類成通

（日照市東港區(qū)漁業(yè)技術(shù)推廣站，山東日照 276800）

蛋白質(zhì)在水生生物的生長(zhǎng)發(fā)育中發(fā)揮著重要作用，水產(chǎn)飼料主要確定不同種類及同種水生生物不同發(fā)育階段的蛋白質(zhì)及氨基酸的需求量及需求模式。魚蛋白水解物（FPH）是由魚粉經(jīng)過蛋白酶水解后加工制得，其中含有大量的小分子肽及游離氨基酸。衛(wèi)育良等研究表明，水解魚蛋白的適量添加能夠促進(jìn)仔稚魚腸道上皮細(xì)胞的發(fā)育和成熟，提高氨基酸利用效率，并通過對(duì)膽囊收縮素、小肽轉(zhuǎn)運(yùn)載體和胰蛋白酶活性的調(diào)節(jié)，來增加對(duì)蛋白質(zhì)的消化和吸收，從而促進(jìn)仔稚魚的生長(zhǎng)和發(fā)育。相似的研究結(jié)果，也有金頭鯛（Sparus aurata）、大西洋鱈（Gadus morhua）等種類的仔稚魚的相關(guān)報(bào)道。目前有關(guān)三疣梭子蟹對(duì)蛋白質(zhì)和必需氨基酸方面的研究報(bào)道相對(duì)較少。現(xiàn)以三疣梭子蟹為研究對(duì)象，在飼料中添加魚蛋白水解物，探究其對(duì)三疣梭子蟹仔蟹生長(zhǎng)、存活及體組成的影響，為三疣梭子蟹仔蟹培育、優(yōu)質(zhì)人工飼料的研制提供基礎(chǔ)數(shù)據(jù)。

1 材料與方法

1.1 地點(diǎn)、時(shí)間和材料

試驗(yàn)地點(diǎn)位于浙江漁業(yè)科技島海水增養(yǎng)殖重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室。試驗(yàn)系統(tǒng)由小蟹籠和中型的水泥池（5 m×5 m×1 m）組成。試驗(yàn)所用的三疣梭子蟹[（8.4±0.1）mg]來自浙江漁業(yè)科技島海水增養(yǎng)殖場(chǎng)。試驗(yàn)時(shí)間為8 周。

1.2 試驗(yàn)設(shè)計(jì)

將三疣梭子蟹仔蟹分為3 個(gè)處理組（對(duì)照組FH0、處理組FH5 和FH10），每組30 只三疣梭子蟹，分別投喂含有添加0%，5%和10%的魚蛋白水解物的微顆粒飼料，每種飼料設(shè)3 個(gè)重復(fù)組。

1.3 試驗(yàn)飼料制備

試驗(yàn)飼料為3 組等脂肪（10.00%）、等蛋白的半純化飼料。魚粉和蛋白水解物作為蛋白源，玉米淀粉作為糖源，魚油作為脂肪源。飼料組成（干質(zhì)量）見表1。將各種原料粉按表1 配方，在孔徑為0.250 mm 的攪拌機(jī)中充分?jǐn)嚢?，再添加淀粉和適宜的水混勻至面團(tuán)狀。通過雙螺桿擠出機(jī)（華南理工大學(xué)科技實(shí)業(yè)總廠，CD4XITS 型多功能成型機(jī)）分別擠出直徑為1.5 和2.5 mm 的顆粒飼料，經(jīng)50 ℃負(fù)壓（0.097 mPa）干燥，破碎，過篩，于-20 ℃冰箱中備用。

表1 飼料組成（干質(zhì)量） %

續(xù)表

1.4 試驗(yàn)方法

在試驗(yàn)開始前，將三疣梭子蟹放在試驗(yàn)環(huán)境中養(yǎng)殖1 周，其間投喂三疣梭子蟹暫養(yǎng)飼料。在試驗(yàn)開始前，挑選體格相近，身體健康的三疣梭子蟹稱質(zhì)量并記錄，隨機(jī)分配到蟹籠中。每個(gè)蟹籠放一個(gè)梭子蟹，避免其自相殘殺。所有三疣梭子蟹每天09：30和16：30 各投喂1 次，投喂量大約占體質(zhì)量的8%。每隔2 個(gè)星期稱體質(zhì)量1 次，稱質(zhì)量后的投喂量也隨體質(zhì)量調(diào)整。整個(gè)試驗(yàn)期間每天清理蟹籠，檢查蟹籠的完整性，防止逃跑；持續(xù)充氧，換水量為池水量的15%。每天記錄梭子蟹蛻殼的殼長(zhǎng)和死亡數(shù)，水溫25～32℃，ρ（溶解氧）>7 mg/L，pH 值6.7～7.3，整個(gè)過程梭子蟹生長(zhǎng)良好。試驗(yàn)結(jié)束時(shí)，樣品采集前停止投喂24 h。統(tǒng)計(jì)塑料筐中的梭子蟹數(shù)量并稱質(zhì)量，然后用液氮冷凍后于-80 ℃保存，待分析。

