李江佩 孔祥波 孫音 李戰(zhàn)青

子宮內(nèi)膜癌作為女性生殖系統(tǒng)最常見的惡性腫瘤之一，近年來發(fā)病率明顯上升，且呈年輕化趨勢[1]。子宮內(nèi)膜癌發(fā)病早期往往無明顯癥狀及典型體征，僅部分病人出現(xiàn)壓迫癥狀、陰道排液及出血[2]。晚期的子宮內(nèi)膜癌病人療效與預(yù)后較差，生存率約為5%～15%[3]。因此，子宮內(nèi)膜癌的盡早診斷對于治療與預(yù)后均有重要意義。人表皮生長因子受體-2(human epidermal growth factor receptor 2，HER2)是一種原癌基因，屬于生長因子受體家族，多種惡性腫瘤的發(fā)生發(fā)展、惡性程度、治療的抵抗性以及不良預(yù)后均與其異常激活相關(guān)[4-5]。高半胱氨酸蛋白61(cysteine-rich 61，Cyr61)參與了血管性病變、損傷后組織修復(fù)和腫瘤的發(fā)生發(fā)展，是即刻早期反應(yīng)基因家族的主要因子[6]。有研究表明，代謝綜合征如肥胖、糖尿病等是子宮內(nèi)膜癌的高危因子，其中胰島素樣生長因子結(jié)合蛋白(insulin-like growth factor binding proteins，IGFBPs)可調(diào)節(jié)血清胰島素水平[7]。因此，本研究旨在檢測子宮內(nèi)膜癌組織中HER2、Cyr61、IGFBP3的表達(dá)水平，探討其在子宮內(nèi)膜癌病人預(yù)后中的價值。

1 對象與方法

1.1 研究對象 選擇2015年1月至2017年1月我院婦產(chǎn)科收治的124例子宮內(nèi)膜癌病人為子宮內(nèi)膜癌組，年齡62～78歲，平均(64.1±4.2)歲。入選前均行病理學(xué)檢查確診為子宮內(nèi)膜癌，診斷標(biāo)準(zhǔn)依照WHO乳腺腫瘤組織學(xué)分類(2003)，手術(shù)方式為經(jīng)腹次廣泛或廣泛性全子宮切除術(shù)以及盆腔淋巴結(jié)切除術(shù)。根據(jù)2009年國際婦產(chǎn)科協(xié)會(FIGO)手術(shù)病理分期標(biāo)準(zhǔn)，分為Ⅰ期56例，Ⅱ期43例，Ⅲ～Ⅳ期25例；根據(jù)1988年FIGO組織內(nèi)膜癌分級法，分為高分化(G1)62例，中分化(G2)41例，低分化(G3)21例。選取同期120例常規(guī)健康體檢婦女為對照組，年齡60～67歲，平均(64.1±3.5)歲；子宮良性病變病人120例為良性病變組，年齡60～68歲，平均(64.2±3.3)歲，其中黏膜下肌瘤62例，子宮內(nèi)膜息肉58例。所有病人均排除合并急慢性疾病或其他惡性腫瘤者。3組年齡差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。

1.2 方法

1.2.1 HER2、Cyr61、IGFBP3檢測：健康體檢婦女為體檢時采集標(biāo)本，其余病人為手術(shù)或穿刺檢查時采集標(biāo)本。標(biāo)本于4%甲醛中固定，石蠟包埋后4μm連續(xù)切片，脫蠟、覆水后進(jìn)行HE染色和HER2(兔抗人HER2購自Abcam公司)、Cyr61(兔抗人Cyr61購自Santa cruze Biotech公司)、IGFBP3(山羊抗人IGFBP3多克隆抗體購自Abcam公司)免疫組織化學(xué)染色，以PBS溶液染色為陰性對照。采用EnVision法且嚴(yán)格按照試劑盒說明書進(jìn)行操作。分別采用相對應(yīng)已知陽性組織切片為陽性對照。

