陳孝禮，江文婧，吳繼春，杜 江

(貴州中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，貴州 貴陽 550025)

疏花蛇菰(Balanophoralaxiflora)，為蛇菰科蛇菰屬的草本寄生植物，又名鹿仙草、不上蓮、回春草、通天蠟燭，苗藥名為購俗(ngoub xud)，具有益腎養(yǎng)陰、清熱止血、鎮(zhèn)痛消炎的作用，常用于痔瘡、虛勞出血、腰痛等多種病癥的治療，廣泛分布于云南、四川、湖北等西南地區(qū)，西南地區(qū)民間常用于痔瘡、梅毒、小兒陰莖腫、胃痛、咳嗽咳血等多種病癥的治療[1]?，F(xiàn)代研究表明疏花蛇菰含有酚酸、多糖、黃酮等多種化學(xué)成分，可以用于原發(fā)性肝癌、肝硬化等肝病的治療，但是目前對(duì)其研究較少。為了明確疏花蛇菰的物質(zhì)基礎(chǔ)，為該藥的臨床應(yīng)用提供科學(xué)依據(jù)，本實(shí)驗(yàn)對(duì)疏花蛇菰的化學(xué)成分進(jìn)行了研究，從該植物石油醚部位中分離得到5個(gè)化合物，分別鑒定為角鯊烯(1)、羽扇豆醇乙酸酯(2)、羽扇豆烷-20(29)-烯-3β-醇硬脂酸酯(3)、齊墩果烷-12-烯-3β-醇硬脂酸酯(4)、β-谷甾醇(5)?；衔?-4為首次從該植物中分離得到。

1 儀器與材料

數(shù)顯調(diào)溫?zé)犸L(fēng)槍，寧波得力工具有限公司；Bruker Avance Neo-400 MHz核磁共振波譜儀(TMS為內(nèi)標(biāo)),德國(guó)Bruker公司；1000Y西廚多功能粉碎機(jī)，永康市鉑歐五金制品有限公司；WFH-308B型三色紫外分析儀，上海精科實(shí)業(yè)有限公司； New Classic MF型電子天平，瑞士Metter-Toledo公司；Buchi 旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀，瑞士步琦有限公司；GF254 薄層硅膠板，青島海洋化工有限公司；柱層析硅膠(140～160目，200～300目)，青島海洋化工有限公司；Sephadex LH-20葡聚糖凝膠，美國(guó)GE公司。

無水乙醇、石油醚、乙酸乙酯、二氯甲烷、甲醇(分析純)，天津市富宇精細(xì)化工有限公司；純凈水，華潤(rùn)怡寶飲料有限公司。

實(shí)驗(yàn)用材料購于云南省昆明市新螺獅灣中藥材市場(chǎng)，由貴州中醫(yī)藥大學(xué)江洪副教授鑒定為蛇菰科蛇菰屬疏花蛇菰(Balanophoralaxiflora)的全草。標(biāo)本存放于貴州省苗醫(yī)藥重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室(標(biāo)本號(hào)為2018100402)。

