李俊虹，劉幫偉，陳 飛，畢 勝

(云南省第一人民醫(yī)院/昆明理工大學(xué)附屬昆華醫(yī)院 1.檢驗(yàn)科 2.腎內(nèi)科，云南 昆明 650032)

機(jī)體在外傷、腫瘤、炎癥等病理狀態(tài)時(shí)，漿膜腔積液及腦脊液往往在數(shù)量和內(nèi)容上發(fā)生改變，體液細(xì)胞學(xué)檢測(cè)就是對(duì)這一時(shí)期積液內(nèi)存在的常見細(xì)胞如間皮細(xì)胞，炎癥細(xì)胞，腫瘤細(xì)胞，寄生蟲等進(jìn)行檢查，獲得數(shù)量和形態(tài)上的信息[1]。通過對(duì) WBC 計(jì)數(shù)及分類為臨床提示積液性質(zhì)，有無(wú)炎癥，對(duì) RBC 計(jì)數(shù)可以提示臨床血性標(biāo)本是機(jī)械性損傷或病理性原因引起的，通過對(duì)異常細(xì)胞形態(tài)的觀察，可以為臨床提示腫瘤的可能，或提示臨床做進(jìn)一步做檢查。從而為臨床確定診療方案、判斷愈后情況等提供較高的實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)價(jià)值。體液細(xì)胞形態(tài)學(xué)檢查是初步鑒別漿膜腔積液性質(zhì)的基礎(chǔ)性項(xiàng)目，是診斷和鑒別診斷多種相關(guān)性疾病的常規(guī)檢測(cè)手段[2，3]。傳統(tǒng)的體液細(xì)胞學(xué)形態(tài)檢查是直接鏡檢和進(jìn)行細(xì)胞的計(jì)數(shù)和分類，但操作粗糙、誤差較大、漏檢率和誤檢率高[4]。目前，體液細(xì)胞學(xué)自動(dòng)化檢測(cè)技術(shù)日趨發(fā)展，檢測(cè)速度和精密度明顯提高，雖然可以彌補(bǔ)手工法的不足，但也不能完全代替手工法，特別在細(xì)胞形態(tài)分類方面，異常細(xì)胞的確認(rèn)還需結(jié)合顯微鏡進(jìn)一步觀察[5-7]。

1 對(duì)象方法

1.1 研究對(duì)象

收集2016年5月-2019年12月就診于云南省第一人民醫(yī)院的患者標(biāo)本198例，患者已簽署了知情同意書?；颊吣挲g2～80歲，男性122例，女性76例，其中胸水110例，腹水51例，關(guān)節(jié)液1例、心包積液4例，滑膜腔積液1例，腹膜透析液2例，腦脊液29例，每例標(biāo)本確保2～6 mL。

1.2 研究方法

1.2.1 試劑與儀器

萊卡相差顯微鏡、SysmexXT-4000i全自動(dòng)血球分析儀、低速臺(tái)式離心機(jī)、一次性塑料吸管、瑞氏染液。

1.2.2 全自動(dòng)血球分析儀XT-4000i儀器檢測(cè)

將EDTA-K2抗凝的體液標(biāo)本198份于1 h內(nèi)嚴(yán)格按照標(biāo)準(zhǔn)化操作規(guī)程選用全自動(dòng)血球分析儀XT-4000i的體液模式下進(jìn)行上機(jī)檢測(cè)，獲得分葉核細(xì)胞(PMN(#%))、單個(gè)核細(xì)胞(MN(#%))、高熒光(HF-BF(#%))的檢測(cè)結(jié)果。

1.2.3 手工制片

將標(biāo)本置低速離心機(jī)(轉(zhuǎn)速：1500 r/min，離心力：400 g，時(shí)間：5 min)離心沉淀后吸出上面的液體丟棄，保留底部少量的液體，把管底的液體輕輕混勻，制成涂片規(guī)格約為2.5*1.0 cm(長(zhǎng)*寬)的圖片；待手工制片自然干燥后，固定標(biāo)本，用血球瑞氏染液按染血片的方法進(jìn)行染色。