1.2.2 結(jié)果判定：HER2定位于細(xì)胞膜：-，<10%的細(xì)胞膜染色或完全無染色；+，≥10%的細(xì)胞膜微弱染色，間斷性的染色分布，環(huán)繞細(xì)胞膜不完整；++，≥10%的細(xì)胞膜弱至中度染色，連續(xù)染色且環(huán)繞完整細(xì)胞膜；+++，≥10%的細(xì)胞膜強(qiáng)染色，連續(xù)染色且環(huán)繞完整細(xì)胞膜[8]。

Cyr61定位于細(xì)胞質(zhì)：-，完全無染色；+，<10%的陽性細(xì)胞染色；++，10%～50%的陽性細(xì)胞染色；+++，≥50%的陽性細(xì)胞染色[9]。

IGFBP3定位于細(xì)胞質(zhì)：-，<10%的陽性細(xì)胞數(shù)或完全無染色；+，10%～30%的陽性細(xì)胞數(shù)；++，31%～60%的陽性細(xì)胞數(shù)；+++，>60%的陽性細(xì)胞數(shù)[10]。

在顯微鏡下將切片放大200倍，隨機(jī)選取10個視野，陽性率=[(++)例數(shù)+(+++)例數(shù)]/組內(nèi)例數(shù)×100%。

1.3 隨訪 入院后為所有子宮內(nèi)膜癌病人建立資料，包括臨床、病理以及出院后相關(guān)隨訪資料。出院后采用電話、門診等方式開始隨訪，術(shù)后2年內(nèi)隨訪間隔為3個月，術(shù)后2～5年的隨訪間隔為6個月，隨訪截止日期為2022年1月。若病人在隨訪時間內(nèi)死亡，則終止隨訪。計(jì)算病人的5年生存率。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 采用SPSS 21.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)數(shù)資料用頻數(shù)和百分比表示，組間比較采用χ2檢驗(yàn)。P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 3組HER2、Cyr61、IGFBP3的陽性表達(dá)率 在對照組、良性病變組和子宮內(nèi)膜癌組中，HER2的陽性表達(dá)率分別為7.5%、18.3%、69.4%，3組差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)；Cyr61的陽性表達(dá)率分別為10.0%、12.5%、76.6%，3組差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)；IGFBP3的陽性表達(dá)率分別為59.2%、51.7%、29.0%，3組間差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。

2.2 HER2、Cyr61、IGFBP3陽性表達(dá)與子宮內(nèi)膜癌臨床病理特征的關(guān)系 在124例子宮內(nèi)膜癌病人中，HER2陽性表達(dá)與年齡、病理分期、組織分化、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、肌層浸潤深度、病理類型相關(guān)(P均<0.05)，Cyr61陽性表達(dá)與病理分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、肌層浸潤深度、病理類型相關(guān)(P均<0.05)，IGFBP3陽性表達(dá)與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、肌層浸潤深度、病理類型相關(guān)(P均<0.05)。見表1。

表1 子宮內(nèi)膜癌病人HER2、Cyr61、IGFBP3陽性表達(dá)與臨床病理特征的關(guān)系(n，%)

2.3 子宮內(nèi)膜癌病人HER2、Cyr61、IGFBP3的表達(dá)與預(yù)后的關(guān)系 HER2、Cyr61在子宮內(nèi)膜癌組織中呈陰性表達(dá)者的5年生存率高于陽性表達(dá)者，IGFBP3在子宮內(nèi)膜癌組織中呈陽性表達(dá)者的5年生存率高于陰性表達(dá)者，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表2。

表2 子宮內(nèi)膜癌病人HER2、Cyr61、IGFBP3表達(dá)與預(yù)后的關(guān)系

3 討論

近年來，子宮內(nèi)膜癌的發(fā)病率逐漸上升，約占女性生殖系統(tǒng)惡性腫瘤的20%～30%[11]。由于子宮內(nèi)膜癌早期無特異性癥狀或無明顯的臨床特征，易被病人和臨床醫(yī)生忽視，確診時往往進(jìn)展至中晚期，治療難度大且預(yù)后較差[12]。因此，尋找疾病的早期篩查、預(yù)后評價方法對指導(dǎo)子宮內(nèi)膜癌臨床治療、改善病人預(yù)后具有重要意義。