2 提取與分離

干燥疏花蛇菰5 kg，粉碎成粗粉，1.5倍95%乙醇冷浸提取3次，回收溶劑，合并提取液，濃縮得浸膏800 g。將浸膏分散于2 L水中，經(jīng)過石油醚萃取、回收石油醚得到石油醚部分浸膏250 g。石油醚部分用200～300目硅膠拌樣，用石油醚-乙酸乙酯梯度洗脫，得到A～C三個(gè)流份。A部分經(jīng)硅膠柱層析(石油醚-乙酸乙酯 100:1洗脫)、Sephadex LH-20柱層析(二氯甲烷-甲醇1:1洗脫)得到A1～ A2兩個(gè)流份，A1再經(jīng)硅膠柱層析(石油醚-乙酸乙酯 70：1洗脫)得到化合物1(25 mg)，A2經(jīng)硅膠柱層析(石油醚-乙酸乙酯 50:1洗脫)、Sephadex LH-20柱層析(二氯甲烷-甲醇1:1洗脫)得到化合物2(33 mg)；B部分經(jīng)硅膠柱層析(石油醚-乙酸乙酯50:1洗脫)得到B1～B2兩個(gè)流份，B1經(jīng)Sephadex LH-20柱層析(二氯甲烷-甲醇1:1洗脫)得到化合物3(30 mg)、B2經(jīng)硅膠柱層析(石油醚-乙酸乙酯70:1洗脫)、Sephadex LH-20柱層析(二氯甲烷-甲醇1:1洗脫)化合物4(21 mg)；C部分經(jīng)硅膠柱層析(石油醚-乙酸乙酯7:1洗脫)、Sephadex LH-20柱層析(二氯甲烷-甲醇1:1洗脫)得到化合物5(273 mg)。

3 結(jié)構(gòu)鑒定

化合物1：角鯊烯

黃色油狀液體，分子式為C30H50。1H NMR(400 MHz, CDCl3)δ： 5.06～5.18(1H, m, H-3, 7, 11, 14, 18, 22), 1.93～2.14(2H, m, H-4, 5, 8, 9, 12, 13, 16, 17, 20, 21), 1.68(3H, s, H-1, 24), 1.60(3H, 重疊, H-25～30);13C NMR(100 MHz, CDCl3)δ： 17.5(C-1, 24), 131.1(C-2, 23), 124.2(C-3, 22), 26.8(C-4, 21), 39.6(C-5, 20), 134.7(C-6, 19), 124.1(C-7, 14), 26.5(C-8, 17), 39.6(C-9, 16), 134.9(C-10, 15), 124.1(C-11, 18), 28.1(C-12, 13), 25.5(C-25, 30), 15.8(C-26, 29), 15.9(C-27, 28)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[2]報(bào)道基本一致，故鑒定該化合物為角鯊烯。

化合物2：羽扇豆醇乙酸酯

白色粉末，分子式C32H52O2。氫譜數(shù)據(jù)中顯示在化學(xué)位移4.68出現(xiàn)d峰且耦合常數(shù)為2.4 Hz，化學(xué)位移4.57出現(xiàn)d峰且耦合常數(shù)為2.4 Hz，說明是一組相關(guān)峰；在化學(xué)位移2.37出現(xiàn)d 峰。碳譜數(shù)據(jù)中顯示化學(xué)位移在14.5, 16.2, 16.0, 16.5, 18.0, 19.3， 21.3, 27.9分別為甲基碳信號(hào)，化學(xué)位移150.8和109.4為一組烯烴碳信號(hào)，化學(xué)位移170.9為酯基碳信號(hào)。該化合物的數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[3]報(bào)道基本一致，故鑒定該化合物為羽扇豆醇乙酸酯。

化合物3：羽扇豆烷-20(29)-烯-3β-醇硬脂酸酯

白色粉末，分子式C48H84O2。該化合物與化合物2在母體結(jié)構(gòu)上一致，1H-NMR(400 MHz, CDCl3)中母體結(jié)構(gòu)上質(zhì)子信號(hào)類似，唯一不同在于該化合物還有脂肪鏈，故在高場(chǎng)區(qū)質(zhì)子信號(hào)較為豐富，氫譜信號(hào)中化學(xué)位移在2.28為t 峰，耦合常數(shù)為7.5 Hz，峰面積顯示有2個(gè)質(zhì)子，該峰為連酯基的質(zhì)子信號(hào)；碳譜數(shù)據(jù)角甲基化學(xué)位移值與化合物2相似，在化學(xué)位移151.0、109.4為一對(duì)烯烴碳信號(hào)，在173.7為酯基碳信號(hào)，不同的是該化合物多了脂肪酸上的碳信號(hào)，即多了甲基碳和一些亞甲基碳信號(hào)。該化合物的數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[4]報(bào)道基本一致，故鑒定該化合物為羽扇豆烷-20(29)-烯-3β-醇硬脂酸酯。