1.2.4 顯微鏡檢查

待染色的制片自然干燥后，用萊卡相差顯微鏡在低倍鏡下整片觀察涂片，觀察有核細(xì)胞的分布情況(特別是頭、體、尾部重點(diǎn)觀察)，如制片上有核細(xì)胞有無(wú)結(jié)構(gòu)形態(tài)的異常、充分估計(jì)數(shù)量的多少，重點(diǎn)觀察細(xì)胞形態(tài)巨大、成團(tuán)、染色質(zhì)疏松。

2 統(tǒng)計(jì)方法

3 結(jié)果

(1)有核細(xì)胞計(jì)數(shù)儀器法和顯微鏡法有顯著性差異，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)見表1；(2)有核細(xì)胞分類顯微鏡法腫瘤細(xì)胞檢出率高(26)，見表2；(3)腫瘤細(xì)胞主要分布在10%20%高熒光參數(shù)組，見表3。

表1 2種檢驗(yàn)方法檢測(cè)有核細(xì)胞的結(jié)果

表2 有核細(xì)胞分類顯微鏡法與儀器法結(jié)果

表3 高熒光參數(shù)檢測(cè)結(jié)果分布情況

4 細(xì)胞形態(tài)

4.1 良性積液常見細(xì)胞形態(tài)

4.1.1 淋巴細(xì)胞

淋巴細(xì)胞與血液中細(xì)胞形態(tài)相似，分為大淋巴細(xì)胞、大顆粒淋巴細(xì)胞、小淋巴細(xì)胞，見圖1。

圖1 胸水 大小淋巴細(xì)胞、大顆粒淋巴細(xì)胞

4.1.2 粒細(xì)胞(中性粒細(xì)胞、嗜酸性粒細(xì)胞)

粒細(xì)胞與血液中細(xì)胞形態(tài)相似，為炎癥和惡性腫瘤時(shí)常見的細(xì)胞成分，形態(tài)分類：空泡變性、無(wú)空泡變性、細(xì)胞凋亡，見圖2。

圖2 胸水 中性粒細(xì)胞及破碎的細(xì)胞

4.1.3 間皮細(xì)胞

一般形態(tài)：呈圓形或卵圓形，直徑約15～25 μm；胞質(zhì)豐富，弱嗜堿性或嗜酸性，常較淡薄，核顯示為規(guī)則橢圓，偏位，偶見雙核，可隱約見核仁，見圖3、4，

圖3 腹水 間皮細(xì)胞

圖4 胸水 雙核間皮細(xì)胞

4.2 惡性細(xì)胞形態(tài)

胞體大、形態(tài)多樣，多成簇團(tuán)狀分布。胞核大、核質(zhì)比增高、核染色質(zhì)粗密不均、核多樣、易見核仁。胞質(zhì)千變?nèi)f化，核漿比多增高。不典型的惡性細(xì)胞體積小，細(xì)胞分布可單個(gè)散在，也可與巨噬細(xì)胞、間皮細(xì)胞混合成簇，見圖5-8。

圖5 胸水 腫瘤細(xì)胞 病理診斷：腺癌

圖6 胸水 腫瘤細(xì)胞 病理診斷：腺癌

圖7 腹水 腫瘤細(xì)胞 病理診斷：腺癌

圖8 腹水 腫瘤細(xì)胞 病理診斷：腺癌

5 討論

胸腹腔積液細(xì)胞形態(tài)學(xué)檢驗(yàn)是鑒別良惡性積液的關(guān)鍵性指標(biāo)[8，9]，提高檢驗(yàn)工作者的體液細(xì)胞鑒別能力及質(zhì)量評(píng)價(jià)是實(shí)驗(yàn)室的重點(diǎn)[10]。發(fā)放具有重要參考價(jià)值的形態(tài)學(xué)檢驗(yàn)診斷報(bào)告，為臨床提供更有價(jià)值和意義的鑒別診斷依據(jù)[11]。全自動(dòng)血球分析儀XT-4000i的體液模式檢測(cè)體液細(xì)胞，高熒光參數(shù)可以進(jìn)行腫瘤細(xì)胞的篩查，并提出HF-BF%>3%或圖形異常時(shí)，應(yīng)進(jìn)行顯微鏡復(fù)檢[12，13]。全自動(dòng)體液分析儀在體液細(xì)胞學(xué)檢測(cè)方面不能完全代替手工檢測(cè)法，儀器法只能作為參考方法，結(jié)合顯微鏡復(fù)檢，以確定異常細(xì)胞的種類，可以提高體液檢測(cè)的質(zhì)量和能力[14，15]。