HER2位于17號染色體長臂，屬于酪氨酸激酶跨膜受體家族，在正常生理狀況下為非激活狀態(tài)，當(dāng)受到刺激時，HER2的表達(dá)水平改變或結(jié)構(gòu)變化可激活HER2相關(guān)信號通路，參與腫瘤細(xì)胞的增殖、轉(zhuǎn)移、黏附、分化等過程，在多種惡性腫瘤中均存在異常表達(dá)，與腫瘤的治療、轉(zhuǎn)移和預(yù)后密切相關(guān)[13]。Lei等[14]研究發(fā)現(xiàn)，HER2在胃癌病人中的陽性表達(dá)可能與腫瘤部位、性別、TNM分期、轉(zhuǎn)移等臨床特征顯著相關(guān)，且HER2的過度表達(dá)也與胃癌病人的不良預(yù)后有關(guān)。程倩[15]的研究顯示，52例子宮內(nèi)膜癌病人中有35例(67.3%)HER2呈陽性表達(dá)，而正常對照組僅為3例(10.0%)，且HER2的高表達(dá)與子宮內(nèi)膜癌的惡性程度相關(guān)。

Cyr61受激素、生長因子等多種因素的調(diào)節(jié)，與機(jī)體組織修復(fù)、創(chuàng)傷等過程相關(guān)，具有復(fù)雜且廣泛的生物學(xué)特性與功能。Cyr61可增加天冬氨酸特異性半胱氨酸酶-3的活性，抑制細(xì)胞增殖，促進(jìn)細(xì)胞凋亡，還可促進(jìn)細(xì)胞的有絲分裂、遷移與黏附。雷蕾等[16]發(fā)現(xiàn)Cyr61診斷子宮內(nèi)膜癌的靈敏度、特異度較高，表明Cyr61參與了子宮內(nèi)膜癌的發(fā)生與發(fā)展過程，并且通過負(fù)向調(diào)控在子宮內(nèi)膜細(xì)胞的增殖中發(fā)揮作用。

IGFBPs是胰島素功能調(diào)節(jié)的重要蛋白，目前共有15個家族成員，IGFBP3是人體中6種IGFBP之一，以旁分泌與自分泌的形式進(jìn)入組織，可以調(diào)節(jié)胰島素和胰島素樣生長因子-1的生物利用度。代聰偉等[10]研究發(fā)現(xiàn)，IGFBP3在子宮內(nèi)膜癌組織的陽性表達(dá)率較癌旁組織低，且與子宮內(nèi)膜癌的臨床病理特征參數(shù)存在相關(guān)性。

本研究結(jié)果顯示，相較于對照組與良性病變組，子宮內(nèi)膜癌組中HER2、Cyr61的陽性表達(dá)率上升，IGFBP3的陽性表達(dá)率下降，表明HER2和Cyr61擴(kuò)增或過表達(dá)、IGFBP3表達(dá)下降可能參與了正常子宮內(nèi)膜的惡性病變，這與他人的研究結(jié)果一致[15-16]。此外，本研究顯示，HER2陽性表達(dá)與年齡、病理分期、組織分化、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、肌層浸潤深度、病理類型相關(guān)，Cyr61陽性表達(dá)與病理分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、肌層浸潤深度、病理類型相關(guān)，IGFBP3陽性表達(dá)與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、肌層浸潤深度、病理類型相關(guān)，表明HER2與Cyr61的過表達(dá)、IGFBP3的低表達(dá)預(yù)示著腫瘤的惡性程度更高、侵襲性更強(qiáng)。本研究結(jié)果還顯示，HER2陰性表達(dá)者、Cyr61陰性表達(dá)者、IGFBP3陽性表達(dá)者的5年生存率明顯升高，表明可以將HER2過表達(dá)、Cyr61過表達(dá)與IGFBP3低表達(dá)作為子宮內(nèi)膜癌病人預(yù)后不良的危險因素，臨床中應(yīng)予以重視。

綜上所述，子宮內(nèi)膜癌病人存在HER2、Cyr61、IGFBP3異常表達(dá)，其與腫瘤的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、肌層浸潤深度、病理類型和預(yù)后密切相關(guān)，但本研究的臨床樣本量較少，存在地域局限性，有待于擴(kuò)大樣本量和研究區(qū)域以便深入研究。