1.5 計(jì)算及統(tǒng)計(jì)方法

質(zhì)量增加率（%）=（W-W/W×100；

成活率（%）=n/n×100；

特定生長(zhǎng)率（%·d）=（1nW-lnW/t×100；

飼料轉(zhuǎn)化率（%）=Q/（W-W×100；

全蟹水分（%）=m/m。

式中：W——試驗(yàn)?zāi)┚|(zhì)量，mg；

W——試驗(yàn)初均質(zhì)量，mg；

n——試驗(yàn)驗(yàn)初數(shù)量，只；

n——試驗(yàn)驗(yàn)初數(shù)量，只；

t——試驗(yàn)時(shí)間，d；

Q——消耗的飼料量，mg；

m——樣品烘干前質(zhì)量，mg；

m——樣品烘干恒重后的質(zhì)量，mg。

試驗(yàn)結(jié)果以飼料魚蛋白水解物為獨(dú)立變量進(jìn)行回歸分析?；谌嗨笞有返馁|(zhì)量增加率，運(yùn)用SPSS 18.0（IBM.Chicago, USA）的統(tǒng)計(jì)方法中的二階多項(xiàng)式回歸模型，測(cè)定魚蛋白水解物水平，P<0.05表示差異顯著。

2 結(jié)果與分析

不同水平魚蛋白水解物對(duì)三疣梭子蟹仔蟹生長(zhǎng)，存活及體組成的影響見表2。

表2 不同水平魚蛋白水解物對(duì)三疣梭子蟹仔蟹生長(zhǎng)，存活及體組成的影響①

由表2 可見，F(xiàn)H0 組三疣梭子蟹仔蟹質(zhì)量增加率顯著高于其他2 個(gè)處理組（P<0.05），而FH5 組和FH10 組之間沒有差異（P>0.05）；同樣的FH0 組三疣梭子蟹仔蟹特定生長(zhǎng)率顯著高于其他2 個(gè)處理組（P<0.05），而FH5 組和FH10 組之間特定生長(zhǎng)率沒有差異（P>0.05）；3 個(gè)處理組之間比較得出三疣梭子蟹仔蟹存活率沒有顯著差異（P>0.05），而FH0 組和FH10明顯高于FH5 組。體組成檢測(cè)結(jié)果顯示，F(xiàn)H0 組三疣梭子蟹全蟹水分含量顯著低于其他2 個(gè)處理組（P<0.05），而FH5 組和FH10 組之間沒有差異（P>0.05）。

3 討論

水產(chǎn)動(dòng)物幼體前期被發(fā)現(xiàn)消化酶活性不及成魚，對(duì)完整蛋白的利用能力不高。魚粉經(jīng)蛋白酶水解后產(chǎn)生小分子肽以及游離氨基酸，有利于水產(chǎn)動(dòng)物的消化吸收，并提高飼料的利用效率。文獻(xiàn)[4-5]研究發(fā)現(xiàn)，魚蛋白水解物的過量添加會(huì)導(dǎo)致仔稚魚生長(zhǎng)受限。

本研究結(jié)果顯示，F(xiàn)H5 組和FH10 組三疣梭子蟹仔蟹的質(zhì)量增加率以及特定生長(zhǎng)率均顯著低于FH0組（P<0.05），說明三疣梭子蟹仔蟹無法及時(shí)吸收魚粉經(jīng)水解產(chǎn)生的小分子肽及游離氨基酸，引起營(yíng)養(yǎng)缺乏導(dǎo)致生長(zhǎng)性能下降。FH0 組三疣梭子蟹全蟹水分含量顯著低于其他2 個(gè)處理組（P<0.05），表明飼料中魚蛋白水解物的添加不利于三疣梭子蟹仔蟹體內(nèi)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的積累。甲殼動(dòng)物生長(zhǎng)有蛻殼的過程，而體內(nèi)物質(zhì)的積累速度與蛻殼的頻率直接相關(guān)，因此魚蛋白水解物的添加不利于三疣梭子蟹仔蟹的生長(zhǎng)。Zheng 等通過比較不同分子質(zhì)量的魚蛋白水解物在微顆粒飼料中的應(yīng)用，發(fā)現(xiàn)大分子質(zhì)量的魚蛋白水解物更有利于大菱鲆（Scophthalmusmaximus）稚魚的生長(zhǎng)及飼料利用。而通過大黃魚（Larimichthys crocea）稚魚的一項(xiàng)營(yíng)養(yǎng)研究結(jié)果表明，相對(duì)于水解魚粉超濾保留物和未處理的魚蛋白水解物，經(jīng)過超濾的魚蛋白水解物更易于消化吸收，并促進(jìn)消化酶相關(guān)基因的表達(dá)。

本試驗(yàn)中，F(xiàn)H0 組生長(zhǎng)性能最好，表明三疣梭子蟹仔蟹的消化酶能較好地適應(yīng)完整蛋白，而不是小分子肽及游離氨基酸。魚蛋白水解物的添加能影響仔稚魚體能生長(zhǎng)因子（IGF-1）的表達(dá)量，從而影響其生長(zhǎng)發(fā)育。Cai 等研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，由于分子質(zhì)量的不同，魚蛋白水解物對(duì)消化酶的活性及其表達(dá)量具有很大的影響。這或許是魚蛋白水解物對(duì)仔稚魚生長(zhǎng)發(fā)育以及消化吸收能力影響的主要原因。但在本研究中，添加魚蛋白水解物反而影響了三疣梭子蟹仔蟹的生長(zhǎng)，或許是甲殼動(dòng)物的酶系統(tǒng)與魚類有所不同，具有較強(qiáng)的消化完整蛋白的能力。

4 結(jié)論

試驗(yàn)結(jié)果表明，飼料中魚蛋白水解物的添加不利于三疣梭子蟹仔蟹的生長(zhǎng)發(fā)育，但對(duì)其存活沒有明顯的影響，魚蛋白水解物在三疣梭子蟹仔蟹的人工飼料中使用效率不高。