臂屈側(cè)處標(biāo)記2個(gè)3 cm×3 cm的區(qū)域作為空白對(duì)照區(qū)和涂抹區(qū).區(qū)域間隔為1 cm，涂抹用量為(2.0±0.1) mg·cm-2.涂抹后分別在第1、2、3、4 h測(cè)定涂抹區(qū)和空白對(duì)照區(qū)的皮膚水分含量(記為Mi、M0).各區(qū)域平行測(cè)定3次并取平均值.計(jì)算皮膚水分變化率M的公式[15]為M=[(Mi-M0)/M0]×100%.

2 結(jié)果與分析

2.1 體外自由基清除活性的測(cè)定

圖1為西洋參、枸杞子提取液及兩者復(fù)配時(shí)對(duì)DPPH自由基的清除率.由圖可以看出，西洋參-枸杞子復(fù)配液在體積比為1∶1時(shí)其對(duì)DPPH自由基的清除率高于其他復(fù)配比或單獨(dú)使用西洋參、枸杞子提取液，且當(dāng)濃度為0.5 mg/mL時(shí)其對(duì)自由基的清除率達(dá)到78.4%，清除效果良好.因此本文選擇0.5 mg/mL的西洋參 - 枸杞子復(fù)配液(1∶1)作為活性成分.

圖1 西洋參、枸杞子提取液及兩者的復(fù)配液對(duì)DPPH自由基的清除率

2.2 基質(zhì)添加量的篩選

圖2為棕櫚酸異辛酯、椰子油、十八醇的不同添加量對(duì)基質(zhì)綜合評(píng)分的影響.由圖2可以看出：當(dāng)棕櫚酸異辛酯、椰子油的添加量分別超過4.0%和3.0%(質(zhì)量分?jǐn)?shù))時(shí)乳液的綜合評(píng)分趨于穩(wěn)定，因此本文選擇棕櫚酸異辛酯和椰子油的添加量為4.0%和3.0%；當(dāng)十八醇添加量為2.0%時(shí)乳液的綜合評(píng)分最高，因此本文選擇十八醇的添加量為2.0%.

圖2 不同原料添加量對(duì)基質(zhì)綜合評(píng)分的影響

圖3為丙三醇、卡波姆、聚氧乙烯山梨醇酐單油酸酯、1,2-丙二醇的不同添加量對(duì)基質(zhì)綜合評(píng)分的影響.由圖3可以看出：當(dāng)卡波姆、聚氧乙烯山梨醇酐單油酸酯的添加量分別為0.3%、0.5%(質(zhì)量分?jǐn)?shù))時(shí)乳液的綜合評(píng)分最高，因此本文選擇卡波姆和聚氧乙烯山梨醇酐單油酸酯的添加量為0.3%和0.5%；當(dāng)丙三醇、1,2-丙二醇的添加量分別超過2.0%(質(zhì)量分?jǐn)?shù))時(shí)乳液的綜合評(píng)分趨于穩(wěn)定，因此本文選擇丙三醇、1,2-丙二醇的添加量為2.0%.

圖3 不同原料添加量對(duì)基質(zhì)綜合評(píng)分的影響

根據(jù)上述單因素試驗(yàn)結(jié)果選取卡波姆、十八醇、聚氧乙烯山梨醇酐單油酸酯的3個(gè)水平進(jìn)行試驗(yàn).表2為正交試驗(yàn)的因素水平表，表3為正交試驗(yàn)結(jié)果.由表3可知，當(dāng)配方為A2B3C1時(shí)(0.3%卡波姆、 3.0%十八醇、0.4%聚氧乙烯山梨醇酐單油酸酯)基質(zhì)評(píng)分結(jié)果最優(yōu)；因此，本文將基質(zhì)的配方確定為： 4.0%棕櫚酸異辛酯、 3.0%椰子油、 3.0%十八醇、 2.0%丙三醇、 0.3%三乙醇胺、0.3%卡波姆、0.4%聚氧乙烯山梨醇酐單油酸酯、2.0% 1,2-丙二醇、0.45%苯氧乙醇、0.05%乙基己基甘油.

表2 正交試驗(yàn)因素水平表

表3 正交試驗(yàn)結(jié)果

圖4為不同西洋參-枸杞子復(fù)配液(體積比為1∶1)的添加量對(duì)乳液綜合評(píng)分的影響.由圖可以看出，分?jǐn)?shù)呈先增加后降低的趨勢(shì)，且添加量為10.0%和12.0%(質(zhì)量分?jǐn)?shù))時(shí)評(píng)分最高，因此本文選取西洋參 - 枸杞子復(fù)配液的添加量為10.0%.

圖4 復(fù)配液添加量對(duì)乳液綜合評(píng)分的影響

2.3 護(hù)膚乳液的功效評(píng)價(jià)

護(hù)膚乳液的感官、理化指標(biāo)評(píng)價(jià)結(jié)果見表4.由表4可以看出，制得的護(hù)膚乳液的外觀、pH、耐熱性、耐寒性、離心穩(wěn)定性、菌落總數(shù)符合GB/T 29665—2013中的相關(guān)標(biāo)準(zhǔn).試驗(yàn)測(cè)定顯示，制備的乳液對(duì)DPPH自由基的清除率達(dá)到68.3%，高于市售某品牌護(hù)膚乳液對(duì)DPPH自由基的清除率(42.9%).

表4 護(hù)膚乳液的感官和理化指標(biāo)的評(píng)價(jià)結(jié)果

圖5為使用護(hù)膚乳液后皮膚水分含量隨時(shí)間的變化率.由圖5可以看出，在4 h內(nèi)，西洋參-枸杞子乳液的保濕效果優(yōu)于某市售樣品，這表明本文制備的護(hù)膚乳液具有良好的保濕效果.

圖5 不同乳液對(duì)皮膚水分含量的影響

3 結(jié)論

本文用西洋參-枸杞子復(fù)配提取液制備了一種抗氧化護(hù)膚乳液，該乳液的最佳配方為：4.0%棕櫚酸異辛酯、3.0%椰子油、3.0%十八醇、2.0%丙三醇、0.3%三乙醇胺、0.3%卡波姆、0.4%聚氧乙烯山梨醇酐單油酸酯、2.0% 1,2-丙二醇、0.45%苯氧乙醇、0.05%乙基己基甘油、10.0%西洋參-枸杞子復(fù)配液(體積比為1∶1)、74.5%超純水.經(jīng)測(cè)定顯示，該乳液的各項(xiàng)指標(biāo)均符合國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)，且具有良好的保濕效果和抗氧化性能，因此該西洋參-枸杞子乳液可作為一種良好的護(hù)膚類產(chǎn)品進(jìn)行開發(fā)利用.