化合物4：齊墩果烷-12-烯-3β-醇硬脂酸酯

白色粉末，分子式C48H84O2。1H-NMR(400 MHz, CDCl3)中化學(xué)位移在5.18 為t峰，耦合常數(shù)為3.7 Hz，氫譜信號(hào)中化學(xué)位移在2.29為t峰，耦合常數(shù)為7.5 Hz，峰面積顯示有2個(gè)質(zhì)子，該峰為連酯基的質(zhì)子信號(hào)；13C-NMR(100 MHz, CDCl3)中化學(xué)位移在15.6, 16.8, 16.8, 26.0, 23.6, 28.1, 28.4, 33.4均為母體結(jié)構(gòu)上角甲基碳信號(hào)，化學(xué)位移在14.1為脂肪鏈上甲基碳信號(hào)，化學(xué)位移在121.6, 145.2為一對(duì)烯烴碳信號(hào)，化學(xué)位移在173.7為酯基碳信號(hào)，該化合物數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[5]報(bào)道基本一致，故鑒定該化合物為齊墩果烷-12-烯-3β-醇硬脂酸酯。

化合物5：

白色結(jié)晶，分子式C29H50O。氫譜數(shù)據(jù)中，化學(xué)位移在5.30(1H, m) 為烯烴質(zhì)子信號(hào)；化學(xué)位移在1.09(3H, s), 1.01(3H, s), 0.92(3H, d,J= 6.5 Hz), 0.84(3H, d,J= 6.5 Hz), 0.80(3H, d,J= 6.5 Hz), 0.68(3H, s) 為6個(gè)角甲基質(zhì)子信號(hào)；碳譜數(shù)據(jù)中，化學(xué)位移在11.0, 12.0, 17.9, 18.9, 18.9, 19.1為6個(gè)角甲基碳信號(hào)，化學(xué)位移在121.0, 140.0為一對(duì)烯烴碳信號(hào)以及化學(xué)位移在71.0為連羥基的碳信號(hào)。該化合物數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[6]報(bào)道基本一致，故鑒定該化合物為β-谷甾醇。

4 結(jié) 論

疏花蛇菰石油醚部位經(jīng)過硅膠柱層析、凝膠柱層析等分離技術(shù)和波譜數(shù)據(jù)鑒定得到5個(gè)化合物，分別是為角鯊烯(1)、羽扇豆醇乙酸酯(2)、羽扇豆烷-20(29)-烯-3β-醇硬脂酸酯(3)、齊墩果烷-12-烯-3β-醇硬脂酸酯(4)、β-谷甾醇(5)，化合物1～4均為萜類化合物，化合物5為甾醇?；衔?具有清除自由基、抗氧化、抗炎、抗腫瘤等多種藥理活性[7～8]；化合物2具有抗完全弗羅因德氏佐劑誘導(dǎo)的大鼠關(guān)節(jié)炎作用[9]；化合物5具有降血脂、抗癌、抑菌等多種藥理活性[10]，化合物1、5在現(xiàn)代研究中具有較好的活性，非常具有研究?jī)r(jià)值。蛇菰屬藥用資源相對(duì)豐富，民間藥用基礎(chǔ)深厚，全世界約有18個(gè)屬120種，我國(guó)2個(gè)屬20種，廣泛分布于臺(tái)灣、四川、貴州、云南等地。近年來國(guó)內(nèi)外學(xué)者對(duì)蛇菰屬植物研究廣泛，如筒鞘蛇菰、杯莖蛇菰、印度蛇菰等蛇菰的研究相對(duì)成熟且廣泛，但疏花蛇菰的基礎(chǔ)研究相對(duì)較少，本課題對(duì)疏花蛇菰化學(xué)成分進(jìn)行研究，為其開發(fā)與利用提供參考。